Применения анти-cd40-антител

Применения анти-cd40-антител

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область изобретения, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым применениям анти-CD40-антител в лечении заболеваний или состояний, ассоциированных с ростом неопластических В-клеток. Изобретение особенно применимо для лечения пациентов, которым предварительно вводили (i) СНОР, (ii) химерное моноклональное анти-CD20-антитело ритуксимаб или (iii) CHOP и ритуксимаб в виде комбинированной терапии.

Уровень техники

CD40 является антигеном клеточной поверхности 50-55 кДа, присутствующим на поверхности как нормальных, так и неопластических В-клеток человека. Злокачественные В-клетки из опухолей В-клеточного направления дифференцировки экспрессируют CD40 и, по-видимому, зависят от передачи сигнала CD40 для выживания и пролиферации. Трансформированные клетки от пациентов с В-клеточными лимфомами низкой и высокой степени, В-клеточным острым лимфобластным лейкозом, множественной миеломой, хроническим лимфоцитарным лейкозом и болезнью Ходжкина экспрессируют CD40. Экспрессия CD40 детектируется также в остром миелобластном лейкозе и 50% связанных со СПИДом лимфом.

Анти-CD40-антитела и их применения были описаны, например, в совместных международных заявках на патент, опубликованных в виде WO 2005/044294, WO 2005/044304, WO 2005/044305, WO 2005/044306, WO 2005/044307, WO 2004/044854, WO 2005/044855, WO 2006/073443, WO 2006/125117, WO 2006/125143, WO 2007/053661 и WO 2007/053767. Эти заявки описывают конкретно моноклональное анти-CD40-антитело IgG₁ человека, называемое в этих заявках CHIR-12 (но теперь известное как HCD122), генерируемое иммунизацией трансгенных мышей, несущих локус тяжелой цепи IgG₁ человека и локус легкой цепи κ человека (XenoMouse® technology; Abgenix, California). Эти заявки раскрывают также применение анти-CD40-антител, таких как HCD122, для лечения заболеваний и состояний, ассоциированных с ростом неопластических В-клеток.

Хотя любой один терапевтический агент может обеспечивать пользу пациенту, требуются дополнительные способы для уменьшения токсичности и для улучшения результатов лечения. Кроме того, заболевания или состояния часто могут становиться не поддающимися лечению монотерапией (резистентными к монотерапии) либо в результате исходной устойчивости, либо устойчивости, развивающейся во время терапии. Таким образом, любое обнаружение комбинированной терапии, которая может улучшать лечение относительно монотерапии, представляет большой интерес.

Краткое описание фигур

Фиг.1 иллюстрирует результаты исследования противоопухолевой активности, обеспечиваемой различными обработками в модели ксенотрансплантата RL DLBCL (см. пример 1).

Фиг.2 иллюстрирует результаты исследования действий CD40L и HCD122 на цитотоксичность CHOP на клетках SU-DHL-4.

Фиг.3 иллюстрирует результаты исследования действий CD40L и HCD122 на передачу сигнала NFκB в клеточных линиях RL и SU-DHL-4.

Фиг.4 иллюстрирует результаты исследования действий CD40L и HCD122 на экспрессию некоторых молекул адгезии клеточной поверхности в клетках RL.

Фиг.5 иллюстрирует результаты исследования действий CD40L и HCD122 на экспрессию некоторых молекул адгезии клеточной поверхности в клетках SU-DHL-4.

Фиг.6 иллюстрирует результаты исследования действий CD40L и HCD122 на агрегацию in vitro клеток SU-DHL-4.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает способы лечения пациентов-людей в отношении заболеваний или состояний, ассоциированных с ростом неопластических В-клеток. Эти способы включают комбинированную терапию с использованием (i) анти-CD40-антитела и (ii) циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона (CHOP). Авторы изобретения обнаружили, что введение этих двух известных терапий в комбинации приводит к неожиданно сильнодействующей терапевтической эффективности in vivo. Авторы изобретения обнаружили, что объединенное действие этих двух терапий может быть более эффективным, чем сумма отдельных действий каждой терапии, т.е. что комбинация анти-CD40-антитела (такого как HCD122) с CHOP может обеспечивать синергическое терапевтическое действие. Не желая быть связанными какой-либо определенной теорией, авторы изобретения считают, что эта неожиданно сильная терапевтическая эффективность обусловлена способностью анти-CD40-антител сенсибилизировать В-клетки к цитотоксичности CHOP посредством подавления активации NF-κB и/или ингибированием CD40L-индуцированной экспрессии молекул адгезии.

Настоящее изобретение обеспечивает способ лечения пациента-человека в отношении заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток, включающий введение указанному пациенту циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона (CHOP) в комбинации с анти-CD40-антителом.

В некоторых вариантах осуществления анти-CD40-антитело (в настоящем документе "лечение антителами (пассивная иммунотерапия)") и циклофосфамид, доксорубицин, винкристин и преднизон (CHOP; здесь "химиотерапия") вводят пациенту одновременно. В этих вариантах осуществления введение антител пациенту (пассивная терапия) может проводиться точно в то же самое время, что и химиотерапия (т.е. эти два типа терапевтических веществ вводят одновременно). Альтернативно введение антител пациенту может проводиться приблизительно в то же самое время, что и химиотерапия (т.е. эти два типа терапевтических веществ не вводят точно в то же самое время), например, во время одного и того же визита к врачу или другому медицинскому работнику.

В других вариантах осуществления лечение антителами пациента и химиотерапию проводят не в одно и то же время, а последовательно в любом порядке. В этих вариантах осуществления способы по настоящему изобретению могут предусматривать первый цикл химиотерапии пациенту перед введением первой дозы анти-CD40-антитела этому пациенту. Альтернативно эти способы могут предусматривать проведение первого цикла химиотерапии пациенту после введения первой дозы анти-CD40-антитела этому пациенту. В вариантах, в которых лечение антителами и химиотерапию выполняют последовательно, эти терапевтические вещества могут вводиться таким образом, что обе эти терапии проявляют терапевтическое действие на пациента в одно и то же время (т.е. периоды, в которых каждое терапевтическое вещество является эффективным, могут перекрываться), хотя это и не является существенным.

Таким образом, изобретение обеспечивает способ лечения пациента-человека в отношении заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток, включающий введение пациенту анти-CD40-антитела до, во время или после введения одного и/или нескольких из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона. Ссылки здесь в отношении использования одного или нескольких из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона являются ссылками на использование одного или более, двух или более, трех или более или всех четырех из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона.

В вариантах осуществления, в которых первый цикл химиотерапии проводят для пациента до первой дозы анти-CD40-антитела, первый цикл химиотерапии может проводиться от приблизительно одной недели до приблизительно одного года, от приблизительно одной недели до приблизительно десяти месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно восьми месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно шести месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно четырех месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно двух месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно одного месяца, от приблизительно одной недели до приблизительно трех недель, от приблизительно одной недели до приблизительно двух недель или приблизительно одной недели, прежде чем первую дозу анти-CD40-антитела вводят этому пациенту. Другими словами, лечение антителами может проводиться от приблизительно одной недели до приблизительно одного года, от приблизительно одной недели до приблизительно десяти месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно восьми месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно шести месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно четырех месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно двух месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно одного месяца, от приблизительно одной недели до приблизительно трех недель, от приблизительно одной недели до приблизительно двух недель или приблизительно одной недели после первого цикла химиотерапии.

В вариантах осуществления, в которых первый цикл химиотерапии проводят для пациента после первой дозы анти-CD40-антитела, первый цикл химиотерапии может проводиться от приблизительно одной недели до приблизительно одного года, от приблизительно одной недели до приблизительно десяти месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно восьми месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно шести месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно четырех месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно двух месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно одного месяца, от приблизительно одной недели до приблизительно трех недель, от приблизительно одной недели до приблизительно двух недель или приблизительно одной недели, после введения первой дозы анти-CD40-антитела этому пациенту. Другими словами, лечение антителами может проводиться от приблизительно одной недели до приблизительно одного года, от приблизительно одной недели до приблизительно десяти месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно восьми месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно шести месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно четырех месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно двух месяцев, от приблизительно одной недели до приблизительно одного месяца, от приблизительно одной недели до приблизительно трех недель, от приблизительно одной недели до приблизительно двух недель или приблизительно одной недели, перед первым циклом химиотерапии.

Когда эти терапевтические вещества вводят одновременно, они могут вводиться в виде единой фармацевтической композиции или в виде двух или более отдельных фармацевтических композиций. Когда эти терапевтические вещества не вводят одновременно, их вводят в виде двух или более отдельных фармацевтических композиций.

При использовании двух или более фармацевтических композиций, может быть использована любая подходящая комбинация терапевтического антитела и химиотерапевтического вещества. Например, одна фармацевтическая композиция может содержать терапевтическое антитело, тогда как другая фармацевтическая композиция (другие фармацевтические композиции) содержит химиотерапевтические агенты циклофосфамид, доксорубицин, винкристин и преднизон. Альтернативно одна фармацевтическая композиция может содержать терапевтическое антитело и один или несколько химиотерапевтических агентов, тогда как другая фармацевтическая композиция (другие фармацевтические композиции) содержит другой химиотерапевтический агент (другие фармацевтические агенты). В вариантах осуществления, в которых фармацевтическая композиция содержит терапевтическое антитело и один или несколько химиотерапевтических агентов, эта фармацевтическая композиция может быть получена способом, предусматривающим стадии (i) получения композиции лиофилизированного анти-CD40-антитела, (ii) получения композиции, содержащей один или несколько химиотерапевтических агентов в стерильном разбавителе и (iii) воссоздания композиции лиофилизированного антитела с использованием композиции, содержащей один или несколько из этих химиотерапевтических агентов.

Таким образом, изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию (i) одного или нескольких из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона, (ii) анти-CD40-антитела и (iii) фармацевтически приемлемого носителя или эксципиента.

Изобретение обеспечивает также применение (i) одного или нескольких из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона и (ii) анти-CD40-антитела в производстве лекарственного средства для лечения пациента-человека от заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток. В других вариантах осуществления изобретение обеспечивает применение (i) одного или нескольких из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона и (ii) анти-CD40-антитела в производстве по меньшей мере двух отдельных лекарственных средств (двух, трех, четырех или пяти лекарственных средств) для лечения пациента-человека от заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток, комбинированной терапией. Циклофосфамид, винкристин, преднизон, доксорубицин и анти-CD40-антитело могут быть использованы в производстве по меньшей мере трех, по меньшей мере четырех или пяти раздельных лекарственных средств.

Изобретение обеспечивает также набор для лечения пациента-человека от заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток, причем указанный набор содержит (i) один или несколько из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона и (ii) анти-CD40-антитело. Этот набор может дополнительно содержать одно или несколько устройств для введения комбинированного терапевтического средства пациенту-человеку, таких как одна или несколько стерильных игл и один или несколько стерильных шприцов, (ii) стерильный контейнер (например, стеклянный флакон, пластиковый флакон или пластиковый мешок) и отстойник, (iii) стерильная трубка с регулировочным зажимом и (iv) катетер.

Изобретение обеспечивает способ лечения пациента-человека от заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток, включающий введение указанному пациенту одного или нескольких из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона, при этом пациенту предварительно вводили анти-CD40-антитело. Настоящее изобретение обеспечивает также способ лечения пациента-человека от заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток, включающий введение указанному пациенту анти-CD40-антитела, при этом пациенту предварительно вводили один или несколько из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона.

Изобретение обеспечивает дополнительно применение анти-CD40-антитела в производстве лекарственного средства для лечения пациента-человека от заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток, причем указанному пациенту-человеку предварительно вводили один или несколько из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона. Изобретение обеспечивает также применение одного или нескольких из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона в производстве лекарственного средства для лечения пациента-человека от заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток, причем указанному пациенту-человеку предварительно вводили анти-CD40-антитело.

Под терминами "предварительно вводили" или "предварительное введение" имеют в виду, что субъект получал одну или несколько доз первого лекарственного средства перед получением второго лекарственного средства. Субъект, которому "предварительно вводили" или которому обеспечивали "предварительное введение", включает пациентов, которых лечили первым терапевтическим средством в пределах 2 лет, в пределах 18 месяцев, в пределах 1 года, в пределах 6 месяцев, в пределах 2 месяцев, в пределах 6 недель, в пределах 1 месяца, в пределах 4 недель, в пределах 3 недель, в пределах 2 недель, в пределах 1 недели, в пределах 6 дней, в пределах 5 дней, в пределах 4 дней, в пределах 3 дней, в пределах 2 дней или в пределах 1 дня перед началом лечения вторым терапевтическим средством. В комбинированных способах по настоящему изобретению термины "предварительно вводили" или "предварительное введение" относятся также к пациентам, которых лечили анти-CD40-антителом в пределах 2 лет, в пределах 18 месяцев, в пределах 1 года, в пределах 6 месяцев, в пределах 2 месяцев, в пределах 6 недель, в пределах 1 месяца, в пределах 4 недель, в пределах 3 недель, в пределах 2 недель, в пределах 1 недели, в пределах 6 дней, в пределах 5 дней, в пределах 4 дней, в пределах 3 дней, в пределах 2 дней или в пределах 1 дня перед началом лечения с использованием химиотерапии. В комбинированных способах по настоящему изобретению термины "предварительно вводили" или "предварительное введение" относятся также к пациентам, которых лечили химиотерапией в пределах 2 лет, в пределах 18 месяцев, в пределах 1 года, в пределах 6 месяцев, в пределах 2 месяцев, в пределах 6 недель, в пределах 1 месяца, в пределах 4 недель, в пределах 3 недель, в пределах 2 недель, в пределах 1 недели, в пределах 6 дней, в пределах 5 дней, в пределах 4 дней, в пределах 3 дней, в пределах 2 дней или в пределах 1 дня перед началом лечения анти-CD40-антителом.

Пациентов, которым предварительно вводили анти-CD40-антитело, можно отличать от других пациентов, например, с использованием медицинских карт пациентов или проведением подходящего теста (подходящих тестов) in vitro. Пациентов, которым предварительно вводили один или несколько из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона, можно отличать от других пациентов, например, с использованием медицинских карт пациентов или проведением подходящего теста (подходящих тестов) in vitro.

Изобретение обеспечивает также применение анти-CD40-антитела в производстве лекарственного средства для лечения пациента-человека от заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток, причем лекарственное средство вводят перед циклофосфамидом, доксорубицином, винкристином или преднизоном. В альтернативных вариантах осуществления изобретение обеспечивает также применение анти-CD40-антитела в производстве лекарственного средства для лечения пациента-человека от заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток, причем лекарственное средство вводят после циклофосфамида, доксорубицина, винкристина или преднизона. Изобретение обеспечивает также применение одного или нескольких из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона в производстве лекарственного средства для лечения пациента-человека от заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток, причем лекарственное средство вводят перед анти-CD40-антителом. В альтернативных вариантах осуществления изобретение обеспечивает применение одного или нескольких из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона в производстве лекарственного средства для лечения пациента-человека от заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток, причем лекарственное средство вводят после анти-CD40-антитела.

Изобретение обеспечивает также анти-CD40-антитело и один или несколько из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении пациента-человека от заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток, комбинированной терапией. Изобретение обеспечивает также применение анти-CD40-антитела в производстве лекарственного средства для одновременного или последовательного применения в комбинации с одним или несколькими из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона для лечения пациента-человека от заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток. Изобретение обеспечивает применение одного или нескольких из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона в производстве лекарственного средства для одновременного или последовательного применения в комбинации с анти-CD40-антителом для лечения пациента-человека от заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток.

Способы по изобретению могут предусматривать введение дозы анти-CD40-антитела в любой момент во время первого или последующего цикла химиотерапии. Альтернативно способы по изобретению могут предусматривать введение дозы анти-CD40-антитела между циклами химиотерапии.

Как отмечалось выше, авторы изобретения нашли, что комбинированная терапия анти-CD40-антителом и CHOP может обеспечивать синергическое терапевтическое действие. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления способов, применений, композиций и наборов, описанных в настоящем документе, комбинированная терапия обеспечивает синергическое улучшение терапевтической эффективности относительно индивидуальных терапевтических агентов при введении раздельно. Термин "синергия" используется для описания комбинированного действия двух или более активных агентов, которое является более высоким, чем сумма индивидуальных действий каждого соответствующего активного агента. Таким образом, если объединенное действие двух или более агентов приводит к "синергическому ингибированию" активности или процесса, например, роста опухоли, предполагается, что это ингибирование активности или процесса является более высоким, чем сумма ингибирующих действий каждого соответствующего активного агента. Таким образом, термин "синергическое терапевтическое действие" относится к терапевтическому действию, наблюдаемому с комбинацией двух или более терапий, где это терапевтическое действие (измеренное по любому из ряда параметров, например, задержке роста опухоли, как в примере 1 в данном описании) является более высоким, чем сумма индивидуальных терапевтических действий, наблюдаемых с соответствующими индивидуальными терапиями.

Как отмечалось выше, авторы изобретения считают, что эта неожиданно сильная терапевтическая эффективность, обеспечиваемая комбинированной терапией по изобретению, обусловлена способностью анти-CD40-антител сенсибилизировать В-клетки к цитотоксичности CHOP посредством подавления активации NF-κB и/или ингибированием CD40L-индуцированной экспрессии молекул адгезии (см. примеры 2-4 данного описания). Приведенные примеры демонстрируют, что передача сигнала через CD40 может способствовать развитию резистентности В-клеток к цитотоксичности CHOP, и что эта устойчивость может предотвращаться или уменьшаться использованием антагонистического анти-CD40-антитела (такого как HCD122) с уменьшением передачи сигнала CD40. Приведенные примеры дополнительно демонстрируют, что экспрессия молекул адгезии клеточной поверхности на В-клетках, индуцируемая передачей сигнала CD40, может способствовать развитию резистентности В-клеток к цитотоксичности CHOP, позволяющей В-клеткам агрегироваться и взаимодействовать с их микроокружением. Приведенные здесь примеры предполагают, что экспрессия молекул адгезии клеточной поверхности на В-клетках может быть предотвращена или уменьшена с использованием анти-CD40-антитела (такого как HCD122).

Таким образом, изобретение обеспечивает применение анти-CD40-антитела для предотвращения или уменьшения резистентности к цитотоксичности CHOP в неопластических В-клетках человека (т.е. для сенсибилизации неопластических В-клеток к цитотоксичности CHOP). Изобретение обеспечивает также способ предотвращения или уменьшения резистентности к цитотоксичности CHOP в неопластических В-клетках человека (т.е. сенсибилизации неопластических В-клеток к цитотоксичности CHOP), предусматривающий стадию контактирования in vitro одной или нескольких неопластических В-клеток человека с анти-CD40-антителом.

Кроме того, изобретение обеспечивает способ предотвращения или уменьшения резистентности В-клеток к цитотоксичности CHOP в пациенте-человеке, предусматривающий стадию введения анти-CD40-антитела этому пациенту. Изобретение обеспечивает также способ лечения пациента-человека от заболевания или состояния, ассоциированного с ростом неопластических В-клеток, причем указанный способ предусматривает стадию уменьшения резистентности В-клеток к цитотоксичности CHOP в указанном пациенте (т.е. сенсибилизации неопластических В-клеток этого пациента к цитотоксичности CHOP) введением анти-CD40-антитела пациенту.

Изобретение обеспечивает также анти-CD40-антитело для предотвращения или уменьшения резистентности В-клеток к цитотоксичности CHOP в неопластических В-клетках человека in vitro (т.е. для сенсибилизации неопластических В-клеток этого пациента к цитотоксичности CHOP) или в пациенте-человеке in vivo (т.е. сенсибилизации неопластических В-клеток пациента к цитотоксичности CHOP). Изобретение обеспечивает также применение анти-CD40-человека в производстве лекарственного средства для предотвращения или уменьшения резистентности В-клеток к цитотоксичности CHOP в пациенте-человеке (т.е. сенсибилизации неопластических В-клеток пациента к цитотоксичности CHOP).

Предпочтительно анти-CD40-антитело, используемое в этих экспериментах, подавляет активацию NF-κB. В частности, антитело может подавлять активацию NF-κB в В-клетках, которая индуцируется передачей сигнала CD40 и которая способствует развитию резистентности В-клеток к цитотоксичности CHOP.

Предпочтительно анти-CD40-антитело, используемое в этих экспериментах, является антителом, которое ингибирует экспрессию одной или нескольких молекул адгезии клеточной поверхности на В-клетках. В частности, это антитело может ингибировать экспрессию одной или нескольких молекул адгезии клеточной поверхности на В-клетках, которая индуцируется передачей сигнала CD40 и которая способствует развитию резистентности В-клеток к цитотоксичности CHOP. В некоторых вариантах осуществления анти-CD40-антитело ингибирует индуцированную CD40-L экспрессию одного или нескольких из CD54, CD80, CD86 и CD95 (или двух или более, трех или более или всех четырех из CD54, CD80, CD86 и CD95).

Таким образом, композиции, применения и наборы по изобретению могут использовать анти-CD40-антитело, которое способно подавлять активацию NF-κB и/или которое способно ингибировать экспрессию одной или нескольких молекул адгезии клеточной поверхности на В-клетках.

Суммирование стандартных способов и процедур, которые могут быть использованы для применения изобретения, приведены ниже. Должно быть понятно, что настоящее изобретение не ограничивается описанными конкретными методологией, протоколами, клеточными линиями, векторами и реагентами. Должно быть также понятно, что используемая здесь терминология является терминологией только для цели описания конкретных вариантов осуществления, и не предполагается, что эта терминология должна ограничивать объем настоящего изобретения. Объем изобретения ограничивается только прилагаемой формулой изобретения.

В данном описании используются стандартные аббревиатуры для нуклеотидов и аминокислот. Применение на практике настоящего изобретения будет использовать, если нет других указаний, общепринятые способы молекулярной биологии, микробиологии, технологии рекомбинантных ДНК и иммунологии, которые находятся в рамках квалификации специалистов, работающих в данной области. Такие способы полностью описаны в литературе.

Изобретение включает применение анти-CD40-антител для лечения пациентов, имеющих заболевания или состояния, ассоциированные с ростом неопластических В-клеток. Под терминами "CD40", "CD40-антиген" или "CD40-рецептор" имеется в виду трансмембранный гликопротеин 50-55 кДа семейства рецепторов фактора некроза опухолей (TNF) (см., например, патенты США №№ 5674492 и 4708871; Stamenkovic et al. (1989) EMBO 8:1403; Clark (1990) Tissue Antigens 36:33; Barclay et al. (1997) The Leucocyte Antigen Facts Book (2d ed.; Academic Press, San Diego)). Были идентифицированы две изоформы CD40 человека, кодируемые вариантами альтернативно сплайсированных транскриптов этого гена. Первая изоформа (также известная как "длинная изоформа" или "изоформа 1") экспрессируется в виде состоящего из 277 аминокислот полипептида-предшественника (SEQ ID NO:9; впервые сообщенного в виде GenBank Accession № CAA43045, и идентифицированного как изоформа 1 в GenBank Accession № NP_001241), кодируемого SEQ ID NO:8 (см. GenBank Accession №№ X60592 и NM_001250), который имеет сигнальную последовательность, представленную первыми 19 остатками. Вторая изоформа (также известная как "короткая изоформа" или "изоформа 2") экспрессируется в виде состоящего из 203 аминокислот полипептида-предшественника (SEQ ID NO:7; GenBank Accession № NP_690593), кодируемого SEQ ID NO:6 (GenBank Accession № NM_152854), который также имеет сигнальную последовательность, представленную первыми 19 остатками. Полипептиды-предшественники этих двух изоформ CD40 человека имеют общие первые 165 остатков (т.е. остатки 1-165 SEQ ID NO:7 и SEQ ID NO:9). Полипептид-предшественник короткой изоформы (показанной в SEQ ID NO:7) кодируется вариантом транскрипта (SEQ ID NO:6), который лишен кодирующего сегмента, что приводит к смещению рамки трансляции; полученная изоформа CD40 содержит более короткий С-конец (остатки 166-203 SEQ ID NO:7), отличающийся от С-конца длинной изоформы CD40 (C-конца, показанного в остатках 166-277 SEQ ID NO:9). Для целей данного изобретения термин "CD40" или "CD40-антиген", "антиген CD40 клеточной поверхности" или "CD40-рецептор" включает в себя как короткую, так и длинную изоформы CD40.

Под термином "CD40-экспрессирующие клетки" здесь имеют в виду любые нормальные или злокачественные клетки, которые экспрессируют детектируемые уровни CD40-антигена. Способы детектирования CD40-антигена хорошо известны в данной области и включают, но не ограничиваются ими, ПЦР-способы, иммуногистохимию, проточную цитометрию, Вестерн-блоттинг, ELISA и т.п. Эти способы позволяют детектировать мРНК CD40, CD40-антиген и CD40-антиген клеточной поверхности. Предпочтительно CD40-экспрессирующие клетки являются клетками, которые экспрессируют детектируемые уровни CD40-антигена клеточной поверхности.

Под терминами "CD40-лиганд" или "CD40L" имеют в виду трансмембранный белок 32-33 кДа, который также существует в двух меньших биологически активных растворимых формах, 18 кДа и 31 кДа, соответственно (Graf et al. (1995) Eur. J. Immunol. 25:1749-1754; Mazzei et al. (1995) J. Biol. Chem. 270:7025-7028; Pietravalle et al. (1996) J. Biol. Chem. 271:5965-5967). CD40L человека известен также как CD154 или gp39.

Под термином "пациент-человек" имеют в виду человека, который поражен любым заболеванием или состоянием, ассоциированным с ростом неопластических В-клеток или имеет риск развития или рецидива этого заболевания или состояния.

Под термином "заболевание или состояние, ассоциированное с ростом неопластических В-клеток" имеют в виду любое заболевание или состояние (в том числе предраковые состояния), включающее неконтролируемый рост клеток В-клеточного направления дифференцировки. Такие заболевания и состояния включают, но не ограничиваются ими, острый лимфобластный лейкоз (ALL), острый миелогенный лейкоз (AML), хронический миелогенный лейкоз (CML), хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), пролимфоцитарный лейкоз (PLL), мелкоклеточный лимфоцитарный лейкоз (SLL), диффузный мелкоклеточный лимфоцитарный лейкоз (DSLL), диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому (DLBCL), злокачественный гистиоцитарный ретикулоэндотелиоз, неходжкинские лимфомы, болезнь Ходжкина, индуцированные вирусом Эпштейна-Барра (EBV) лимфомы, миеломы, такие как множественная миелома, макроглобулинемию Вальденстрема, болезнь тяжелых цепей, связанную со слизистой оболочкой лимфому лимфоидной ткани, моноцитоидную В-клеточную лимфому, селезеночную лимфому, лимфогрануломатоз, внутрисосудистый лимфоматоз, иммунобластные лимфомы, связанные со СПИДом лимфомы и т.п.

Способы по изобретению находят применение в лечении субъектов, имеющих неходжкинские лимфомы, связанные с аномальными пролиферацией или накоплением В-клеток. Для целей данного изобретения такие лимфомы будут называться в соответствии со схемой классификации (Working Formulation classification scheme), т.е. эти В-клеточные лимфомы будут классифицироваться как лимфомы низкой степени, промежуточной степени и высокой степени (см. "The Non-Hodgkin's Lymphoma Pathologic Classification Project", Cancer 49(1982):2112-2135). Таким образом, В-клеточные лимфомы низкой степени включают мелкоклеточные лимфоцитарные, фолликулярные мелкоклеточные дифференцированные и фолликулярные смешанно-клеточные дифференцированные и крупноклеточные лимфомы; лимфомы промежуточной степени включают фолликулярные крупноклеточные, диффузные мелкоклеточные дифференцированные, диффузные смешанные мелкоклеточные и крупноклеточные и диффузные крупноклеточные лимфомы; и лимфомы высокой степени включают крупноклеточные иммунобластные, лимфобластные и мелкоклеточные недифференцированные лимфомы типа Беркитта и не-Беркитта. Способы изобретения могут быть использованы для лечения В-клеточных лимфом низкой, промежуточной и высокой степени.

Способы по изобретению применимы в терапевтическом лечении В-клеточных лимфом, которые классифицируются в соответствии с системой классификации Revised European and American Lymphoma Classification (REAL). Такие В-клеточные лимфомы включают, но не ограничиваются ими, лимфомы, классифицируемые как В-клеточные неоплазмы-предшественники, такие как В-лимфобластные лейкоз/лимфома; периферические B-клеточные неоплазмы, включающие B-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз/мелкоклеточную лейкоцитарную лимфому, лимфоплазмацитоидную лимфому/иммуноцитому, лимфому клеток мантии (коры головного мозга) (MCL), фолликулярную лимфому (в том числе диффузные мелкоклеточные, диффузные смешанные мелкоклеточные и крупноклеточные и диффузные крупноклеточные лимфомы), В-клеточную лимфому маргинальной зоны (в том числе внеузловые (нефолликулярные), нодулярные и селезеночные типы, например, внеузловую (нефолликулярную) В-клеточную лимфому маргинальной зоны ассоциированной со слизистой оболочкой ткани), плазмацитому/миелому, диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому подтипа первичной медиастинальной (тимусовой) лимфомы, лимфому Беркитта и подобную лимфоме Беркитта В-клеточную лимфому высокой степени; и неклассифицируемые В-клеточные лимфомы низкой степени или высокой степени.

В способах по изобретению комбинированную терапию используют для обеспечения положительной терапевтической реакции в отношении заболевания или состояния. Под "положительной терапевтической реакцией" имеют в виду улучшение в этом заболевании или состоянии в результате терапевтической активности комбинированной терапии. То есть, могут наблюдаться антипролиферативное действие, предотвращение дополнительного разрастания опухоли, уменьшение размера опухоли, уменьшение количества неопластических клеток и/или уменьшение одного или нескольких симптомов, связанных с CD40-экспрессирующими клетками. Так, например, положительной терапевтической реакцией можно было бы назвать одно или несколько следующих изменений в заболевании: (1) уменьшение размера опухоли; (2) уменьшение количества неопластических клеток; (3) увеличение гибели неопластических клеток; (4) ингибирование выживания неопластических клеток; (4) ингибирование (т.е. замедление до некоторой степени, предпочтительно остановка) роста опухоли; (5) ингибирование (т.е. замедление до некоторой степени, предпочтительно остановка) инфильтрации неопластических клеток в периферические органы; (6) ингибирование (т.е. замедление до некоторой степени, предпочтительно остановка) метастазирования опухоли; (7) предотвращение дополнительных разрастаний опухоли; (8) увеличенная скорость выживания пациентов; и (9) некоторое ослабление одного или нескольких симптомов, ассоциированных с этим заболеванием или состоянием.

Положительные терапевтические реакции в любом конкретном заболевании или состоянии могут быть определены стандартизованными критериями реакции, специфическими в отношении заболевания или состояния. Реакция опухоли может оцениваться в отношении изменений в морфологии опухоли (например, отягощенности опухолью (общей массе опухолевой ткани в организме), размере опухоли и т.п.) с использованием способов скрининга, таких как сканирование магнитно-резонансного изображения (MRI), x-радиографическая томография, компьютерно-томографическое (CT) сканирование, сканирование кости, эндоскопия и взятие проб биопсии опухоли, включающее костно-мозговую аспирацию (BMA) и счет опухолевых клеток в кровотоке. Кроме этих положительных терапевтических реакций, субъект, подвергающийся терапии, может испытывать благоприятное действие улучшения в симптомах, ассоциированных с заболеванием. Так, что касается В-клеточных опухолей, субъект может испытывать уменьшение так называемых В-симптомов, т.е. ночной потливости, жара, потери массы и/или к