Применение анти-cd40-антител

Применение анти-cd40-антител

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящее изобретение относится к новым способам применения анти-CD40-антител, в частности к способам лечения воспалительных и аутоиммунных заболеваний, ассоциированных с CD40-экспрессирующими клетками.

Предшествующий уровень техники

Многие члены семейства лигандов, к которому принадлежит фактор некроза опухоли (TNF), и их соответствующие рецепторы регулируют рост нормальных клеток посредством индуцирования апоптоза либо способствуют увеличению продолжительности жизни клеток и усилению их пролиферации. То есть между апоптотическими сигналами и сигналами выживаемости и пролиферации клеток существует определенный баланс, благодаря которому поддерживается нормальный клеточный гомеостаз. В настоящее время было идентифицировано по меньшей мере 26 рецепторов для лигандов семейства TNF и 18 лигандов этого семейства. Биологически активные формы этих рецепторов и лигандов представляют собой тримерные белки, способные к самосборке. Были идентифицированы трансмембранные и растворимые формы этих рецепторов и лигандов. Внутриклеточные домены указанных рецепторов не имеют гомологичных последовательностей, но их внеклеточные домены содержат цистеин-богатые повторы, состоящие из 40 аминокислот. Их цитоплазматические концы передают сигналы посредством взаимодействия с двумя главными группами внутриклеточных белков: факторами, ассоциированными с рецепторами TNF (TRAF), и белками, содержащими домен “гибели” (DD). Взаимодействие между по меньшей мере шестью человеческими TRAF и TRAF-связывающими сайтами на цитоплазматическом хвосте некоторых из этих рецепторов приводит к инициации нескольких путей передачи сигнала, включая AKT (сериновой/треониновой киназы, называемой протеинкиназой В или РВК), нуклеарный фактор-kB (NF-kB) и активируемые митогеном протеинкиназы (MAPK). См., например, публикацию Younes and Kadin (2003) J. Clin. Oncol. 18:3526-3534.

Член CD40 семейства TNF-рецепторов представляет собой антиген клеточной поверхности, имеющий массу 50-55 кДа и присутствующий на поверхности нормальных и опухолевых человеческих В-клеток, дендритных клеток, моноцитов, макрофагов, CD8⁺-Т-клеток, эндотелиальных клеток, а также моноцитарных и эпителиальных клеток. Антиген CD40 также экспрессируется на активированных Т-клетках, активированных тромбоцитах, воспалительных клетках сосудистых гладких мышц, эозинофилах, синовиальных мембранах при ревматоидном артрите, фибробластах дермы и других нелимфоидных клетках. В зависимости от типа CD40-экспрессирующих клеток, слияние этих клеток может индуцировать межклеточную адгезию, дифференцировку, активацию и пролиферацию. Так, например, связывание CD40 с его когнатным лигандом, CD40L (также называемым CD154), стимулирует пролиферацию B-клеток и их дифференцировку в плазматические клетки, вырабатывание антител, переключение изотипов и продуцирование В-клеток памяти. В процессе дифференцировки В-клеток CD40 экспрессируется на пре-B-клетках, но после дифференцировки эти клетки превращаются в плазматические клетки.

Лиганд CD40 (CD40L), также известный как CD154, представляет собой трансмембранный белок размером 32-33 кДа, который также существует в двух менее крупных биологически активных растворимых формах, 18 кДа и 31 кДа, соответственно (Graf et al. (1995) Eur. J. Immunol. 25:1749-1754; Mazzei et al. (1995) J. Biol. Chem. 270:7025-7028; Pietravalle et al. (1996) J. Biol. Chem. 271:5965-5967). CD40L экспрессируется на активированных, но не на покоящихся CD4⁺-Т-хелперных клетках (Lane et al. (1992) Eur. J. Immunol. 22:2573-2578; Spriggs et al. (1992) J. Exp. Med. 176:1543-1550; и Roy et al. (1993) J. Immunol. 151 :1-14). CD40 и CD40L были клонированы и охарактеризованы (Stamenkovi et al. (1989) EMBO J. 8:1403-1410; Armitage et al. (1992) Nature 357:80-82; Lederman et al. (1992) J. Exp. Med. 175:1091-1101; и Hollenbaugh et al. (1992) EMBO J. 11:4313-4321). См. также патент США № 5945513, в котором описан человеческий CD40L. Клетки, трансфицированные геном CD40L и экспрессирующие белок CD40L на своей поверхности, могут инициировать пролиферацию В-клеток, а вместе с другими стимулирующими сигналами они могут индуцировать вырабатывание антител (Armitage et al. (1992) выше; и патент США № 5945513). Пациенты с аутоиммунным заболеванием имеют повышенные уровни растворимого CD40L (sCD40L) в сыворотке, тогда как у здоровых пациентов они не наблюдаются. У животных-грызунов, используемых в качестве моделей, сверхэкспрессия CD40L приводит к развитию аутоиммунного заболевания, аналогичного системной красной волчанке (Higuchi et al. (2002) J. Immunol. 168:9-12). В противоположность этому, отсутствие функционального CD40L на активированных T-клетках приводит к развитию X-связанного гипер-IgM-синдрома (Allen et al (1993) Science 259:990; и Korthauer et al. (1993) Nature 361: 539). Кроме того, блокирование взаимодействия CD40/CD40L может предотвращать отторжение трансплантата у приматов-моделей, не являющихся человеком. См., например, Wee et al. (1992) Transplantation 53:501-7.

Экспрессия CD40 на АПК играет важную ко-стимулирующую роль в активации этих клеток. Так, например, было показано, что моноклональные анти-CD40-антитела-агонисты (mAb) имитируют действие хелперных Т-клеток, направленное на активацию В-клеток. При презентации на адгезивных клетках, экспрессирующих FcγRII, эти антитела индуцируют пролиферацию В-клеток (Banchereau et al. (1989) Science 251:70). Кроме того, анти-CD40 mAb-агонисты могут имитировать действие хелперных Т-клеток, направленное на передачу сигнала секреции IgM, IgG и IgE в присутствии IL-4 (Gascan et al. (1991) J. Immunol. 147:8). Кроме того, анти-CD40 mAb-агонисты могут предотвращать запрограммированную гибель (апоптоз) В-клеток, выделенных из лимфоузлов.

Эти и другие наблюдения подтверждают существующую теорию, основанную на предположении, что взаимодействие CD40 с CD40L играет ведущую роль в регуляции гуморального и клеточно-опосредованного иммунного ответа. Последние исследования выявили, что взаимодействие CD40/CD40L играет гораздо более широкую роль в различных физиологических и патологических процессах.

Пути передачи CD40-сигнала зависят от координированной регуляции многих внутриклеточных факторов. Подобно другим членам семейства TNF-рецепторов, CD40 активируют TRAF, включая TRAF-2, -3, -5 и -6, которые стимулируют различные пути передачи сигналов после контактирования CD40 с CD40L (с мембраносвязанным CD40L или с растворимым CD40L), включая внеклеточную активируемую сигналом киназу (ERK), амино-концевую киназу c-jun (JNK), p38 MAPK и NF-kB (см., например, Younes and Carbone (1999) Int. J. Biol. Markers 14:135-143; van Kooten and Banchereau (2000) J. Leukoc. Biol. 67:2-17).

Было показано, что передача сигнала посредством CD40 приводит к предупреждению гибели клеток в результате апоптоза (Makus et al. (2002) J. Immunol. 14:973-982). Апоптотические сигналы необходимы для индуцирования запрограммированной гибели в координированных путях передачи сигнала. Сигналы гибели клеток могут включать природные факторы, присутствующие в клетках, такие как фактор разрушения эндоплазматического ретикулума, или внешние факторы, такие как рецептор, связывающийся с FasL или TNFα. Такой путь передачи сигнала является сложным и включает активацию каспаз, таких как каспаза-3 и каспаза-9, и поли-(ADP-рибозо)-полимераза (PARP). В процессе осуществления каскада реакций происходит ингибирование белков, передающих антиапоптотический сигнал, таких как mcl-1 и bcl-x, а также членов семейства белков IAP, таких как X-связанный ингибитор апоптоза (XIAP) (Budihardjo et al. (1999) Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. 15:269-290). Так, например, в дендритных клетках CD40-опосредуемая передача сигнала может блокировать сигналы апоптоза, трансдуцированные FasL (Bjorck et al. (1997) Intl. Immunol. 9:365-372).

Таким образом, взаимодействие CD40 с CD40L и последующая активация передачи сигнала CD40 представляют собой стадии, необходимые для продуцирования нормальных иммунных ответов, однако нарушение регуляции CD40 может приводить к развитию заболевания. Было обнаружено, что путь передачи сигнала CD40 участвует в развитии аутоиммунного заболевания (Ichikawa et al. (2002) J. Immunol. 169:2781-2787 и Moore et al. (2002) J. Autoimmun. 19:139-145). Кроме того, взаимодействие CD40/CD40L играет важную роль в развитии воспалительных процессов. Так, например, CD40 и CD40L сверхэкспрессируются в организме человека и в экспериментальных участках, пораженных атеросклерозом. Стимуляция CD40 индуцирует экспрессию матрикс-разлагающих ферментов и экспрессию тканевого фактора в ассоциированных с атеромой клетках, таких как эндотелиальные клетки, клетки гладких мышц и макрофаги. Кроме того, стимуляция CD40 индуцирует продуцирование провоспалительных цитокинов, таких как IL-1, IL-6 и IL-8, и адгезивных молекул, таких как ICAM-1, E-селектин и VCAM. Ингибирование взаимодействия CD40/CD40L предупреждает атерогенез у животных-моделей. У моделей с трансплантатом блокирование взаимодействия CD40/CD40L предотвращает воспаление. Было обнаружено, что связывание CD40/CD40L вместе с действием амилоидного пептида-бета, вызывающим болезнь Альцгеймера, является синергическим и стимулирует активацию макрофагов, что приводит к нейротоксичности.

У пациентов с ревматоидным артритом (РА) в хондроцитах суставов наблюдается повышенный уровень экспрессии CD40, и, таким образом, передача CD40-сигнала, вероятно, играет определенную роль в продуцировании цитокинов и металлопротеиназ матрикса, которые оказывают разрушающее действие. См., Gotoh et al. (2004) J. Rheumatol. 31 :1506-1512. Кроме того, было показано, что амплификация синовиального воспалительного ответа происходит в результате активации MAPK и NF-kB посредством присоединения CD40 к синовиальным CD14⁺-клеткам у пациентов с РА (Harigai et al. (2004) Arthritis. Rheum. 50:2167-2177). В экспериментальной модели РА обработка анти-CD40L антителом предупреждает индуцирование этого заболевания, воспаление суставов и продуцирование антител против коллагена (Durie et al. (1993) Science 261:1328-1330). И, наконец, клинические испытания показали, что истощение CD20⁺-B-клеток у пациентов с РА путем введения им ритуксана® (обычно применяемого для лечения В-клеточной лимфомы) приводит к ослаблению симптомов заболевания (Shaw et al. (2003) Ann. Rheum. Dis. 62(Suppl. 2):ii55-ii59).

Было также показано, что блокирование взаимодействий CD40/CD40L во время презентации антигена Т-клеткам индуцирует Т-клеточную толерантность. Поэтому блокирование взаимодействия CD40/CD40L предупреждает начальную активацию Т-клеток, а также индуцирует длительную толерантность к повторному воздействию антигена.

Человеческие моноклональные анти-CD40-антитела и их различные применения описаны в совместных опубликованных патентных заявках, а именно WO 2005/044854, WO 2005/044304, WO 2005/044305, WO 2005/044306, WO 2005/044855, WO 2005/044307 и WO 2005/044294. В этих заявках, в частности, описано человеческое моноклональное антитело IgG1 против CD40, обозначаемое здесь CHIR-12.12, которое было получено путем иммунизации трансгенных мышей, несущих локус тяжелой цепи и легкой цепи каппа человеческого IgG1 (XenoMouse® technology; Abgenix, California).

Как показал FACS-анализ, CHIR-12.12 специфически связывается с человеческим CD40 и может предотвращать связывание CD40 с лигандом (CD40L). CHIR-12.12 может конкурировать за связывание с CD40L, предварительно связанным с CD40 на клеточной поверхности. Моноклональное антитело CHIR-12.12 представляет собой сильный антагонист и ингибирует in vitro CD40L-опосредуемую пролиферацию нормальных и злокачественных В-клеток. Моноклональное антитело CHIR-12.12 непосредственно снижает выживаемость клеток и ингибирует CD40L-опосредуемые пути передачи сигнала в нормальных человеческих B-лимфоцитах. In vitro антитело CHIR-12.12 уничтожает первичные раковые клетки у пациентов с НХЛ посредством ADCC. Дозозависимая противоопухолевая активность наблюдалась у модели с ксенотрансплантатом человеческой лимфомы. В настоящее время CHIR-12.12 проходит испытание фазы I на его применение для лечения злокачественных B-клеточных опухолей.

CD20 представляет собой антиген клеточной поверхности, экспрессируемый на ранней стадии дифференцировки В-клеток и остающийся на клеточной поверхности в процессе развития В-клеток. CD20 участвует в активации В-клеток, экспрессируется в опухолевых В-клетках на очень высоких уровнях и является известной клиницистам терапевтической мишенью (см. например, Hooijberg et al. (1995) Cancer Research 55: 2627). Антитела против CD20, такие как ритуксимаб (ритуксан®), были разрешены Управлением по контролю за качеством пищевых продуктов, медикаментов и косметических средств (США) к применению для лечения неходжкинской лимфомы (см., например, Boye et al. (2003) Ann. Oncol. 14:520). Было обнаружено, что ритуксан является эффективным средством для лечения низкозлокачественной, среднезлокачественной и высокозлокачественной неходжкинской лимфомы (НХЛ) (см., например, Maloney et al. (1994) Blood 84:2457-2466), McLaughlin et al. (1998) J Clin. Oncol. 16:2825-2833, Maloney et al. (1997) Blood 90:2188-2195, Hainsworth et al. (2000) Blood 95:3052-3056, Colombat et al. (2001) Blood 97:101-106, Coiffer et al. (1998) Blood 92:1927-1932), Foran et al (2000) J. Clin. Oncol. 18:3l7-324, Anderson et al. (1997) Biochem. Soc. Trans. 25:705-708, или Vose et al. (1999) Ann. Oncol. 10:58a). Ритуксан® также истощает популяцию нормальных В-клеток, которые могут играть определенную роль в развитии воспалительных и аутоиммунных заболеваний. В настоящее время ритуксан проходит клиническое испытание на его применение для лечения аутоиммунных заболеваний.

Хотя точный механизм действия ритуксана® неизвестен, однако имеются данные, указывающие на то, что действие ритуксана®, направленное на подавление лимфомы, частично обусловлено комплемент-опосредуемой цитотоксичностью (CMC), антитело-зависимой клеточно-опосредуемой цитотоксичностью (ADCC), ингибированием пролиферации клеток и, в конечном счете, прямым индуцированием апоптоза. Однако у некоторых пациентов может вырабатываться резистентность к лечению ритуксаном® (см. Witzig et al. (2002) J. Clin. Oncol. 20:3262, Grillo-Lopez et al. (1998) J. Clin. Oncol. 16:2825 или Jazirehi et al. (2003) Mol. Cancer Ther. 2:1183-1193). Так, например, у некоторых пациентов после лечения анти-CD20-антителом ингибируется экспрессия CD20 на злокачественных В-клетках (Davis et al. (1999) Clin. Cancer Res. 5:611). Кроме того, у 30-50% пациентов с низкозлокачественной НХЛ наблюдается клинический ответ на указанное моноклональное антитело (Hainsworth et al. (2000) Blood 95:3052-3056; Colombat et al. (2001) Blood 97:101-106). Было показано, что клиническая активность ритуксимаба в НХЛ коррелирует с FcγRIIIa-генотипом пациента. Пациенты со 158а.к.-полиморфизмом FcγRIIIa генотипа V/V или V/F являются более восприимчивыми к лечению ритуксимабом, чем пациенты с генотипом F/F (см., например, Cartron et al. (2002) Blood 99(3):754-758 или Dall'Ozzo et al. (2004) Cancer Res. 64:4664-4669). Пациенты, у которых развивается резистентность к такому моноклональному антителу или которые страдают воспалительным заболеванием или аутоиммунным заболеванием, резистентным к первоначальной терапии указанным антителом, нуждаются в альтернативных формах терапевтического лечения.

Кроме того, ритуксан® истощает нормальные В-клетки у пациента. Поэтому он может быть использован для лечения В-клеточнозависимого аутоиммунного и воспалительного заболеваний.

Таким образом, необходимость в разработке новых терапевтических средств и новых терапевтических стратегий лечения воспалительных и аутоиммунных заболеваний остается актуальной. В частности, необходимо разработать новые терапевтические стратегии лечения пациентов, не поддающихся лечению анти-CD20-антителами, такими как ритуксимаб (ритуксан®).

Краткое описание сущности изобретения

Настоящее изобретение относится к способу лечения человека, страдающего воспалительным заболеванием или аутоиммунным заболеванием, ассоциированным с CD40-экспрессирующими клетками, где указанный пациент является гетерозиготным или гомозиготным по FcγRIIIa-158F (генотип V/F или F/F). Указанные способы включают введение пациенту терапевтически или профилактически эффективного количества анти-CD40-антитела. Настоящее изобретение также относится к использованию терапевтически или профилактически эффективного количества анти-CD40-антитела в целях получения лекарственного средства для лечения воспалительного заболевания или аутоиммунного заболевания, ассоциированного с CD40-экспрессирующими клетками у пациента, который является гетерозиготным или гомозиготным по FcγRIIIa-158F (генотип V/F или F/F).

Настоящее изобретение также относится к способам ингибирования продукции антитела В-клетками у пациента, гетерозиготного или гомозиготного по FcγRIIIa-158F (генотип V/F или F/F), где указанный способ включает введение указанному пациенту эффективного количества анти-CD40-антитела. Настоящее изобретение также относится к использованию эффективного количества анти-CD40-антитела в целях получения лекарственного средства для ингибирования продукции антитела В-клетками у пациента, гетерозиготного или гомозиготного по FcγRIIIa-158F (V/F или F/F).

Настоящее изобретение также относится к способам и к наборам для идентификации пациента, страдающего воспалительным или аутоиммунным заболеванием, которое поддается лечению под действием анти-CD40-антитела, и которое не поддается лечению ритуксимабом (ритуксаном®). В некоторых вариантах изобретения указанный способ включает: a) идентификацию пациента, страдающего воспалительным или аутоиммунным заболеванием, которое ассоциируется с CD40-экспрессирующими клетками и которое не поддается лечению ритуксимабом (ритуксаном®); и b) определение FcγRIIIa-158-генотипа (V/V, V/F или F/F) у данного пациента; где указанное воспалительное или аутоиммунное заболевание поддается лечению под действием анти-CD40-антитела в том случае, если указанный пациент является гетерозиготным или гомозиготным по FcγRIIIa-158F (генотип V/F или F/F). Настоящее изобретение может также включать стадию введения пациенту, который был идентифицирован таким способом, терапевтически или профилактически эффективного количества анти-CD40-антитела. Настоящее изобретение также относится к наборам для идентификации пациента, страдающего воспалительным или аутоиммунным заболеванием, которое поддается лечению под действием анти-CD40-антитела, где указанные наборы включают реагенты для определения у пациента FcγRIIIa-158-генотипа.

Настоящее изобретение также относится к способам и к наборам для выбора терапии антителом, подходящей для лечения пациента, страдающего воспалительным заболеванием или аутоиммунным заболеванием, которое не поддается лечению ритуксимабом (ритуксаном®). В некоторых вариантах изобретения указанный способ включает: a) идентификацию пациента, страдающего воспалительным заболеванием или аутоиммунным заболеванием, которое ассоциируется с CD40-экспрессирующими клетками и которое не поддается лечению ритуксимабом (ритуксаном®); и b) определение FcγRIIIa-158-генотипа (V/V, V/F или F/F) у данного пациента; где для лечения указанного воспалительного заболевания или аутоиммунного заболевания анти-CD40-антитело выбирают в том случае, если указанный пациент является гетерозиготным или гомозиготным по FcγRIIIa-158F (генотип V/F или F/F). Настоящее изобретение может также включать стадию введения пациенту, который был идентифицирован таким способом, терапевтически или профилактически эффективного количества анти-CD40-антитела. Настоящее изобретение также относится к наборам для выбора терапии антителом, подходящей для лечения пациента, страдающего воспалительным или аутоиммунным заболеванием, ассоциированным с CD40-экспрессирующими клетками, где указанные наборы включают реагенты для определения FcγRIIIa-158-генотипа у данного пациента.

Настоящее изобретение также относится к способам лечения пациента, страдающего воспалительным или аутоиммунным заболеванием, ассоциированным с CD40-экспрессирующими клетками, где указанные способы включают введение пациенту медленно интернализующегося антитела. В одном из таких вариантов терапевтически или профилактически эффективное количество анти-CD40-антитела вводят пациенту так, чтобы указанное анти-CD40-антитело после его введения не обнаруживало значительной интернализации в CD40-экспрессирующие клетки. В другом таком варианте терапевтически или профилактически эффективное количество анти-CD40-антитела вводят пациенту так, чтобы указанное анти-CD40-антитело после его введения по существу равномерно распределялось по поверхности CD40-экспрессирующих клеток. В еще одном из таких вариантов анти-CD40-антитело вводят пациенту так, чтобы после его введения терапевтически или профилактически эффективное количество указанного анти-CD40-антитела присутствовало на поверхности CD40-экспрессирующих клеток данного пациента.

Анти-CD40-антитела, используемые в соответствии с настоящим изобретением, специфически связываются с антигеном CD40. В некоторых вариантах изобретения анти-CD40-антитела, используемые в способах согласно изобретению, а в частности моноклональные антитела, обладают высокой аффинностью связывания с человеческим FcγRIIIa-158V, высокой аффинностью связывания с человеческим FcγRIIIa-158F или высокой аффинностью связывания с человеческим FcγRIIIa-158V и FcγRIIIa-158F. В некоторых из этих вариантов анти-CD40-антитела могут связываться с любыми из двух аллотипов FcγRIIIa, отличающихся по аминокислоте 158 (V или F) и присутствующих на человеческих природных клетках-киллерах (NK), причем связывающие свойства указанных антител являются подходящими для индуцирования сильной антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (ADCC). Подходящими анти-CD40-антителами являются, но не ограничиваются ими, анти-CD40-антитела, не обладающие значительной агонистической активностью, включая, например, анти-CD40-антитела, которые являются антагонистами передачи CD40-CD40L-сигнала на CD40-экспрессирующих клетках. В некоторых вариантах изобретения анти-CD40-антитело выбирают из группы, состоящей из: а) моноклонального антитела CHIR-12.12; b) моноклонального антитела, продуцируемого гибридомной клеточной линией 12.12; с) моноклонального антитела, содержащего аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательности, представленной в SEQ ID NO:2, последовательности, представленной в SEQ ID NO:4, последовательности, представленной в SEQ ID NO:5, обеих последовательностей, представленных в SEQ ID NO:2 и SEQ ID NO:4, и обеих последовательностей, представленных в SEQ ID NO:2 и SEQ ID NO:5; d) моноклонального антитела, имеющего аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательности, представленной в SEQ ID NO:1, последовательности, представленной в SEQ ID NO:3 и обеих последовательностей, представленных в SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:3; е) моноклонального антитела, которое связывается с эпитопом, способным связываться с моноклональным антителом, продуцируемым гибридомной клеточной линией 12.12; f) моноклонального антитела, которое связывается с эпитопом, содержащим остатки 82-87 человеческой последовательности CD40, представленной в SEQ ID NO:7 или SEQ ID NO:9; g) моноклонального антитела, которое связывается с эпитопом, содержащим остатки 82-89 человеческой последовательности CD40, представленной в SEQ ID NO:7 или SEQ ID NO:9; h) моноклонального антитела, которое конкурирует с моноклональным антителом CHIR-12.12 в анализе на конкурентное связывание; i) моноклонального антитела по предшествующему пункту а) или моноклонального антитела по любому из предшествующих пунктов с)-h), где указанное антитело является рекомбинантно продуцируемым; и j) моноклонального антитела, которое представляет собой антигенсвязывающий фрагмент моноклонального антитела по любому из предшествующих пунктов а)-i), где указанный фрагмент сохраняет способность к специфическому связыванию с человеческим антигеном CD40.

Способы согласно изобретению могут быть применены для лечения воспалительных заболеваний или аутоиммунных заболеваний, ассоциированных с CD40-экспрессирующими клетками. Примерами таких заболеваний являются, но не ограничиваются ими, системная красная волчанка (СКВ), дискоидная волчанка, волчаночный нефрит, саркоидоз, воспалительный артрит, включая ювенильный артрит, ревматоидный артрит, псориазный артрит, синдром Рейтера, анкилозирующий спондилит и подагрический артрит; отторжение трансплантата органов или тканей, сверхострое, острое или хроническое отторжение трансплантата и/или реакция “трансплантат против хозяина”, рассеянный склероз, гипер-IgM-синдром, нодозный полиартериит, первичный билиарный цирроз, воспалительное заболевание кишечника, болезнь Крона, глютеновая болезнь (глютен-чувствительная энтеропатия), аутоиммунный гепатит, пернициозная анемия, аутоиммунная гемолитическая анемия, псориаз, склеродермия, тяжелая миастения, аутоиммунная тромбоцитопеническая пурпура, аутоиммунный тиреоидит, болезнь Грейвса, тиреоидит Хашимото, болезнь иммунных комплексов, иммунодисфункциональный синдром хронической усталости (CFIDS), полимиозит и дерматомиозит, криоглобулинемия, тромболиз, кардиомиопатия, вульгарная пузырчатка, интерстициальный фиброз легких, сахарный диабет типа I и типа II, гиперчувствительность замедленного типа 1, 2, 3 и 4, аллергия или аллергические расстройства, нежелательные/самопроизвольные иммунные ответы на терапевтические белки, астма, синдром Черга-Штраусса (аллергический гранулематоз), атопический дерматит, аллергический и раздражающий контактный дерматит, крапивница, IgE-опосредуемая аллергия, атеросклероз, васкулит, идиопатические воспалительные миопатии, гемолитическое заболевание, болезнь Альцгеймера и хроническая воспалительная демиелинизирующая полиневропатия, воспаление легких, включая, но не ограничиваясь им, отторжение легочного трансплантата, астму, саркоидоз, эмфизему, кистозный фиброз, идиопатический фиброз легких, хронический бронхит, аллергический ринит и аллергические заболевания легких, такие как пневмонит, ассоциированный с гиперчувствительностью, эозинофильная пневмония, облитерирующий бронхиолит, вызываемый трансплантацией костного мозга и/или легких или другими факторами; атеросклероз/флебосклероз, вызываемый трансплантацией; фиброз легких, индуцированный коллагеном, сосудистые и аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит и системная красная волчанка, а также воспалительные заболевания или аутоиммунные заболевания, ассоциированные с CD20-экспрессирующими клетками. Способы согласно изобретению являются особенно предпочтительными для их применения в целях лечения воспалительных заболеваний и аутоиммунных заболеваний, ассоциированных с клетками, экспрессирующими CD40 и CD20. Таким образом, настоящее изобретение может быть использовано для лечения пациентов, страдающих воспалительным или аутоиммунным заболеванием, которое является невосприимчивым к лечению у пациентов, гомозиготных или гетерозиготных по FcγRIIIa-158F (генотип V/F или F/F), другими терапевтическими средствами, включая анти-CD20-антитела, или вообще не поддается лечению такими терапевтическими средствами.

Краткое описание графического материала

На фиг. 1А-1F представлены результаты анализа на антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) в шести клеточных линиях.

На фиг. 2A-2D представлены результаты анализа на антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) в клетках пациента с ХЛЛ (n = 8).

На фиг.3 систематизированы результаты анализа на ADCC в клетках пациента с ХЛЛ (n=9).

На фиг.4 представлены результаты анализа на ADCC в клетках пациента с ХЛЛ, проводимого с использованием эффекторных NK-клеток, взятых у двух различных доноров.

На фиг.5 представлены результаты количественной оценки экспрессии CD40 и CD20 на поверхности клеток пациента с ХЛЛ и на поверхности нормальных В-клеток.

На фиг.6 систематизированы результаты анализа на ADCC-активность для клеток, оцененных на уровень экспрессии CD40 и CD20 на поверхности указанных клеток.

На фиг.7 представлена гистограмма, иллюстрирующая уровни связанного антитела CHIR-12.12 на поверхности клеток клеточных линий Дауди и ARH77.

На фиг.8 представлены результаты исследований по интернализации антитела CHIR-12.12 и ритуксимаба в клетках пациента с ХЛЛ, полученные с помощью FACS-анализа.

На фиг.9 представлены результаты исследований по интернализации антитела CHIR-12.12 и ритуксимаба в нормальных В-клетках, полученные с помощью конфокальной микроскопии ФИТЦ-меченных антител.

На фиг.10 представлены результаты исследований по интернализации антитела CHIR-12.12 и ритуксимаба в клетках пациента с ХЛЛ, полученные с помощью конфокальной микроскопии Alexa488-меченных антител.

На фиг.11 систематизирована взаимосвязь между ADCC-активностью и интернализацией.

На фиг.12 представлена гистограмма, иллюстрирующая максимальный процент специфического лизиса клеток Дауди под действием антитела CHIR-12.12 или ритуксимаба, определяемого с использованием очищенных эффекторных NK-клеток, взятых у доноров с различными FcγRIIIa-генотипами.

На фиг.13 представлена гистограмма, иллюстрирующая ADCC-активность (ED₅₀) антитела CHIR-12.12 или ритуксимаба по отношению к клеткам Дауди, определяемая с использованием очищенных эффекторных NK-клеток, взятых у доноров с различными FcγRIIIa-генотипами.

На фиг.14 систематизирована сравнительная ADCC-активность антитела CHIR-12.12 и ритуксимаба по отношению к клеткам пациента с ХЛЛ (n=9), определяемая с использованием человеческих NK-клеток, взятых у пациентов-доноров с различными генотипами.

Подробное описание изобретения

Авторами настоящего изобретения было неожиданно обнаружено, что анти-CD40-антитела, такие как CHIR-12.12, обладают способностью опосредовать сильную антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) по отношению к CD40-экспрессирующим клеткам-мишеням в условиях, при которых другие ADCC-опосредующие антитела являются менее эффективными или относительно неэффективными. По сравнению с другими антителами, такими как ритуксимаб (ритуксан®), анти-CD40-антитела, используемые в соответствии с настоящим изобретением, могут связываться с любыми из двух аллотипов FcγRIIIa, отличающихся по аминокислоте 158 (V или F) и находящихся на человеческих природных клетках-киллерах (NK), причем связывающие свойства этих антител являются достаточными для индуцирования сильной ADCC. Полученные результаты оказались неожиданными и явились большим шагом вперед в области разработки способов лечения воспалительных и аутоиммунных заболеваний путем проведения перекрестного обследования всех пациентов.

В соответствии с этим анти-CD40-антитела, такие как CHIR-12.12, могут быть использованы для лечения воспалительных заболеваний и аутоиммунных заболеваний, ассоциированных с CD40-экспрессирующими клетками, у пациентов, гетерозиготных или гомозиготных по FcγRIIIa-158F (генотип V/F или F/F), а также пациентов, гомозиготных по FcγRIIIa-158V (генотип V/V).

Настоящее изобретение также относится к способу лечения пациента, страдающего воспалительным или аутоиммунным заболеванием, ассоциированным с CD40-экспрессирующими клетками, где указанный пациент является гетерозиготным или гомозиготным по FcγRIIIa-158F (генотип V/F или F/F) и где указанный способ включает введение указанному пациенту терапевтически или профилактически эффективного количества анти-CD40-антитела. Настоящее изобретение также относится к применению терапевтически или профилактически эффективного количества анти-CD40-антитела в целях приготовления лекарственного средства для лечения воспалительного или аутоиммунного заболевания, ассоциированного с CD40-экспрессирующими клетками у пациента, гетерозиготного или гомозиготного по FcγRIIIa-158F (генотип V/F или F/F).

Как указывалось выше, было обнаружено, что клиническая активность ритуксимаба при лечении НХЛ коррелирует с FcγRIIIa-генотипом пациента. Пациенты с 158 а.к.-полиморфизмом FcγRIIIa F/F являются менее восприимчивыми к лечению ритуксимабом, чем V/V- или V/F-пациенты (см., например, Cartron et al. (2002) Blood 99(3):754-758 или Dall'Ozzo et al. (2004) Cancer Res. 64:4664-4669. Как указывалось выше, в настоящее время проводятся клинические испытания по применению ритуксана® для лечения аутоиммунных заболеваний. В соответствии с этим настоящее изобретение может быть использовано для лечения воспалительных заболеваний и аутоиммунных заболеваний, которые не являются восприимчивыми к лечению анти-CD20-антителом, таким как ритуксимаб (ритуксан®). Кроме того, может быть получено лекарственное средство, которое будет обладать сильным действием, направленным на уничтожение клеток-мишеней и которое необязательно использовать в виде конъюгата “антитело-токсин”, а поэтому такое средство будет более дешевым и будет продуцировать меньше побочных эффектов.

Анти-CD40-антитела, такие как CHIR-12.12, могут быть использованы в способах ингибирования продукции антител В-клетками у пациента, гетерозиготного или гомозиготного по FcγRIIIa-158F (генотип V/F или F/F), а также у пациентов, гомозиготных по FcγRIIIa-158V (генотип V/V).

Таким образом, настоящее изобретение относится к способу ингибирования продукции антитела В-клетками у пациента, гетерозиготного или гомозиготного по FcγRIIIa-158F (генотип V/F или F/F), где указанный способ включает введение указанному пациенту эффективного количества анти-CD40-антитела, такого как CHIR-12.12. Настоящее изобретение также относится к использованию эффективного количества анти-CD40-антитела в целях изготовления лекарственного средства для ингибирования продукции антитела В-клетками у пациента, гетерозиготного или гомозиготного по FcγRIIIa-158F (V/F или F/F).

Для специалистов в данной области явился неожиданным тот факт, что может быть осуществлено ингибирование продуцирования антитела В-клетками у пациента, гетерозиготного или гомозиготного по FcγRIIIa-158F (генотип V/F или F/F).

Настоящее изобретение относится к способу лечения, выбранному для отдельного индивидуума, исходя из его FcγRIIIa-158-генотипа, и включающему введение указанному пациенту ADCC-опосредующего анти-CD40-антитела.

Настоящее изобретение относится к способу идентификации пациента, страдающего воспалительным или аутоиммунным заболеванием, которое поддается лечению под действием анти-CD40-антитела и которое не поддается лечению ритуксимабом (ритуксаном®), где указанный способ включает:

а) идентификацию пациента, страдающего воспалительным заболеванием или аутоиммунным заболеванием, которое ассоциируется с CD40-экспрессирующими клетками и которое не поддается лечению ритуксимабом (ритуксаном®); и

b) определение указанного FcγRIIIa-158-генотипа у пациента (V/V, V/F или F/F),

где указанное воспалительное заболевание или аутоиммунное заболевание поддается лечению под действием анти-CD40-антитела в том случае, если указанный пациент является гетерозиготным или гомозиготным по FcγRIIIa-158F (генотип V/F или F/F). Настоящее изобретение может также включать стадию введения пациенту, идентифицированному с применением такого способа, терапевтически или профилактически эффективного количества анти-CD40-антитела.

Такой способ идентификации пациента, страдающего воспалительным заболеванием или аутоиммунным заболеванием, поддающимся лечению анти-CD40-антителом, может быть легко осуществлен специалистом в данной области с использованием подходящего диагностического набора. Такой набор должен включать реагенты, подходящие для установления у пациента FcγRIIIa-158-генотипа. Таким образом, настоящее изобретение также относится к набору для идентификации пациента, страдающего воспалительным или аутоиммунным заболеванием, поддающимся лечению анти-CD40-антителом, где указанный набор включает реагенты для определения FcγRIIIa-158-генотипа у данного пациента. Подходящие наборы более подробно описаны ниже.

Настоящее изобретение также относится к способу выбора курса лечения антителом для пациента, страдающего воспалительным или аутоиммунным заболеванием, которое не поддается лечению ритуксимабом (ритуксаном®), где указанный способ включает:

а) идентификацию пациента, страдающего воспалительным заболеванием или аутоиммунным заболеванием, которое ассоциируется с CD40-экспрессирующими клетками и которое не поддается лечению ритуксимабом (ритуксаном®); и

b) определение у пациента указанного FcγRIIIa-158-генотипа (V/V, V/F или F/F),

где для лечения указанного воспалительного заболевания или аутоиммунного заболевания анти-CD40-антитело выбирают в том случае, если указанный пациент является гетерозиготным или гомозиготным по FcγRIIIa-158F (генотип V/F или F/F). В частности, лечение анти-CD40-антителом может оказаться предпочтительнее, чем лечение ритуксимабом (ритуксаном®). Настоящее изобретение может также включать стадию введения пациенту, идентифицированному таким способом, терапевтически или профилактически эффективного количества анти-CD40-антитела.

Указанный способ выбора курса лечения антителом для данного пациента, страдающего воспалительным или аутоиммунным заболеванием, может быть легко осуществлен специалистом в данной области с использованием подходящего диагностического набора. Такой набор должен включать реагенты, подходящие для оп