Гуманизированные антагонистические антитела против бета7 и их применение

Гуманизированные антагонистические антитела против бета7 и их применение

Иллюстрации

Показать все

Реферат

В данной заявке, которая не является предварительной заявкой, поданной согласно 37 CFR § 1.53(b)(1), испрашивается приоритет в соответствии с 35 USC § 119(e) на основании предварительной заявки США №60/607377, поданной 3 сентября 2004, полное содержание которой включено в данное описание в качестве ссылки.

Область техники

Настоящее изобретение в основном относится к области молекулярной биологии и регуляции факторов роста. Более конкретно, данное изобретение относится к модуляторам биологической активности интегринов, содержащих субъединицу бета7, а также к применению таких модуляторов.

Предпосылки создания изобретения

Интегрины представляют собой α/β-гетеродимерные рецепторы клеточной поверхности, участвующие в ряде клеточных процессов, от клеточной адгезии до регуляции генов (Hynes, R.O., Cell, 1992, 69:11-25; and Hemler, M.E., Annu. Rev. Immunol., 1990, 8:365-368). Некоторые интегрины участвуют в патологических процессах и вызывают большой интерес как потенциальные мишени для разрабатываемых лекарственных средств (Sharar, S.R. et al., Springer Semin. Immunopathol., 1995, 16:359-378). Интегрины участвуют в иммунологических процессах, таких как транспорт, адгезия и инфильтрация лейкоцитов при воспалительном ответе (Nakajima, H. et al., J. Exp.Med., 1994, 179:1145-1154). Адгезивные свойства клеток регулируются путем изменения экспрессии интегринов, причем в разных воспалительных ответах участвуют разные интегрины. Butcher, E.C. et al., Science, 1996, 272:60-66. Интегрины бета7 (т.е. альфа4бета7 (α4β7) и альфаЕбета7 (αEβ7)) экспрессируются преимущественно на моноцитах, лимфоцитах, эозинофилах, базофилах и макрофагах, но не на нейтрофилах. Elices, M.J. et al., Cell, 1990, 60:577-584. Основными лигандами интегрина α4β7 являются эндотелиальные поверхностные белки, к которым относятся молекулы клеточной адгезии - мукозные адрессины (MAdCAM) и молекулы адгезии сосудистых клеток (VCAM-I) (Makarem, R. et al., J. Biol. Chem., 1994, 269:4005-4011). Связывание α4β7 с MAdCAM и/или VCAM, экспрессирующимися на наружных эндотелиальных венулах (HEV) в участках воспаления, приводит к прочной адгезии лейкоцитов к эндотелию, с последующим проникновением в воспаленную ткань (Chuluyan, H.E. et al., Springer Semin. Immunopathol., 1995, 16:391-404). Основным лигандом интегрина αEβ7 является поверхностный белок внутриэпителиальных лимфоцитов (IEL) E-кадгерин, который обеспечивает прилипание αEβ7-несущей клетки к эпителиальным лимфоцитам. Показано, что моноклональные антитела против α4β7, MAdCAM или VCAM являются эффективными модуляторами хронических воспалительных заболеваний у животных моделей, таких как астма (Laberge, S. et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 1995, 151:822-829), ревматоидный артрит (RA; Barbadillo, C. et al., Springer Semin. ImmunopathoL, 1995, 16:375-379), колит (Viney et al, J. Immunol., 1996, 157: 2488-2497) и воспалительное заболевание кишечника (IBD; Podalski, D.K., N. Eng. J. Med., 1991, 325:928-937; Powrie, F. et al., Ther. Immunol., 1995, 2:115-123). Показано, что моноклональные антитела против субъединицы бета7 связываются с данной субъединицей интегринов (Tidswell, M. et al. (1997) J. Immunol. 159:1497-1505), однако поскольку эти антитела не являются человеческими или гуманизированными, они не могут иметь клинического применения.

Существует потребность в высокоспецифических соединениях, таких как гуманизированные антитела или их связывающие фрагменты, которые способны ингибировать взаимодействие между интегрином альфа4бета7 и его лигандами MAdCAM и/или VCAM, а также взаимодействие между интегрином альфаЕбета7 и его лигандом E-кадгерином. Такие соединения можно использовать для лечения хронических воспалительных заболеваний, таких как астма, болезнь Крона, язвенный колит, диабет, осложнения при трансплантации органов и заболевания, связанные с аллотрансплантацией.

Все упоминаемые ссылки, в том числе патентные заявки и публикации, включены в данное описание в качестве ссылки во всей полноте.

Описание изобретения

Данное изобретение частично основано на идентификации ряда антагонистов биологических путей, в которых участвуют бета7-содержащие интегрины и которые в большинстве случаев относятся к биологическим/клеточным процессам, представляющим собой важные и перспективные терапевтические мишени. Такие биологические процессы включают в себя, без ограничения, воспаление, в частности хронические воспалительные заболевания, такие как астма, аллергия, IBD, диабет, заболевания, связанные с трансплантацией, и реакции "трансплантат против хозяина". В данном изобретении предложены композиции и способы, направленные на ингибирование клеточной адгезии и/или клеточного рекрутинга, опосредованных интегрином бета7, которое включает в себя, без ограничения, ингибирование связывания MAdCAM и VCAM-1 с внеклеточным фрагментом интегрина альфа4бета7 и ингибирование взаимодействия E-кадгерина с интегрином альфаЕбета7. Как описано в данном документе, на основе антагонистов согласно изобретению можно получить важные терапевтические и диагностические средства, направленные на патологические состояния, связанные с аномальной или нежелательной передачей сигнала, опосредованной интегрином бета7. Соответственно, в данном изобретении предложены способы, композиции, наборы и промышленные изделия, направленные на модуляцию интегрин бета7-опосредованных путей, включающую в себя модулирование связывания MAdCAM-альфа4бета7 и рекрутинга лейкоцитов в эпителий желудочно-кишечного тракта при аллергии, астме, IBD (такой как болезнь крона и язвенный колит), диабете, воспалении, сопровождающем трансплантацию, реакции "трансплантант против хозяина" и/или нарушениях при аллотрансплантации, а также при других биологических/физиологических процессах, опосредованных интегрином бета7.

В одном аспекте настоящего изобретения предложены терапевтические средства против бета7, подходящие для терапевтического применения и способные воздействовать на различные нарушения интегрин бета7-опосредованного пути. Например, в одном воплощении данного изобретения предложено гуманизированное антитело против бета7, где антитело в виде фрагмента Fab обладает практически таким же сродством связывания с человеческим бета7, как и у мышиного фрагмента Fab, включающего в себя, содержащего или в основном содержащего последовательности вариабельных доменов легкой цепи и тяжелой цепи, как изображено на фиг.1A и 1B, или на фиг.9A и 9B. В другом воплощении данного изобретения предложено гуманизированное антитело против бета7, где сродство связывания антитела в виде фрагмента Fab с человеческим бета7 по меньшей мере в 3 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 7 раз или по меньшей мере в 10 раз ниже, чем сродство связывания мышиного или крысиного фрагмента Fab, включающего в себя, содержащего или в основном содержащего последовательности вариабельных доменов легкой цепи и тяжелой цепи, как изображено на фиг.1A и 1B или на фиг.9A и 9B. Альтернативно, гуманизированное антитело против бета7 или его фрагмент, связывающий бета7, согласно изобретению обладает моновалентным сродством к человеческому бета7, причем данное сродство по существу равно моновалентному сродству или превышает моновалентное сродство к человеческому бета7 антитела, содержащего вариабельные последовательности легкой цепи и тяжелой цепи, как изображено на фиг.1A (SEQ ID NO: 10) и/или фиг.1B (SEQ ID NO: 11), или на фиг.9A (SEQ ID NO: 12), и/или на фиг.9B (SEQ ID NO: 13). Сродство антитела или его связывающего фрагмента с высокой аффинностью в отношении человеческого бета7 по меньшей мере в 2 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 50 раз, по меньшей мере в 100 раз, по меньшей мере в 500 раз, по меньшей мере в 1000 раз, по меньшей мере в 5000 раз или по меньшей мере в 10000 раз выше, чем сродство антитела, содержащего последовательности легкой цепи и тяжелой цепи, как изображено на фиг.1A (SEQ ID NO: 10) и/или фиг.1B (SEQ ID NO: 11), или на фиг.9A (SEQ ID NO: 12) и/или фиг.9B (SEQ ID NO: 13).

В другом воплощении данное изобретение связано с гуманизированным антителом против бета7, где антитело в виде фрагмента Fab обладает сродством связывания с человеческим бета7, которое, например, по меньшей мере в 3 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 7 раз, по меньшей мере в 9 раз, по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 15 раз, по меньшей мере в 20 раз или по меньшей мере в 100 раз выше, чем сродство связывания фрагмента Fab грызунов (таких, как крысы или мыши), включающего в себя, содержащего или в основном содержащего последовательности вариабельных доменов легкой цепи и тяжелой цепи, как изображено на фиг.1A и фиг.1B соответственно. В одном воплощении указанный фрагмент Fab грызунов обладает сродством связывания фрагмента Fab, содержащего последовательности вариабельных доменов крысиного антитела FIB504.64, полученного с использованием гибридомной клеточной линии, депонированной в Американской коллекции типовых культур под номером ATCC HB-293. В следующем воплощении гуманизированный фрагмент Fab согласно изобретению обладает сродством связывания фрагмента Fab, содержащего последовательности вариабельных доменов, полученные из гуманизированных антител против бета7 согласно изобретению. В данной области хорошо известно, что сродство связывания лиганда с рецептором можно определить с помощью разных анализов и выразить в виде ряда количественных значений. Соответственно, в одном воплощении сродство связывания выражают в виде значений Kd и подразумевают собственное сродство связывания (например, с минимизированной авидностью). В основном и предпочтительно сродство связывания измеряют in vitro, в бесклеточной среде или в среде, содержащей клетки. Как описано в данном документе, степень различия в сродстве связывания можно количественно выразить в виде отношения значения сродства связывания гуманизированного антитела в виде Fab к значению сродства связывания Fab антитела отнесения/сравнения (например, мышиного антитела, содержащего донорные последовательности гипервариабельных участков), где значения сродства связывания определяют в одинаковых условиях. Так, в одном воплощении степень различия сродства связывания определяют как отношение значений Kd гуманизированного антитела в виде Fab и указанного Fab антитела отнесения/сравнения. Для измерения сродства связывания можно использовать любые известные в данной области анализы, в том числе описанные в данном документе, например, Biacore® (Biacore International Ab, Uppsala, Sweden) и ELISA.

Разные аспекты и воплощения антагонистического антитела против бета7 согласно изобретению отражены в возможных пунктах формулы изобретения:

1. Антитело, представляющее собой антитело против бета7 или его бета7-связывающий фрагмент, которое включает в себя

(a) по меньшей мере одну, две, три, четыре или пять последовательностей гипервариабельных участков (HVR), выбранных из группы, состоящей из

(i) HVR-L1, содержащего последовательность A1-A11, где A1-A11 означает RASESVDTYLH (SEQ ID NO: 1)

(ii) HVR-L2, содержащего последовательность B1-B8, где B1-B8 означает KYASQSIS (SEQ ID NO: 2)

(iii) HVR-L3, содержащего последовательность C1-C9, где C1-C9 означает QQGNSLPNT (SEQ ID NO: 3)

(iv) HVR-H1, содержащего последовательность D1-D10, где D1-D10 означает GFFITNNYWG (SEQ ID NO: 4)

(v) HVR-H2, содержащего последовательность E1-E17, где E1-E17 означает GYISYSGSTSYNPSLKS (SEQ ID NO: 5); и

(vi) HVR-H3, содержащего последовательность F2-F11, где F2-F11 означает MTGSSGYFDF (SEQ ID NO: 6).

В воплощении полипептида или антитела по п.1 полипептид или антитело содержит по меньшей мере один вариант HVR, где вариантная последовательность HVR включает в себя по меньшей мере один остаток по меньшей мере одной из последовательностей SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и 9. В другом воплощении п.1 или п.2 данное изобретение включает в себя антитело против бета7 или его бета7-связывающий фрагмент, содержащий один, два, три, четыре, пять или шесть гипервариабельных участков (HVR), выбранных из группы, состоящей из HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3,

где (i) HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность RASESVDTYLH (SEQ ID NO: 1); RASESVDSLLH (SEQ ID NO: 7), RASESVDTLLH (SEQ ID NO: 8) или RASESVDDLLH (SEQ ID NO: 9);

(ii) HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность KYASQSIS (SEQ ID NO: 2), RYASQSIS (SEQ ID NO: 67) или XYASQSIS (SEQ ID NO: 68, где X означает любую аминокислоту),

(iii) HVR-L3 содержит QQGNSLPNT (SEQ ID NO: 3),

(iv) HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность GFFITNNYWG (SEQ ID NO: 4),

(v) HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность GYISYSGSTSYNPSLKS (SEQ ID NO: 5) и

(vi) HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность MTGSSGYFDF (SEQ ID NO: 6) или RTGSSGYFDF (SEQ ID NO: 66) в относительных положениях F2-F11; или данный участок содержит аминокислотную последовательность F1-F11, где F1-F11 означает AMTGSSGYFDF (SEQ ID NO: 63), ARTGSSGYFDF (SEQ ID NO: 64) или AQTGSSGYFDF (SEQ ID NO: 65).

В следующем воплощении п.1 или в любом из его воплощений данное изобретение связано с антителом против бета7 или его бета7-связывающим фрагментом, которое содержит один, два, три, четыре, пять или шесть гипервариабельных участков (HVR), выбранных из группы, состоящей из HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3,

где (i) HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность A1-A11, где A1-A11 означает RASESVDTYLH (SEQ ID NO: 1); RASESVDSLLH (SEQ ID NO: 7), RASESVDTLLH (SEQ ID NO: 8) или RASESVDDLLH (SEQ ID NO: 9), или вариант SEQ ID NO: 1, 7, 8 или 9, где аминокислота A2 выбрана из группы, состоящей из A, G, S, T и V, и/или аминокислота A3 выбрана из группы, состоящей из S, G, I, K, N, P, Q, R и T, и/или A4 выбрана из группы, состоящей из E, V, Q, A, D, G, H, I, K, L, N и R, и/или аминокислота A5 выбрана из группы, состоящей из S, Y, A, D, G, H, I, K, N, P, R, T и V, и/или аминокислота A6 выбрана из группы, состоящей из V, R, I, A, G, K, L, M и Q, и/или аминокислота A7 выбрана из группы, состоящей из D, V, S, A, E, G, H, I, K, L, N, P, S и T, и/или аминокислота A8 выбрана из группы, состоящей из D, G, N, E, T, P и S, и/или аминокислота A9 выбрана из группы, состоящей из L, Y, I и M, и/или аминокислота A10 выбрана из группы, состоящей из L, A, I, M и V, и/или аминокислота A11 выбрана из группы, состоящей из H, Y, F и S;

(ii) HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность B1-B8, где B1-B8 означает KYASQSIS (SEQ ID NO: 2), RYASQSIS (SEQ ID NO: 67) или XYASQSIS (SEQ ID NO: 68, где X означает любую аминокислоту), или вариант SEQ ID NO: 2, 67 или 68, где аминокислота B1 выбрана из группы, состоящей из K, R, N, V, A, F, Q, H, P, I, L, Y и X (где X означает любую аминокислоту), и/или аминокислота B4 выбрана из группы, состоящей из S и D, и/или аминокислота B5 выбрана из группы, состоящей из Q и S, и/или аминокислота B6 выбрана из группы, состоящей из S, D, L и R, и/или аминокислота B7 выбрана из группы, состоящей из I, V, E и K;

(iii) HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность C1-C9, где C1-C9 означает QQGNSLPNT (SEQ ID NO: 3) или вариант SEQ ID NO: 3, где аминокислота С8 выбрана из группы, состоящей из N, V, W, Y, R, S, T, A, F, H, I, L, M и Y;

(iv) HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность D1-D10, где D1-D10 означает GFFITNNYWG (SEQ ID NO: 4),

(v) HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность E1-E17, где E1-E17 означает GYISYSGSTSYNPSLKS (SEQ ID NO: 5) или вариант SEQ ID NO: 5, где аминокислота Е2 выбрана из группы, состоящей из Y, F, V и D, и/или аминокислота Е6 выбрана из группы, состоящей из S и G, и/или аминокислота Е10 выбрана из группы, состоящей из S и Y, и/или аминокислота Е12 выбрана из группы, состоящей из N, T, A и D, и/или аминокислота Е13 выбрана из группы, состоящей из P, H, D и A, и/или аминокислота Е15 выбрана из группы, состоящей из L и V, и/или аминокислота Е17 выбрана из группы, состоящей из S и G, и

(vi) HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность F2-F11, где F2-F11 означает MTGSSGYFDF (SEQ ID NO: 6) или RTGSSGYFDF (SEQ ID NO: 66); или содержит аминокислотную последовательность F1-F11, где F1-F11 означает AMTGSSGYFDF (SEQ ID NO: 63), ARTGSSGYFDF (SEQ ID NO: 64) или AQTGSSGYFDF (SEQ ID NO: 65), или вариант SEQ ID NO: 6, 63, 64, 65 или 66, где аминокислота F2 представляет собой R, M, A, E, G, Q, S, и/или аминокислота F11 выбрана из группы, состоящей из F и Y.

В одном из воплощений п.1 или в любом антителе согласно изобретению аминокислота в положении 71 (по системе нумерации Кабат) каркасного участка тяжелой цепи выбрана из группы, состоящей из R, A и T, и/или аминокислота в положении 73 (по системе нумерации Кабат) каркасного участка тяжелой цепи выбрана из группы, состоящей из N и T, и/или аминокислота в положении 78 (по системе нумерации Кабат) каркасного участка тяжелой цепи выбрана из группы, состоящей из F, A и L.

В одном воплощении п.1 или в любом антителе согласно изобретению HVR-L1 антитела согласно изобретению содержит последовательность SEQ ID NO: 1. В одном воплощении HVR-L2 антитела согласно изобретению содержит последовательность SEQ ID NO: 2. В одном воплощении HVR-L3 антитела согласно изобретению содержит последовательность SEQ ID NO: 3. В одном воплощении HVR-H1 антитела согласно изобретению содержит последовательность SEQ ID NO: 4. В одном воплощении HVR-H2 антитела согласно изобретению содержит последовательность SEQ ID NO: 5. В одном воплощении HVR-H3 антитела согласно изобретению содержит последовательности SEQ ID NO: 6 или 66 в относительных положениях F2-F11, или SEQ ID NO: 63, 64 или 65 в относительных положениях F1-F11. В одном воплощении HVR-L1 содержит RASESVDSLLH (SEQ ID NO: 7). В одном воплощении HVR-L1 содержит RASESVDTLLH (SEQ ID NO: 8). В одном воплощении HVR-L1 содержит RASESVDDLLH (SEQ ID NO: 9). В одном воплощении антитело согласно изобретению, содержащее указанные последовательности (как здесь указано в сочетании), является гуманизированным или человеческим.

В одном аспекте данного изобретения предложено антитело, содержащее один, два, три, четыре, пять или шесть HVR, где каждый HVR включает в себя, содержит или преимущественно содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и 9, и где SEQ ID NO: 1, 7, 8 или 9 соответствуют HVR-L1, SEQ ID NO: 2 соответствует HVR-L2, SEQ ID NO: 3 соответствует HVR-L3, SEQ ID NO: 4 соответствует HVR-H1, SEQ ID NO: 5 соответствует HVR-H2, а SEQ ID NO: 6 соответствует HVR-H3. В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, которые имеют последовательности SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 и 6 соответственно. В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, которые имеют последовательности SEQ ID NO: 7, 2, 3, 4, 5 и 6 соответственно. В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, которые имеют последовательности SEQ ID NO: 8, 2, 3, 4, 5 и 6 соответственно. В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, которые имеют последовательности SEQ ID NO: 9, 2, 3, 4, 5 и 6 соответственно. В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, которые имеют последовательности SEQ ID NO: 9, 2, 3, 4, 5 и 66, или SEQ ID NO: 9, 2, 3, 4, 5, 63, или SEQ ID NO: 9, 2, 3, 4, 5, 64, или SEQ ID NO: 9, 2, 3, 4, 5 и 65, или SEQ ID NO: 9, 67, 3, 4, 5, 64, или SEQ ID NO: 9, 68, 3, 4, 5, 64.

Вариантные HVR, входящие в состав антитела согласно изобретению, могут содержать модификации одного или нескольких остатков, кроме того, HVR и/или каркасные участки могут быть гуманизированными. Воплощения согласно изобретению, несущие модификации в HVR и/или каркасном участке, включают в себя, без ограничения, нижеследующие возможные пункты формулы изобретения:

2. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, где A8 в вариантном HVR-L1 означает S, D или T, а A9 означает L.

3. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, где антитело является гуманизированным.

4. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, где по меньшей мере часть каркасной последовательности представляет собой консенсусную последовательность человеческого каркасного участка.

5. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, где указанная модификация представляет собой замену, вставку или делецию.

6. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, где вариант HVR-L1 содержит 1-10 (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) замен в любом сочетании следующих положений: A2 (G, S, T или V); A3 (G, I, K, N, P, Q, R или T), A4 (A, D, G, H, I, K, L, N, Q, R или V), A5 ( A, D, G, H, I, K, N, P, R, T, V или Y), A6 (A, G, I, K, L, M, Q или R), A7 (A, E, G, H, I, K, L, N, P, S, T или V), A8 (S, D, E, G, P или N) и A9 (L, I или M), A10 (A, I, M или V) и A11 (F, S или Y).

7. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, где вариант HVR-L2 содержит 1-4 (1, 2, 3 или 4) замен в любом сочетании следующих положений: B1 (N), B5 (S), B6 (R или L) и B7 (T, E, K или V).

8. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, где вариант HVR-L3 содержит по меньшей мере одну замену в положении C8 (W, Y, R, S, A, F, H, I, L, M, N, T или V).

9. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, где вариант HVR-H2 содержит 1-7 (1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7) замен в любом сочетании следующих положений: E2 (V, D или F), E6 (G), E10 (Y), E12 (A, D или T), E13 (D, A или H), E15 (V), E17 (G).

10. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, где вариант HVR-H3 содержит 1 или 2 замены в любом сочетании следующих положений: F2 (A, E, G, Q, R или S) и F11 (Y).

11. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, которое содержит HVR-L1, имеющий последовательность SEQ ID NO: 7.

12. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, которое содержит HVR-L1, имеющий последовательность SEQ ID NO: 8.

13. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, которое содержит HVR-L1, имеющий последовательность SEQ ID NO: 9.

14. Антитело по любому из п.п.11-13, тяжелая цепь которого содержит консенсусную последовательность каркасного участка человеческой тяжелой цепи подгруппы III, несущую замену в положении 71, 73 и/или 78.

15. Антитело по п.14, где указанная замена включает в себя R71A, N73T и/или N78A.

16. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, которое содержит HVR-L3, имеющий последовательность SEQ ID NO: 3.

17. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, где A8 в вариантном HVR-L1 означает S.

18. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, где A8 в вариантном HVR-L1 означает D.

19. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, где A9 в вариантном HVR-L1 означает L.

20. Антитело по п.1 или любое из его воплощений, где между последовательностями E1-E17 и F1-F11 находится последовательность каркасного участка HFR3-1-HFR3-31, и где HFR3-6 означает A или R, HFR3-8 означает N или T, а HFR3-13 означает L, или A, или F.

21. Гуманизированное антитело против бета7, где моновалентное сродство антитела к человеческому бета7 по существу идентично моновалентному сродству крысиного антитела, содержащего вариабельную последовательность легкой цепи и тяжелой цепи, как изображено на фиг.9.

22. Гуманизированное антитело против бета7, где моновалентное сродство антитела к человеческому бета7 по меньшей мере в 3 раза выше, чем моновалентное сродство крысиного антитела, содержащего вариабельную последовательность легкой цепи и тяжелой цепи, как изображено на фиг.9.

23. Гуманизированное антитело по п.21 или 22, где крысиное антитело получают с использованием гибридомной клеточной линии, депонированной в Американской коллекции типовых культур под номером ATCC HB-293.

24. Антитело по любому из п.п.21-23, где сродство связывания выражают в виде значения Kd.

25. Антитело по любому из п.п.21-24, где сродство связывания измеряют методом Biacore™ или радиоиммуного анализа.

26. Антитело по п.1, содержащее консенсусную последовательность каркасного участка человеческой легкой цепи κ подгруппы I.

27. Антитело по п.1, содержащее консенсусную последовательность каркасного участка человеческой тяжелой цепи подгруппы III.

28. Антитело по п.27, где последовательность каркасного участка содержит замену в положении 71, 73 и/или 78.

29. Антитело по п.28, где указанная замена включает в себя R71A, N73T и/или N78A, или где заменяемой аминокислотой в положении 71 является R или A, и/или аминокислотная замена в положении 78 включает в себя N или T, и/или аминокислотная замена в положении 78 включает в себя L, или A, или F.

30. Антитело по п.28, где указанная замена включает в себя L78F, или A78F, или A78L, или L78A.

31. Способ ингибирования взаимодействия субъединицы бета7 человеческого интегрина со второй субъединицей интегрина и/или лигандом путем приведения в контакт антитела по любому из п.п.1-30 со второй субъединицей интегрина и/или лигандом.

32. Способ по п.31, где вторая субъединица интегрина представляет собой альфа4-субъединицу интегрина, и где лиганд представляет собой MAdCAM, VCAM или фибронектин.

33. Способ по п.32, где альфа4-субъединица интегрина является человеческой.

34. Способ по п.33, где лиганд является человеческим.

35. Способ по п.32, где вторая субъединица интегрина представляет собой альфаЕ-субъединицу интегрина, и где лиганд представляет собой E-кадгерин.

36. Способ по п.35, где альфаЕ-субъединица интегрина является человеческой.

37. Способ по п.36, где лиганд является человеческим.

38. Способ по п.31, где ингибирование уменьшает или облегчает симптомы заболевания, выбранного из воспаления, астмы, воспалительного заболевания кишечника, болезни Крона, язвенного колита, диабета, воспаления, сопровождающего трансплантацию органов, реакции "трансплантат против хозяина" и воспаления, связанного с нарушениями при аллотрансплантации.

Другие воплощения согласно изобретению включают в себя, без ограничения, нижеследующие.

В одном воплощении HVR-L1 представляет собой SEQ ID NO: 1, 7, 8 или 9, или HVR-L1 представляет собой вариант SEQ ID NO: 1, 7, 8, или 9, который содержит 1-10 (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) замен в относительных положениях A1-A11 с любым сочетанием следующих положений: A2 (A, G, S, T или V); A3 (S, G, I, K, N, P, Q, R или T), A4 (E, A, D, G, H, I, K, L, N, Q, R или V), A5 (S, A, D, G, H, I, K, N, P, R, T, V или Y), A6 (V, A, G, I, K, L, M, Q или R), A7 (D, A, E, G, H, I, K, L, N, P, S, T или V), A8 (T, S, D, E, G, P или N) и A9 (Y, L, I или M), A10 (L, A, I, M или V) и A11 (H, F, S или Y). В одном воплощении HVR-L2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 67 или 68, или HVR-L2 представляет собой вариант SEQ ID NO: 2, 67, или 68, причем данный вариант HVR-L2 содержит 1-4 (1, 2, 3, 4 или 5) замен в относительных положениях B1-B8 с любым сочетанием следующих положений: B1 (K, R, N, V, A, F, Q, H, P, I, L, Y или X (где X означает любую аминокислоту)), B4 (S), B5 (Q или S), B6 (S, R или L) и B7 (I, T, E, K или V). В одном воплощении HVR-L3 представляет собой SEQ ID NO: 3, или HVR-L3 представляет собой вариант SEQ ID NO: 3, который содержит, по меньшей мере, одну замену в относительных положениях C1-C8, например, в положении C8 (W, Y, R, S, A, F, H, I, L, M, N, T или V). В одном воплощении HVR-H1 представляет собой SEQ ID NO: 4. В одном воплощении HVR-H2 представляет собой SEQ ID NO: 5, или HVR-H2 представляет собой вариант SEQ ID NO: 5, причем данный вариант HVR-H2 содержит 1-7 (1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7) замен в относительных положениях E1-E17 с любым сочетанием следующих положений: E2 (Y1 V, D или F), E6 (S или G), E10 (S или Y), E12 (N, A, D или T), E13 (P, D, A или H), E15 (L или V), E17 (S или G). В одном воплощении HVR-H3 представляет собой SEQ ID NO: 6, 63, 64, 65 или 66, или HVR-H3 представляет собой вариант SEQ ID NO: 6, 63, 64, 65 или 66, который содержит 1 или 2 замены в относительных положениях F1-F11 в случае SEQ ID NO: 63, 64 и 65, или в относительных положениях F2-F11 в случае SEQ ID NO: 6 и 66, с любым сочетанием следующих положений: F2 (M, A, E, G, Q, R или S) и F11 (F или Y). Буква (буквы) в скобках после каждого положения указывает пример замены (т.е. замещения) аминокислоты на консенсусную или другую аминокислоту, очевидный для специалиста в данной области, а пригодность других аминокислот для замен в контексте данного описания можно определить в рабочем порядке с помощью методов, известных в данной области и/или описанных в данном документе.

В одном воплощении HVR-L1 содержит последовательность SEQ ID NO: 1. В одном воплощении A8 в вариантном HVR-L1 означает D. В одном воплощении A8 в вариантном HVR-L1 означает S. В одном воплощении A9 в вариантном HVR-L1 означает L. В одном воплощении A8 в вариантном HVR-L1 означает D, а A9 в вариантном HVR-L1 означает L. В одном воплощении A8 в вариантном HVR-L1 означает S, а A9 в вариантном HVR-L1 означает L. В некоторых воплощениях согласно изобретению указанные варианты относятся к HVR-L1, а HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3 включают в себя или содержат, или преимущественно содержат последовательности SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5 и 6 соответственно. В некоторых воплощениях HVR-H3 включает в себя, или содержит, или преимущественно содержит SEQ ID NO: 6 или 66 (в относительных положениях F2-F11), или SEQ ID NO: 63 или 64 или 65 (в относительных положениях F1-F11).

В одном воплощении A8 в вариантном HVR-L1 означает I, а A9 в вариантном HVR-L1 означает L, данный вариант также относится к HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, причем каждый HVR включает в себя, содержит или преимущественно содержит SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5 и 6 соответственно.

В одном воплощении A8, A9 и A10 в вариантном HVR-L1 означают D, L и V, соответственно данный вариант также относится к HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, причем каждый HVR включает в себя, содержит или преимущественно содержит SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5 и 6 соответственно.

В одном воплощении A8 и A9 в вариантном HVR-L1 означают N и L, соответственно данный вариант также относится к HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, причем каждый HVR включает в себя, содержит или преимущественно содержит SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5 и 6 соответственно.

В одном воплощении A8 и A9 в вариантном HVR-L1 означают P и L соответственно, а B6 и B7 в вариантном HVR-L2 означают R и T соответственно, данный вариант также относится к HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, причем каждый HVR включает в себя, содержит или преимущественно содержит SEQ ID NO: 3, 4, 5 и 6 соответственно.

В одном воплощении A2, A4, A8, A9 и A10 в вариантном HVR-L1 означают S, D, S, L и V соответственно, данный вариант также относится к HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, причем каждый HVR включает в себя, содержит или преимущественно содержит SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5 и 6 соответственно.

В одном воплощении A5 и A9 в вариантном HVR-L1 означают D и T соответственно, данный вариант также относится к HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, причем каждый HVR включает в себя, содержит или преимущественно содержит SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5 и 6 соответственно.

В одном воплощении A5 и A9 в вариантном HVR-L1 означают N и L соответственно, данный вариант также относится к HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, причем каждый HVR включает в себя, содержит или преимущественно содержит SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5 и 6 соответственно.

В одном воплощении A9 в вариантном HVR-L1 означает L, данный вариант также относится к HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, причем каждый HVR включает в себя, содержит или преимущественно содержит SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5 и 6.

В одном воплощении данного изобретения антитело или полипептид, связывающий бета7, содержит HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, причем каждый HVR включает в себя, содержит или преимущественно содержит SEQ ID NO: 9, 2, 3, 4, 5 и 64 соответственно. В другом воплощении каждый HVR включает в себя, содержит или преимущественно содержит SEQ ID NO: 9, 67, 3, 4, 5 и 64. В другом воплощении каждый HVR включает в себя, содержит или преимущественно содержит SEQ ID NO: 9, 68, 3, 4, 5 и 64. В другом воплощении каждый HVR включает в себя, содержит или преимущественно содержит SEQ ID NO: 9, 2 или 67, или 68, 3, 4, 5 и 66.

В некоторых воплощениях вариантные антитела с указанными вариантами HVR-L1 также содержат HVR-L2, HVR-L3, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, каждый из которых имеет последовательность, описанную соответственно в SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5 и 6. Если вариант антитела содержит HVR-L1 A8(P) и A9(L) и HVR-L2 B6(R) и B7(T), в некоторых воплощениях указанный HVR-L1, HVR-L2-вариант также содержит HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, каждый из которых имеет последовательность, описанную соответственно в SEQ ID NO: 3, 4, 5 и 6.

В некоторых воплощениях указанные антитела дополнительно содержат консенсусную последовательность человеческой тяжелой цепи подгруппы III. В одном воплощении данных антител консенсусная последовательность каркасного участка содержит замену в положении 71, 73 и/или 78. В некоторых воплощениях указанных антител в положении 71 находится A, в положении 73 находится T, и/или в положении 78 находится A. В одном воплощении указанные антитела дополнительно содержат консенсусную последовательность каркасного участка человеческой легкой цепи κI.

В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит HVR-L1, имеющий последовательность SEQ ID NO: 1. В одном воплощении, вариантное антитело согласно изобретению содержит вариант HVR-L1, где A10 означает V. В одном воплощении указанное вариантное антитело дополнительно содержит HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, каждый из которых имеет последовательность, описанную соответственно в SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5 и 6. В некоторых воплощениях указанные антитела дополнительно содержат консенсусную последовательность каркасного участка человеческой тяжелой цепи подгруппы III. В одном воплощении данных антител консенсусная последовательность каркасного участка содержит замену в положении 71, 73 и/или 78. В некоторых воплощениях данных антител в положении 71 находится A, в положении 73 находится T и/или в положении 78 находится A. В одном воплощении данных антител, указанные антитела дополнительно содержат консенсусную последовательность каркасного участка человеческой легкой цепи κI.

В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит HVR-L3, имеющий последовательность SEQ ID NO: 3. В одном воплощении вариантное антитело согласно изобретению содержит вариант HVR-L3, где C8 означает L. В одном воплощении указанное вариантное антитело дополнительно содержит HVR-L1, HVR-L2, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, каждый из которых имеет последовательность, описанную соответственно в SEQ ID NO: 1, 2, 4, 5 и 6. В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит вариант HVR-L3, где C8 означает W. В одном воплощении указанное вариантное антитело дополнительно содержит HVR-L1, HVR-L2, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, каждый из которых имеет последовательность, описанную соответственно в SEQ ID NO: 1, 2, 4, 5 и 6. В одном воплощении HVR-L1 имеет последовательность SEQ ID NO: 7, 8 или 9. В некоторых воплощениях указанные антитела дополнительно содержат консенсусную последовательность каркасного участка человеческой тяжелой цепи подгруппы III. В одном воплощении данных антител консенсусная последовательность каркасного участка содержит замену в положении 71, 73 и/или 78. В некоторых воплощениях данных антител в положении 71 находится A, в положении 73 находится T, и/или в положении 78 находится A. В одном воплощении данных антител указанные антитела дополнительно содержат консенсусную последовательность каркасного участка человеческой легкой цепи κI.

В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит HVR-H3, имеющий последовательность SEQ ID NO: 6. В одном воплощении вариант указанного антитела содержит вариантный HVR-H3, где F1 означает Q. В одном воплощении указанное вариантное антитело дополнительно содержит HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1 и HVR-H2, каждый из которых имеет последовательность, описанную соответственно в SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4 и 5. В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит вариант HVR-H3, где F1 означает R. В одном воплощении указанное вариантное антитело дополнительно содержит HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1 и HVR-H2, каждый из которых имеет последовательность, описанную соответственно в SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4 и 5. В одном воплощении HVR-L1 имеет последовательность SEQ ID NO: 7, 8 или 9. В некоторых воплощениях указанные антитела дополнительно содержат консенсусную последовательность каркасного участка человеческой тяжелой цепи подгруппы III. В одном воплощении данных антител консенсусная последовательность каркасного участка содержит замену в положении 71, 73 и/или 78. В некоторых воплощениях данных антител в положении 71 находится A, в положении 73 находится T, и/или в положении 78 находится A. В одном воплощении указанные антитела дополнительно содержат консенсусную последовательность каркасного участка человеческой легкой цепи κI.

В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит HVR-L1, имеющий последовательность SEQ ID NO: 1. В одном воплощении антитело содержит вариант HVR-L1, где A4 означает Q. В одном воплощении указанное вариантное антитело дополнительно содержит HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, каждый из которых имеет последовательность, описанную соответственно в SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5 и 6. В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит вариант HVR-L1, где A6 означает I. В одном воплощении указанное вариантное антитело дополнительно содержит HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, каждый из которых имеет последовательность, описанную соответственно в SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5 и 6. В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит вариант HVR-L1, где A7 означает S. В одном воплощении указанное вариантное антитело дополнительно содержит HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, каждый из которых имеет последовательность, описанную соответственно в SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5 и 6. В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит вариант HVR-L1, где A8 означает D или N. В одном воплощении указанное вариантное антитело дополнительно содержит HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, каждый из которых имеет последовательность, описанную соответственно в SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5 и 6. В некоторых воплощениях указанные антитела дополнительно содержат консенсусную последовательность каркасного участка тяжелой цепи человеческой подгруппы III. В одном воплощении данных антител консенсусная последовательность каркасного участка содержит замену в положении 71, 73 и/или 78. В некоторых воплощениях данных антител в положении 71 находится A, в положении 73 находится T и/или в положении 78 находится A. В одном воплощении указанные антитела дополнительно содержат консенсусную последовательность каркасного участка человеческой легкой цепи κI.

В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит HVR-L2, имеющий последовательность SEQ ID NO: 2. В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит вариант HVR-L2, где B1 означает N. В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит вариант HVR-L2, где B5 означает S. В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит вариант HVR-L2, где B6 означает L. В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит вариант HVR-L2, где B7 означает V. В одном воплощении антитело согласно изобретению содержит вариант HVR-L2, где B7 означает E или K. В некоторых воплощениях указанное вариантное антитело дополнительно содержит HVR-L1, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, каждый из