Пероральная композиция с эффектом, направленным против старения кожи

Пероральная композиция с эффектом, направленным против старения кожи

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к композиции, адаптированной для перорального приема, и применению этой и некоторых родственных композиций.

Улучшение внешнего вида и ощущения кожи человека получило значительное усилие исследователей. Однако для огромного большинства коммерчески доступной продукции эту проблему решают воздействием на наружную часть кожи. Наиболее распространенной формой является точечный крем для кожи. Однако такое точечное нанесение обладает своими ограничениями и воздействует преимущественно на омертвевшие поверхностные слои кожи. Известно, что определенные ингредиенты могут обеспечить улучшения внешнего вида и структуры кожи при приеме внутрь. Такие ингредиенты, таким образом, действуют с внутренней стороны кожи и, таким образом, могут обеспечить большие возможности улучшения кожи, обладая доступом к живой внутренней части. Более того, такое действие может восприниматься широкой общественностью как являющееся более эффективным или лечебным по природе, чем точечное нанесение.

Известно, что пищевой рыбий жир при приеме внутрь придает значительную защиту от эритемы, индуцированной UVR.

Также показано, что каротиноиды, такие как ликопин и β-каротин, при пероральном введении дают значительную защиту от эритемы, индуцированной UVR.

Сходным образом также показано, что витамины E и C при пероральном введении в сочетании обеспечивают защиту от эритемы, индуцированной UVR.

В US 6589535 (Johnson & Johnson) описана пищевая добавка, которая содержит масло, обогащенное жирными кислотами ω-3 и ω-6 и каротиноидом в сочетании, для противодействия вредным эффектам ксенобиотиков на кожу, в частности, на иммунную систему кожи. Однако это ограничено пищевыми добавками, такими как капсулы или таблетки, и не описано, как такие вещества можно доставлять с напитками или другой пищевой продукцией. Масло семян черной смородины предпочтительно в качестве источника жирных кислот, однако оно содержит менее эффективную ω-3-PUFA, α-линоленовую кислоту и в целом не так обогащено ω-3-PUFA, как рыбий жир.

В US 2003/0082275 описан питьевой препарат ω-3, который стабилен при хранении. Описанный напиток содержит очень большое количество масла и, следовательно, нестабилен, формируя двухфазный напиток при хранении. Примером служит напиток, обладающий 4 мас.% масла, давая концентрацию ω-3 в 1,6 мас.%. Яичный желток применяют как эмульгатор, который содержит приблизительно 8 мас.% лецитина.

Находящаяся на совместном рассмотрении международная заявка авторов настоящего изобретения No. PCT/EP2005/011658 относится к стабильным годным к употреблению эмульсиям.

В WO 02/074308 описана композиция для профилактики остеопороза, которая содержит сочетание изофлавонов и полиненасыщенных жирных кислот.

US 5976606 относится к способу получения содержащего DHA тофу или напитка на основе соевого молока. Цель состоит в устранении нежелательного вкуса и/или запаха рыбьего жира.

В EP-A-1340427 описаны кисломолочные продукты, содержащие EPA и/или DHA. Этот документ нацелен на обеспечение композициями, которые стабильны в отношении окисления и разделения на фазы.

В DE-U-20304752 описан ряд пищевых антиоксидантных композиций, которые содержат ряд разных компонентов, включая цинк, селен, ликопин, витамин C, витамин E, экстракт виноградных косточек и жирные кислоты омега-3.

Существует потребность в композициях, которые могут обеспечить благоприятные эффекты, направленные против старения кожи. В частности, существует потребность в композициях, которые могут оказывать усиленные эффекты на кожу.

Согласно изобретению представлена композиция, адаптированная для перорального потребления и способная обеспечить эффект против старения на кожу потребителя, которая находится в форме водной эмульсии, суспензии или коллоидного раствора, где композиция содержит:

(i) лиганд PPAR;

(ii) средство, связывающееся с эстрогенным рецептором;

(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и

(iv) каротиноид,

где композиция по существу не содержит добавленного цинка и/или селена при условии, что когда композиция представляет собой водную эмульсию, содержащую по меньшей мере 0,01 мас.% фосфолипидного эмульгатора пищевого качества, общее количество докозагексаеновой кислоты (DHA) и эйкозапентаеновой кислоты (EPA) в композиции составляет более чем 0,6 мас.% или менее чем 0,024 мас.%.

В другом аспекте изобретение относится к применению композиции, адаптированной для перорального потребления, где композиция содержит:

(i) лиганд PPAR;

(ii) средство, связывающееся с эстрогенным рецептором;

(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и

(iv) каротиноид,

где композиция по существу не содержит добавленного цинка и/или селена

для получения эффекта, направленного против старения кожи.

В другом аспекте изобретение относится к применению композиции, адаптированной для перорального потребления, где композиция содержит:

(i) лиганд PPAR;

(ii) средство, связывающееся с эстрогенным рецептором;

(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и

(iv) каротиноид,

для усиления синтеза коллагена в коже. Предпочтительно, композиция по существу не содержит добавленного цинка и/или селена.

Изобретение также относится к способу достижения эффекта, направленного против старения кожи человека или не являющегося человеком млекопитающего (предпочтительно человека), который включает получение человеком или не являющимся человеком млекопитающим количества композиции по изобретению, которое эффективно для достижения указанного эффекта, направленного против старения. Изобретение дополнительно относится к способу усиления синтеза коллагена в коже млекопитающего (предпочтительно человека), который включает получение человеком или не являющимся человеком млекопитающим количества композиции по изобретению, которое эффективно для достижения указанного повышенного синтеза коллагена. Как правило, эффекты будут заметны через несколько недель или месяцев потребления композиции.

Лиганд PPAR

Рецепторы, активируемые пролифератором пероксидом (в данной работе сокращенные как PPAR), представляют собой факторы транскрипции, которые контролируют липидный метаболизм. Лиганды PPAR известны и описаны, например, в WO 02/102337, содержание которого приведено здесь в качестве ссылки.

Лиганд PPAR содержит жирную кислоту омега-3 (т.е. ненасыщенную карбоновую кислоту, содержащую от 12 до 26 атомов углерода), выбранную из DHA, EPA и их смесей.

Как правило, жирная кислота омега-3 присутствует в композиции в количестве от 0,001% до 10% от массы композиции. Более предпочтительные количества составляют от 0,01% до 5 мас.%, например, от 0,1% до 1 мас.% или от 0,1 до 0,5 мас.%.

Жирная кислота омега-3 предпочтительно присутствует в форме рыбьего жира, или она получена из микробного источника. Жирная кислота омега-3 может находиться в форме свободной кислоты, алкильного сложного эфира C₁-C₆, глицерида (включая моно-, ди- и триглицериды) или их смесей. Предпочтительно, жирная кислота омега-3 находится в форме глицерида (например, триглицерида). Упоминание в данной работе жирной кислоты омега-3 означает свободную кислоту или алкильные сложные эфиры или глицериды или их смеси.

Предпочтительными жирными кислотами омега-3 являются DHA и EPA.

DHA представляет собой ω-3, полиненасыщенную, жирную кислоту с 22 атомами углерода. Она также присутствует в большом количестве в определенных рыбных жирах (таких как из тунца и луфаря) и жирах из морских животных.

Как правило, количество DHA в композициях по изобретению варьирует от 0,001% до 10 мас.% композиции. Более предпочтительные количества составляют от 0,01% до 5 мас.%, например, от 0,1% до 1 мас.% или от 0,1 до 0,5 мас.%.

В одном из альтернативных вариантов осуществления композиция может содержать менее чем 0,2 мас.% масла, содержащего DHA. В другом альтернативном варианте осуществления композиция может содержать более 5 мас.% масла, содержащего DHA.

DHA может присутствовать вместе с EPA.

Эйкозапентаеновая кислота (EPA) является одной из нескольких жирных кислот ω-3, используемых в организме. Показано, что усиление потребления EPA является благоприятным при коронарной болезни сердца, высоком кровяном давлении и воспалительных расстройствах, таких как ревматоидный артрит.

Эйкозапентаеновую кислоту (EPA) и докозагексаеновую кислоту (DHA) получают из холодноводных рыб, таких как дикий лосось (не разводимый искусственно), скумбрия, сардины, сельдь и других северных морских животных. Рыбы могут производить EPA и DHA из незаменимой жирной кислоты ω-3, альфа-линоленовой кислоты (LNA), но получают большую часть EPA и DHA из бурых и красных водорослей, которые производят EPA и DHA из углеводов - сахара, крахмала, целлюлозы и т.д.

Позднее начали коммерческое выращивание бурых и красных водорослей для получения EPA и DHA. Они вырабатывают от 10 до 14% длинноцепочечных ω-3 (на сухую массу), и их можно использовать в качестве пищевых источников EPA- и DHA-содержащих триглицеридов.

Если как DHA, так и EPA присутствуют в композициях по изобретению, то отношение массы DHA к массе EPA составляет, как правило, от 1:10 до 10:1, более предпочтительно от 5:1 до 1:5, более предпочтительно от 3:1 до 1:3, как, например, от 1:1 до 1:2.

Средство, связывающееся с эстрогенным рецептором

Композиции по изобретению содержат средство, связывающееся с эстрогенным рецептором. Средство, связывающееся с эстрогенным рецептором, представляет собой предпочтительно природный продукт или его производное или экстракт.

Предпочтительно, средство, связывающееся с эстрогенным рецептором, содержит один или несколько изофлавонов сои. Предпочтительным изофлавоном сои является генистеин.

Композиция по изобретению предпочтительно содержит генистеин в количестве от 0,0001% до 0,1 мас.%, более предпочтительно от 0,001% до 0,05 мас.%, более предпочтительно от 0,005% до 0,04 мас.%, наиболее предпочтительно от 0,005% до 0,025 мас.%, например, от 0,01% до 0,025 мас.%.

Предпочтительно, композиция содержит от 0,0002 до 0,2 мас.% изофлавонов сои. Это эквивалентно от 20 до 200 мг/100 г композиции. Предпочтительно, композиция содержит от 0,02 до 0,05 мас.% изофлавонов сои.

Генистеин может находиться в гликозилированной или негликозилированной форме или смеси этих двух форм. Упоминание генистеина на протяжении данного описания означает гликозилированную или негликозилированную формы или смеси двух форм, если конкретно не указано иначе. Количества генистеина вычисляют исходя из негликозилированной формы (т.е. как если бы гликозилированный генистеин являлся негликозилированным). Генистеин предпочтительно присутствует в композиции по изобретению в виде компонента природного продукта или его экстракта или концентрата. Предпочтительно, природный продукт является соей или красным клевером, более предпочтительно соей.

Генистеин при получении из сои предпочтительно очищают, по меньшей мере до некоторой степени, путем удаления соевого белка. Таким образом, композиции по изобретению предпочтительно содержат менее чем 1 мас.% соевого белка, более предпочтительно менее чем 0,5 мас.% соевого белка, более предпочтительно менее чем 0,1 мас.% соевого белка, например, менее чем 0,01% или менее чем 0,001%, или менее чем 0,0001 мас.%. Композиция по изобретению может не содержать соевого белка или по существу не содержать соевого белка.

Средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена

Композиции по изобретению содержат компонент, который является средством (например, соединением), участвующим в посттрансляционной модификации коллагена. Предпочтительно, средство является кофактором гидроксилирования пролиновых остатков.

Предпочтительно, средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена, является витамином C.

Как правило, витамин C присутствует в композиции по изобретению в количестве от 0,01% до 1 мас.%, более предпочтительно от 0,05% до 0,5 мас.%, наиболее предпочтительно от 0,1% до 0,3 мас.%.

Каротиноид

Композиции по изобретению содержат один или несколько каротиноидов.

Предпочтительно, композиция содержит от 0,0005 до 0,1 мас.% каротиноидов. Это эквивалентно от 0,5 до 100 мг/100 г. Предпочтительно, композиция содержит от 0,002 до 0,04 мас.% каротиноидов. Каротиноиды, являясь маслорастворимыми, должны содержаться преимущественно в масляной фазе. Очень предпочтительными каротиноидами являются β-каротин и ликопин. Эти каротиноиды обеспечивают умеренную защиту от эритемы, индуцированной UV, как предполагают, благодаря их антиоксидантной функции, включая поглощение активных форм кислорода.

Предпочтительно, каротиноид выбран β-каротина, ликопина и их смесей.

Как правило, каротиноид присутствует в количестве от 0,001% до 0,1 мас.%, более предпочтительно от 0,01% до 0,05 мас.%.

Необязательные компоненты

Композиции по изобретению могут содержать один или несколько дополнительных компонентов. Предпочтительные необязательные дополнительные компоненты включают компоненты, выбранные из антиоксидантов, ароматизаторов, консервантов и стабилизаторов и их сочетаний.

Композиция предпочтительно содержит один или несколько дополнительных компонентов, выбранных из антиоксидантов, ароматизаторов, консервантов и стабилизаторов.

Композиция по изобретению предпочтительно имеет pH от 3 до 5, например от 3 до 4.

Один или несколько антиоксидантов предпочтительно присутствуют в композициях по изобретению, чтобы предотвратить или замедлить естественную окислительную деградацию окисляемых веществ, таких как любая жирная кислота омега-3. Прогорклый рыбий жир не только обладает неприятным вкусом, но даже может обладать негативными эффектами на здоровье (Kubow S., «Toxicity of dietary lipid peroxidation products», Trends in Food Sciences & Technology, September, 67-71 (1990)).

Подходящие антиоксиданты можно выбрать, хотя не исключительно, из следующего списка, или по отдельности или в сочетании: TBHQ, аскорбиловые сложные эфиры (например, аскорбилпальмитат), аскорбиновая кислота, токоферолы, экстракт розмарина, фруктовые концентраты или экстракты, экстракт черного или зеленого чая, пропилгаллат, эфирные масла или смолы, бутилированный гидроксианизол (BHA), бутилированный гидрокситолуол (BHT), лимонная кислота или сложные эфиры, кофермент Q10, токотриенолы, хелаторы (например, EDTA), носители, полифенолы, фенольные соединения, флавоноиды, поглотители кислорода.

Особенно предпочтительным антиоксидантом является витамин E.

Количество антиоксиданта следует добавить достаточно для предотвращения прогоркания жирной кислоты омега-3 в течение обычного срока годности в 6 месяцев. Очевидно, что количество антиоксиданта будет зависеть от типа и активности используемого антиоксиданта.

Для этих целей антиоксидантную активность измеряют с использованием подходящего анализа (например, тролоксового эквивалента антиоксидантной способности).

Композиции по изобретению предпочтительно содержат ароматизатор. Подходящие ароматизаторы могут являться природными или синтетическими. Ароматизатор может потребоваться для того, чтобы сделать продукт более аппетитным для употребления.

В другом варианте осуществления композиция по изобретению содержит менее чем 50 мас.% воды, и/или по существу не содержит консервантов и/или ароматизаторов.

Предпочтительно, композиция содержит по меньшей мере 0,01 мас.% фосфолипидного эмульгатора пищевого качества. Предпочтительно, эмульгатор присутствует в количестве от 0,05 до 3 мас.%, более предпочтительно от 0,1 до 1 мас.%.

Обнаружено, что фосфолипидные эмульгаторы являются весьма пригодными.

Фосфолипидный эмульгатор пищевого качества может потребоваться для того, чтобы стабилизировать композицию в виде эмульсии «масло в воде». Предпочтительно, фосфолипидный эмульгатор является лецитином. Фосфолипидные эмульгаторы являются маслорастворимыми, но лецитин можно добавлять в любую фазу перед эмульгированием. Предпочтительно, его добавляют в водную фазу.

В другом варианте осуществления композиция по изобретению содержит менее чем 0,01 мас.% фосфолипидного эмульгатора пищевого качества.

Композицию по изобретению, как правило, потребляют от одного до четырех раз в сутки (предпочтительно один раз в сутки).

Композиции по изобретению по существу не содержат добавленного цинка и/или селена. Композиции по изобретению могут содержать следовые количества цинка и/или селена из коммерчески доступных компонентов композиции, но не содержат добавленного цинка или селена в форме их металлов или солей. Таким образом, композиции по изобретению, например, могут содержать менее чем 0,5 мг цинка и/или менее чем 0,01 мг селена, или менее чем 0,0005% цинка и менее чем 0,00001% селена, соответственно более предпочтительно менее чем 0,0001% цинка и менее чем 0,000005% селена.

В частных случаях композиции по изобретению включают следующее:

Композиции, содержащие:

(i) жирную кислоту омега-3, предпочтительно DHA и/или EPA;

(ii) генистеин, предпочтительно из изофлавонов сои;

(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и

(iv) каротиноид.

Композиции, содержащие:

(i) жирную кислоту омега-3, предпочтительно DHA и/или EPA;

(ii) средство, связывающееся с эстрогенным рецептором;

(iii) витамин C; и

(iv) каротиноид.

Композиции, содержащие:

(i) жирную кислоту омега-3, предпочтительно DHA и/или EPA;

(ii) средство, связывающееся с эстрогенным рецептором;

(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и

(iv) ликопин и/или бета-каротин.

Композиции, содержащие:

(i) жирную кислоту омега-3, предпочтительно DHA и/или EPA;

(ii) генистеин, предпочтительно из изофлавонов сои;

(iii) витамин C; и

(iv) каротиноид.

Композиции, содержащие:

(i) жирную кислоту омега-3, предпочтительно DHA и/или EPA;

(ii) генистеин, предпочтительно из изофлавонов сои;

(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и

(iv) бета-каротин и/или ликопин.

Композиции, содержащие:

(i) жирную кислоту омега-3, предпочтительно DHA и/или EPA;

(ii) генистеин, предпочтительно из изофлавонов сои;

(iii) витамин C; и

(iv) бета-каротин и/или ликопин.

Композиции, содержащие:

(i) лиганд PPAR;

(ii) генистеин, предпочтительно из изофлавонов сои;

(iii) витамин C; и

(iv) каротиноид.

Композиции, содержащие:

(i) лиганд PPAR;

(ii) генистеин, предпочтительно из изофлавонов сои;

(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и

(iv) бета-каротин и/или ликопин.

Композиции, содержащие:

(i) лиганд PPAR;

(ii) генистеин, предпочтительно из изофлавонов сои;

(iii) витамин C; и

(iv) бета-каротин и/или ликопин.

Отношение массы (i) к массе (ii) в композициях по изобретению составляет предпочтительно от 100:1 до 1:10, более предпочтительно от 50:1 до 1:1, более предпочтительно от 40:1 до 10:1.

Форма продукта

Композиция по изобретению годна к употреблению в пищу, и ее получают предпочтительно на водной основе, т.е. она содержит по меньшей мере 50 мас.% воды, предпочтительно по меньшей мере 60 мас.% или даже, по меньшей мере, 70 мас.% воды. Она может являться как жидкой, так и замороженной. Продукт, таким образом, создает ощущение обычного продукта на водной основе, и его можно употреблять на регулярной основе как часть обычного питания потребителей. Например, он может заменять фруктовый сок, обычно употребляемый во время завтрака.

Композиция по изобретению может принимать любую подходящую форму, включая, например, пищевые продукты и пищевые добавки. Композиции для перорального потребления, которые можно применять согласно изобретению, включают напитки, плитки и другие жидкие и твердые формы, такие как таблетки, пилюли, капсулы и порошки (которые могут содержать кристаллическое вещество), а также пастообразные продукты, маргарины, сливки, соусы, приправы, майонезы, мороженое, начинки, кондитерские изделия и каши.

Предпочтительно, композиции по изобретению находятся в форме по существу гомогенной водной эмульсии, суспензии или коллоидного раствора.

Композиция по изобретению предпочтительно упакована в виде напитка.

Предпочтительно композиция обладает вязкостью от 2 до 100 сантипуаз при скорости сдвига 1 с^-1 и при 25°C.

Композицию по настоящему изобретению можно получать из водной фазы и масляной фазы. Как правило, водорастворимые ингредиенты объединяют в водной фазе и маслорастворимые ингредиенты - в масляной фазе. Исключением является эмульгатор. Неожиданно обнаружили, что эмульгатор, который является маслорастворимым, дает более стабильную эмульсию при добавлении к водной фазе.

Две фазы затем смешивают вместе в общепринятом устройстве для эмульгирования. Полученная эмульсия стабильна при хранении, и масло не прогоркает в течение месяцев.

Масляную фазу и водную фазу затем смешивают вместе для формирования гомогенной стабильной эмульсии.

В предпочтительном способе масло находится на порошкообразном веществе-носителе, чтобы способствовать формированию эмульсии.

Стабильную эмульсию можно затем упаковать в запаянную тару, такую как тара из металла, картона с покрытием (например, tetra Pak) или пластика. Тару затем, предпочтительно, запаивают так, чтобы не оставить свободного пространства, или свободное пространство заполняют газом (например, азотом или диоксидом углерода). Это способствует еще большему предотвращению окисления.

Альтернативно, эмульсию можно заморозить и упаковать и продавать как замороженный потребительский продукт.

Применение изобретения

Композиция по изобретению предпочтительно способна усиливать синтез коллагена в коже.

Композиция может вызывать эффект, направленный против старения кожи. Под термином «против старения» авторы настоящего изобретения подразумевают, что кожа может выглядеть менее морщинистой (т.е. существует эффект против морщин, направленный на морщины и/или тонкие морщины, включая уменьшение глубины морщин) и что композиция может сообщать одно или несколько дополнительных преимуществ для кожи, выбранных из: пониженная сухость; повышенная плотность; повышенная эластичность; повышенная гладкость; и, в целом, более здоровая кожа.

Композиции по изобретению могут обладать эффектом, направленным против старения, путем усиления синтеза коллагена в коже, и композиции по изобретению можно применять для усиления синтеза коллагена (как часть эффекта, направленного против старения или независимо от него); предпочтительно синтез коллагена усиливается по меньшей мере на 10%, более предпочтительно по меньшей мере на 20%, например, по меньшей мере на 25 мас.% (например, как определено на основе массы синтезированного коллагена, предпочтительно в течение периода 14 недель).

Кожа может включать кожу всего организма, предпочтительно лица, шеи и/или рук. Кожа может также включать кожу головы с благоприятным действием на волосы (включая замедление старения) и зуд или раздражение кожи головы.

Следующие неограничивающие примеры иллюстрируют изобретение и никоим образом не ограничивают его объем. В примерах и в настоящем описании все процентные доли, части и отношения являются массовыми, если не указано иное.

ПРИМЕРЫ

Определение усиления синтеза коллагена

Описание экспериментального подхода

Биохимический анализ и способ выделения белка разработали для определения изменений в синтезе нового коллагена в коже.

a. Биоптаты кожи отбирали для исходного состояния (T1) и в конце (T15) периода воздействия.

b. Для каждого момента времени отбирали дерматомом два 3 мм биоптата (глубиной 4 мм), помещали в контейнер для криопробирок и сразу же замораживали в жидком азоте.

c. Эти биоптаты затем хранили при -80°C.

Материалы и методы

Получение клеточного лизата

Все полученные дерматомом биоптаты помещали в гомогенизатор Даунса с 1 мл буфера для лизиса клеток и полностью измельчали (таким образом, чтобы не оставалось значительных кусков кожи или внеклеточного матрикса). Буфер для лизиса содержал 1% NP-40, 0,1% дезоксихолата натрия, 0,1% SDS, 6 мМ хлорида натрия и 0,05М триса при pH 7,6. Смесь ингибиторов протеаз (1000X; Sigma P8340) добавляли перед использованием до концентрации 10 мкл на мл буфера для лизиса. После полной гомогенизации ткани нежелательный клеточный дебрис удаляли центрифугированием в течение 20 минут при 20000 g при 4ºC. Осветленный клеточный лизат замораживали при -80ºC до возникновения необходимости.

Анализ общего белка (Pierce)

Концентрацию общего белка для каждого клеточного лизата измеряли с использованием набора для анализа белка Pierce BCA. Набор из восьми стандартных растворов, варьирующих от 0 до 1200 мкг/мл белка, получали из поставляемого маточного раствора 2 мг/мл BSA. 10 мкл стандарта или клеточного лизата добавляли в двух параллелях в лунки плоскодонного 96-луночного планшета для микротитрования. Раствор реагента получали согласно инструкциям к набору из 50 частей реагента A и 1 части реагента B. 200 мкл окончательного реагента добавляли в каждую лунку планшета для микротитрования. Планшет перемешивали, закрывали и инкубировали при 37ºC в течение 30 минут и измеряли поглощение при 562 нм. Строили калибровочную кривую для белка и использовали ее для определения концентрации белка для каждого клеточного лизата.

Набор для EIA C-пептида проколлагена I (Takara Bio Inc.)

Коллаген I синтезируется из молекулы-предшественника, проколлагена I. Количество свободного пропептида, таким образом, стехиометрически отражает количество синтезированного коллагена I. Набор для ферментного иммуноанализа (EIA) C-пептида проколлагена I типа дает возможность количественно определить C-пептид проколлагена I типа (PIP).

Восемь стандартов PIP получали в разбавителе для образцов в концентрациях, варьирующих от 0 до 640 нг/мл. 100 мкл раствора конъюгата антитело-пероксидаза и 20 мкл клеточного лизата (1 мкг белка) или стандарта добавляли в двух параллелях в лунки. Планшет герметично закрывали и инкубировали при 37ºC в течение 3 часов с последующей промывкой четыре раза 400 мкл PBS. В каждую лунку затем добавляли 100 мкл раствора субстрата, и планшет инкубировали при комнатной температуре на столе в течение 15 минут. После этого периода добавляли в каждую лунку 100 мкл останавливающего раствора и измеряли поглощение при 450 нм помощью планшет-ридера.

Строили калибровочную кривую среднего значения поглощения в зависимости от концентрации PIP и вычисляли линию наилучшего соответствия путем регрессионного анализа. Из нее определяли неизвестную концентрацию PIP во всех образцах.

Измерение гидратации кожи

Различные способы определения состояния гидратации рогового слоя суммированы в Fluhr et al., Skin Res Technol 1999; 5:161-170. В кратком изложении, с помощью корнеометра (Courage & Khazaka) измеряют гидратацию кожи посредством детекции емкости эпидермиса. Датчик состоит из двух расположенных рядом друг с другом металлических пластин пальцевого типа с глубиной измерения приблизительно 30 мм. Инструмент определяет уровень влажности наиболее наружных слоев кожи рогового слоя. Принцип действия корнеометра^® основан на изменении электрических емкостей детектора, который сконструирован в форме конденсатора. При контакте с кожей поверхности измерительной головки происходит изменение ее электрической емкости в соответствии с уровнем влажности кожи. Увеличение величины, измеряемой корнеометром, указывает на улучшение гидратации кожи.

Измерение трансэпидермальной потери воды (TEWL)

Анализ способов измерения TEWL осуществляли согласно Wilson & Maibach, (1989) Transepidermal water loss, A review, In: Cutaneous Investigation in Health and Disease, Noninvasive Methods and Instrumentation (Leveque, J.L., ed.), pp. 113-130, Dekker, New York, NY. Кожный барьер действует как регулятор водного баланса кожи. При его повреждении происходит дестабилизация системы регуляции водного обмена. Это означает, что происходит более легкая миграция воды во внешнюю среду, что повышает трансэпидермальную потерю воды. Эффективность кожного барьера снижается с возрастом. Однако при улучшении состояния кожного барьера происходит снижение потери воды, так как механизм регуляции водного обмена возвращается в состояние равновесия. Измерения трансэпидермальной потери воды можно осуществлять с помощью эвапориметра EP-3^® Servomed. Через датчик, состоящий из двух уловителей, проходит поток водяного пара. Разницу парциального давления измеряют между двумя уловителями. Эта величина соответствует скорости испарения летучего вещества (в данном случае, воды). Уменьшение TEWL указывает на улучшение барьерных свойств кожи.

Измерение эластичности и плотности кожи

Измерения эластичности и плотности кожи осуществляют с помощью кутометра, и они описаны в Escoffier et al, J Invest Dermatol, 93(3):353-7. Измерение осуществляют с помощью инструмента, который с использованием вакуумного принципа всасывает определенные области поверхности кожи и оптически это регистрирует. Анализ кривых зарегистрированного измерения дает возможность определить эластические и пластические характеристики кожи. Молодая кожа обладает высокой степенью эластичности и утрачивает форму только постепенно, в то время как восстанавливает свое изначальное состояние после окончания процедуры засасывания. Кожа, которая является молодой, здоровой, мягкой и адекватно увлажненной, будет обладать более высокой степенью эластичности по сравнению со старческой сухой, грубой кожей. Кутометр, таким образом, дает набор измерений, которые позволяют количественно определить характеристики эластичности. Способ состоит в засасывании кожи с помощью датчика измерения. Кожа засасывается в отверстие датчика под действием отрицательного давления, создаваемого внутри устройства. Глубина, до которой кожа проникает в датчик, измеряется бесконтактной оптической измерительной системой. Эта система состоит из источника света и приемника света, а также двух призм, обращенных друг к другу, которые направляют свет от трансмиттера к приемнику. Интенсивность света изменяется в зависимости от глубины проникновения кожи. Сопротивление кожи по отношению к засасыванию указывает на плотность кожи и способность возвращаться в свое исходное состояние указывает на эластичность кожи. В конце каждого измерения отображается кривая, которая позволяет осуществить несколько вычислений, соответствующих механическим свойствам кожи.

Анализ тонких морщин, морщин и гладкости кожи

Грубость и морщинистость кожи можно оценивать с использованием реплик и профилометрии кожи, как описано в Cook, J Soc Cosmet Chem, 1980; 31:339-359. Получают материал из силиконовой резины, такой как Silflo, и прикладывают его к тестируемой области. После приложения его перемещают и осуществляют анализ с использованием оптической профилометрии. С помощью этого способа измерения изображение из параллельных полос проецируют на поверхность кожи и запечатлевают на CCD-матрицу камеры. Трехмерный эффект измерения достигают благодаря тому, что незначительные различия в оценке на поверхности кожи отклоняют параллельные полосы проекции и что эти отклонения образуют качественное и количественное измерение профиля кожи. Профили кожи регистрируют на CCD-камеру, подвергают цифровой обработке и передают на измерительный и вычислительный компьютер для количественной оценки.

Пример 1 - Композиция по изобретению

Следующее представляет собой пример композиции по изобретению.

Ингредиент	мас.%
Рыбий жир (содержащий 12% DHA и EPA)	3,2
Изофлавон сои (40%)	0,083
Витамин C	0,17
Витамин E	0,25
Ликопин (20% активного)	0,027
Бета-каротин (30%)	0,008
Лимонная кислота	0,18
Ароматизатор, подсластитель, загуститель, эмульгатор	q.v.
Вода	До 100%

Композицию можно получить добавлением компонентов в воду и гомогенизируя смесь.

Пример 2

Композицию по изобретению тестировали в течение 14 недель и получили следующие результаты:

Измерение	Способ	Изменение после 14 недель (среднее значение из 50)
	Плацебо	Опыт
Цвет кожи	Хромометр (условные единицы)	-0,2	0,72
Плотность кожи	Кутометр (Ur/Uf)	-0,027	0,022
Глубина морщин	Анализ PRIMOS реплик кожи (величина Rz)	7,82	-5,74
Проколлаген I	ELISA (%)	3	24,3

На фиг.1 представлена реплика области кожи вокруг глаза потребителя перед лечением композицией (левая сторона фигуры) и после потребления композиции в течение 14 недель (правая сторона фигуры).

Фиг.2 представляет собой параллельное сравнение того же типа, что и на фиг.1, для разных частей кожи вокруг глаза потребителя.

Как на фиг.1, так и на фиг.2 заметно значительное снижение морщинистости после потребления композиции.

1. Композиция, адаптированная для перорального потребления и способная обеспечить эффект, направленный против старения кожи потребителя, которая находится в форме водной эмульсии, суспензии или коллоидного раствора, где композиция содержит:(i) лиганд PPAR;(ii) средство, связывающееся с эстрогенным рецептором;(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и(iv) каротиноид,где композиция, по существу, не содержит добавленного цинка и/или селена, при условии, что когда композиция является водной эмульсией, содержащей по меньшей мере 0,01 мас.% фосфолипидного эмульгатора пищевого качества, общее количество докозагексаеновой кислоты (DHA) и эйкозапентаеновой кислоты (ЕРА) в композиции составляет более чем 0,6 мас.% или менее чем 0,024 мас.%;где лиганд PPAR содержит жирную кислоту омега-3, выбранную из DHA, ЕРА и их смесей, средство, связывающееся с эстрогенным рецептором, включает один или более изофлавонов сои и средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена, представляет собой витамин С.

2. Композиция по п.1, где отношение массы (i) к массе (ii) составляет от 100:1 до 1:10.

3. Композиция по п.1, где жирная кислота омега-3 присутствует в количестве от 0,01 до 1,0 мас.%.

4. Композиция по п.4, где изофлавоны сои присутствуют в количестве от 0,01 до 0,1 мас.%.

5. Композиция по п.6, где витамин С присутствует в количестве от 0,01 до 1 мас.%.

6. Композиция по любому из пп.1-3, где каротиноид выбран из β-каротина, ликопина и их смесей.

7. Композиция по п.8, где каротиноид присутствует в количестве от 0,001 до 0,1 мас.%.

8. Композиция по любому из пп.1-3, которая содержит один или несколько дополнительных компонентов, выбранных из антиоксидантов, ароматизаторов, консервантов и стабилизаторов.

9. Композиция по любому из пп.1-3, которая упакована в виде напитка.

10. Композиция по любому из пп.1-3, которая способна усиливать синтез коллагена в коже.

11. Применение композиции, адаптированной для перорального потребления, где композиция содержит:(i) лиганд PPAR;(ii) средство, связывающееся с эстрогенным рецептором;(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и(iv) каротиноид,где композиция, по существу, не содержит добавленного цинка и/или селена, и лиганд PPAR содержит жирную кислоту омега-3, выбранную из DHA, ЕРА и их смесей, средство, связывающееся с эстрогенным рецептором, включает один или более изофлавонов сои и средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена, представляет собой витамин С для получения эффекта, направленного против старения кожи.

12. Применение композиции, адаптированной для перорального потребления, где композиция содержит:(i) лиганд PPAR;(ii) средство, связывающееся с эстрогенным рецептором;(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и(iv) каротиноид,где лиганд PPAR содержит жирную кислоту омега-3, выбранную из DHA, ЕРА и их смесей, средство, связывающееся с эстрогенным рецептором, включает один или более изофлавонов сои и средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена, представляет собой витамин С,для усиления синтеза коллагена в коже.

13. Применение по п.13 или 14, где отношение массы (i) к массе (ii) составляет от 100:1 до 1:10.