Применение расбуриказы для лечения или профилактики расстройств или косвенных осложнений на сердце, вызванных приступами ишемии или реперфузией

Применение расбуриказы для лечения или профилактики расстройств или косвенных осложнений на сердце, вызванных приступами ишемии или реперфузией

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к применению уратоксидазы, предпочтительно, рекомбинантной уратоксидазы, например, Расбуриказы (Rasburicase), для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики расстройств или косвенных осложнений на сердце, вызванных приступами ишемии или реперфузией, например, во время и после операции на сердце типа CABG (аорто-коронарное шунтирование), PCI (чрескожное вмешательство на коронарных сосудах), трансплантации, после инфаркта миокарда, и для лечения или профилактики заболевания коронарной артерии или сердечной недостаточности, например, застойной сердечной недостаточности.

Мочевая кислота представляет собой конечный продукт метаболизма пурина у птиц, рептилий, приматов и людей и она производится в печени путем окисления ксантина и гипоксантина. У всех остальных млекопитающих мочевая кислота дополнительно окисляется с помощью фермента уратоксидазы с получением аллантоина. Однако у людей нет этого фермента. Поскольку мочевая кислота обладает относительно низкой водорастворимостью, то увеличение уровня мочевой кислоты в плазме, как известно, является причиной некоторых расстройств, таких как подагра. Резкое увеличение уровня мочевой кислоты приводит к острой почечной недостаточности, вызванной осаждением кристаллов мочевой кислоты в почечных канальцах (Ejaz A.A. et al., Clin. J. Am. Nephrol. (2007) 2:16-21).

Увеличение продуцирования мочевой кислоты происходит, в основном, у пациентов, страдающих расстройствами метаболизма пурина, такими как наследственная гиперурикемия. Однако резкое увеличение уровня мочевой кислоты в плазме также наблюдается у любого пациента, клетки которого подвергаются массовой клеточной смерти так, как во время лечения рака с помощью цитостатиков. Последнее, как известно, приводит к так называемому синдрому лизиса опухоли, где массовая клеточная смерть приводит к высвобождению нуклеиновых кислот, которые благодаря метаболизму пуринов быстро катаболизируют до конечного продукта в виде мочевой кислоты. В основном, массивная смерть клеток также наблюдается в любом патофизиологическом случае ишемии и реперфузии и, таким образом, также во время операции на сердце типа CABG (аорто-коронарное шунтирование), PCI (чрескожное вмешательство на коронарных сосудах), трансплантации, после инфаркта миокарда, заболевания коронарной артерии или сердечной недостаточности.

Кроме последних упомянутых острых факторов увеличенные концентрации мочевой кислоты в плазме, как недавно было обнаружено, являются прогнозирующими для летальности при застойной сердечной недостаточности (Anker SD et al., Circulation (2003); 107:1991-1997). Причины корреляции указанного также были раскрыты недавно (Hare JM et al., Circulation (2003) 107:1951-1953).

В настоящий момент могут использоваться три различных принципа с целью уменьшения патофизиологического повышенного уровня мочевой кислоты: (i) усиление почечного выведения мочевой кислоты, (ii) снижение генерирования мочевой кислоты или (iii) превращение мочевой кислоты в аллантоин.

i) Бензбромарон

Лечение с помощью Бензбромарона ((2-этил-3-бензофуранил)-(3,5-дибром-4-гидроксифенил)кетон) усиливает почечное выведение мочевой кислоты, затрагивая почечную реабсорбцию мочевой кислоты. Совокупный эффект при лечении с помощью бензбромарона представляет собой увеличенное выведение мочевой кислоты.

Лечение следует начинать с минимальной дозировкы, так как Бензбромарон сам по себе может инициировать осаждение мочевой кислоты в почке или в мочеточнике.

ii) Аллопуринол

Другой способ затрагивает катаболизм пуринов до мочевой кислоты с ингибированием ксантиноксидазы, ключевого фермента метаболизма пуринов: Аллопуринол (4-гидроксипуринол), аналог ксантина, представляет собой ингибитор ксантиноксидазы, приводящий к уменьшенному генерированию мочевой кислоты. Лечение с помощью Аллопуринола в настоящий момент рассматривается в качестве стандартного фармакологического лечения гиперурикемия-ассоциированных заболеваний, таких как подагра. Во время лечения с помощью Аллопуринола вместо мочевой кислоты накапливаются предшественники в виде ксантинов, которые в основном выводятся через почки. Лечение с помощью Аллопуринола является превентивным, чтобы избежать высокого уровня мочевой кислоты, но оно не подходит в случаях уже повышенного уровня мочевой кислоты, и, кроме того, известно, что аллопуринол сам по себе индуцирует подагру. В случае предотвращения синдрома лизиса опухоли во время лечения рака. Аллопуринол дают перед цитотоксическим лечением. Кроме применения Аллопуринола терапия направлена на нормализацию аномалий метаболизма и на предотвращение дальнейшего поражения почек.

iii) Уратоксидаза

Механизм действия уратоксидазы отличается от механизма Аллопуринола. Уратоксидаза (оксидаза мочевой кислоты, оксидоредуктаза кислорода уратов, EC 1.7.3.3) катализирует окисление мочевой кислоты с получением аллантоина, водорастворимого продукта, который легко выводится с помощью почек (схема 1). Белковый фермент уратоксидаза может быть получен, например, из Aspergillus flavus.

кДНК, кодирующая этот белок, была клонирована и экспрессирована в Escherichia coli (Legoux R. et al., J. Biol. Chem., 1992, 267, (12), 8565-8570), в Aspergillus flavus (Chevalet L. et al., Curr. Genet., 1992, 21, 447-453) и в Saccharomyces cerevisiae (Leplatois P. et al., Gene., 1992, 122, 139-145).

Рекомбинантная уратоксидаза представляет собой уратоксидазу, полученную с помощью генетически модифицированных микроорганизмов, и может быть получена, например, из вышеупомянутых генетически модифицированных штаммов Escherichia coli и Saccharomyces cerevisiae. Расбуриказа представляет собой рекомбинантный фермент уратоксидазу, полученную из генетически модифицированного штамма Saccharomyces cerevisiae, клонированную с помощью кДНК из штамма Aspergillus flavus (Oldfield V et al., Drugs (2006) 66 (4):529-545, Leplatois P. et al., Gene., 1992, 122, 139-145). Расбуриказа представляет собой тетрамерный белок, содержащий идентичные субъединицы с молекулярной массой, составляющей примерно 34 кДа каждая (фиг.1) - подобно нативной уратоксидазе Aspergillus flavus (Bayol A. et al., Biotechnol. Appl. Biochem. 2002, 36, 21-31).

Схема 1: Эффекты действия уратоксидазы, Расбуриказы, Аллопуринола и Оксипуринола (активный метаболит Аллопуринола) на катаболизм пурина.

обозначает ингибирование ксантиноксидазы с помощью аллопуринола и оксипуринола; обозначает метаболизм мочевой кислоты с помощью Расбуриказы или Уратоксидазы.

Вместо лечения с помощью аллопуринола, применение Расбуриказы, благодаря ее способу действия, является в настоящее время предпочтительным лечением в случаях резкого и существенно увеличенного уровня мочевой кислоты в плазме применительно к предотвращению синдрома лизиса опухоли.

Очевидным недостатком лечения с помощью уратоксидазы является генерирование стехиометрически эквивалентного количества перекиси водорода (схема 2), которое, согласно настоящей информации, представляется проблемой, особенно в отношении предназначенного применения уратоксидазы по сердечно-сосудистым показаниям.

Схема 2

Хотя H₂O₂ не является сама по себе радикалом, может при этом легко превращаться в гидроксильные радикалы с помощью реакции Фентона. Различные формы эндогенно генерированных радикалов кислорода обозначаются как активные формы кислорода (ROS), включающие также другие типы, такие как гидроксильные радикалы или супероксид-анионы, которые легко конвертируются. Такие ROS могут генерироваться с помощью различных клеточных ферментных систем, например, с помощью NADPH-оксидазы. Ранее было показано, что ROS вовлечены во многие физиологические и патофизиологические процессы. Многочисленные исследования обнаружили пагубную роль ROS в отношении сердечно-сосудистых показаний (Lo SK et al., Am. J. Physiol (1993) 264:L406-412; PMNs; Gasic AC et al., Circulation (1991) Nov; 84(5): 2154-2166; Bradley JR et al., Am. J. Pathol. (1995); 147(3): 627-641; Kevil CG et al., Am. J. Physiol. Cell Physiol. (2000) Jul; 279(1): C21-30; Zafari AM et al., Hypertension (1998) Sep; 32(3): 488-495; for an overview see Cai H, Cardiovascular Research (2005) 68:26-36).

Эксперименты проводили для тестирования уратоксидазы Расбуриказы в комбинации с мочевой кислотой на предмет ее ожидаемых побочных эффектов, вызванных генерированной перекисью водорода. Неожиданно эксперименты показали, что функционирование сердца не подвержено существенному влиянию высоких концентраций Расбуриказы индивидуально или в комбинации с высокими концентрациями мочевой кислоты. Кроме того, комбинация Расбуриказы и мочевой кислоты даже улучшали функционирование сердца и кардиодинамику в случае, когда комбинация присутствовала перед началом и во время приступа ишемии и реперфузии.

Таким образом, изобретение относится к применению уратоксидазы, предпочтительно, рекомбинантной уратоксидазы, например Расбуриказы, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики расстройств или косвенных осложнений на сердце, вызванных приступами ишемии или реперфузией, например, во время и после операции на сердце типа CABG (аорто-коронарное шунтирование), PCI (чрескожное вмешательство на коронарных сосудах), трансплантации, после инфаркта миокарда, и для лечения или профилактики заболевания коронарной артерии или сердечной недостаточности, например, застойной сердечной недостаточности.

В другом варианте осуществления изобретения является предпочтительным лечение вместе с акцептором H₂O₂, таким как, например, витамины A, C или E, Тролокс, Олигомерный Проантоцианидин, Глутатион, L-N-Ацетилцистеин, Эбселен, Ликопин, Флавоноид, Катехин и Антоциан, более предпочтительно, L-аскорбиновая кислота.

Фармацевтические композиции включают, в качестве активной составляющей, эффективную дозу Расбуриказы, кроме того, стандартные фармацевтически приемлемые носители и вспомогательные вещества, а также необязательно включают другие активные фармакологические ингредиенты в количестве одного или более, например, аскорбиновую кислоту. Фармацевтические композиции содержат обычно 0,1-90% Расбуриказы по массе.

Фармацевтические композиции могут быть получены способом, который сам по себе является известным. Для этой цели активные ингредиенты и/или их физиологически совместимые соли вместе с твердыми или жидкими фармацевтическими носителями и/или с вспомогательными веществами в количестве одного или более превращаются в подходящую форму для введения или в дозированную форму, которая затем может использоваться в качестве лекарственного средства для человека.

Лекарственные средства, которые включают Расбуриказу, могут вводиться, например, парентерально, внутривенно, ректально, назально, с помощью ингаляции или местно, причем предпочтительное введение зависит от конкретного случая.

Вспомогательные вещества, которые являются подходящими для целевой фармацевтической композиции, известны специалисту в данной области благодаря специальным знаниям. Дополнительно к растворителям, гелеобразующим веществам, основам суппозиториев, вспомогательным веществам таблеток и другим носителям активных ингредиентов возможно использование, например, антиоксидантов, диспергирующих веществ, эмульгаторов, противовспенивателей, ароматизаторов, консервантов, солюбилизаторов, агентов для достижения депо-эффекта, буферных веществ или красителей.

Для подкожного, внутримышечного или внутривенного введения используемые активные компоненты, если необходимо, вместе со стандартными для таких целей веществами, такими как солюбилизаторы, эмульгаторы или дополнительные вспомогательные вещества, превращаются в раствор, суспензию или эмульсию. Примеры используемых растворителей представляют собой: воду, физиологический солевой раствор или спирты, например, этанол, пропанол, глицерин, и дополнительно также сахарные растворы, такие как растворы глюкозы или маннита, или еще смесь различных указанных растворителей. Примеры подходящих фармацевтических композиций для введения в форме аэрозолей или спреев представляют собой растворы, суспензии, эмульсии или везикулярные и мицелярные лекарственные формы активных ингредиентов или их физиологически совместимые соли в воде или в фармацевтически приемлемом водорастворимом или в масляном растворителе или в смеси таких растворителей. Также подходящими для введения в форме аэрозолей или спреев, например, для назального введения, являются порошки активных ингредиентов или их физиологиически совместимых солей. Если требуется, все композиции также могут включать другие фармацевтические вспомогательные вещества, такие как добавки для изотоничности, поверхностно-активные вещества, эмульгаторы и стабилизоторы, а также газ-пропеллент. Указанные композиции могут быть дополнительно представлены в форме лиофилизованных продуктов.

Дозировка Расбуриказы, вводимой согласно изобретению, зависит от индивидуального случая и для оптимального действия должна, как обычно, регулироваться соответственно индивидуальному случаю. Например, она, конечно, зависит от частоты введения и от силы и продолжительности действия соединений, используемых в каждом случае для лечения или профилактики, но также от природы и тяжести заболевания, которое следует подвергнуть лечению, а также от пола, возраста, веса и индивидуальной чувствительности человека или животного, которое следует подвергнуть лечению, и от того, практикуются ли срочное или продолжительное лечение или профилактика.

Дозировка Расбуриказы обычно может варьироваться в интервале от 1 мг до 1 г в день и на одного человека (с массой тела, составляющей примерно 75 кг), предпочтительно, от 5 до 750 мг в день и на одного человека, например, от 100 до 150 мг в день и на одного человека. Однако более высокие дозировки также могут быть подходящими. Ежедневная доза активных ингредиентов может вводиться целиком за один раз или она может быть разделена на множество введений, например, 2, 3 или 4 введения.

Экспериментальная часть

Список сокращений
Asc.A	Аскорбиновая кислота
кДа	Килодальтоны
n	Количество животных
P	Давление
Rasb	Расбуриказа
Reperf.	Реперфузия
UA	Мочевая кислота

Примеры фармацевтических препаратов

Пример A: Водный раствор для внутривенного введения

Для получения раствора объемом 10 мл, включающего 50 мкг активного компонента на 1 мл, 0,5 мг Расбуриказы растворяли в 10 мл изотонического раствора (0,9%) хлорида натрия.

Эксперименты на изолированных работающих сердцах крыс

В качестве биологического материала использовали изолированные сердца самцов крыс, которых приобретали у заявителя в отделе содержания лабораторных животных (Laboratory Animal Science and Welfare) (LASW). Функционирование сердца (коронарный кровоток и сократительную способность) исследовали на модели "Изолированного Работающего Сердца", как описано ранее (Itter G et al., Laboratory Animals (2005) 39; 178-193). Сначала сердца перфузировали согласно методу Лангендорффа с оксигенированным (95% O₂, 5% CO₂) нециркулирующим раствором Кребса-Хенселейта следующего состава (ммоль/л): NaCl 118; KCl 4,7; CaCl₂ 2,5; MgSO₄ 1,6; NaHCO₃ 24,9; KH₂PO₄ 1,2; глюкоза 5,5; Na-пируват 2,0. Катетер, помещенный в пульмонарную артерию, дренировал вытекающий коронарный перфузат, который собирали для определения коронарного кровотока и измерения внутривенного P_O2. Левое предсердие канюлировали путем рассечения левого ушка сердца. Через 15 минут периода равновесия при фиксированном давлении перфузии, составляющем 60 мм рт.ст., сердце включали в рабочий режим при фиксированном давлении наполнения, составляющем 11 мм рт.ст. Производили выборку коронарного кровотока (CF) и сигналов давления (dP/dt_max) при 500 Гц, в среднем каждые 2 секунды.

Влияния на коронарный кровоток и сократительную способность сердца

Высокие концентрации Расбуриказы тестировали с различными концентрациями мочевой кислоты на изолированных работающих сердцах на предмет их возможных побочных эффектах для сердца, вызванных генерированной перекисью водорода (H₂O₂).

В таблице 1 показано, что при концентрации H₂O₂ выше 100 мкМ существенно уменьшались коронарный кровоток и сократительная способность.

Таблица 1Влияние увеличения концентраций H2O2 на коронарный кровоток (CF) и сократительную способность (dP/dtmax) в изолированных сердцах крыс; n=4, *p<0,05 против исходной величины
	Исходный уровень	H2O2 10 мкМ	H2O2 30 мкМ	H2O2 100 мкМ	H2O2 200 мкМ	Буфер
CF (мл/мин)	14,07±0,33	13,89±0,55	15,21±1	15,7±1,3	10,42±0,3*	14,43±0,96
dP/dtmax (мм рт.ст./с)	4646±178	4774±185	4469±167	4573±268	1698±69*	2493±182*

Увеличение концентраций Расбуриказы (0,5; 1,5; 5; 15; 50 мкг/мл) индуцировало всего лишь небольшое (незначительное) уменьшение коронарного кровотока и сократительной способности, которые не подвергались влиянию в присутствии мочевой кислоты (6 мг/л) (таблица 2). Подобные эффекты наблюдались, когда Расбуриказу высокой концентрации (50 мкг/мл) перфузировали с более высокими концентрациями мочевой кислоты (6-30 мг/л) (таблица 3).

Таблица 2Влияние увеличения концентраций Расбуриказы в присутствии или в отсутствие мочевой кислоты (UA 6 мг/л) на коронарный кровоток (CF) и сократительную способность (dP/dtmax) в изолированных сердцах крыс; n=6-7 на группу
	Исходный уровень	Расбуриказа 0,5 мкг/мл	Расбуриказа 1,5 мкг/мл	Расбуриказа 5 мкг/мл	Расбуриказа 15 мкг/мл	Расбуриказа 50 мкг/мл
CF (мл/мин) в отсутствие UA	14,39±0,89	14,09±0,86	13,69±0,89	13,59±1,02	13,11±0,99	12,27±1,16
CF (мл/мин) в присутствии UA	15,86±0,79	15,7±0,7	15,4±0,74	15,05±0,68	14,62±0,76	13,3±0,81
dP/dtmax (мм рт.ст./с) в отсутствие UA	4397±259	4311±260	4271±341	4144±267	4146±316	3917±252
dP/dtmax (мм рт.ст./с) в присутствии UA	4534±158	4657±215	4538±234	4491±291	4381±292	4200±348

Таблица 3Влияние увеличения концентраций мочевой кислоты и высокой концентрации Расбуриказы (Расбуриказа 50 мкг/мл) на коронарный кровоток (CF) и сократительную способность (dP/dtmax) в изолированных сердцах крыс; n=4-5 на группу
	Исходный уровень	Мочевая кислота 6 мг/л	Мочевая кислота 6 мг/л + высокая концентрация Расбуриказы	Мочевая кислота 15 мг/л + высокая концентрация Расбуриказы	Мочевая кислота 30 мг/л + высокая концентрация Расбуриказы	Буфер
CF (мл/мин) Контроль	12,86±1,56	12,86±1,47	13,23±1,61	12,27±1,54	13,34±1,56	13,47±1,32
CF (мл/мин) в присутствии UA	13,32±0,99	13,51±1,02	12,57±1	12,35±1,31	11,06±1,22	10,58±1,2
dP/dtmax (мм рт.ст./с) Контроль	3550±447	3599±524	3745±581	3845±570	3897±455	4100±390
dP/dtmax (мл/мин) в присутствии UA	3780±213	3867±327	3821±347	3982±341	3610±241	3671±252

Влияния на коронарный кровоток и сократительную способность сердца с глобальной ишемией и реперфузией

Высокая концентрация Расбуриказы (Расбуриказа 50 мкг/мл) в комбинации с высокими концентрациями мочевой кислоты (UA 15 или 30 мг/л) улучшала восстановление после ишемии/реперфузии зависимым от концентрации образом (таблицы 4, 5).

Таблица 4Влияние высоких концентраций Расбуриказы (Расбуриказа 50 мкг/мл) и мочевой кислоты (UA 15 мг/л) на коронарный кровоток (CF) и сократительную способность (dP/dtmax) в изолированных сердцах крыс с глобальной ишемией и реперфузией; n=5 на группу; *p<0,05 против контроля
	5 мин до ишемии	1 мин до ишемии	Глобальная ишемия	Реперфузия 5 мин после ишемии	Реперфузия 10 мин после ишемии	Реперфузия 15 мин после ишемии
CF (мл/мин) Контроль в присутствии UA	13,28±0,7	12,82±0,75	0,38±0,06	4,47±1,69	4,71±1,86	4,73±1,85
CF (мл/мин) в присутствии UA+Расбуриказа	14,55±0,7	14,59±0,75	0,38±0,01	9,76±2,4*	8,24±2,95	7,94±2,83
dP/dtmax (мм рт.ст./с) Контроль в присутствии UA	3600±250	3608±318	61±1	1057±496	1284±667	1403±736
dP/dtmax (мм рт.ст./с) в присутствии UA+Расбуриказа	4000±270	4074±277	61±1	2987±687*	2056±672	2110±774

Таблица 5Влияние высоких концентраций Расбуриказы (Расбуриказа 50 мкг/мл) и мочевой кислоты (UA 30 мг/л) на коронарный кровоток (CF) и сократительную способность (dP/dtmax) в изолированных сердцах крыс с глобальной ишемией и реперфузией; n=5 на группу; *p<0,05 против контроля
	5 мин до ишемии	1 мин до ишемии	Глобальная ишемия	Реперфузия 5 мин после ишемии	Реперфузия 10 мин после ишемии	Реперфузия 15 мин после ишемии
CF (мл/мин) Контроль в присутствии UA	13,33±0,7	13,11±0,88	0,31±0,02	8,34±1,88	9,16±1,29	9,25±0,63
CF (мл/мин) в присутствии UA+Расбуриказа	15,14±0,8	15,21±1,06	0,39±0,02	12,89±2,2*	12,9±1,35*	12,44±1,1*
dP/dtmax (мм рт.ст./с) Контроль в присутствии UA	4020±350	4017±437	59±2	2224±418	2898±314	3192±273
dP/dtmax (мм рт.ст./с) в присутствии UA+Расбуриказа	4090±339	4115±328	61±3	3759±587*	3300±75	3373±52

Добавка аскорбиновой кислоты (1 мМ) приводит к нормализации коронарного кровотока и к дальнейшему улучшению сократительной способности после ишемии/реперфузии (таблица 6).

Таблица 6Влияние высоких концентраций Расбуриказы (Расбуриказа 50 мкг/мл), мочевой кислоты (UA 30 мг/л) и аскорбиновой кислоты (аскорбиновая кислота 1 мМ) на коронарный кровоток (CF) и сократительную способность (dP/dtmax) в изолированных сердцах крыс с глобальной ишемией и реперфузией; n=6 на группу; *p<0,05 против контроля
	5 мин до ишемией	1 мин до ишемии	Глобальная ишемия	Реперфузия 5 мин после ишемии	Реперфузия 10 мин после ишемии	Реперфузия 15 мин после ишемии
CF (мл/мин) Контроль в присутствии UA+Расбуриказа	13,84±0,88	13,32±0,52	0,21±0,02	12,85±2,78	14,87±0,59	13,48±0,57
CF (мл/мин) в присутствии UA+Расбуриказа + аскорбиновая кислота	14,34±0,98	14,23±1,1	0,35±0,02	15±1,66	13,91±1,7	12,64±1,6
dP/dtmax (мм рт.ст./с) Контроль в присутствии UA + Расбуриказа	4813±300	4849±314	61±2	2624±625	3730±156	4160±255
dP/dtmax (мм рт.ст./с) Контроль в присутствии UA Расбуриказа + аскорбиновая кислота	4574±312	4437±297	58±2	3862±379*	3976±268	4002±274

Как показано выше, высокие концентрации Расбуриказы индивидуально или в комбинации с высокими концентрациями мочевой кислоты не оказывали существенного влияния на функционирование сердца. Неожиданно оказалось, что применение Расбуриказы в присутствии мочевой кислоты даже улучшало функционирование сердца в случае их присутствия перед и во время ишемии/реперфузии. В случае операции на сердце и сердечной недостаточности предполагается, что лечение с помощью Расбуриказы будет подходящим и безопасным. В экспериментах заявителей с индуцированием ишемии/реперфузии Расбуриказы даже улучшала кардиодинамику после ишемии.

1. Применение расбуриказы для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики расстройств или косвенных осложнений на сердце, вызванных приступами ишемии или реперфузией.

2. Применение расбуриказы по п.1 для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики сердечной недостаточности.

3. Применение расбуриказы по п.1 для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики застойной сердечной недостаточности.

4. Применение расбуриказы по п.1 для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики расстройств или косвенных осложнений на сердце, вызванных приступами ишемии или реперфузией, во время и после операции на сердце.

5. Применение расбуриказы по п.1 для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики расстройств или косвенных осложнений на сердце, вызванных приступами ишемии или реперфузией, во время и после аорто-коронарного шунтирования, чрескожного вмешательства на коронарных сосудах или трансплантации.

6. Применение расбуриказы по п.1 для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики инфаркта миокарда.

7. Применение по пп.1-6 вместе с акцептором H₂O₂.

8. Применение по п.7, где акцептором Н₂О₂ является аскорбиновая кислота.