Моющие средства со стабилизированными ферментными системами

Моющие средства со стабилизированными ферментными системами

Иллюстрации

Показать все

Реферат

По настоящей заявке испрашивается приоритет согласно находящейся на рассмотрении предварительной патентной заявке США с серийным номером 60/818824, поданной 6 июля 2006 г.

В настоящем изобретении предлагаются способы и композиции для стабилизации ферментов оксидаз во время хранения. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления изобретения оксидаза является компонентом жидких композиций, которые дополнительно содержат по меньшей мере один оксидазный субстрат. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления изобретения оксидаза является компонентом жидких моющих (детергентных) композиций. В некоторых особенно предпочтительных вариантах осуществления изобретения оксидазу стабилизируют путем добавления к жидкому моющему средству обратимого ингибитора оксидазы. В некоторых особенно предпочтительных вариантах осуществления изобретения оксидазу стабилизируют бисульфитом. В предпочтительных дополнительных вариантах осуществления изобретения применение обратимого ингибитора также предотвращает преждевременное образование пероксида во время хранения жидкого моющего средства. В дополнительных вариантах осуществления изобретения жидкие препараты моющего средства, состоящие из фермента оксидазы, ее субстрата и ее обратимого ингибитора, при разведении жидкого моющего средства в моющем растворе для стирки вырабатывают продукт с активным кислородом (пероксид).

Моющие средства для стирки и мытья посуды состоят из комплексных смесей, содержащих широкий спектр ингредиентов, которые обычно включают ряд компонентов, таких как ионогенные и неионогенные поверхностно-активные вещества, растворители, структурообразователи, отдушки, ферменты и отбеливающие компоненты. Для таких комплексных смесей хорошо известны проблемы, связанные со стабильностью при хранении, в частности со стабильностью ферментов. В некоторых случаях проблемы стабильности связаны с физической стабильностью моющего средства, в то время как в других случаях они связаны с функциональной стабильностью отдельных ингредиентов моющего средства. Ферменты, такие как оксидазы, в частности, подвержены ограничениям стабильности при хранении в жидком препарате моющего средства. Это препятствует их широкому применению в очищающих композициях, предназначенных для тканей и для домашнего пользования, для которых подразумевается отбеливающее действие. Сохранение ферментативной активности оксидазы в моющих средствах во время хранения является трудной задачей, особенно в моющих средствах, которые также содержат компоненты в виде оксидазного субстрата. Присутствие как оксидазы, так и оксидазного субстрата приводит к образованию пероксида водорода непосредственно in situ. Пероксид водорода приводит к уменьшению стабильности фермента вследствие окисления ферментов как в жидких, так и в сухих препаратах. Считается, что разрушение ферментов под действием пероксида осуществляется благодаря различным механизмам (например, окислению важнейших аминокислотных остатков в ферменте путем взаимодействия с кофакторами ферментов и т.д.). Однако считается, что настоящее изобретение не ограничивается каким-либо конкретным механизмом. Тем не менее, разрушение ферментов под действием пероксида часто приводит к постепенной потере активности. В сухих препаратах моющего средства ферменты можно стабилизировать (например, с помощью инкапсуляции ферментов, как описано в заявке WO 96/02623, включенной в данное описание во всей своей полноте посредством ссылки).

В данной области известны различные отбеливатели для стирки и активаторы стирки (см., например, публикации Grime and Clauss, Chem. Indust., 20:647-649, 652-653 [1990]; Sheane and Wilkinson, Tinctoria 101:36-41 [2004]; и Broze, Handbook of Detergents, Warwick International, [1999]). Применяемые наиболее часто отбеливающие средства включают перборат натрия, перкарбонат натрия, персульфат натрия, перфосфат натрия, пероксид мочевины, персиликат натрия, их аммониевые, калиевые и литиевые аналоги; в моющих средствах, зубных пастах и других продуктах широко используются пероксид кальция, пероксид цинка, пероксид натрия, карбамидпероксид и другие, такие как гипохлорит натрия и оксид хлора. Окислительную способность таких пероксидов при низкой температуре можно улучшать путем добавления "активатора отбеливания". В данной области известно множество активаторов отбеливания, которые включают ацильные соединения, такие как тетраацетилэтилендиамин (TAED), сложноэфирные соединения, такие как нонаноилоксибензолсульфонат (NOBS) и изононаноилоксибензолсульфонат (ISONOBS), комплексы переходных металлов и другие соединения.

В такой отбеливающей системе при добавлении воды во время цикла стирки вырабатываются перкислоты (например, надуксусная кислота), пероксид водорода и/или другие родственные продукты. Перкислоты и другие продукты с активным кислородом, присутствующие в системе, затем действуют, чтобы отбеливать или осветлять некоторые пятна на ткани или посуде. Однако активаторы отбеливания нельзя добавлять в жидкие моющие средства с перкарбонатом, поскольку они будут взаимодействовать и образовывать перкислоты и/или другие активированные окисляющие средства. Поэтому существует потребность в системе, вырабатывающей H₂O₂, которая неактивна во время хранения, однако вырабатывает пероксид водорода во время цикла стирки.

Отбеливающие средства обычно не включаются в жидкие моющие средства вследствие плохой стабильности при хранении отбеливающих средств в моющих средствах, которые содержат значительные количества воды (например, более 1% воды). Присутствие отбеливающих средств также весьма негативно воздействует на стабильность при хранении ферментов, чувствительных к окислению, и других соединений, включенных в моющие средства. Поэтому существует потребность в жидких моющих средствах, которые обеспечивают выработку отбеливающих средств in situ при разведении моющего средства в моющем растворе.

Было описано несколько оксидаз (см., например, публикации: Beck et al., Bleach activators. Carbohydrates as Organic Raw Materials III, developed from a Workshop, Wageningen, Nov. 28-29, 1994, стр. 295-306 [1996]; Nakayama и Amachi, J. Mol. Catalysis B: Enzymatic 6: 185-198 [1999]; WO 06/008497; WO 05/124012; патент США № 6399329; WO 01/007555 и WO 03/36094). Однако важное ограничение для таких систем состоит в том, что когда оксидазы вместе с их субстратами хранятся в жидком моющем средстве, они вырабатывают пероксид водорода, который сам по себе может разрушать ферменты, а также может взаимодействовать с активаторами отбеливания, присутствующими в системе. Поэтому такие системы с оксидазным субстратом нестабильны. Фактически в данной области сохраняется потребность в средстве, обеспечивающем оксидазы, обратимо ингибируемые в присутствии субстратов во время хранения, которое будет вырабатывать отбеливающие средства in situ при разведении в моющем растворе. Кроме того, существует потребность в получении отбеливающих средств (например, продуктов с активным кислородом, пероксида и перкислот) при разведении моющего средства в моющем растворе для стирки с целью отбеливания и/или осветления пятен.

Как и в случае жидкостей, присутствие отбеливающих средств в порошкообразных моющих средствах часто оказывает сильно негативное влияние на стабильность ферментов, присутствующих в моющем средстве. Следовательно, предполагается большая осторожность в разделении молекул ферментов и отбеливающих средств в порошкообразном моющем средстве. Обычно этого достигают путем отдельного составления смеси для ферментов и отбеливающих средств. Например, в некоторых случаях ферменты получают в виде гранулятов, приготовленных таким образом, чтобы уменьшить проникновение продукта с активным кислородом в гранулы, содержащие фермент, во время хранения. Для таких порошкообразных детергентных (моющих) систем также может быть полезно применение обратимо ингибируемой системы фермента с оксидазным субстратом.

В настоящем изобретении предлагаются способы и композиции для стабилизации ферментов оксидаз во время хранения. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления изобретения оксидаза является компонентом жидких моющих композиций. В некоторых особенно предпочтительных вариантах осуществления изобретения оксидазу стабилизируют путем добавления к жидкому моющему средству обратимого ингибитора оксидазы. В некоторых особенно предпочтительных вариантах осуществления изобретения оксидазу стабилизируют бисульфитом. В дополнительных предпочтительных вариантах осуществления изобретения применение обратимого ингибитора также предотвращает преждевременное образование пероксида во время хранения жидкого моющего средства. В дополнительных вариантах осуществления изобретения жидкие препараты моющего средства, содержащие фермент оксидазу, ее субстрат и ее обратимый ингибитор, при разведении жидкого моющего средства в моющем растворе для стирки вырабатывают продукт с активным кислородом (пероксид). В дополнительных вариантах осуществления настоящего изобретения предлагаются порошкообразные препараты моющего средства, содержащие по меньшей мере один фермент оксидазу, по меньшей мере один оксидазный субстрат и по меньшей мере один обратимый ингибитор. В некоторых особенно предпочтительных вариантах осуществления изобретения такие порошкообразные препараты моющего средства вырабатывают продукты с активным кислородом (пероксид) при разведении порошкообразного моющего средства в моющем растворе для стирки.

В настоящем изобретении предлагаются стабилизированные композиции оксидазы, содержащие по меньшей мере одну оксидазу и по меньшей мере один стабилизатор. В некоторых вариантах осуществления изобретения оксидаза выбрана из глюкозооксидазы, сорбитоксидазы, холиноксидазы, гексозооксидазы и спиртовой оксидазы. В некоторых альтернативных вариантах осуществления изобретения композиции дополнительно содержат по меньшей мере один субстрат по меньшей мере для одной оксидазы. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления изобретения субстрат выбирают из глюкозы, лактата, сорбита, холина, глицерина, этиленгликоля, пропиленгликоля и этанола. В некоторых альтернативных вариантах осуществления изобретения по меньшей мере один стабилизатор содержит по меньшей мере один ингибитор оксидазы. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления изобретения стабилизатор содержит по меньшей мере один сульфит. В некоторых особенно предпочтительных вариантах осуществления изобретения по меньшей мере один сульфит выбирают из гидросульфита натрия, метабисульфита натрия и/или бисульфита натрия. В некоторых альтернативных предпочтительных вариантах осуществления изобретения стабилизатор выбирают из тиосульфата и 2-амино-2-метил-1-пропанола. В некоторых особенно предпочтительных вариантах осуществления изобретения композиция представляет собой очищающую, отбеливающую и/или дезинфицирующую композицию. При некоторых альтернативных предпочтительных вариантах осуществления изобретения моющее средство представляет собой моющее средство для стирки или моющее средство для посуды. В некоторых дополнительных вариантах осуществления изобретения моющее средство выбирают из порошкообразных, жидких и гелеобразных моющих средств. В некоторых еще одних дополнительных вариантах осуществления изобретения композиция представляет собой моющую (детергентную) добавку или продукт предварительной обработки. В еще некоторых дополнительных вариантах осуществления изобретения композиция дополнительно содержит активатор отбеливания или предшественник отбеливателя. В некоторых вариантах осуществления изобретения активатор отбеливания выбирают из предшественников перкислот, комплексов металлов, пероксидаз и системы ацилтрансфераза-субстрат. В некоторых особенно предпочтительных вариантах осуществления изобретения композиции дополнительно содержат по меньшей мере один фермент, выбранный из протеаз, амилаз, пектиназ, пектатлиаз, липаз, маннаназ, целлюлаз, эстераз, кутиназ, оксидоредуктаз, гемицеллюлаз и карбогидраз. В некоторых дополнительных вариантах осуществления изобретения композиции дополнительно содержат по меньшей мере один вспомогательный ингредиент, выбранный из поверхностно-активных веществ, структурообразователей, отбеливающих средств, противомикробных средств, полимеров, растворителей, солей, буферных средств, хелатообразующих средств, средств, ингибирующих перенос красителя, добавок для осаждения, диспергирующих средств, ферментов, стабилизаторов ферментов, каталитических материалов, активаторов отбеливания, ускорителей отбеливания, предварительно полученных перкислот, полимерных диспергирующих средств, грязеудаляющих средств/средств против повторного осаждения, оптических отбеливателей, гасителей мыльной пены, красителей, отдушек, средств, придающих упругость структуре, мягчителей ткани, носителей, гидротропов, технологических добавок, пигментов и их смесей.

В настоящем изобретении также предлагаются способы получения отбеливающего продукта в моющем растворе, включающие стадию добавления к моющему раствору по меньшей мере одной композиции по настоящему изобретению. В еще одних дополнительных вариантах осуществления изобретения отбеливающий продукт представляет собой пероксид или отбеливающую систему, которую можно активировать с помощью пероксида.

На фиг.1 представлен график, показывающий влияние бисульфита на стабильность и отбеливающие характеристики глюкозооксидазы.

На фиг.2 представлен график, показывающий влияние бисульфита на стабильность и отбеливающие характеристики глюкозооксидазы в испытаниях дисков, загрязненных черникой.

На фиг.3 представлен график, показывающий влияние бисульфита на стабильность и отбеливающие характеристики глюкозооксидазы при испытании образцов ткани с многочисленными загрязнениями в терготометре.

В настоящем изобретении предлагаются способы и композиции для стабилизации ферментов оксидаз во время хранения. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления изобретения оксидаза является компонентом жидких моющих композиций. В некоторых особенно предпочтительных вариантах осуществления изобретения оксидаза стабилизируется путем добавления к жидкому моющему средству обратимого ингибитора оксидазы. В дополнительных предпочтительных вариантах осуществления изобретения применение обратимого ингибитора также предотвращает преждевременное образование пероксида во время хранения жидкого моющего средства. В дополнительных вариантах осуществления изобретения жидкие препараты моющего средства, содержащие фермент оксидазу, ее субстрат и ее обратимый ингибитор, при разведении жидкого моющего средства в моющем растворе для стирки вырабатывают продукт с активным кислородом (пероксид). В некоторых особенно предпочтительных вариантах осуществления изобретения оксидаза стабилизируется бисульфитом. В дополнительных вариантах осуществления настоящего изобретения предлагаются жидкие препараты моющего средства, содержащие по меньшей мере одну оксидазу, по меньшей мере один оксидазный субстрат и по меньшей мере один обратимый ингибитор. В особенно предпочтительных вариантах осуществления изобретения такие жидкие препараты моющего средства при разведении жидкого моющего средства в моющем растворе для стирки вырабатывают продукт с активным кислородом (например, пероксид).

Если не указано иное, осуществление настоящего изобретения на практике подразумевает применение традиционных методик, широко применяемых в молекулярной биологии, микробиологии, очистке белков, белковой инженерии, определении последовательностей белков и ДНК, областей рекомбинантной ДНК и промышленном применении и развитии ферментов, все из которых находятся в компетенции специалиста в данной области. Все патенты, патентные заявки, статьи и публикации, приведенные в данном описании как выше, так и ниже, тем самым в явной форме включены в данное описание посредством ссылки.

Кроме того, предусмотренные в данном описании рубрики не являются ограничениями различных аспектов или вариантов осуществления изобретения, которые можно получить посредством ссылки на описание изобретения в целом. Соответственно, термины, определенные непосредственно ниже, более полно определены посредством ссылки на описание изобретения во всей полноте. Тем не менее, для того чтобы облегчить понимание изобретения, ниже приведены определения ряда терминов.

Если не указано иное, все используемые в данном описании технические и научные термины имеют то же значение, которое широко понятно специалисту в данной области, к которой относится данное изобретение. Хотя любые способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным в данном описании, найдут применение при осуществлении настоящего изобретения на практике, в настоящем описании описаны предпочтительные способы и материалы. Соответственно, термины, определенные непосредственно ниже, более полно описаны посредством ссылки на описание изобретения во всей его полноте. Также применяемые формы единственного числа включают ссылку на множественное число, если в контексте ясно не указывается на другое. Если не указано иное, нуклеиновые кислоты записаны слева направо при ориентации от 5' к 3'; аминокислотные последовательности записаны слева направо при направлении от аминогруппы к карбоксигруппе, соответственно. Следует понимать, что данное изобретение не ограничивается конкретной методологией, протоколами и описанными реагентами, которые могут различаться в зависимости от контекста, при котором они используются специалистами в данной области.

Считается, что каждое из максимальных численных ограничений, приводимых на всем протяжении данного описания изобретения, включает любое численное ограничение более низкого порядка, как если бы такие численные ограничения более низкого порядка были описаны в данном описании в явно выраженной форме. Каждое из минимальных численных ограничений, приводимых на всем протяжении данного описания изобретения, будет включать любое численное ограничение более высокого порядка, как если бы такие численные ограничения более высокого порядка были описаны в данном описании в явно выраженной форме. Каждый численный диапазон, приведенный на всем протяжении данного описания изобретения, будет включать любой более узкий численный диапазон, который находится в пределах такого более широкого численного диапазона, как если бы все такие более узкие численные диапазоны были описаны в данном описании в явно выраженной форме.

Используемый в данном описании термин "оксидаза" относится к ферментам, которые катализируют реакцию окисления/восстановления, включая молекулярный кислород (O₂) в качестве акцептора электронов. В таких реакциях кислород восстанавливается до воды (H₂O) или пероксида водорода (H₂O₂). Оксидазы представляют собой подкласс оксидоредуктаз.

Используемый в данном описании термин "глюкозооксидаза" ("Gox") относится к ферменту оксидазе (EC 1.1.3.4), которая катализирует окисление β-D-глюкозы в D-глюконо-l,5-лактон, который затем гидролизуется до глюконовой кислоты с сопутствующим восстановлением молекулярного кислорода до пероксида водорода.

Используемый в данном описании термин "спиртовая оксидаза" ("Aox") относится к ферменту оксидазе (EC 1.1.3.13), которая превращает спирт в альдегид с сопутствующим восстановлением молекулярного кислорода до пероксида водорода.

Используемый в данном описании термин "холиноксидаза" ("Cox") относится к ферменту оксидазе (EC 1.1.3.17), которая катализирует окисление холина до глицинбетаина с переносом четырех электронов и с бетаиновым альдегидом в качестве промежуточного продукта и сопутствующим восстановлением двух молекул молекулярного кислорода до двух молекул пероксида водорода.

Используемый в данном описании термин "гексозооксидаза" ("Hox") относится к ферменту оксидазе (EC 1.1.3.5) для окисления моно- и дисахаридов до их соответствующих лактонов с сопутствующим восстановлением молекулярного кислорода до пероксида водорода. Гексозооксидаза способна окислять различные субстраты, включая D-глюкозу, D-галактозу, мальтозу, целлобиозу и лактозу, и т.д. Считается, что настоящее изобретение не ограничивается какой-либо конкретной гексозой.

Используемый в данном описании термин "глицериноксидаза" относится к ферменту оксидазе (EC 1.1.3.), которая катализирует окисление глицерина до глицеральдегида с сопутствующим восстановлением молекулярного кислорода до пероксида водорода.

Используемый в данном описании термин "сорбитоксидаза" относится к ферменту оксидазе полиолов (EC 1.1.3.), которая катализирует окисление субстрата (например, D-сорбита) до D-глюкозы с сопутствующим восстановлением молекулярного кислорода до пероксида водорода. Субстраты для сорбитоксидазы также включают различные полиолы (например, ксилит, арабит, маннит, рибит, глицерин, пропандиол и пропиленгликоль). Используемый в данном описании термин "полиол" относится к химическим соединениям, которые содержат множество гидроксильных групп.

В настоящем изобретении находят применение дополнительные оксидазы, включая, но не ограничиваясь ими, холестериноксидазу, пиранозооксидазу, карбоксиспиртовую оксидазу, L-аминокислотную оксидазу, глициноксидазу, пируватоксидазу, глутаматоксидазу, саркозиноксидазу, лизиноксидазу, лактатоксидазу, ваниллилоксидазу, гликолятоксидазу, галактозооксидазу, уриказу, оксалатоксидазу, ксантиноксидазу.

Используемый в данном описании термин "ингибиторы" относится к химическим соединениям, которые могут уменьшать или блокировать каталитическую активность фермента. В особенно предпочтительных вариантах осуществления изобретения ингибиторы уменьшают или блокируют каталитическую активность по меньшей мере одной оксидазы. Примеры ингибиторов оксидазы включают ацетат, соли серебра, ионы галогенида, вторичные и третичные спирты, изоцианат, изотиоцианат, аналоги глюкозы, бисульфит, сульфит, тиосульфат, метабисульфит, соли цинка, диэтилдикарбамат, метилметансульфонат, акрилонитрил, 2-амино-2-метил-1-пропанол.

Используемый в данном описании термин "обратимый ингибитор фермента" относится к молекулам, которые присоединяются к ферменту и уменьшают скорость реакции с его участием. В некоторых вариантах осуществления изобретения обратимые ингибиторы ферментов находятся под влиянием изменения концентрации ферментного субстрата в зависимости от ингибитора. В некоторых вариантах осуществления изобретения обратимые ингибиторы ферментов присоединяются к ферменту с помощью слабых связей, которые подобны связям, используемым для присоединения к субстрату. Таким образом, обратимый ингибитор блокирует фермент не навсегда, по мере удаления ингибитора фермент имеет возможность присоединяться к своему субстрату и обмениваться своим субстратом. В некоторых вариантах осуществления изобретения обратимые ингибиторы ферментов представляют собой конкурирующие ингибиторы, которые нековалентно взаимодействуют с ферментом, и/или конкурируют с субстратом за активный участок фермента, и/или имеют структуры, подобные субстрату, продуктам и/или переходному состоянию. В дополнительных вариантах осуществления изобретения обратимый ингибитор представляет собой неконкурирующий ингибитор фермента, который присоединяется на участке, присутствующем на ферменте и отличающемся от активного участка, и/или вызывает конформационные изменения фермента, которые уменьшают и/или блокируют каталитическую активность. Считается, что данный термин не ограничивается каким-либо конкретным механизмом или типом обратимого ингибитора фермента. Необходимым условием является только то, чтобы воздействия ингибитора фермента были обратимы, чтобы фермент функционировал при отсутствии ингибитора и/или при отсутствии воздействий ингибитора.

Используемый в данном описании термин "совместимые" означает, что материалы очищающих композиций не уменьшают ферментативную активность предлагаемого фермента(ов) оксидазы до такой степени, что оксидаза(ы) становится неэффективной, как желательно в ситуациях обычного применения. Материалы конкретной очищающей композиции подробно приводятся в качестве примера ниже.

Используемый в данном описании термин "эффективное количество фермента" относится к количеству фермента, необходимому для достижения ферментативной активности, предусмотренной при конкретном применении. Такие эффективные количества легко определяются специалистом в данной области и основаны на многих факторах, таких как конкретный вариант используемого фермента, применение очистки, конкретный состав очищающей композиции, требуется жидкая или сухая (например, гранулированная) композиция и т.п.

Используемая в данном описании фраза "стабильность моющего средства" относится к стабильности композиции моющего средства. В некоторых вариантах осуществления изобретения стабильность оценивается во время применения моющего средства, в то время как в других вариантах осуществления изобретения указанный термин относится к стабильности композиции моющего средства во время хранения.

Термин "улучшенная стабильность" используется для того, чтобы показать лучшую стабильность ферментов в композициях, содержащих субстрат. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения в моющих средствах с ингибиторами, предназначенных для стирки или ухода за посудой, ферменты обладают улучшенной стабильностью во время хранения по сравнению с соответствующими препаратами без ингибиторов ферментов. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения система фермент/субстрат в моющих средствах с ингибиторами, предназначенных для стирки или ухода за посудой, обладает улучшенной стабильностью во время хранения по сравнению с соответствующими препаратами без ингибиторов ферментов.

Используемый в данном описании термин "стабильность при окислении" относится к способности белков функционировать в окислительных условиях. В частности, термин относится к способности белков функционировать в присутствии различных концентраций H₂O₂, перкислот и других окислителей. Стабильность при различных окислительных условиях можно измерить либо с помощью стандартных методик, известных специалистам в данной области, и/или с помощью описанных в данном описании способов. Значительное изменение стабильности при окислении подтверждается увеличением или уменьшением (в большинстве вариантов осуществления изобретения предпочтительным является увеличение) по меньшей мере приблизительно на 5% или более полупериода ферментативной активности по сравнению с ферментативной активностью, наблюдающейся при отсутствии окислительных соединений.

Используемый в данном описании термин "стабильность при изменении pH" относится к способности белков функционировать при конкретном pH. Как правило, большинство ферментов имеет ограниченный диапазон pH, в котором они будут функционировать. В дополнение к ферментам, которые функционируют в среднем диапазоне значений pH (то есть около pH 7), существуют ферменты, которые способны работать в условиях с очень высокими или очень низкими pH. Стабильность при различных pH можно измерить либо с помощью стандартных методик, известных специалистам в данной области, и/или с помощью описанных в данном описании способов. Значительное изменение стабильности при изменении pH подтверждается увеличением или уменьшением (в большинстве вариантов осуществления изобретения предпочтительным является увеличение) по меньшей мере приблизительно на 5% или более полупериода ферментативной активности по сравнению с ферментативной активностью при оптимальном для ферментов pH. Однако считается, что настоящее изобретение не ограничивается ни каким-либо уровнем стабильности при изменении pH, ни диапазоном pH.

Используемый в данном описании термин "термическая стабильность" относится к способности белков функционировать при конкретной температуре. Как правило, большинство ферментов имеет ограниченный диапазон температур, при которых они будут функционировать. В дополнение к ферментам, которые работают в умеренном диапазоне температур (например, при комнатной температуре), существуют ферменты, которые способны работать при очень высоких или очень низких температурах. Термическую стабильность можно измерить либо с помощью известных методик, либо с помощью описанных в данном описании способов. Значительное изменение термической стабильности подтверждается увеличением или уменьшением (в большинстве вариантов осуществления изобретения предпочтительным является увеличение) по меньшей мере приблизительно на 5% или более полупериода каталитической активности мутанта, когда он подвергается воздействию заданной температуры. Однако считается, что настоящее изобретение не ограничивается ни уровнем стабильности при какой-либо температуре, ни диапазоном температур.

Используемый в данном описании термин "химическая стабильность" относится к стабильности белков (например, фермента) по отношению к химическим веществам, которые могут оказывать отрицательное влияние на их активность. В некоторых вариантах осуществления изобретения такие химические вещества включают, но не ограничиваются ими, пероксид водорода, перкислоты, анионогенные моющие средства, катионогенные моющие средства, неионогенные моющие средства, хелатирующие средства и т.д. Однако считается, что настоящее изобретение не ограничивается ни каким-либо конкретным уровнем химической стабильности, ни диапазоном химической стабильности.

Используемые в данном описании термины "очищенный" и "выделенный" относятся к удалению загрязнений из образца. Например, фермент, представляющий интерес, очищают путем удаления загрязняющих белков и других соединений, которые не являются ферментом, представляющим интерес, из раствора или при получении. В некоторых вариантах осуществления изобретения рекомбинантные ферменты, представляющие интерес, экспрессируются в бактериальных или грибковых клетках хозяина, и такие рекомбинантные ферменты, представляющие интерес, очищают путем удаления других составляющих клеток хозяина; процент рекомбинантного фермента, представляющего интерес, среди полипептидов в образце при этом увеличивается.

Используемый в данном описании термин "белки, представляющие интерес" относится к белкам (например, ферменту или "ферменту, представляющему интерес"), которые подвергаются анализу, идентификации и/или модификации. В настоящем изобретении находят применение природные, а также рекомбинантные (например, мутантные) белки.

Используемый в данном описании термин "белковая" относится к любой композиции, содержащей аминокислоты и идентифицируемой специалистом в данной области как белковая. Термины "белок", "пептид" и полипептид применяются в данном описании взаимозаменяемо. Когда пептид является частью белка, специалисту в данной области применение данного термина будет понятно в контексте.

Используемые в данном описании термины "очищающие композиции" и "очищающие препараты" относятся к композициям, которые находят применение при удалении нежелательных соединений с изделий, подвергаемых очистке, таких как ткань, посуда, контактные линзы, другие твердые субстраты, при удалении нежелательных соединений с волос (шампуни), кожи (мыла и кремы), зубов (жидкости для полоскания полости рта, зубные пасты) и т.д. Термин охватывает любые материалы/соединения, выбранные для конкретного типа требуемой очищающей композиции, и форму продукта (например, жидкая, гелеобразная композиция, композиция в виде гранул или спрея) при условии, что композиция совместима с оксидазой и другим ферментом(ами), используемыми в композиции, и любыми обратимыми ингибиторами ферментов в композиции. Конкретный выбор материалов очищающей композиции легко осуществить с учетом поверхности, изделия или ткани, подвергаемой очистке, и требуемой формы композиции для применения в условиях очистки.

Кроме того, термины относятся к любой композиции, которая подходит для очистки, отбеливания, дезинфекции и/или стерилизации любого объекта и/или поверхности. Считается, что термины включают, но не ограничиваются ими, моющие композиции (например, жидкие и/или твердые моющие средства для стирки и моющие средства для тонких тканей; моющие препараты для твердых поверхностей, таких как стеклянные, деревянные, керамические и металлические столешницы и окна; чистящие средства для ковров; чистящие средства для духовых шкафов; освежители тканей; мягчители тканей и пятновыводители для предварительного выведения пятен при стирке и для текстильных изделий, а также моющие средства для посуды).

Более того, используемый в данном описании термин "очищающая композиция" включает, если не указано иное, моющие средства общего назначения в гранулированной или порошкообразной форме или моющие средства, предназначенные для интенсивного режима очистки, в частности очищающие моющие средства; моющие средства общего назначения в жидкой, гелеобразной или пастообразной форме, в частности так называемые типы жидкостей, предназначенные для интенсивного режима очистки (HDL); жидкие моющие средства для тонких тканей; средства для ручного мытья посуды или средства для облегченного мытья посуды, в частности средства, относящиеся к типу обильного пенообразования; средства для машинного мытья посуды, включая различные типы в виде таблеток, гранул, жидкостей и добавок для споласкивания, предназначенных для домашнего пользования и применения в учреждениях; жидкие очищающие и дезинфицирующие средства, включая антибактериальные типы для умывания, куски очищающего мыла, жидкости для полоскания полости рта, очищающие средства для зубных протезов, шампуни для автомобилей или ковров, чистящие средства для ванной комнаты; шампуни для волос и ополаскиватели для волос; гели для душа и пену для ванн, чистящие средства для металлов; а также очищающие вспомогательные средства, такие как отбеливающие добавки и средства типа "карандаша для удаления пятен" или предварительной обработки.

Термины "композиция моющего средства" и "препарат моющего средства" применяются в отношении смесей, которые предназначены для применения в моющей среде для очистки загрязненных объектов. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления изобретения термин применяется в отношении стирки тканей и/или предметов одежды (например, "моющие средства для стирки"). В альтернативных вариантах осуществления изобретения термин относится к другим моющим средствам, таким как моющие средства, применяемые для очистки посуды, столовых приборов и т.д. (например, "моющие средства для мытья посуды"). Считается, что настоящее изобретение не ограничивается каким-либо конкретным препаратом моющего средства или композицией. Более того, считается, что кроме пергидролазы термин охватывает моющие средства, которые содержат поверхностно-активные вещества, трансферазу(ы), гидролитические ферменты, оксидоредуктазы, структурообразователи, отбеливающие средства, активаторы отбеливания, подсинивающие средства и флуоресцентные красители, ингибиторы комкования, маскирующие средства, активаторы ферментов, ингибиторы ферментов, антиокислители и солюбилизаторы. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления изобретения препараты моющего средства включают, но не ограничиваются ими, средства, опубликованные в патентных заявках США серийные №№ 10/576331 и 10/581014, а также заявках WO 05/52161 и WO 05/056782, нашедших применение в настоящем изобретении. Однако считается, что настоящее изобретение не ограничивается каким-либо конкретным препаратом моющего средства(ми), поскольку в настоящем изобретении находит применение любой подходящий препарат моющего средства.

Используемый в данном описании термин "композиция для мытья посуды " относится ко всем формам композиций для очистки посуды, включая столовые приборы, включая, но не ограничиваясь ими, гранулированные и жидкие формы. Считается, что настоящее изобретение не ограничивается каким-либо конкретным