Новые составы, которые стабилизируют иммуногенные композиции и ингибируют их осаждение

Новые составы, которые стабилизируют иммуногенные композиции и ингибируют их осаждение

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область изобретения

Настоящее изобретение в общем относится к области иммунологии, бактериологии, приготовления вакцин, стабильности белков и к разработке процессов изготовления. Более конкретно, изобретение относится к новым составам, которые ингибируют (подавляют) осаждение иммуногенных композиций.

Уровень техники

Специалистам в области биофармацевтики известно, что повышение стабильности иммуногенной композиции (например, белкового иммуногена, конъюгата полисахарид-белок) является необходимой и чрезвычайно желательной целью в частности, иммуногенная композиция для введения пациенту должна быть свежей, профессионально приготовленной и иметь привлекательный внешний вид. Любые изменения стабильности и/или физического внешнего вида иммуногенной композиции, в частности изменение цвета, помутнение или потемнение, могут вызвать у пациента или потребителя недоверие к продукту. Кроме того, поскольку многие иммуногенные составы упаковывают в контейнеры для многократного применения, необходимо обеспечивать одинаковое содержание активного ингредиента (в частности, конъюгата полисахарид-белок) в каждой дозе (например, в мутном растворе дозы могут иметь неравномерный состав). При этом иммуногенная композиция должна сохранять активность в течение всего "ожидаемого" срока хранения, причем любое превращение иммуногенной композиции в неактивную или иную нежелательную форму (например, в агрегат) снижает общую концентрацию продукта.

В некоторых литературных источниках высказано предположение, что стабильность конкретной иммуногенной композиции (такой, как, например, белковый иммуноген или конъюгат полисахарид-белок) по меньшей мере частично зависит от специфичного белка или белка-носителя (Ho et al., 2001; Но et al., 2002, Bolgiano et al., 2001). Так, например, анализ стабильности полисахаридов менингококка типа С (MenC) и полисахаридов Haemophilus influenzae типа b (Hib), конъюгированных с токсоидом столбняка (tetanus токсоид, ТТ) или с белком-носителем CRM₁₉₇, показал, что профиль стабильности этих препаратов зависит от белка-носителя (Но et al., 2002). В другом исследовании (Но et al., 2001) анализировали конъюгаты MenC-CRM₁₉₇ двух различных производителей (Но et al., 2001), при этом конъюгаты MenC-CRM₁₉₇ отличались способом конъюгации и длиной цепи полисахарида конъюгата (оба имели один и тот же белок-носитель CRM₁₉₇). Кроме того, результаты этого исследования показали, что такие факторы, как способ конъюгации (например, восстановительное аминирование - прямое или при помощи химической промежуточной группы), количество участков конъюгации, длина цепи полисахарида, рН, буфер, добавляемый для хранения, температура хранения и циклы замораживания/оттаивания, также оказывают влияние на стабильность иммуногенной композиции.

Таким образом, для получения безопасного, стабильного, надежного и экономичного продукта при разработке состава для иммуногенной композиции необходимо учитывать множество факторов. Такие факторы включают, в частности, но без ограничения, химическую стабильность иммуногенной композиции (например, гидролиз сахаридов, деполимеризация полисахаридов, протеолиз или фрагментация белков), физическую/температурную стабильность иммуногенной композиции (например, агрегация, осаждение, адсорбция), совместимость иммуногенной композиции с системой для хранения/укупорки, взаимодействие между иммуногенной композицией и неактивными ингредиентами (например, буферами, солями, наполнителями, криопротекторами), способ получения, лекарственную форму (например, лиофилизированная, жидкая), условия окружающей среды во время транспортировки, хранения и применения (например, температура, влажность, сдвигающие усилия) и продолжительность периода времени между изготовлением и применением.

Специалисты предполагают, что силиконовое масло, которое вызывает изменения вторичной и третичной структуры белков,1 может, быть ответственным за агрегацию/осаждение, наблюдаемые в некоторых белковых фармацевтических препаратах (Jones et al., 2005). Так, например, некоторые сообщения, опубликованные в 1980-х годах, указывали, что выделение силиконового масла из одноразовых пластмассовых шприцев может служить причиной агрегации инсулина человека (Chantelau and Berber, 1985; Chantelau et. al., 1986; Chantelau, 1989, Bernstein, 1987; Baldwin, 1988; Collier и Dawson, 1985), Chantelau et al. (1986) наблюдали, что после отбора (с использованием силиконизированного одноразового шприца) трех или более доз препарата инсулина из флакона, содержащего 10 доз, содержимое флакона начинало мутнеть вследствие загрязнения силиконовым маслом, что приводило к агрегации и дезактивации инсулина (Chantelau et al., 1986). Пародоксально, но силиконовое масло является необходимым компонентом для пластмассовых шприцев, поскольку оно служит для смазки резинового поршня и способствует перемещению поршня в цилиндре шприца (т.е. силиконовое масло облегчает возможность введения препарата при помощи шприца).

Однако силиконовое масло применяют не только в шприцах: его используют также в качестве покрытия для стеклянных флаконов для минимизации адсорбции белка, в качестве смазки для предотвращения слеживания резиновых пробок в процессе заполнения флаконов, в качестве смазки, необходимой для обработки стеклянной и эластомерной крышки, и в качестве смазки, облегчающей прохождение иглы через резиновую пробку. Кроме того, силиконизация шприцев, стеклянных флаконов, резиновых пробок и т.п. не является надежно контролируемым или стандартизованным процессом, поэтому существует высокая степень колебаний содержания силиконового масла от одной партии продукта к другой.

Поэтому в данной области техники существует постоянная потребность в составах, которые повышают стабильность и ингибируют осаждение иммуногенных композиций.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение в широком смысле относится к новым составам, которые стабилизируют иммуногенные композиции и ингибируют их осаждение. Более конкретно, некоторые варианты реализации настоящего изобретения представляют собой новые составы, которые ингибируют осаждение иммуногенных композиций, содержащихся в контейнерах. Один конкретный вариант реализации изобретения представляет собой новые составы, которые стабилизируют иммуногенные композиции в условиях взаимодействия с силиконовым маслом, а также под действием сдвигающих усилий, тряски при транспортировке и т.п.

Некоторые варианты реализации настоящего изобретения представляют собой составы, которые стабилизируют конъюгат полисахарид-белок, при этом указанный состав содержит (1) буферный солевой раствор, причем pKa буфера оставляет от примерно 3.5 до примерно 7.5, (2) поверхностно-активный агент и (3) один или более конъюгатов полисахарид-белок. В одном конкретном варианте реализации изобретения состав, содержащий конъюгат полисахарид-белок, находится в контейнере. В некоторых вариантах реализации изобретения контейнер выбирают из одного или более элементов из группы, включающей флакон, пробку флакона, крышку флакона, стеклянную крышку, резиновую крышку, пластмассовую крышку, шприц, пробку шприца, поршень шприца, колбу, мензурку, мерный цилиндр, ферментер, биореактор, шланг, трубку, мешок, банку, ампулу, баллон и одноразовую ручку. В некоторых вариантах реализации изобретения контейнер является силиконизированным.

В некоторых вариантах реализации изобретения буферный солевой раствор составов имеет рН от 5.5 до 7.5. В других вариантах реализации изобретения буфер является фосфатным, сукцинатным, гистидиновым или цитратным. В некоторых вариантах реализации буфер представляет собой сукцинатный буфер с конечной концентрацией от 1 мМ до 10 мМ и рН от 5.8 до 6.0. В одном конкретном варианте реализации конечная концентрация сукцинатного буфера составляет 5 мМ. В других вариантах реализации изобретения соль в буферном солевом растворе включает хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание. В одном конкретном варианте реализации изобретения соль в буферном солевом растворе представляет собой хлорид натрия.

В другом варианте реализации поверхностно-активный агент указанных составов выбран из группы, включающей полисорбат, 20 (Tween™20), полисорбат 40 (Tween™40), полисорбат 60, (Tween™60), полисорбат 5, (Tween™65), полисорбат 80 (Tween™80), полисорбат 85 (Tween™85), Triton™ N-101, Triton™ Х-100, окстоксинол 40, ноноксинол-9, триэтаноламин, полипептид триэтаноламинолеата, полиоксиэтилен-660-гидроксистеарат (PEG-15, Solutol Н15), полиоксиэтилен-35-рицинолеат (Cremophor EL™), соевый лецитин и полоксамер. В одном конкретном варианте реализации поверхностно-активный агент представляет собой полисорбат 80. В другом варианте реализации конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна по меньшей мере от 0.01% до 10% мас./об. состава. B других вариантах реализации изобретения конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна 0.01% мас/об. состава. В следующих вариантах реализации изобретения конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна 0.05% мас./об. состава. В другом варианте реализации конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна 0.1% мас./об. состава. В некоторых других вариантах реализации изобретения конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна 1.0% мас./об. состава. В следующих вариантах реализации изобретения конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна 10.0% мас/об. состава.

В другом варианте реализации конъюгат полисахарид-белок включает один или более полисахаридов пневмококка. В некоторых вариантах реализации изобретения указанные один или более полисахаридов пневмококка представляют собой полисахарид S. pneumoniae серотипа 4, полисахарид pneumoniae серотипа 6 В, полисахарид S. pneumoniae серотипа 9V, полисахарид S. pneumoniae серотипа 14, полисахарид S pneumoniae серотипа 18С, полисахарид S. pneumoniae серотипа 19F, полисахарид S. pneumoniae серотипа 23F, полисахарид S. pneumoniae сеортипа 1, полисахарид S. pneumoniae серотипа 3, полисахарид S. pneumoniae серотипа 5, полисахарид S. pneumoniae серотипа 6A, полисахарид S. pneumoniae серотипа 7F и полисахарид S. pneumoniae серотипа 19A. В некоторых вариантах реализации изобретения белок в составе, содержащем конъюгат полисахарид-белок, выбран из группы, включающей CRM₁₉₇, токсоид столбняка, токсоид холеры, токсоид коклюша, термолабильный токсоид (LT) Е. coli, пневмолизиновый токсоид, поверхностный белок А пневмококков (PspA), белок адгезин А пневмококков (PsaA), пептидазу С5а из стрептококка, белок D Haemophilus influenzae, яичный альбумин, гемоцианин лимфы улитки (keyhole limpet haemocyanin, KLH), альбумин сыворотки крупного рогатого скота (bovine serum albumin, BSA) и очищенное белковое производное туберкулина (purified protein derivative of tuberculin, PPD).

В одном конкретном варианте реализации изобретения состав, содержащий конъюгат полисахарид-белок, представляет собой состав 7-валентного пневмококкового конъюгата (7vPnC), содержащий полисахарид S. pneumoniae серотипа 4, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 9V, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полипептид, полисахарид S. pneumoniae серотипа 14, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 19F, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, и полисахарид S. pneumoniae серотипа 23F, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇.

В другом конкретном варианте реализации состав, содержащий конъюгат полисахарид-белок, представляет собой 13-валентный пневмококковый конъюгатный (13vPnC) состав, содержащий полисахарид S. pneumoniae серотипа 4, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 9V, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 14, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 18C, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 19F, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 23F, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 1, конъюгированный с полипептидом, CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 3, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 5, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 6А, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 7F, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇ и полисахарид S. pneumoniae серотипа 19A, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇.

В других вариантах реализации изобретения состав содержит также один или более полисахаридов менингококка, один или более антигенных белков менингококка или их сочетание. В следующих вариантах реализации изобретения состав содержит также один или более полисахаридов стрептококка, один или более антигенных белков стрептококка или их сочетание.

В некоторых других вариантах реализации изобретения состав содержит также один или более адъювантов. Примеры пригодных адъювантов приведены ниже.

Другие варианты реализации изобретения представляют собой препараты, которые стабилизируют состав пептидазы стрептококка С5а (SCP) и которые содержат (1) буферный солевой раствор, причем pKa буфера составляет примерно от 3.5 до примерно 6.5, (2) поверхностно-активный агент и (3) пептидазу стрептококка С5а. В одном конкретном варианте реализации изобретения состав SCP находится в контейнере. В некоторых вариантах реализации изобретения контейнер выбирают из одного или более элементов из группы, включающей флакон, пробку флакона, крышку флакона, стеклянную крышку, резиновую крышку, пластмассовую крышку, шприц, пробку шприца, поршень шприца, колбу, мензурку, мерный цилиндр, ферментер, биореактор, шланг, трубку, мешок, банку, ампулу, баллон и одноразовую ручку.

В других вариантах реализации изобретения буферный солевой раствор состава имеет рН от 5.5 до 7.5. В следующих вариантах реализации изобретения буфер является сукцинатным, гистидиновым, фосфатным или цитратным. В одном конкретном варианте реализации буфер представляет собой суцинатный буфер с конечной концентрацией от 1 мМ до 10 мМ и рН от 5.8 до 6.0. В другом конкретном варианте реализации конечная концентрация сукцинатного буфера составляет 5 мМ. В следующих вариантах реализации изобретения соль в буферном солевом растворе включает хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание.

В некоторых вариантах реализации изобретения поверхностно-активный агент в составах выбирают из группы, включающей полисорбат 20 (Tween™20), полисорбат 40 (Tween™40), полисорбат 60 (Tween™60), полисорбат 65 (Tween™65), полисорбат 80 (Tween™80), полисорбат 85 (Tween™85), Triton™ N-101, Triton™ X-100, окстоксинол 40, ноноксинол-9, триэтаноламин, полипептид триэтаноламинолеата, полиоксиэтилен-660-гидроксистеарат (PEG-15, Solutol H15), полиоксиэтилен-35-рицинолеат (Cremophor EL™), соевый лецитин и полоксамер. В одном конкретном варианте реализации изобретения поверхностно-активный агент представляет собой полисорбат 80. В некоторых вариантах реализации изобретения конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна от 0.01% до 10% мас./об. состава. В следующих вариантах реализации изобретения конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна 0.01% мас./об состава. В других вариантах реализации изобретения конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна 0.05% мас./об. состава. В следующих вариантах реализации изобретения конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна 0.1% мас./об. состава. В другом варианте реализации конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна 1.0% мас./об. состава. В еще одном варианте реализации конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна 10.0% мас./об. состава.

В некоторых других вариантах реализации изобретения состав SCP содержит также один или более полипептидов, которые выбирают из группы, включающей полипептид стрептококка, полипептид пневмококка, полипептид менингококка и полипептид стафилококка. В следующих вариантах реализации изобретения состав SCP содержит также один или более полисахаридов, выбранных из группы, включающей полисахарид стрептококка, полисахарид пневмококка, полисахарид менингококка и полисахарид стафилококка.

В другом варианте реализации состав содержит также один или более адъювантов. Примеры пригодных адъювантов приведены ниже.

Другой вариант реализации изобретения представляет собой составы, которые ингибируют индуцируемое силиконом осаждение конъюгата полисахарид-белок, находящегося в силиконизированном контейнере, при этом указанный состав содержит (1) буферный солевой раствор, причем буфер имеет pKa примерно от 3.5 до примерно 7.5, (2) соль алюминия и (3) один или более конъюгатов полисахарид-белок. В некоторых вариантах реализации изобретения силиконизированный контейнер выбран из одного или более элементов из группы, включающей флакон, пробку флакона, крышку флакона, стеклянную крышку, резиновую крышку, пластмассовую крышку, шприц, пробку шприца, поршень шприца, колбу, мензурку, мерный цилиндр, ферментер, биореактор, шланг, трубку, мешок, банку, ампулу, баллон и одноразовую ручку.

В некоторых вариантах реализации изобретения буферный солевой раствор в составах имеет pH от 5.5 до 7.5. В других вариантах реализации изобретения буфер в составах является фосфатным, сукцинатным, гистидиновым или цитратным. В следующих вариантах реализации буфер представляет собой сукцинатный буфер с конечной концентрацией от 1 мМ до 10 мМ и рН от 5.8 до 6.0. В одном конкретном варианте реализации конечная концентрация сукцинатного буфера составляет 5 мМ. В следующих вариантах реализации изобретения соль в буферном солевом растворе включает хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание. В одном конкретном варианте реализации соль в буферном солевом растворе представляет собой хлорид натрия.

В других вариантах реализации изобретения соль алюминия представляет собой гидроксид алюминия, фосфат алюминия или сульфат алюминия. В одном конкретном варианте реализации изобретения соль алюминия представляет собой фосфат алюминия.

В некоторых других вариантах реализации изобретения состав содержит также полисорбат 80 (Tween™80). В одном конкретном варианте реализации изобретения конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна по меньшей мере, 0.01% до 10% мас./об. состава.

В другом варианте реализации конъюгат полисахарид-белок содержит один или более полисахаридов пневмококка. В некоторых вариантах реализации изобретения указанные один или более полисахаридов пневмококка представляют собой полисахарид S. pneumoniae серотипа 4, полисахарид S. pneumoniae серотипа 6В, полисахарид S. pneumoniae серотипа 9V, полисахарид S. pneumoniae серотипа 14, полисахарид S. pneumoniae серотипа 18С, полисахарид S. pneumoniae серотипа 19F, полисахарид S. pneumoniae серотипа 23F, полисахарид S. pneumoniae сеортипа 1, полисахарид S. pneumoniae серотипа 3, к полисахарид S. pneumoniae серотипа 5, полисахарид S. pneumoniae серотипа 6А, полисахарид S. pneumoniae серотипа 7F и полисахарид S. pneumoniae серотипа 19A.

В некоторых вариантах реализации изобретения белок состава, содержащего конъюгат полисахарид-белок, выбран из группы, включающей CRM₁₉₇, токсоид столбняка, токсоид холеры, токсоид коклюша, термолабильный токсоид (LT) Е. coli, пневмолизиновый токсоид, поверхностный белок А пневмококков (PspA), белок пневмококков адгезин А (PsaA), пептидазу С5а из стрептококка, белок D Haemophilus influenzae, яичный альбумин, гемоцианин лимфы улитки (keyhole limpet haemocyanin, KLH), альбумин сыворотки крупного рогатого скота (bovine serum albumin, BSA) и очищенное белковое производное туберкулина (purified protein derivative of tuberculin, PPD).

В одном конкретном варианте реализации изобретения состав, содержащий конъюгат полисахарид-белок, представляет собой состав, содержащий 7-валентный пневмококковый конъюгат (7vPnC), содержащий полисахарид S. pneumoniae серотипа 4, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 6B, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 9V, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полипептид, полисахарид S. pneumoniae серотипа 14, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 18С, конъюгированный CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 19F, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, и полисахарид S. pneumoniae серотипа 23F, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇.

В другом конкретном варианте реализации состав, содержащий конъюгат полисахарид-белок, представляет особой состав, содержащий 13-валентный пневмококковый конъюгат (13vPnC), содержащий полисахарид S. pneumoniae серотипа 4, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 9V, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 14, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 19F, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 23F, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 1, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 3, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 5, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 6А, конъюгированный, с полипептидом CRM₁₉₇, полисахарид S. pneumoniae серотипа 7F, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇, и полисахарид S. pneumoniae серотипа 19А, конъюгированный с полипептидом CRM₁₉₇.

В следующих вариантах реализации изобретения состав содержит также один или более полисахаридов менингококка, один или более антигенных белков менингококка или их сочетание.

В другом варианте реализации состав содержит также один или более полисахаридов стрептококка, один или более антигенных белков стрептококка или их сочетание.

В некоторых других вариантах реализации изобретения состав содержит также один или более адъювантов. Примеры пригодных адъювантов приведены ниже.

Другие варианты реализации настоящего изобретения представляют собой составы, которые ингибируют индуцируемое силиконом осаждение состава пептидазы стрептококка (SCP) С5а, находящегося в силиконизированном контейнере, при этом указанный состав содержит (1) буферный солевой раствор, причем буфер имеет pKa примерно от 3.5 до примерно 6.5, (2) соль алюминия и (3) пептидазу стрептококка С5а. В некоторых вариантах реализации изобретения в качестве контейнерного средства выбирают один или более элементов из группы, включающей флакон, пробку флакона, крышку флакона, стеклянную крышку, резиновую крышку, пластмассовую крышку, шприц, пробку шприца, поршень шприца, колбу, мензурку, мерный цилиндр, ферментер, биореактор, шланг, трубку, мешок, банку, ампулу, баллон и одноразовую ручку.

В другом варианте реализации буферный солевой раствор состава имеет рН от 5.5 до 7.5. В других вариантах реализации изобретения буфер является сукцинатным, гистидиновым, фосфатным или цитратным. В некоторых вариантах реализации буфер представляет собой сукцинатный буфер с конечной концентрацией от 1 мМ до 10 мМ и рН от 5.8 до 6.0. В другом варианте реализации соль в буферном солевом растворе включает хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание.

В некоторых других вариантах реализации изобретения состав содержит также полисорбат 80 (Tween™80). В одном конкретном варианте реализации изобретения конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна от 0.01% до 10% мас./об. состава.

В следующих вариантах реализации изобретения состав SCP содержит также один или более полипептидов, которые выбирают из группы, включающей полипептид стрептококка, полипептид пневмококка, полипептид менингококка и полипептид стафилококка.

В некоторых других вариантах реализации изобретения состав SCP содержит также один или более полисахаридов, которые выбирают из группы, включающей полисахарид стрептококка, полисахарид пневмококка, полисахарид менингококка и полисахарид стафилококка.

В еще одном варианте реализации состав содержит также один или более адъювантов. Примеры пригодных адъювантов приведены ниже.

Другие варианты реализации изобретения представляют собой составы, которые стабилизируют композицию белка N. meningitides 2086, при этом указанный состав содержит (1) буферный солевой раствор, причем буфер имеет pKa примерно от 3.5 до примерено 6.5, (2) поверхностно-активный агент и (3) белок N. meningitides 2086. Примеры белков N. meningitidis 2086 приведены далее. Водном конкретном варианте реализации изобретения композиция белка N. meningitidis 2086 находится в контейнере. В некоторых вариантах реализации изобретения в качестве контейнерного средства выбирают один или более элементов из группы, включающей флакон, пробку флакона, крышку флакона, стеклянную крышку, резиновую крышку, пластмассовую крышку, шприц, пробку шприца, поршень шприца, колбу, мензурку, мерный цилиндр, ферментер, биореактор, шланг, трубку, мешок, банку, ампулу, баллон и одноразовую ручку.

В других вариантах реализации изобретения буферный солевой раствор состава имеет рН от 5.5 до 7.5. В других вариантах реализации изобретения буфер является сукцинатным, гистидиновым, фосфатным или цитратным. В одном конкретном варианте реализации буфер представляет собой сукцинатный буфер с конечной концентрацией от 1 мМ до 10 мМ и рН от 5.8 до 6.0. В другом конкретном варианте реализации конечная концентрация сукцинатного буфера составляет 5 мМ. В следующих вариантах реализации изобретения соль в буферном солевом растворе включает хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание.

В некоторых вариантах реализации изобретения поверхностно-активный агент в составах выбирают из группы, включающей полисорбат 20 (Tween™20), полисорбат 40 (Tween™40), полисорбат 60 (Tween™60), полисорбат 65 (Tween™65), полисорбат 80 (Tween™80), полисорбат 85 (Tween™85), Triton™ N-101, Triton™ X-100, окстоксинол 40, ноноксинол-9, триэтаноламин, полипептид триэтаноламинолеата, полиоксиэтилен-660-гидроксистеарат (PEG-15, Solutol Н15), полиоксиэтилен-35-рицинолеат (Cremophor EL™), соевый лецитин и полоксамер. В одном конкретном варианте реализации изобретения поверхностно-активный агент представляет собой полисорбат 80. В некоторых вариантах реализации изобретения конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна от 0.01% до 10% мас./об. состава. В следующих вариантах реализации изобретения конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна 0.01% мас./об. состава. В других вариантах реализации изобретения конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна 0.05% мас./об. состава. В следующих вариантах реализации изобретения конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна 0.1% мас./об. состава. В другом варианте реализации конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна 1.0% мас./об. состава. В еще одном варианте реализации конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна 10.0% мас./об. состава.

В некоторых других вариантах реализации изобретения композиция белка N. meningitidis 2086 содержит также один или более полипептидов, которые выбирают из группы, включающей полипептид стрептококка, полипептид пневмококка, полипептид менингококка и полипептид стафилококка. В следующих вариантах реализации изобретения композиция белка N. meningitidis 2086 содержит также один или более полисахаридов, которые выбирают из группы, включающей полисахарид стрептококка, полисахарид пневмококка, полисахарид менингококка и полисахарид стафилококка.

В другом варианте реализации состав содержит также один или более адъювантов. Примеры пригодных адъювантов приведены ниже.

Другие варианты реализации настоящего изобретения представляют собой составы, которые ингибируют индуцируемое силиконом осаждение композиции белка N. meningitidis 2086, находящиеся в силиконизированном контейнере, при этом указанный состав содержит (1) буферный солевой раствор, причем буфер имеет pKa примерно от 3.5 до примерно 6.5, (2) соль алюминия и (3) белок N. meningitidis 2086. В некоторых вариантах реализации изобретения контейнер выбран из одного или более элементов из группы, включающей флакон, пробку флакона, крышку флакона, стеклянную крышку, резиновую крышку, пластмассовую крышку, шприц, пробку шприца, поршень шприца, колбу, мензурку, мерный цилиндр, ферментер, биореактор, шланг, трубку, мешок, банку, ампулу, баллон и одноразовую ручку.

В другом варианте реализации буферный солевой раствор состава имеет рН от 5.5 до 7.5. В других вариантах реализации изобретения буфер является сукцинатным, гистидиновым, фосфатным или цитратным. В некоторых вариантах реализации буфер представляет собой сукцинатный буфер с конечной концентрацией от 1 мМ до 10 мМ и рН от 5.8 до 6.0. В другом варианте реализации соль в буферном солевом растворе включает хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание.

В некоторых других вариантах реализации изобретения состав содержит также полисорбат 80 (Tween™80). В одном конкретном варианте реализации изобретения конечная концентрация полисорбата 80 в составе равна от 0.01% до 10% мас./об. состава.

В следующих вариантах реализации изобретения композиция белка N. meningitidis 2086 содержит также один или более полипептидов, выбранных из группы, включающей полипептид стрептококка, полипептид пневмококка, полипептид менингококка и полипептид стафилококка.

В некоторых других вариантах реализации изобретения композиция белка N. meningitidis 2086 содержит также один или более полисахаридов, которые выбирают из группы, включающей полисахарид стрептококка, полисахарид пневмококка, полисахарид менингококка и полисахарид стафилококка.

В еще одном варианте реализации состав содержит также один или более адъювантов. Примеры пригодных адъювантов приведены ниже.

Другие признаки и преимущества настоящего изобретения станут очевидны из приведенного ниже подробного описания, вариантов реализации изобретения и формулы изобретения.

Краткое описание фигур

На фигуре 1 показана стабильность составов пептидазы стрептококка (SCP) С5а (набранных в шприцы) до и после аккуратного перемешивания (60 циклов в минуту) в горизонтальном орбитальном шейкере. Данные, показанные на фигуре 1А, представляют стабильность SCP в течение двух дней без добавления Tween™80 (т.е. 0%), а данные на фигуре 1В - стабильность SCP в течение двух дней с добавлением 0.025% Tween™80. Буферы, применяемые в составах, показанных на фигуре 1А и 1В, представляют собой сукцинатный буферный раствор (SBS), фосфатный буферный раствор (PBS) и трис(гидроксиметил)аминометан (TRIS).

На фигуре 2 показана общая потеря антигенности 13vPnC, приготовленного с AlPO₄ (0.25 мг/мл) и набранного в шприц BD Hypak, спустя два часа, восемь часов и двадцать четыре часа после перемешивания со скоростью 500 об/мин при температуре 2-8°С.

На фигуре 3 показана общая потеря антигенности 13vPnC, приготовленного с AlPO₄ (0.25 мг/мл) и набранного в несиликонизированный шприц, спустя два часа, восемь часов и двадцать четыре часа после перемешивания со скоростью 500 об/мин при температуре 2-8°С.

На фигуре 4 показана общая потеря антигенности 13vPnC, приготовленного с AlPO₄ (0.25 мг/мл) и набранного в шприц Vetter, спустя два часа, восемь часов и двадцать четыре часа после перемешивания со скоростью 500 об/мин при температуре 2-8°С.

На фигуре 5 показана общая потеря антигенности 13vPnC, приготовленного с AlPO₄ (0.25 мг/мл) и набранного в шприц Schott TopPac, спустя два часа, восемь часов и двадцать четыре часа после перемешивания со скоростью 500 об/мин при температуре 2-8°С.

На фигуре 6 показана общая потеря антигенности 13vPnC, пригтовленного с добавлением (фиг.6А) и без добавления (фиг.6В) AlPO₄ (0.25 мг/мл) и набранного в шприц BD из спеченного стекла, спустя два часа, восемь часов и двадцать четыре часа после перемешивания со скоростью 500 об/мин при температуре 2-8°С.

На фигуре 7 показана общая с потеря антигенности 13vPnC, полученного с добавлением (фиг.7А) и без добавления (фиг.7В) AlPO₄ (0.25 мг/мл) и набранного в шприц BünderGlas PS2, спустя два часа, восемь часов и двадцать четыре часа после перемешивания со скоростью 500 об/мин при температуре 2-8°C.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение связано с существующей в данной области насущной потребностью в улучшении стабильности иммуногенных композиций, в частности конъюгатов полисахарид-белок и белковых иммуногенов. Таким образом, настоящее изобретение в широком смысле относится к новым составам, содержащим поверхностно-активный агент и/или соль алюминия, которые стабилизируют иммуногенные композиции и ингибируют их осаждение. Более конкретно, настоящее изобретение связано с существующей в данной области потребностью в составах, ингибирующих образование частиц (например, агрегацию, осаждение) и стабилизирующих иммуногенные композиции, которые обрабатывают, создают, составляют, изготавливают и/или хранят в контейнерах, в частности в ферментаторах, биореакторах, флаконах, колбах, мешках, шприцах, резиновых пробках, трубках и т.п.

Как указано выше в разделе "Уровень техники", на стабильность иммуногенных композиций оказывают влияние различные факторы, включающие, среди прочего, химическую стабильность иммуногенной композиции, физическую/термическую стабильность иммуногенной композиции, совместимость иммуногенной композиции с системой контейнера/крышки, взаимодействия между иммуногенной композицией и неактивными ингредиентами (например, с буферами, солями, наполнителями, криопротекторами), способы изготовления, лекарственную форму, условия окружающей среды во время транспортировки, хранения и применения (например, температура, влажность, сдвигающие усилия) и длительность периода времени между изготовлением и применением.

Стабильность иммуногенной композиции согласно настоящему изобретению можно легко определить стандартными способами, которые хорошо известны специалистам и широко применяются в данной области техники. Так, например, иммуногенную композицию исследуют на стабильность, агрегацию, иммуногенность, образование частиц, потерю (концентрации) белка и т.п. различными методами, включая, в частности, но без ограничения, определение рассеивания света, оптической плотности, скорости седиментации при центрифугировании, седиментационного равновесия при центрифугировании, кругового дихроизма (circular dichroism, CD), анализа Лоури, анализа методом бицинхониновой кислоты (bicinchoninic кислота, ВСА), связывания антитела и т.п.

Как подробно описано в настоящем тексте, настоящее изобретение связано с неожиданными и удивительными результатами, которые показывают, что состав, содержащий иммуногенную композицию, который включает поверхностно-активный агент, в частности Tween™80, существенно повышает стабильность и ингибирует осаждение иммуногенной композиции. Так, например, согласно настоящему изобретению наблюдали (см., в частности, пример 2), что тринадцативалентный пневмококковый конъюгат (13vPnC), приготовленный в буферном солевом растворе и набранный в шприц для одноразовой дозы, начинает осаждаться из раствора в течение десяти минут при 2-8°С после легкого перемешивания при помощи горизонтального орбитального шейкера. (Горизонтальный орбитальный шейкер использовали для моделирования типичных условий процесса изготовления, транспортировки и хранения иммуногенной композиции 13vPnC). Однако неожиданно оказалось, что 13vPnC, приготовленный в буферном солевом растворе с добавлением 0.001% Tween™80 и набранный в шприц для одноразовой дозы, и после легкого перемешивания при 2-8°С остается стабильным в течение двадцати пяти дней без видимых признаков осаждения (данные не показаны). Таким образом, полученные данные указывают на то, что добавление поверхностно-активного агента (например, Tween™80) в состав иммуногенной композиции повышает стабильность иммуногенной композиции.

Результаты второго исследования стабильности 13vPnC дополнительно подтвердили, что добавление поверхностно-активного агента в состав существенно повышает стабильность 13vPnC. Так, например, стабильность (определяемую по изменению антигенности 13vPnC) состава 13vPnC с 0.05% Tween™80 (таблица 1) и без Tween™80 (0.0%, таблица 1) измеряли в течение двух часов. Как показано в таблице 1, антигенность существенно уменьшилась в полисахаридах тринадцати серотипов (полученных без Tween™80) согласно анализам, проведенным в течение двух часов. Состав 13vPnC, содержащий 0.05% Tween™80 (таблица 1), напротив, показал высокую стабильность антигенности при проведении анализов в течение двух час