Соединения 2-(2-оксоиндолин-3-илиден)метил-5-(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропил)-6,7 дигидро-1-н-пиррол[3,2-с]пиридин-4(5н)-она и их применение в качестве ингибиторов протеинкиназы

Соединения 2-(2-оксоиндолин-3-илиден)метил-5-(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропил)-6,7 дигидро-1-н-пиррол[3,2-с]пиридин-4(5н)-она и их применение в качестве ингибиторов протеинкиназы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники

Данное изобретение относится к серии новых конденсированных с пирролом шестичленных азагетероциклических производных гидроксилированного морфолина, в частности к новым производным 2-(2-оксоиндолин-3-илиден)метил-5-(2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)-6,7-дигидро-1Н-пиррол[3,2-с]пиридин-4(5Н)-она, к их получению, к фармацевтическим композициям, содержащим такие производные, и к применению таких производных в качестве терапевтических агентов, в частности в качестве ингибиторов протеинкиназ.

Предшествующий уровень техники

Передача сигнала в клетке является фундаментальным механизмом, посредством которого внеклеточные сигналы перенаправляются во внутреннее пространство клеток и в дальнейшем регулируют различные клеточные процессы. Эти сигналы регулируют множество физиологических ответов в клетке, включая пролиферацию, дифференциацию, апоптоз и подвижность. Внеклеточные сигналы принимают форму разнообразных растворимых факторов, включая факторы роста, а также паракринные, аутокринные и эндокринные факторы. Посредством связывания со специфичными трансмембранными рецепторами лиганды факторов роста передают внеклеточные сигналы на внутриклеточные сигнальные пути, вызывая тем самым ответ индивидуальной клетки на внеклеточные сигналы. Многие из этих процессов передачи сигнала используют обратимый процесс фосфорилирования белков, в который вовлечены специфичные протеинкиназы и фосфатазы.

Протеинкиназы (ПК) играют решающую роль в процессе передачи сигнала. Они переносят гамма-фосфатную группу АТФ на специфический аминокислотный остаток в функциональном белке, что приводит в результате к серии биологических ответов. Протеинкиназы классифицируют на две группы в соответствии с аминокислотной специфичностью в качестве субстрата в процессе фосфорилирования: серин/треонинкиназы (СТК) и протеинтирозинкиназы (ПТК).

Механизм фосфорилирования тирозина широко распространен в процессе передачи сигнала и контролирует несколько клеточных функций, таких как митоз, развитие клеточного цикла и дифференциация и т.д. (Hanks and Hunter, 1995, FASEB J. 9:576-596; Cadena and Gill, 1992, FASEB J. 6:2332-2337; Schlessinger and Ullrich, 1992, Neuron 9:383-391; Vandergeer et al., 1994, Annu. Rev. Cell Biol. 10:251-337). Показано, что мутация, нерегулируемый или чрезмерно высокий уровень экспрессии протеинтирозинкиназ приводит к переходу нормальной клетки к неопластическому фенотипу (Chiao et al., 1994, Cancer Metast. Rev. 9:63-80; Hunter, 1991, Cell 64:249-270).

Фактор роста эндотелия сосудов (ФРЭС) был идентифицирован как неспецифический фактор роста, действующий на эндотелиальную клетку сосудов, и было показано, что он имеет разнообразные функции, такие как стимуляция пролиферации эндотелиальных клеток, повышение проницаемости микрососудов и индукция ангиогенеза (Hanks and Hunter, 1995, FASEB J. 9:576-596). Известно, что ФРЭС является наиболее эффективным и непосредственно действующим ангиогенным белком. Он является диффундирующим эндотелиальным клеточно-специфичным митогеном и фактором роста сосудов (Ferrara N et al., Endocr Rev, 1997, 18, 4-25; Tofimura Tet al., Hum Pathol, 1998, 29, 986-991). Семейство ФРЭС (VEGF) в настоящее время включает шесть известных членов: VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E и плацентарный фактор роста (ПлФР, PDF), представляющих собой димерные гликопротеины. Все члены семейства ФРЭС содержат характерные регулярно расположенные восьмицистеиновые остатки, относящиеся к мотиву, называемому "цистеиновым узлом". Авторы Li ling et al. (Li ling et al., Acta Biochimica et Biophysica Sinica, 2002, 34(1), 21-27) выявили высокую экспрессию ФРЭС в злокачественных опухолевых клетках, а также высокую экспрессию Flk-1, которая подразумевает существование как аутокринной, так и паракринной петель ФРЭС внутри опухоли. Существует четкая корреляция экспрессии ФРЭС с плотностью внутриопухолевой микрососудистой сети, и существует корреляция концентрации ФРЭС в тканях с прогнозом солидной опухоли, такой как рак молочной железы, рак легкого, рак простаты и колоректальный рак. Известно, что гипоксия играет решающую роль в стимуляции экспрессии ФРЭС. В дополнение к повышению скорости транскрипции гена, гипоксия, индуцирующая экспрессию гена ФРЭС в опухолевой клетке, также способствует стабилизации иРНК ФРЭС. Идентифицированы три различных члена, которые принадлежат к семейству VEGFR (РФРЭС): VEGFR-1/Flt-1, VEGFR-2/Flk-1/KDR и VEGFR-4/Flt-4. VEGFR-1 и VEGFR-2 принадлежат к рецепторам тирозинкиназы, расположенным на поверхности клетки, экспрессия которых, главным образом, ограничена клетками эндотелия сосудов опухоли. Фактор роста эндотелия сосудов (ФРЭС) и рецептор фактора роста эндотелия сосудов (РФРЭС) играют важную роль в процессе опухолевого ангиогенеза, и их оценивают как важную мишень противораковой биотерапии.

Обсуждают пять стратегий, направленных на ФРЭС(VEGF) и РФРЭС(VEGFR) для противоопухолевой терапии, как описано ниже: 1. Генотерапия (Ellis LM et al. J Biol Chem 1998, 273, 1052-1057): ФРЭС и РФРЭС вовлечены в положительную регуляцию опухолевого ангиогенеза. Генотерапия снижает экспрессию ФРЭС/РФРЭС или прерывает пути передачи сигнала с ингибированием их биологических активностей. 2. Моноклональные антитела анти-VEGF/VEGFR (Gordon M et al. Proc Am Soc Clin Oncol, 1998, 17, 2IIa): моноклональные антитела против ФРЭС/РФРЭС блокируют секретируемые ФРЭС и РФРЭС и прерывают внутриклеточную передачу сигнала, запускаемую ФРЭС, с ингибированием ангиогенеза. 3. Низкомолекулярные ингибиторы: серия соединений su, разработанная Sugen. 4. Растворимый РФРЭС: он связывается с ФРЭС, но не влияет на передачу сигнала. 5. Направленная терапия: два основных рецептора ФРЭС Flt-1 и Flk-1/KDR экспрессируются в клетках эндотелия сосудов опухоли, но не могут быть обнаружены при присоединении к эндотелию сосудов нормальной ткани. Следовательно, ФРЭС и РФРЭС обеспечивают специфичную мишень для противоопухолевой терапии. Для противоопухолевой терапии ФРЭС можно комбинировать с другими противоопухолевыми агентами, токсинами, радионуклидами.

Настоящее изобретение направлено на разработку аналогов формулы (I), основываясь на ингибиторе тирозинкиназы SU-14813 и эффективном противораковом агенте, которым являются конденсированные с пирролом шестичленные азагетероциклические производные, представленные на формуле А. Соединения по изобретению обладают очевидными структурными отличиями от существующих соединений на предшествующем уровне техники, и они также проявляют большую эффективность и большую функциальность.

Описание изобретения

Настоящее изобретение направлено на конкретные соединения конденсированных с пирролом шестичленных азагетероциклических производных гидроксилированного морфолина, имеющие формулу (I), в частности, на новые ингибиторы протеинтирозинкиназы, соединения 2-(2-оксоиндолин-3-илиден)метил-5-(2-гидроксил-3-морфолин-4-илпропил)-6,7-дигидро-1Н-пиррол[3,2-с]пиридин-4(5Н)-она, их таутомеры, энантиомеры, физиологически приемлемые соли, метаболиты, метаболитные пролекарства и их активности в регуляции активностей протеинкиназ.

где каждый из R₁, R₂, R₃, R₄ независимо выбран из группы, состоящей из атома водорода, галогена, арила, C_5-6 гетероарила, имеющего от одного до трех гетероатомов в кольце, выбранных из О, S и N, -OR₅, -NR₅R₆ и -NR₅COR₆, где указанный арил или С_5-6 гетероарил, имеющий от одного до трех гетероатомов в кольце, выбранных из О, S и N, является незамещенным или дополнительно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из алкила, алкоксила и галогена;

каждый из R₅ и R₆ независимо выбран из группы, состоящей из атома водорода и алкила, где указанный алкил является незамещенным или дополнительно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из арила, галогенарила, гидроксила и алкоксила.

Репрезентативные соединения по данному изобретению включают следующие не ограничивающие их соединения:

или их фармацевтически приемлемые соли,

где фармацевтически приемлемые соли согласно настоящему изобретению представляют собой соли, образованные настоящими соединениями и яблочной или малеиновой кислотами.

Другой аспект данного изобретения направлен на фармацевтическую композицию, ингибирующую протеинкиназы и содержащую соединения конденсированных с пирролом шестичленных азагетероциклических производных гидроксилированного морфолина, имеющие формулу (I), или их фармацевтически приемлемые соли, носители или эксципиенты.

Другой аспект данного изобретения направлен на способ модулирования каталитической активности протеинкиназы, включающий приведение в контакт данной протеинкиназы с соединениями конденсированных с пирролом шестичленных азагетероциклических производных гидроксилированного морфолина, имеющими формулу (I), или их фармацевтически приемлемыми солями, носителями или эксципиентами. Указанные протеинкиназы выбраны из рецепторных тирозинкиназ (РТК), нерецепторных протеинтирозинкиназ (ПТК) и серин/треонинпротеинкиназ (СТПК).

В другом аспекте данное изобретение направлено на применение соединений конденсированных с пирролом шестичленных азагетероциклических производных гидроксилированного морфолина, имеющих формулу (I), для получения лекарственного средства для лечения расстройств, связанных с протеинкиназой, где расстройства, связанные с протеинкиназой, выбраны из расстройств, связанных со следующими протеинкиназами: EGFR, HER-2, HER-3, HER-4, PDGFR, VEGFR-2, c-Kit, c-Met, FGFR и Flt3.

Другой аспект данного изобретения представляет собой способ получения конденсированных с пирролом шестичленных азагетероциклических производных гидроксилированный морфолина, имеющих формулу (I), или их фармацевтически приемлемых солей, где данный способ получения включает следующие стадии:

нагревание в атмосфере азота оптически активного соединения 1-амино-3-морфолин-4-илпропан-2-ола (Ia) с 2-трет-бутиловым, 4-этиловым диэфиром 5-карбоксиметил-3-метил-1Н-пиррол-2,4-дикарбоновой кислоты в ацетонитриле в присутствии 1-гидроксибензотриазола и N-этил-N'-(диметиламинопропил)-карбодиимида с получением хирального диэфира амида пирролдикарбоновой кислоты (Ib);

нагревание в атмосфере аргона хирального диэфира амида пирролдикарбоновой кислоты (Ib) с соляной кислотой в этаноле до образования флегмы с получением оптически активного этилового эфира пирроламида (Ic);

последующее нагревание оптически активного этилового эфира пирроламида (Ic) с бораном в безводном тетрагидрофуране (ТГФ) до образования флегмы с получением путем избирательного восстановления этилового эфира хирально замещенного пиррола (Id);

последующее нагревание в атмосфере аргона этилового эфира хирально замещенного пиррола (Id) с моногидратом гидроксида лития в гликоле до образования флегмы с получением циклизованного продукта, представляющего собой оптически активный конденсированный с пирролом шестичленный азагетероцикл (Ie);

взаимодействие оптически активного конденсированного с пирролом шестичленного азагетероцикла (Ie) с оксихлоридом фосфора и N,N-диметилформамидом (ДМФ) в безводном дихлорметане при комнатной температуре с получением путем реакции формилирования оптически активного конденсированного с пирролом шестичленного азагетероциклического формальдегида (If);

на последней стадии нагревание оптически активного конденсированного с пирролом шестичленного азагетероциклического формальдегида (If) с различными индолинонами в присутствии основания, такого как триэтиламин или пиперидин, в течение 2~12 часов с получением целевого продукта, относящегося к хиральным конденсированным с пирролом шестичленным азагетероциклическим производным гидроксилированного морфолина формулы (I);

где R₁, R₂, R₃, R₄ представляют собой такие, как описано выше.

Подробное описание изобретения

Если не указано иное, приведенные ниже термины, используемые в описании и формуле изобретения, имеют значения, обсуждаемые ниже.

"Алкил" относится к насыщенной алифатической углеводородной группе, включающей прямоцепочечные и разветвленноцепочечные группы из 1-20 атомов углерода. Предпочтительно алкильная группа представляет собой алкил среднего размера, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, например, метил, этил, пропил, 2-пропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, пентил и тому подобные. Более предпочтительно, он представляет собой низший алкил, имеющий от 1 до 4 атомов углерода, например, метил, этил, пропил, 2-пропил, н-бутил, изобутил или трет-бутил, и тому подобные. Алкильная группа может быть замещена или не замещена. В случае замещении замещающая группа (группы) может быть выбрана из группы, состоящей из галогена, гидроксила, алкоксила, арила, гетероарила, галогенарила, арилоксила, карбоновой кислоты, эфира карбоновой кислоты, -OR₅, -NR₅R₆, -COR₅ и -NR₅COR₆.

"Арил" относится к группам, имеющим по меньшей мере одно ароматическое кольцо, то есть имеющим конъюгированную систему пи-электронов, включая полностью углеродную циклическую арильную, гетероарильную и биарильную группу. Данная арильная группа может быть замещена или не замещена. В случае замещении замещающая группа (группы) может быть выбрана из группы, состоящей из галогена, алкоксила, алкила, гидроксила, арилоксила, карбоновой кислоты, эфира карбоновой кислоты, -OR₅, -NR₅R₆, -COR₅ и -NR₅COR₆.

"Гетероарил" относится к арилу, имеющему от одного до трех гетероатомов в кольце, выбранных из группы, состоящей из О, S и N, в качестве атомов, находящихся в кольце, где остальные атомы в кольце представляют собой С. Указанное кольцо представляет собой 5- или 6-членное кольцо. Примеры гетероарильных групп включают фурил, тиенил, пиридил, пирролил, N-алкилпирролил, пиримидинил, пиразинил, имидазолил и подобные. Гетероарильная группа может быть замещена или не замещена. В случае замещения замещающая группа (группы) может быть выбрана из группы, состоящей из галогена, алкоксила, алкила, гидроксила, арилоксила, карбоновой кислоты, эфира карбоновой кислоты, -OR₅, -NR₅R₆, -COR₅ и -NR₅COR₆.

"Гидроксил" относится к группе -ОН.

"Алкоксил" относится к обеим группам -О-(алкил) и -O-(незамещенный циклоалкил). Показательные неограничивающие примеры включают метокси, этокси, пропокси, бутокси, циклопропилокси, циклобутилокси, циклопентилокси, циклогексилокси и подобные. Алкоксильная группа может быть замещена или не замещена. В случае замещения замещающая группа (группы) может быть выбрана из группы, состоящей из галогена, гидроксила, алкоксила, арила, гетероарила, галогенарила, арилоксила, карбоновой кислоты, эфира карбоновой кислоты, -OR₅, -NR₅R₆, -COR₅ и -NR₅COR₆.

"Арилоксил" относится к обеим группам -O-арил и -O-гетероарил, где арил и гетероарил являются такими, как определено выше. Показательные неограничивающие примеры включают фенокси, пиридинилокси, фуранилокси, тиенилокси, пиримидинилокси, пиразинилокси и подобные, и их производные. Арилоксильная группа может быть замещена или не замещена. В случае замещения замещающая группа (группы) может быть выбрана из группы, состоящей из галогена, алкоксила, алкила, гидроксила, арилоксила, карбоновой кислоты, эфира карбоновой кислоты, -OR₅, -NR₅R₆, -COR₅ и -NR₅COR₆.

"Галоген" относится к фтору, хлору, брому или йоду, предпочтительно фтору или хлору.

"Галогеналкокси" относится к -О-(галогеналкил). Показательные неограничивающие примеры включают трифторметокси, трибромэтокси и подобные.

"Карбоновая кислота" относится к (алкил) С(=O)ОН.

"Карбоксилат" относится к (алкил) С(=O)O (алкил).

"Необязательный" или "необязательно" означает, что описанное далее событие или обстоятельство может иметь или не иметь место, и что описание включает случаи, где событие или обстоятельство может иметь или не иметь место. Например, "гетероциклическая группа, необязательно замещенная алкильной группой" означает, что алкил может присутствовать или отсутствовать, и описание включает ситуации, где гетероциклическая группа замещена алкильной группой, и ситуации, где гетероциклическая группа не замещена алкильной группой.

"Фармацевтическая композиция" относится к смеси из одного или более чем одного соединений, описанных в данном документе, или их физиологически/фармацевтически приемлемых солей или пролекарств с другими химическими компонентами, такими как физиологически/фармацевтически приемлемые эксципиенты. Цель фармацевтической композиции состоит в облегчении введения соединения в организм.

Способы получения

С целью выполнения задачи настоящего изобретения в изобретении применено следующее техническое решение:

Способ получения соединений конденсированных с пирролом шестичленных азагетероциклических производных гидроксилированного морфолина формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей, включающий следующие стадии:

в качестве исходного вещества используют оптически активное соединение 1-амино-3-морфолин-4-илпропан-2-ола (Ia) (полученное в соответствии с патентом US 20040209937), нагревание в атмосфере азота оптически активного 1-амино-3-морфолин-4-илпропан-2-ола (Ia) с 2-трет-бутиловым, 4-этиловым диэфиром 5-карбоксиметил-3-метил-1Н-пиррол-2,4-дикарбоновой кислоты в ацетонитриле до образования флегмы в присутствии 1-гидроксибензотриазола и N-этил-N'-(диметиламинопропил)-карбодиимида с получением хирального диэфира амида пирролдикарбоновой кислоты (Ib); нагревание в атмосфере аргона хирального диэфира амида пирролдикарбоновой кислоты (Ib) с соляной кислотой в этаноле до образования флегмы с получением оптически активного этилового эфира пирроламида (Ic); последующее нагревание в безводном тетрагидрофуране оптически активного этилового эфира пирроламида (Ic) с бораном до образования флегмы и получения путем избирательного восстановления этилового эфира хирально замещенного пиррола (Id); последующее нагревание в атмосфере аргона этилового эфира хирально замещенного пиррола (Id) с моногидратом гидроксида лития в гликоле до образования флегмы с получением циклизованного продукта оптически активного конденсированного с пирролом шестичленного азагетеро цикла (Ie); взаимодействие оптически активного конденсированного с пирролом шестичленного азагетероцикла (Ie) с оксихлоридом фосфора и N,N-диметилформамидом в безводном дихлорметане при комнатной температуре с получением путем реакции формилирования оптически активного конденсированного с пирролом шестичленного азагетероциклического формальдегида (If); на последней стадии нагревание оптически активного конденсированного с пирролом шестичленного азагетероциклического формальдегида (If) с различными индолинонами в присутствии основания, такого как триэтиламин или пиперидин в течение 2~12 часов с получением целевого продукта, относящегося к хиральным конденсированным с пирролом шестичленным гетероциклическим производным гидроксилированного морфолина формулы (I), где ключевой методикой является избирательное восстановление субстрата (Ic) бораном и циклизация субстрата (Id), катализируемая щелочным катализатором моногидратом гидроксида лития. Что касается последнего, нет соответствующих ссылок на подход к созданию такой конденсированной с пирролом шестичленной лактамовой структуры.

Данное изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) или его соль в эффективной терапевтической дозе, а также фармацевтически приемлемые носители.

Данное изобретение далее относится к применению соединений по изобретению формулы (I) или их солей при получении лекарственного средства, такого как ингибитор протеинкиназы.

Предпочтительные осуществления

Приведенные ниже примеры служат для иллюстрации изобретения, но эти примеры не следует рассматривать как ограничивающие объем изобретения.

Структуру соединения идентифицировали с помощью ядерного магнитного резонанса (ЯМР) или масс-спектрометрии (МС). Химические сдвиги ЯМР (δ) приведены в миллионных долях (млн^-1). ЯМР определяли с помощью прибора Bruker AVANCE-400. Растворитель представлял собой дейтерированный хлороформ (CDCl₃) и дейтерированный диметилсульфоксид (ДМСО-d6) с тетраметилсиланом (ТМС) в качестве внутреннего стандарта. Химические сдвиги приведены в миллионных долях (млн^-1).

МС определяли с помощью масс-спектрометра FINNIGAN LCQAd (ИЭР, ионизация электрораспылением).

Тонклослойный силикагель представлял собой пластину силикагеля Yantai Huanghai HSGF254 или Qingdao GF254.

В колоночной хроматографии обычно использовали силикагель Yantai Huanghai 200-300 меш в качестве носителя.

ДМСО-D₆: дейтерированный диметилсульфоксид.

CDCl₃: дейтерированный хлороформ.

Примеры получения

Пример 1

(R,Z)-2-(5-Фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-5-(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропил)-3-метил-1,5,6,7-тетрагидропирроло[3,2-с]пиридин-4-он

Стадия 1

(S)-2-Трет-бутиловый, 4-этиловый диэфир 5-[(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропилкарбамоил)-метил]-3-метил-1Н-пиррол-2,4-дикарбоновой кислоты

(S)-1-Амино-3-морфолин-4-илпропан-2-ол формулы 1а (15,125 г, 94,5 ммоль), 2-трет-бутиловый, 4-этиловый диэфир 5-карбоксиметил-3-метил-1Н-пиррол-2,4-дикарбоновой кислоты (32,34 г, 104 ммоль), 1-гидроксибензотриазол (25,5 г, 189,06 ммоль) и N-этил-N'-(диметиламинопропил)-карбодиимид (36,2 г, 189,06 ммоль) растворяли в 450 мл ацетонитрила при перемешивании при комнатной температуре, и реакционную смесь перемешивали при 50°С на масляной бане в течение 3 часов. Реакция была завершена, когда тонкослойная хроматография (ТСХ) показала исчезновение исходных веществ, и растворитель выпаривали при пониженном давлении, а затем к остатку добавляли 150 мл насыщенного рассола. Смесь экстрагировали смесью растворителей этилацетата и тетрагидрофурана (V:V=4:1, 200 мл × 5). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным рассолом (100 мл), сушили над безводным сульфатом магния и фильтровали для удаления высушивающего агента. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением масла (75 г). Масло очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением соединения, указанного в заголовке, (S)-2-трет-бутилового, 4-этилового диэфира 5-[(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропилкарбамоил)-метил]-3-метил-1Н-пиррол-2,4-дикарбоновой кислоты 1b (30 г, выход 70%) в виде светло-коричневого твердого вещества.

По данным МС m/z (ИЭР): 454,4 [М+1]

Стадия 2

Этиловый эфир (S)-2-[(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропилкарбамоил)-метил]-4-метил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты

(S)-2-Трет-бутил, 4-этиловый диэфир 5-[(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропилкарбамоил)-метил]-3-метил-1Н-пиррол-2,4-дикарбоновой кислоты формулы 1b (25,7 г, 56,7 ммоль) растворяли в 70 мл безводного этанола при перемешивании в атмосфере аргона, а затем к раствору добавляли по каплям 71 мл соляной кислоты (12 Н) в бане с водой со льдом. После завершения добавления баню с водой со льдом убирали. Реакционную систему перемешивали при 60°С на масляной бане в течение 1,5 часов. Реакция была завершена, когда ТСХ показывала исчезновение исходных веществ, и реакционную систему доводили до pH примерно 7 с помощью 10 Н раствора гидроксида натрия в бане, содержащей сухой лед-ацетон, и образовывалось большое количество осадков. Смесь фильтровали и отфильтровальный осадок промывали этанолом. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя и остаток доводили до pH примерно 10 с помощью 10 Н раствора гидроксида натрия. Смесь экстрагировали дихлорметаном (150 мл × 3). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным рассолом (100 мл), сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали для удаления высушивающего агента и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения, указанного в заголовке, этилового эфира (S)-2-[(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропилкарбамоил)-метил]-4-метил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты формулы 1 с (16,9 г, выход 84%) в виде темно-зеленого масла.

По данным МС m/z (ИЭР): 354,3 [М+1]

Стадия 3

Этиловый эфир (S)-2-[2-(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропиламино)-этил]-4-метил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты

Этиловый эфир (S)-2-[(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропилкарбамоил)-метил]-4-метил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты формулы 1 с (16,9 г, 47,9 ммоль) растворяли в 143,6 мл безводного тетрагидрофурана в атмосфере аргона, а затем к раствору добавляли комплекс боран-тетрагидрофуран в тетрагидрофуране (143,6 мл, 1 моль/л, 143,6 ммоль) в бане с водой со льдом. После завершения добавления баню с водой со льдом убирали. Реакционной системе давали нагреться до комнатной температуры и кипятили с обратным холодильником при 95°С на масляной бане в течение 1 часа. Реакция была завершена, когда ТСХ показывала исчезновение исходных веществ. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, а затем к остатку добавляли 150 мл соляной кислоты (2 Н). Смесь перемешивали в течение 0,5 часа, а затем добавляли 50 мл ледяной воды. Смесь доводили до pH примерно 10 с помощью 10 Н раствора гидроксида натрия и экстрагировали этилацетатом (200 мл × 2). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным рассолом (100 мл), сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали для удаления высушивающего агента и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения, указанного в заголовке, этилового эфира (S)-2-[2-(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропиламино)-этил]-4-метил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты формулы 1d (15,6 г, выход 96%) в виде коричневого масла. По данным МС m/z (ИЭР): 340,3 [М+1]

Стадия 4

(R)-5-(2-Гидрокси-3-морфолин-4-илпропил)-3-метил-1,5,6,7-тетрагидропирроло[3,2-с]пиридин-4-он

Этиловый эфир (S)-2-[2-(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропиламино)-этил]-4-метил-1Н-пиррол-3-карбоновой кислоты формулы 1d (16,2 г, 47,9 ммоль) и моногидрат гидроксида лития (8 г, 190,6 ммоль) растворяли в 50 мл гликоля при перемешивании в атмосфере аргона. Реакционную систему перемешивали при 135°С на масляной бане в течение 50 минут. Реакция была завершена, когда ТСХ показывала исчезновение исходных веществ. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, а затем к остатку добавляли 150 мл насыщенного рассола. Смесь экстрагировали дихлорметаном (150 мл × 5). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным рассолом (150 мл), сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали для удаления высушивающего агента и концентрировали при пониженном давлении с получением масла (12,3 г). Масло очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением соединения, указанного в заголовке, (R)-5-(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропил)-3-метил-1,5,6,7-тетрагидропирроло[3,2-с]пиридин-4-она формулы 1е (7.9 г, выход 60,6%) в виде белого твердого вещества.

По данным МС m/z (ИЭР): 294,2 [М+1]

Стадия 5

(R)-5-(2-Гидрокси-3-морфолин-4-илпропил)-3-метил-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3,2-с]пиридин-2-карбальдегид

Оксихлорид фосфора (674 мкл, 4.04 ммоль) и N,N-диметилформамид (963 мкл, 12,32 ммоль) растворяли в 21,18 мл дихлорметана при перемешивании при комнатной температуре и реакционный раствор перемешивали в течение 15 минут, при этом поддерживая температуру -10°С в бане с водой со льдом. (R)-5-(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропил)-3-метил-1,5,6,7-тетрагидропирроло[3,2-с]пиридин-4-он формулы 1е (790 мг, 2,7 ммоль) растворяли в 10 мл дихлорметана при перемешивании, а затем этот раствор добавляли по каплям к вышеописанной реакционной системе. После завершения добавления баню с водой со льдом убирали и реакционной системе давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение дополнительных 2 часов. Реакция была завершена, когда ТСХ показывала исчезновение исходных веществ, и реакционную систему охлаждали ледяной водой и перемешивали в течение 15 минут. Смесь доводили до pH примерно 12 с помощью 10 Н раствора гидроксида натрия и экстрагировали смесью растворителей дихлорметана и метанола (V:V=20:1, 100 мл × 8). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным рассолом (150 мл), сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали для удаления высушивающего агента и концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта (800 мг). Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением соединения, указанного в заголовке,

(R)-5-(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропил)-3-метил-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3,2-с]пиридин-2-карбальдегида формулы 1f (650 мг, выход 75%) в виде белого твердого вещества.

По данным МС m/z (ИЭР): 322,6 [М+1]

Стадия 6

(R,Z)-2-(5-Фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-5-(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропил)-3-метил-1,5,6,7-тетрагидро-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он

(R)-5-(2-Гидрокси-3-морфолин-4-илпропил)-3-метил-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3,2-с]пиридин-2-карбальдегид формулы 1f (200 г, 0,623 ммоль), 5-фтор-1,3-дигидроиндол-2-он (84,67 мг, 0,56 ммоль) и пиперидин (30,8 мкл, 0,31 ммоль) растворяли в 1,09 мл этанола при перемешивании при комнатной температуре. Реакционную систему перемешивали при 80°С на масляной бане в темноте в течение 2 часов. Реакция была завершена, когда ТСХ показывала исчезновение исходных веществ, и масляную баню убирали. Реакционной системе давали охладиться до комнатной температуры для осаждения твердых веществ. Полученные в результате твердые вещества фильтровали с получением соединения, указанного в заголовке, (R,Z)-2-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-5-(2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)-3-метил-1,5,6,7-тетрагидропирроло[3,2-с]пиридин-4-она формулы 1 (256 мг, 90%) в виде желтого твердого вещества.

По данным МС m/z (ИЭР): 455,2 [М+1]

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): 13,674 (s, 1H, NH-группа пиррола), 10,945 (s, 1H, NH-группа индола), 7,771~7,800 (m, 1H, -ArH), 7,762 (s, 1H, -СН=С), 6,927~6,978 (dd, 1H, -ArH), 6,842~6,874 (d, 1H, -ArH), 4,707~4,719 (d, 1H, -ОН), 3,900~3,915 (m, 1H, -CHO), 3,704~3,748 (dd, 2H, внутренняя СН₂-группа шестичленного кольца, содержащего N амидного происхождения), 3,616~3,695 (dd, 1H, наружная СН₂-группа шестичленного кольца с N амидного происхождения), 3,563~3,585 (t, 4Н, 2×-CH₂O морфолина), 3,105~3,158 (dd, 1H, наружная СН₂-группа шестичленного кольца с N амидного происхождения), 3,433 (t, 2H, CH₂-группа шестичленного кольца, соединенного с пирролом), 2,545 (s, 3H, пиррол-СН₃), 2,420~2,431 (m, 2H, -CH₂N, -CH₂N морфолина), 2,420~2,431 (m, 2H, -CH₂N, наружная CH₂N-группа морфолина), 2,304~2,330 (t, 2H, внутренняя CH₂N-группа морфолина).

Пример 2

(R,Z)-2-(5-Хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-5-(2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропил)-3-метил-1,5,6,7-тетрагидропирроло[3,2-с]пиридин-4-он

Соединение, указанное в заголовке, получали в таких же условиях, как описано в стадии 6 примера 1, с (R)-5-(2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)-3-метил-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3,2-с]пиридин-2-карбальдегидом формулы 1f, полученным на стадии 5 примера 1, и 5-хлор-1,3-дигидроиндол-2-оном в качестве исходных веществ с получением

(R,Z)-2-(5-хлор-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил)-5-(2-гидрокси-3-морфо лин-4-илпропил)-3-метил-1,5,6,7-тетрагидропирроло[3,2-с]пиридин-4-она формулы 2 (42 мг, выход 64%) в виде желтого твердого вещества.

По данным МС m/z (ИЭР): 471,2 [М+1]

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): 13,727 (s, 1H, NH-группа пиррола), 11,039 (s, 1H, NH-группа индола), 8,003 (m, 1H, -ArH), 7,814 (s, 1H, -СН=С), 7,166~7,141 (dd, 1H, -ArH), 6,890-6,869 (d, 1H, -АгН), 4,713-4,700 (d, 1H, -ОН), 3,907-3,892 (m, 1H, -CHO), 3,626~3,567 (t, 4H, 2×-CH₂O-группы морфолина), 3,152~3,099 (dd, 1H, наружная CH₂-группа шестичленного кольца с N амидного происхождения), 3,027~2,994 (t, 2H, CH₂-группа шестичленного кольца, соединенного с пирролом), 2,547 (s, 3Н, пиррол-СН₃), 2,328~2,290 (t, 2H, внутренняя CH₂N-группа морфолина).

Пример 3

2-[(Z)-4-(2,3-Дифторфенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил]-5-[(R)-2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропил]-3-метил-1,5,6,7-тетрагидропирроло[3,2-с]пиридин-4-он

Стадия 1

4-(4,4,5,5-Тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-индол

4-Бром-1Н-индол формулы 3а (29,4 г, 150 ммоль) растворяли в 600 мл диметилсульфоксида при перемешивании в атмосфере аргона, а затем к раствору добавляли бис(пинаколато)дибор (41,9 г, 165 ммоль), ацетат калия (44,1 г, 450 ммоль) и [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (3,6 г, 4,8 ммоль). После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при 80°С на масляной бане в течение 22 часов. Реакция была завершена, когда ТСХ показывала исчезновение исходных веществ, и к реакционной смеси добавляли 2 л воды. Смесь экстрагировали этилацетатом (2 л × 3). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным рассолом (2 л × 5), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали для удаления высушивающего агента и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле и перекристаллизовали с получением соединения, указанного в заголовке, 4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-индола формулы 3b (20 г, выход 60%) в виде белого твердого вещества. По данным МС m/z (ИЭР): 243,9 [М+1]

Стадия 2

4-(2,3-Дифторфенил)-1Н-индол

4-(4,4,5,5-Тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-индол формулы 3b (1,22 г, 5 ммоль) растворяли в 20 мл тетрагидрофурана при перемешивании в атмосфере аргона, а затем к раствору добавляли 1-бром-2,3-дифторбензол (0,97 г, 5 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий (0,17 г, 0,15 ммоль) и 7 мл раствора гидроксида натрия (2 М). После завершения добавления реакционную систему перемешивали при 75°С на масляной бане в течение ночи. Реакция была завершена, когда ТСХ показывала исчезновение исходных веществ. Реакционную смесь естественным путем охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали этилацетатом (20 мл × 3). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным рассолом (10 мл), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали для удаления высушивающего агента и концентрировали при пониженном давлении. Полученное в результате твердое вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле с получением соединения, указанного в заголовке, 4-(2,3-дифторфенил)-1Н-индола формулы 3 с (800 мг, выход 70%) в виде белого твердого вещества.

По данным МС m/z (ИЭР): 228,4 [М-1]

Стадия 3

4-(2,3-Дифторфенил)-1,3-дигидроиндол-2-он

4-(2,3-Дифторфенил)-1Н-индол формулы 3 с (744 мг, 3,25 ммоль) растворяли в 12 мл этанола при перемешивании при комнатной температуре, к раствору последовательно добавляли 21 мл трет-бутанола, 6,4 мл ледяной уксусной кислоты и трибромид пиридиния (3,12 г, 9,7 ммоль). После завершения добавления реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов, а затем к смеси добавляли 16 мл ледяной уксусной кислоты и цинковую пыль (1,1 г, 16,25 ммоль). Реакционную смесь перемешивали еще в течение 1 часа, фильтровали для удаления остатка и концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли 30 мл этилацетата, последовательно промывали 10 мл воды, 10 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и 10 мл насыщенного рассола, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали для удаления высушивающего агента. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением соединения, указанного в заголовке, 4-(2,3-дифторфенил)-1,3-дигидроиндол-2-она формулы 3d (780 мг, выход 97%) в виде белого твердого вещества.

По данным МС m/z (ИЭР): 246,6 [М+1]

Стадия 4

2-[(Z)-4-(2,3-Дифторфенил)-2-оксо-1,2-дигидроиндол-3-илиденметил]-5-[(R)-2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропил]-3-метил-1,5,6,7-тетрагидропирроло[3,2-с]пиридин-4-он

(R)-5-(2-Гидрокси-3-морфолин-4-илпропил)-3-метил-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3,2-с]пиридин-2-карбальдегид формулы 1f (50 мг, 0,156 ммоль), 4-(2,3-дифторфенил)-1,3-дигидроиндол-2-он 3d (34,3 мг, 0,14 ммоль) и пиперидин (7,7 мкл, 0,078 ммоль) растворяли в 0,3 мл этанола при перемешивании при комнатной температуре. Реакционную систему перемешивали при 80°С на масляной бане в темноте в течение 2 часов. Реакция была завершена, когда ТСХ показывала исчезновение исходных веществ, и масляную баню убирали. Реакционную систему охлаждали естественным путем до комнатной тем