2491938 - Производное изоксазола для лечения рака

Производное изоксазола для лечения рака

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой применение этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрата, или сольвата для получения фармацевтической композиции, предназначенной для лечения рака мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, молочной железы, яичников, поджелудочной железы, желудка, желудочно-кишечного тракта, предстательной железы, головы и шеи и/или крови. Изобретение обеспечивает лечение ряда видов рака с использованием этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты. 5 н. и 1 з.п. ф-лы, 5 табл., 5 пр.

Реферат

Изобретение относится к применению этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты или его таутомера, или фармацевтически приемлемой соли, или гидрата, или сольвата для получения фармацевтических композиций, предназначенных для лечения рака, например, солидных опухолей, например, сарком, например, карцином мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, например, мезотелиомы плевры, например, немелкоклеточной, например, мелкоклеточной мезотелиомы, рака молочной железы, влагалища, яичников, поджелудочной железы, почки, желудка, желудочно-кишечного тракта, например, гастроинтестинальной стромальной опухоли, например, тонкой кишки, например, пищевода, например, жёлчного протока, рака предстательной железы, головы и шеи, брюшной полости, щитовидной железы, костной ткани, мозга, центральной нервной системы, например, глиобластомы, например, нейробластомы, и/или меланомы и/или рака крови, например, рака кроветворной системы, например, лейкоза, например, острого миелоидного лейкоза, например, хронического миелоидного лейкоза, например, хронического лимфолейкоза, например, острого лимфолейкоза, например, множественной миеломы, например, лимфом, и/или миелодиспластического синдрома, системного мастоцистоза, синдрома фон Гиппеля-Линдау, мультицентрической болезни Кастлемана и/или псориаза, к применению этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты или его таутомера, или фармацевтически приемлемой соли, или гидрата, или сольвата для лечения рака, например, солидных опухолей, например, сарком, например, карцином мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, например, мезотелиомы плевры, например, немелкоклеточной, например, мелкоклеточной мезотелиомы, рака молочной железы, влагалища, яичников, поджелудочной железы, почки, желудка, желудочно-кишечного тракта, например, гастроинтестинальной стромальной опухоли, например, тонкой кишки, например, пищевода, например, жёлчного протока, рака предстательной железы, головы и шеи, брюшной полости, щитовидной железы, костной ткани, мозга, центральной нервной системы, например, глиобластомы, например, нейробластомы, и/или меланомы и/или рака крови, например, рака кроветворной системы, например, лейкоза, например, острого миелоидного лейкоза, например, хронического миелоидного лейкоза, например, хронического лимфолейкоза, например, острого лимфолейкоза, например, множественной миеломы, например, лимфом, и/или миелодиспластического синдрома, системного мастоцистоза, синдрома фон Гиппеля-Линдау, мультицентрической болезни Кастлемана и/или псориаза, и к способу лечения теплокровных животных, включая человека, страдающих от рака, например, такого как солидные опухоли, например, саркома, например, карцинома мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, например, мезотелиома плевры, например, немелкоклеточная, например, мелкоклеточная мезотелиома, рак молочной железы, влагалища, яичников, поджелудочной железы, почки, желудка, желудочно-кишечного тракта, например, гастроинтестинальная стромальная опухоль, например, тонкой кишки, например, пищевода, например, жёлчного протока, рака предстательной железы, головы и шеи, брюшной полости, щитовидной железы, костной ткани, мозга, центральной нервной системы, например, глиобластома, например, нейробластома и/или меланома и/или рак крови, например, рак кроветворной системы, например, лейкоз, например, острый миелоидный лейкоз, например, хронический миелоидный лейкоз, например, хронический лимфолейкоз, например, острый лимфолейкоз, например, множественная миелома, например, лимфома, и/или миелодиспластический синдром, системный мастоцистоз, синдром фон Гиппеля-Линдау, мультицентрическая болезнь Кастлемана и/или псориаз, и указанный способ заключается во введении животному, нуждающемся в таком лечении, эффективной дозы этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты или его таутомера, или фармацевтически приемлемой соли, или гидрата, или сольвата.

Лечение рака является основной проблемой, например, лечение солидных опухолей, например, сарком, например, карцином мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, например, мезотелиомы плевры, например, немелкоклеточной, например, мелкоклеточной мезотелиомы, рака молочной железы, влагалища, яичников, поджелудочной железы, почки, желудка, желудочно-кишечного тракта, например, гастроинтестинальной стромальной опухоли, например, тонкой кишки, например, пищевода, например, жёлчного протока, рака предстательной железы, головы и шеи, брюшной полости, щитовидной железы, костной ткани, мозга, центральной нервной системы, например, глиобластомы, например, нейробластомы, и/или меланомы и/или рака крови, например, рака кроветворной системы, например, лейкоза, например, острого миелоидного лейкоза, например, хронического миелоидного лейкоза, например, хронического лимфолейкоза, например, острого лимфолейкоза, например, множественной миеломы, например, лимфом, и/или миелодиспластического синдрома, системного мастоцистоза, синдрома фон Гиппеля-Линдау, мультицентрической болезни Кастлемана и/или псориаза.

Белок температурного шока 90 (Hsp90) в последнее время считается новой противоопухолевой мишенью. Hsp90 является универсальным, широко распространённым (1-2% общего клеточного белка), жизненно важным белком, выполняющим функцию молекулярного шаперона, обеспечивающим устойчивость конформации, форму и функцию соответствующих белков. Ингибирование АТФ-азной активности белка Hsp90 нарушает взаимодействие с белками-клиентами Hsp90, что приводит к их деградации по убиквитин-протеосомному пути. Подсемейство белков-клиентов Hsp90, таких как Raf, AKT, CDK4 и семейство EGFR, включающее ErbB2, представляет собой группу онкогенных сигнальных молекул, играющих основную роль в росте, дифференциации и апоптозе клеток, процессах, которые играют важную роль для раковых клеток. Считается, что одновременная деградация множества онкобелков является причиной противоопулевого действия, наблюдаемого в присутствии ингибиторов Hsp90.

Семейство шаперонов Hsp90 состоит из четырех членов: Hsp90a и Hsp90p, локализованных в цитозоле, GRP94 в эндоплазматической сети, и TRAP1 в митохондриях (Csermely и др., 1998). Hsp90 является наиболее распространенным клеточным шапероном, составляющим 1-2% общего белка (Jakob и Buchner, 1994). Среди белков стресса Hsp90 является уникальным, т.к. он не требуется для биосинтеза большинства полипептидов (Nathan и др., 1997). Его клеточные мишени, называемые также белками-клиентами, являются конформационно лабильными передатчиками сигналов, играющими важную роль в контроле роста и выживании клеток, а также в развитии ткани (Pratt, Toft, 2003).

Шапероны Hsp90, которые характеризуются консервативным АТФ-связывающим сайтом в N-концевом домене (Chene, 2002), относятся к небольшому подсемейству АТФаз и известны как ДНК-гираза, Hsp90, гистидинкиназа и подсемейство MutL (GHKL) (Dutta и Inouye, 2000). Шапероновая (образование вторичной структуры белков) активность Hsp90 зависит от его АТФазной активности, которая снижается в очищенном ферменте. Однако было установлено, что АТФазная активность Hsp90 повышается при его связывании с белками, так называемыми ко-шаперонами (Kamal и др., 2003). Таким образом белки Hsp90 функционируют in vivo в качестве субъединиц крупных, динамичных белковых комплексов. Hsp90 важен для выживания эукариотических клеток и сверхэкспрессирован во многих опухолях.

Этиламид 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты является ингибитором Hsp90, его синтез описан, например, в заявке WO 2004/072051, пример 78, включенной в настоящее описание в качестве ссылки.

Неожиданно было установлено, что этиламид 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты или его таутомер, или фармацевтически приемлемую соль, или гидрат, или сольват можно использовать при лечении рака, например, солидных опухолей, например, сарком, например, карцином мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, например, мезотелиомы плевры, например, немелкоклеточной, например, мелкоклеточной мезотелиомы, рака молочной железы, влагалища, яичников, поджелудочной железы, почки, желудка, желудочно-кишечного тракта, например, гастроинтестинальной стромальной опухоли, например, тонкой кишки, например, пищевода, например, жёлчного протока, рака предстательной железы, головы и шеи, брюшной полости, щитовидной железы, костной ткани, мозга, центральной нервной системы, например, глиобластомы, например, нейробластомы, и/или меланомы и/или рака крови, например, рака кроветворной системы, например, лейкоза, например, острого миелоидного лейкоза, например, хронического миелоидного лейкоза, например, хронического лимфолейкоза, например, острого лимфолейкоза, например, множественной миеломы, например, лимфом, и/или миелодиспластического синдрома, системного мастоцистоза, синдрома фон Гиппеля-Линдау, мультицентрической болезни Кастлемана и/или псориаза.

В соответствии с вышеизложенным в настоящем изобретении предлагается применение этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты или его таутомера, или фармацевтически приемлемой соли, или гидрата, или сольвата для получения фармацевтических композиций, предназначенных для лечения рака, например, солидных опухолей, например, сарком, например, карцином мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, например, мезотелиомы плевры, например, немелкоклеточной, например, мелкоклеточной мезотелиомы, рака молочной железы, влагалища, яичников, поджелудочной железы, почки, желудка, желудочно-кишечного тракта, например, гастроинтестинальной стромальной опухоли, например, тонкой кишки, например, пищевода, например, жёлчного протока, рака предстательной железы, головы и шеи, брюшной полости, щитовидной железы, костной ткани, мозга, центральной нервной системы, например, глиобластомы, например, нейробластомы, и/или меланомы, и/или рака крови, например, рака кроветворной системы, например, лейкоза, например, острого миелоидного лейкоза, например, хронического миелоидного лейкоза, например, хронического лимфолейкоза, например, острого лимфолейкоза, например, множественной миеломы, например, лимфом, и/или миелодиспластического синдрома, системного мастоцистоза, синдрома фон Гиппеля-Линдау, мультицентрической болезни Кастлемана и/или псориаза.

В другом объекте настоящего изобретения предлагается применение этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты или его таутомера, или фармацевтически приемлемой соли, или гидрата, или сольвата для лечения рака, например, солидных опухолей, например, сарком, например, карцином мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, например, мезотелиомы плевры, например, немелкоклеточной, например, мелкоклеточной мезотелиомы, рака молочной железы, влагалища, яичников, поджелудочной железы, почки, желудка, желудочно-кишечного тракта, например, гастроинтестинальной стромальной опухоли, например, тонкой кишки, например, пищевода, например, жёлчного протока, рака предстательной железы, головы и шеи, брюшной полости, щитовидной железы, костной ткани, мозга, центральной нервной системы, например, глиобластомы, например, нейробластомы, и/или меланомы, и/или рака крови, например, рака кроветворной системы, например, лейкоза, например, острого миелоидного лейкоза, например, хронического миелоидного лейкоза, например, хронического лимфолейкоза, например, острого лимфолейкоза, например, множественной миеломы, например, лимфом, и/или миелодиспластического синдрома, системного мастоцистоза, синдрома фон Гиппеля-Линдау, мультицентрической болезни Кастлемана и/или псориаза.

В еще одном объекте настоящего изобретения предлагается этиламид 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты или его таутомер, или фармацевтически приемлемая соль или гидрат, или сольват для применения при лечении рака, например, солидных опухолей, например, сарком, например, карцином мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, например, мезотелиомы плевры, например, немелкоклеточной, например, мелкоклеточной мезотелиомы, рака молочной железы, влагалища, яичников, поджелудочной железы, почки, желудка, желудочно-кишечного тракта, например, гастроинтестинальной стромальной опухоли, например, тонкой кишки, например, пищевода, например, жёлчного протока, рака предстательной железы, головы и шеи, брюшной полости, щитовидной железы, костной ткани, мозга, центральной нервной системы, например, глиобластомы, например, нейробластомы, и/или меланомы, и/или рака крови, например, рака кроветворной системы, например, лейкоза, например, острого миелоидного лейкоза, например, хронического миелоидного лейкоза, например, хронического лимфолейкоза, например, острого лимфолейкоза, например, множественной миеломы, например, лимфом, и/или миелодиспластического синдрома, системного мастоцистоза, синдрома фон Гиппеля-Линдау, мультицентрической болезни Кастлемана и/или псориаза.

В другом объекте настоящего изобретения предлагается способ лечения человека, страдающего от рака, например, солидных опухолей, например, сарком, например, карцином мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, например, мезотелиомы плевры, например, немелкоклеточной, например, мелкоклеточной мезотелиомы, рака молочной железы, влагалища, яичников, поджелудочной железы, почки, желудка, желудочно-кишечного тракта, например, гастроинтестинальной стромальной опухоли, например, тонкой кишки, например, пищевода, например, жёлчного протока, рака предстательной железы, головы и шеи, брюшной полости, щитовидной железы, костной ткани, мозга, центральной нервной системы, например, глиобластомы, например, нейробластомы, и/или меланомы, и/или рака крови, например, рака кроветворной системы, например, лейкоза, например, острого миелоидного лейкоза, например, хронического миелоидного лейкоза, например, хронического лимфолейкоза, например, острого лимфолейкоза, например, множественной миеломы, например, лимфом, и/или миелодиспластического синдрома, системного мастоцистоза, синдрома фон Гиппеля-Линдау, мультицентрической болезни Кастлемана и/или псориаза, и указанный способ заключается во введении человеку, нуждающемуся в указанном лечении, дозы этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты или его таутомера, или фармацевтически приемлемой соли, или гидрата, или сольвата, эффективной при лечении рака, например, солидных опухолей, например, сарком, например, карцином мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, например, мезотелиомы плевры, например, немелкоклеточной, например, мелкоклеточной мезотелиомы, рака молочной железы, влагалища, яичников, поджелудочной железы, почки, желудка, желудочно-кишечного тракта, например, гастроинтестинальной стромальной опухоли, например, тонкой кишки, например, пищевода, например, жёлчного протока, рака предстательной железы, головы и шеи, брюшной полости, щитовидной железы, костной ткани, мозга, центральной нервной системы, например, глиобластомы, например, нейробластомы, и/или меланомы и/или рака крови, например, рака кроветворной системы, например, лейкоза, например, острого миелоидного лейкоза, например, хронического миелоидного лейкоза, например, хронического лимфолейкоза, например, острого лимфолейкоза, например, множественной миеломы, например, лимфом, и/или миелодиспластического синдрома, системного мастоцистоза, синдрома фон Гиппеля-Линдау, мультицентрической болезни Кастлемана и/или псориаза.

В еще одном объекте настоящего изобретения предлагается фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения рака, например, солидных опухолей, например, сарком, например, карцином мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, например, мезотелиомы плевры, например, немелкоклеточной, например, мелкоклеточной мезотелиомы, рака молочной железы, влагалища, яичников, поджелудочной железы, почки, желудка, желудочно-кишечного тракта, например, гастроинтестинальной стромальной опухоли, например, тонкой кишки, например, пищевода, например, жёлчного протока, рака предстательной железы, головы и шеи, брюшной полости, щитовидной железы, костной ткани, мозга, центральной нервной системы, например, глиобластомы, например, нейробластомы, и/или меланомы, и/или рака крови, например, рака кроветворной системы, например, лейкоза, например, острого миелоидного лейкоза, например, хронического миелоидного лейкоза, например, хронического лимфолейкоза, например, острого лимфолейкоза, например, множественной миеломы, например, лимфом, и/или миелодиспластического синдрома, системного мастоцистоза, синдрома фон Гиппеля-Линдау, мультицентрической болезни Кастлемана и/или псориаза, и указанная композиция включает этиламид 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты или его таутомер, или фармацевтически приемлемую соль, или гидрат, или сольват и по крайней мере один фармацевтически приемлемый носитель.

В зависимости от вида, возраста, индивидуального состояния, способа введения и клинической картины заболевания человеку можно вводить эффективные дозы, например, от 2 до 300 мг, предпочтительно от 50 до 160 мг этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты или его таутомера, или фармацевтически приемлемой соли, или гидрата, или сольвата один раз в неделю.

Кроме этого в настоящем изобретении предлагается способ введения этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты или его таутомера, или фармацевтически приемлемой соли, или гидрата, или сольвата, человеку, страдающему от рака, например, от солидных опухолей, например, сарком, например, карцином мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, например, мезотелиомы плевры, например, немелкоклеточной, например, мелкоклеточной мезотелиомы, рака молочной железы, влагалища, яичников, поджелудочной железы, почки, желудка, желудочно-кишечного тракта, например, гастроинтестинальной стромальной опухоли, например, тонкой кишки, например, пищевода, например, желчного протока, рака предстательной железы, головы и шеи, брюшной полости, щитовидной железы, костной ткани, мозга, центральной нервной системы, например, глиобластомы, например, нейробластомы, и/или меланомы и/или рака крови, например, рака кроветворной системы, например, лейкоза, например, острого миелоидного лейкоза, например, хронического миелоидного лейкоза, например, хронического лимфолейкоза, например, острого лимфолейкоза, например, множественной миеломы, например, лимфом, и/или миелодиспластического синдрома, системного мастоцистоза, синдрома фон Гиппеля-Линдау, мультицентрической болезни Кастлемана и/или псориаза, и указанный способ заключается во введении фармацевтически эффективного количества этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты или его таутомера, или фармацевтически приемлемой соли, или гидрата, или сольвата человеку приблизительно 1 раз в неделю или более часто.

Ниже описано настоящее изобретение только в качестве примера. Пример 1

Действие этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты (AUY922) на панель опухолевых клеточных линий in vitro.

Для изучения действия этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты использовали тридцать семь опухолевых клеточных линий (ВТ474, MDA-MB-361, MDA-MB-453, SKBr3, T47D, MCF7, MDA-MB-231, MDA-MB-468, SK-MEL-5, А375, MALME-3M, SK-MEL-28, WM266.4, RPMI8226, U266, BE, Colo205, НСТ116, НТ29, MAWI, RKO, U87MG, HN5, RPMI-8226, А549, MV522, NCI-H1299, NCI-Н460, 41М, А2780, CHI, NCI-N87, SKOV3, РС3, М07е, GIST882 и Baf3). Клеточные линии получали из американской коллекции типовых культур (American Type Culture Collection, АТСС). Указанные клеточные линии включают следующие 12 типов раковых или опухолевых клеток: рак молочной железы, меланома, множественная меланома, рак ободочной кишки, глиобластома, рак головы и шеи, лейкоз, рак легкого, рак яичников, рак предстательной железы, рак желудка и гастроинтестинальная стромальная опухоль (GIST). После деления клеток и замены среды клетки исходной культуры высевали на планшеты для культивирования клеток и до начала исследования выращивали их в течение приблизительно 18 ч для роста и прикрепления клеток. В первый день исследования этиламид 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты добавляли в среду в различных концентрациях до 10 мкМ. Клетки культивировали до 72 или 96 ч и пролиферацию клеток оценивали с использованием коммерческих наборов для анализа пролиферации клеток.

В таблице 1 приведены концентрации (нМ) этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты, при которых наблюдается ингибирование пролиферации на 50% (IC₅₀). Клетки подвергали действию этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты непрерывно в течение 72 или 96 ч и рост клеток оценивали с использованием коммерческих наборов на основе SRB, Alamar blue, метиленового синего или методов WST-1.

Таблица 1
Тип опухоли	Клеточная линия	IC₅₀ (нМ)
Рак молочной железы	ВТ474	2,8
MDA-MB-361	6
MDA-MB-453	3,9
SKBr3	2,3
T47D	2,6
MCF7	2,3
MDA-MB-231	7,7
MDA-MB-468	3,5
Меланома	SK-MEL-5	3
А375	3
MALME-3M	7,7
SK-MEL-28	8
WM266.4	6,2
Множественная меланома (ММ)	RPMI8226	36,7
U266	23,3
Рак ободочной кишки	BE	2,8
Colo205	6,2
НСТ116	16
НТ29	30
MAWI	50
RKO	3,1
Глиобластома	U87MG	6
Рак головы и шеи	HN5	8
Лейкоз	RPMI-8226	6,3
Рак легких	А549	11,7
MV522	8,1
NCI-H1299	5,7
NCI-H460	14
Рак яичников	41М	3
А2780	6,1
CH1	2,8
SKOV3	3,7
Рак предстательной железы	РС3	5

Рак желудка	NCI-N87	0,2
Гастроинтестинальная стромальная опухоль (GIST)	МO7е	10,6
GIST882	6,2
Baf3	22,4

Пример 2

Влияние этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты (AUY922) на панель клеток первичных опухолей человека in vitro

Противоопухолевую активность этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты оценивали in vitro с использованием 30 ксенотрансплантатов опухолей человека методом оценки клоногенности. В указанном эксперименте изучали способность этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты подавлять формирование трехмерных колоний клеток человека, полученных от больных раком. Колонии состоят из опухолевых клеток, характеризующихся свободным ростом клеток на полутвердой среде. Ксенотрансплантаты опухолей, которые никогда не культивировались в клеточной культуре в пластиковых чашках, выделяли из ткани голых мышей. Готовили суспензии опухолевых клеток и инкубировали их в 24-луночных планшетах со слоем мягкого агара. В указанных условиях в колонии избирательно разрастается особая субпопуляция клеток. Исследовали 6 различных концентраций вплоть до 10 мкМ этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты. Опухолевая тест-панель включает от 1 до 6 образцов 10 различных опухолей или рака человека различного типа, а именно, рак мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, немелкоклеточный рак легких (железистый, плоскоклеточный и крупноклеточный), мелкоклеточный рак легких, молочной железы, яичников, поджелудочной железы, меланомы и плевромезотелиома. Противоопухолевое действие характеризовали по подавлению образования колоний по сравнению с необработанными контролями. Концентрации, при которых наблюдается 50%-ное подавление образования колоний (IC₅₀), приведены в таблице 2. Более подробная информация о методе приведена в статьях (Burger и др., 2004, Fiebig и др., 2004, Smith и др., 2005).

В таблице 2 приведены концентрации (нМ) этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты, при которых наблюдается 50%-ное подавление роста колоний (IC₅₀). Клетки непрерывно инкубировали в присутствии этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты и регистрировали образование колоний.

Таблица 2
Тип опухоли	Модели опухолей	Гистология	IC50 (nM)
Рак мочевого пузыря	BXF 1218	Переходно-клеточная карцинома	27
BXF 1228	Переходно-клеточная карцинома	630
Рак ободочной кишки	CXF 1103	Аденокарцинома	13
CXF 158	Аденокарцинома	369
CXF 1729	Карцинома	467
CXF 1784	Карцинома	418
CXF 609	Аденокарцинома	55
Рак печени	LIXF 575	Печеночно-клеточный рак	34
Рак легких, немелкоклеточный	LXFA 297	Аденокарцинома	28
LXFA 526	Аденокарцинома	5
LXFA 629	Аденокарцинома	35
LXFA 983	Аденокарцинома	126
LXFE 1422	Плоскоклеточный рак	48
LXFL 1647	Крупноклеточная карцинома легких	34
Рак легких, мелкоклеточный	LXFS 615	Мелкоклеточная карцинома легких	30
LXFS 650	Мелкоклеточная карцинома легких	2
Рак молочной железы	MAXF 1162	Инвазивный протоковый рак	304
MAXF 1322	Папиллярная аденокарцинома	29
MAXF 1384	Аденокарцинома	209
MAXF 401	Папиллярная аденокарцинома	78
MAXF 583	Протоковый рак	333
Меланома	MEXF 1539	Меланома	3
MEXF 462	Амеланотическая меланома	24
MEXF 535	Амеланотическая меланома	43
MEXF 672	Амеланотическая меланома	18
MEXF 989	Амеланотическая меланома	2
Рак яичников	OVXF 1353	Аденокарцинома	26
OVXF 1544	Карцинома	53
Рак поджелудочнойжелезы	PAXF 1657	Аденокарцинома	39
Мезотелиома плевры	PXF 1118	Двухфазная мезотелиома плевры	223

Пример 3

Противоопухолевое действие этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты (AUY922) на модель рака молочной железы человека ВТ-474

Клетки линии ВТ-474, положительные в отношении рецептора эстрогена, сначала выделяли из карциномы протоков молочной железы человека, полученной из солидной опухоли инвазивного протокового рака молочной железы женщины в возрасте 60 лет (номер АТСС НТВ-20). Клетки выращивали в среде DMEM с высоким содержанием глюкозы (4,5 г/л) и содержащей 10% ЭТС, 200 мМ L-глутамин и 1% пируват натрия.

Для подготовки к инокуляции клеток каждой мыши подкожно имплантировали в верхнюю часть спины пеллет 17β-эстрадиола (25 мкг/сут, высвобождение в течение 90 сут) с использованием иглы для трокара. Клетки ВТ-474 (5×10⁶) вводили в 200 мкл матрицы базальной мембраны Matrigel/HBSS, 1:1 об./об. (BD Matrigel™). Инъекцию осуществляли в правый бок подкожно. Лечение препаратом AUY922 начинали, когда средний объем опухоли достигал приблизительно 100 мм. Рост опухоли регистрировали через равные промежутки времени. Размеры ксенотрансплантатов опухолей измеряли вручную штангенциркулем, а объем опухоли определяли по формуле W×L×H×7t/6, где ширина (W), высота (Н) и длина (L) обозначают три самых больших диаметра.

Результаты представлены в виде среднего значения ± стандартное отклонение. Результаты измерения опухолей анализировали методом ANOVA по критерию Дуннетта для апостериорного сравнения леченой (Л) группы и контрольной (К) группы. В качестве показателя эффективности при завершении эксперимента рассчитывали величину Л/К в % по формуле:

(Δобъема опухоли_{лечение}/Δобъема опухоли_контр.)×100,

где Δобъема опухоли обозначает среднее значение объема опухоли в день оценки опухоли минус среднее значение объема опухоли в начале эксперимента.

Противоопухолевое действие AUY922 оценивали с использованием модели ксенотрансплантата ВТ-474. В этом исследовании период лечения составлял 21 сут. Каждая группа состояла из восьми животных с опухолью. После завершения эксперимента размеры опухолей леченых групп сравнивали с размерами опухолей групп, которым вводили носитель, и эффективность выражали в виде соотношения Л/К в %. Статистически значимое уменьшение размеров опухоли наблюдали при введении препарата AUY922 один раз в неделю в дозе 17-25 мг/кг (таблица 3).

Таблица 3
Влияние AUY922 на рост ксенотрансплантата ВТ-474
Соединение	Доза, курс лечения, способ введения	Л/К (%)	ΔОбъема опухоли (мм³)
Контроль, носитель	10 мл/кг, раз в неделю, внутривенно	100	528±123
AUY922	8,3 мг/кг, раз в неделю, внутривенно	43	229±73
AUY922	17 мг/кг, раз в неделю, внутривенно	9	46±27*
AUY922	25 мг/кг, раз в неделю, внутривенно	3	15±23*
*Р<0,05, однофакторный анализ ANOVA по критерию Дуннетта для апостериорного сравнения.

Пример 4

Трансплантируемую опухоль молочной железы крысы BN472 последовательно прививали в виде фрагментов самкам изогенных крыс линии Brown Norway. Инъекции производили ортотопическим методом в жировое тело молочной железы. Лечение препаратом AUY922 начинали, когда средний объем опухоли достигал приблизительно 100 мм³. Рост опухоли измеряли через равные промежутки времени. Размеры ксенотрансплантатов опухолей измеряли вручную штангенциркулем, а объем опухоли определяли о формуле W×L²×π/6, где ширина (W), высота (Н) означают два самых больших диаметра.

(Δобъема опухоли_{лечение}/Δобъема опухоли_контр)×100,

Противоопухолевое действие AUY922 оценивали с использованием модели ксенотрансплантата BN472. Каждая группа состояла из семи животных с опухолью. При завершении эксперимента размеры опухолей леченых групп (Л) сравнивали с размерами опухолей групп, которым вводили носитель (К), и эффективность выражали в виде соотношения Л/К в %. Статистически значимое уменьшение размеров опухоли наблюдали при введении препарата AUY922 один раз в неделю в дозе 50 мг/кг (таблица 4).

Таблица 4
Влияние AUY922 на рост ксенотрансплантата BN472
Соединение	Доза, курс лечения, способ введения	Л/К (%)	ΔОбъема опухоли (мм³)
Контроль, носитель	2 мл/кг, раз в неделю, внутривенно	100	5569±1639
AUY922	25 мг/кг, раз в неделю, внутривенно	78	4357±1338
AUY922	50 мг/кг, раз в неделю, внутривенно	21	1148±152*
*Р<0,05, однофакторный анализ ANOVA по критерию Дуннетта для апостериорного сравнения.

Пример 5

Противоопухолевое действие этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты (AUY922) на модель рака поджелудочной железы крысы СА20948

Трансплантируемую опухоль поджелудочной железы крысы СА20948 последовательно прививали в виде клеточных гомогенатов самцам изогенных крыс линии Lewis. Инъекции осуществляли подкожно в правый бок. Лечение препаратом AUY922 начинали, когда средний объем опухоли достигал приблизительно 100 мм³. Рост опухоли регистрировали через равные промежутки времени. Размеры ксенотрансплантатов измеряли вручную штангенциркулем, а объем опухоли определяли о формуле W×L²π/6, где ширина (W), высота (Н) означают два самых больших диаметра.

Результаты представлены в виде среднего значения ± стандартное отклонение. Результаты измерения опухолей анализировали метода ANOVA по критерию Дуннетта для апостериорного сравнения леченой (Л) группы и контрольной (К) группы. В качестве показателя эффективности при завершении эксперимента рассчитывали величину Л/К в % по формуле:

(Δобъема опухоли_{лечение}/Δобъема опухоли_контр)×100,

Противоопухолевое действие AUY922 оценивали с использованием модели ксенотрансплантата СА20948. Каждая группа состояла из шести животных с опухолью. При завершении эксперимента размеры опухолей леченых групп сравнивали с размерами опухолей групп, которым вводили носитель, и эффективность выражали в виде соотношения Л/К в %. Статистически значимое уменьшение размеров опухоли наблюдали при введении препарата AUY922 один раз в неделю в дозе 50 и 75 мг/кг (таблица 5).

Таблица 5
Влияние AUY922 на рост ксенотрансплантата СА20948
Соединение	Доза, курс лечения, способ введения	Л/К (%)	ΔОбъема опухоли (мм )
Контроль, носитель	2 мл/кг, раз в неделю, внутривенно	100	23267±7810
AUY922	50 мг/кг, раз в неделю, внутривенно	30	7090±2553*
AUY922	75 мг/кг, раз в неделю, внутривенно	21	4796±1354*
*Р<0,05, однофакторный анализ ANOVA по критерию Дуннетта для апостериорного сравнения.

1. Применение этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрата, или сольвата для получения фармацевтической композиции, предназначенной для лечения рака мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, молочной железы, яичников, поджелудочной железы, желудка, желудочно-кишечного тракта, предстательной железы, головы и шеи и/или крови.

2. Применение этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрата, или сольвата для лечения рака мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, молочной железы, яичников, поджелудочной железы, желудка, желудочно-кишечного тракта, предстательной железы, головы и шеи и/или крови.

3. Способ лечения человека, страдающего от рака мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, молочной железы, яичников, поджелудочной железы, желудка, желудочно-кишечного тракта, предстательной железы, головы и шеи и/или крови, включающий введение указанному человеку, нуждающемуся в таком лечении, дозы этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)изоксазол-3-карбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрата, или сольвата, эффективной для лечения рака мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, молочной железы, яичников, поджелудочной железы, желудка, желудочно-кишечного тракта, предстательной железы, головы и шеи и/или крови.

4. Фармацевтическая композиция для лечения рака мочевого пузыря, ободочной кишки, печени, легкого, молочной железы, яичников, поджелудочной железы, желудка, желуд

Производное изоксазола для лечения рака

Патент 2491938