Гуманизированное антитело к амилоиду бета

Гуманизированное антитело к амилоиду бета

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящее изобретение относится к способам и композициям, предназначенным для диагностики и лечения амилоидоза, группы нарушений и патологий, ассоциированных с амилоидным белком, таких как болезнь Альцгеймера.

Амилоидоз представляет собой не отдельное заболевание, а скорее группу разнообразных прогрессирующих болезненных процессов, которые характеризуются внеклеточными отложениями в ткани воскообразного крахмалоподобного белка, называемого амилоидом, который накапливается в одном или нескольких органах или системах организма. После образования амилоидных отложений они начинают препятствовать нормальному функционированию органа или системы организма. Известно по меньшей мере 15 различных типов амилоидоза. Основными формами являются первичный амилоидоз, не имеющий известных предвестников (состояний-предшественников) заболевания, вторичный амилоидоз, сопровождающий определенное другое состояние, и наследственный амилоидоз.

Вторичный амилоидоз возникает у людей, страдающих хроническим инфекционным или воспалительным заболеванием, таким как туберкулез, бактериальная инфекция, которую называют семейной средиземноморской лихорадкой, костные инфекционные заболевания (остеомиелит), ревматоидный артрит, воспаление тонкого кишечника (гранулематозный илеит), болезнь Ходжкина и проказа.

Амилоидные отложения включают такой компонент, как амилоид Р (пентагональный) (АР), гликопротеин, родственный амилоиду Р сыворотки здорового индивидуума (SAP), и сульфатированные гликозаминогликаны (GAG), комплекс углеводов соединительной ткани. Фибриллы амилоидного белка, на долю которых приходится примерно 90% амилоидного материла, содержат один из нескольких различных типов белков. Эти белки обладают способностью складываться в фибриллы, имеющие так называемую «бета-складчатую» конформацию, уникальную конфигурацию белка, при которой сайты связывания становятся доступными для красителя конго красного, что приводит к уникальным особенностям окрашивания амилоидного белка.

Многие связанные с возрастом заболевания обусловлены или ассоциированы с амилоидоподобными белками и характеризуются, в частности, образованием внеклеточных отложений амилоида или амилоидоподобного материала, которые участвуют в патогенезе, а также в развитии заболевания. Такие заболевания включают (но не ограничиваясь только ими) неврологические нарушения, такие как болезнь Альцгеймера (AD), деменция, связанная с тельцами Леви, синдром Дауна, наследственная церебральная геморрагия с амилоидозом (голландского типа); комплекс деменции Гуама-Паркинсона. Другие заболевания, которые обусловлены или ассоциированы с амилоидоподобными белками, представляют собой прогрессирующий надъядерный паралич, рассеянный склероз; болезнь Крейцфельдта-Якоба, болезнь Паркинсона, связанная с ВИЧ деменция, ALS (амиотрофический боковой склероз), диабет взрослых; старческий сердечный амилоидоз; эндокринные опухоли и другие заболевания, включая дегенерацию желтого пятна.

Хотя патогенез этих заболеваний может быть различным, характерные для них отложения часто содержат многие сходные молекулярные компоненты. В значительной степени это может относиться к местной активации провоспалительных путей, приводя тем самым к конкурентному отложению компонентов активированного комплемента, реактантов острой фазы, иммуномодуляторов и других воспалительных медиаторов (McGeer и др., 1994).

Болезнь Альцгеймера (AD) представляет собой неврологическое нарушение, которое, как предполагается, вызывается прежде всего амилоидными бляшками, накоплением патологических отложений белков в головном мозге. Наиболее часто встречающийся тип амилоида, выявленный в головном мозге пораженных заболеванием индивидуумов, в основном состоит из Аβ-фибрилл. Научно доказано, что увеличение производства и накопления бета-амилоидного белка в бляшках приводит к гибели нервных клеток, что способствует возникновению и развитию болезни Альцгеймера. В свою очередь, утрата нервных клеток в стратегически важных областях головного мозга приводит к уменьшению уровня нейромедиаторов и ухудшению памяти. К белкам, которые в первую очередь ответственны за образование бляшки, относятся амилоидный белок-предшественник (АРР) и два пресенилина (пресенилин I и пресенилин II). Последовательное расщепление амилоидного белка-предшественника (АРР), который конститутивно экспрессируется и катаболизируется в большинстве клеток ферментами β- и γ-секретазами, приводит к высвобождению состоящего из 39-43 аминокислот Аβ-пептида. Расщепление АРР, по-видимому, приводит к повышению их способности к агрегации с образованием бляшек. Аβ(1-42)-фрагмент обладает прежде всего наиболее высокой способностью образовывать агрегаты благодаря наличию двух высокогидрофобных аминокислотных остатков на его С-конце. Поэтому предполагается, что прежде всего Аβ(1-42)-фрагмент участвует и ответствен за инициацию образования нейритной бляшки при AD и следовательно обладает высоким патологическим потенциалом. Таким образом, существует необходимость в создании агентов, предназначенных для предупреждения образования амилоидных бляшек и разрушения существующих при AD бляшек.

Симптомы болезни Альцгеймера проявляются медленно, и первым симптомом может быть лишь слабая забывчивость. На этой стадии индивидуумы могут забывать последние события, действия, имена знакомых людей или названия вещей и могут быть не в состоянии решить простые математические задачи. По мере прогрессирования болезни симптомы становятся более заметными и настолько серьезными, что вынуждают людей, пораженных AD, или членов их семьи прибегать к медицинской помощи. Симптомы, характерные для средней стадии AD, включают забывание того, как выполнять простые функции, такие как приводить себя в порядок, при этом возникают проблемы с речью, пониманием, чтением или письмом. Пациенты на поздней стадии AD могут становиться боязливыми или агрессивными, могут уходить далеко от дома и, в конце концов, нуждаться в полном уходе.

В настоящее время единственным надежным путем диагностики AD является идентификация бляшек и сплетений в ткани головного мозга при вскрытии после смерти индивидуума. Таким образом, пока индивидуум еще жив, доктора могут ставить только диагноз «возможна» или «вероятна» AD. С помощью современных методов лечащие врачи могут правильно диагностировать вплоть до 90 процентов случаев AD с помощью ряда средств, позволяющих диагностировать «возможную» AD. Лечащие врачи задают вопросы об общем состоянии здоровья индивидуума, медицинских проблемах, имевших место в прошлом, и истории каких-либо затруднений у индивидуума при выполнении повседневных действий. Поведенческие тесты на память, решение задач, внимание, счет и речь позволяют получать информацию о когнитивной дегенерации, а медицинские анализы, такие как анализы крови, мочи или спинномозговой жидкости, и сканирование головного мозга могут дать некоторую дополнительную информацию.

Борьба с AD заключается в осуществлении лечения, основанного на применении лекарственных средств, и лечения без использования лекарственных средств (немедикаментозного лечения). Лечение с целью изменения основного течения болезни (замедления или реверсирования развития) до сих пор были по большей части безуспешными. Было продемонстрировано, что лекарственные средства, которые восстанавливают дефицит (дефект) или недостаточную функцию химических медиаторов нервных клеток (нейромедиаторов), в частности, ингибиторы холинэстеразы (ChEI), такие как такрин и ривастигмин, позволяют улучшать симптомы. ChEI задерживают ферментативное расщепление нейромедиаторов, повышая тем самым количество химических медиаторов, пригодных для передачи нервных сигналов в головном мозге.

Для некоторых людей на ранней и средней стадиях заболевания такие лекарственные средства, как такрин (COGNEX^®, Моррис-Плейнс, шт.Нью-Джерси), донепезил (ARICEPT^®, Токио, Япония), ривастигмин (EXELON^®, Ист-Хановер, шт.Нью-Джерси) или галантамин (REMINYL^®, Нью-Брансуик, шт.Нью-Джерси), могут предупреждать ухудшение некоторых симптомов в течение ограниченного периода времени. Другое лекарственное средство, мемантин (NAMENDA^®, Нью-Йорк, шт.Нью-Йорк), разрешено для лечения AD от средней до тяжелой степени. Лекарственные средства могут воздействовать также на психиатрические проявления AD. Некоторые лекарственные средства могут помогать также контролировать поведенческие симптомы AD, такие как бессонница, возбуждение, блуждание, тревога и депрессия. Лечение этих симптомов часто делает жизнь пациентов более комфортной и облегчает обслуживающему персоналу уход за ними. К сожалению, несмотря на значительные успехи лечения, демонстрирующие, что этот класс агентов существенно превосходит по эффективности плацебо, болезнь продолжает прогрессировать, а влияние на умственные функции в среднем является очень ограниченным. Многие лекарственные средства, применяемые для лечения AD, такие, например, как ChEI, обладают также побочными действиями, которые включают желудочно-кишечные нарушения, токсичность для печени и потерю веса.

Еще одним заболеванием, обусловленным или ассоциированным с накоплением и отложением амилоидоподобного белка, является дегенерация желтого пятна.

Дегенерация желтого пятна представляет собой обычное заболевание глаза, которое вызывает деградацию желтого пятна, т.е. центральной области сетчатки (тонкий слой ткани на задней части глаза, откуда светочувствительные клетки посылают зрительные сигналы в головной мозг). Желтое пятно опосредует острое, четкое, «неискаженное» зрение. Повреждение желтого пятна приводит к развитию слепых пятен и затуманенному или нарушенному зрению. Связанная с возрастом дегенерация желтого пятна (AMD) является основной причиной ухудшения зрения в Соединенных Штатах, и у людей старше 65 лет она представляет собой основную причину медицински подтвержденной слепоты среди лиц кавказской расы. Примерно 1,8 миллионов американцев в возрасте 40 лет и старше имеют развитую AMD, а еще у 7,3 миллионов людей с умеренной AMD имеется значительный риск потери зрения. По оценкам правительства к 2020 г. 2,9 миллиона людей будут иметь развитую AMD. Жертвы AMD часто бывают удивлены и расстроены, когда узнают, как мало известно о причинах и методах лечения этого состояния слепоты.

Существует две формы дегенерации желтого пятна: сухая дегенерация желтого пятна и влажная дегенерация желтого пятна. Сухая форма, при которой клетки желтого пятна медленно начинают разрушаться, диагностирована в 85 процентов случаев дегенерации желтого пятна. Как правило, сухая AMD поражает оба глаза, хотя при этом один глаз может потерять зрение, а второй глаз может оставаться непораженным. Обычно ранними признаками сухой AMD являются друзы, которые представляют собой отложения желтого тела под сетчаткой. Риск возникновения развитой сухой AMD или влажной AMD повышается с увеличением количества или размера друз. Сухая AMD может прогрессировать и вызывать потерю зрения, не превращаясь во влажную форму заболевания; однако на ранней стадии сухая AMD может внезапно переходить во влажную форму.

Хотя на долю влажной формы приходится только 15 процентов случаев, она в 90 процентах приводит к слепоте, и ее рассматривают как развитую AMD (не существует ранней или промежуточной стадии влажной AMD). Влажной AMD всегда предшествует сухая форма заболевания. При прогрессировании сухой формы у некоторых людей начинается патологический рост кровеносных сосудов позади желтого пятна. Эти сосуды являются очень хрупкими, и из них просачивается жидкость и кровь (отсюда название «влажная» дегенерация желтого пятна), приводя к быстрому повреждению желтого пятна.

Сухая форма AMD первоначально часто вызывает слегка затуманенное зрение. Затем, прежде всего, центральная часть зрительного поля может становиться затуманенной, и эта область увеличивается в размерах по мере прогрессирования заболевания. Если поражен только один глаз, то симптомы могут оставаться незамеченными. В случае влажной AMD прямые линии могут представляться волнистыми и при этом может быстро наступать потеря центрального зрения.

Для установления диагноза дегенерации желтого пятна, как правило, проводят исследование расширенного глаза (зрачка), тест на остроту зрения и обследование задней стенки глаза с использованием процедуры, называемой фундоскопией, помогающей установлению диагноза AMD, и, если имеется предположение о наличии влажной AMD, то может быть проведена ангиография с использованием флуоресцеина. В настоящее время отсутствуют средства лечения, позволяющие предупреждать потерю зрения, если сухая AMD достигла развитой стадии. Однако применение определенной композиции, содержащей высокую дозу антиоксидантов и цинка, может замедлять или предупреждать прогрессирование промежуточной стадии AMD, приводящее к переходу в развитую стадию. Macugen^® (инъекция пегаптаниба натрия), лазерное фотокоагулирование и фотодинамическая терапия позволяют контролировать патологический рост кровеносных сосудов и кровоизлияние в желтом пятне, что является полезным для определенной группы людей с влажной AMD; однако зрение, если оно уже потеряно, не может быть восстановлено с помощью таких методов. Если зрение потеряно, то существуют средства для слабого зрения, которые могут помогать улучшать качество жизни.

Одним из самых ранних признаков связанной с возрастом дегенерации желтого пятна (AMD) является накопление внеклеточных отложений, известных как друзы, в области, находящейся между базальным слоем пигментированного эпителия сетчатки (RPE) и базальной оболочкой Бруха (ВМ). Результаты современных исследований, проведенных Anderson с соавторами, подтвердили, что друзы содержат амилоид-бета (Experimental Eye Research 78, 2004, cc.243-256).

В настоящее время проводятся исследования, в которых изучают факторы окружающей среды, генетические и связанные с питанием факторы, которые могут влиять на AMD. Исследуют также новые стратегии лечения, включая применение трансплантатов клеток сетчатки, лекарственных средств, которые должны предупреждать или замедлять прогрессирование заболевания, лучевой терапии, генной терапии, компьютерного чипа, имплантированного в сетчатку, который может помогать стимулировать зрение, и агентов, которые должны предупреждать рост новых кровеносных сосудов под желтым пятном.

Важным фактором, который необходимо принимать во внимание при разработке новых лекарственных средств, является простота их применения пациентами, для которых они предназначены. На долю вводимых оральным путем лекарственных средств, в частности, таблеток, капсул и мягких гелей, приходится 70% всех применяемых лекарственных форм из-за удобства их применения пациентами. Разработчики лекарственных средств признают, что пациенты предпочитают оральное применение по сравнению с инъекциями, или другими более инвазивными формами, применяемыми в медицине. Также предпочтительными являются препаративные формы, которые позволяют снижать количество доз (т.е. формы, применяемые один раз в день, или формы с пролонгированным высвобождением). Простота применения антибиотиков в виде оральных лекарственных форм приводит к тому, что соблюдение пациентом режима и схемы лечения в процессе лечения улучшается.

Таким образом, необходима разработка эффективных способов и композиций, предназначенных для предупреждения или направленных на борьбу с осложнениями, ассоциированными с амилоидозом, представляющим собой группу заболеваний и нарушений, ассоциированных с образованием амилоидных бляшек, включая вторичный амилоидоз и связанный с возрастом амилоидоз, включая (но не ограничиваясь только ими) неврологические заболевания, такие как болезнь Альцгеймера (AD), деменция, связанная с тельцами Леви, синдром Дауна, наследственная церебральная геморрагия с амилоидозом (голландского типа); комплекс деменции Гуама-Паркинсона, а также другие заболевания, которые обусловлены или ассоциированы с амилоидоподобными белками, такие как прогрессирующий надъядерный паралич, рассеянный склероз; болезнь Крейцфельдта-Якоба, болезнь Паркинсона, связанная с ВИЧ деменция, ALS (амиотрофический боковой склероз), диабет взрослых; старческий сердечный амилоидоз; эндокринные опухоли и другие заболевания, включая дегенерацию желтого пятна. В частности, существует необходимость в разработке агентов, которые обладают способностью противодействовать физиологическим проявлениям заболевания, таким как образование бляшек, ассоциированное с агрегацией волокон амилоида или амилоидоподобного пептида.

Было установлено, что антитела к амилоидам, которые вырабатываются при инокуляции Аβ_1-42 в смеси с полным или неполным адъювантом Фрейнда, обладают способностью снижать амилоидную загрузку у трансгенных мышей, на которых смоделирована человеческая болезнь Альцгеймера (Schenk и др., 1999). Внутрибрюшинная инокуляция тетрапальмитоилированного Аβ_1-16, реконструированного в липосомах, трансгенным мышам линии NORBA приводила к получению высоких титров антител к амилоидам, которые, как установлено, обладали способностью солюбилизировать амилоидные волокна и бляшки in vitro и in vivo (Nicolau и др., 2002).

Впервые гипотеза о возможном механизме, посредством которого происходит растворение амилоидных бляшек и волокон, была предложена Bard с соавторами, 2000, которые сделали заключение о том, что антитела опсонизируют бляшки, которые затем разрушаются макрофагами микроглии. De Mattos с соавторами, 2001 установили, что МАт к центральному домену β-амилоида обладает способностью связываться и полностью разрушать амилоид в плазме. Они доказали, что присутствие указанных МАт в кровотоке сдвигает равновесие Аβ между головным мозгом и плазмой в сторону периферического клиренса и катаболизма вместо накопления в головном мозге.

Длительное лечение человека антителами грызунов можно вызывать антиглобулиновый ответ, который выявляется примерно на 8-12 день после введения и достигает пика примерно через 20-30 дней. Если такой антиглобулиновый ответ обнаружен, то лечение необходимо прерывать не более чем через примерно 10 дней, и повторную обработку в более поздний момент времени, как правило, не проводят, поскольку она может приводить к быстрому возникновению вторичного антиглобулинового ответа. Хотя для антител грызунов характерен заметный уровень консервативности последовательностей с человеческими антителами, существует много различий в последовательностях грызунов и человека, что является достаточным для иммуногенности антител грызунов для человека.

Эту проблему можно решить путем создания антител непосредственно в организме человека или путем создания «гуманизированных» (известных также как «реконструированные» антитела). Гуманизированные антитела содержат аминокислотную последовательность вариабельной области, которая несет полученные из антител грызунов CDR, распределенные в человеческих или напоминающих человеческие последовательностях каркасных участков. Поскольку специфичность гуманизированного антитела обеспечивается полученными из антител грызунов CDR, эти остатки следует применять практически в неизмененном виде, при этом допустимы лишь минорные модификации, которые не оказывают существенного воздействия на аффинность и специфичность антитела в отношении его антигена-мишени. Каркасные остатки можно получать из вариабельной области антитела любого примата или прежде всего из любой человеческой вариабельной области или их комбинации и созданную в результате вариабельную область следует рассматривать как реконструированную.

Для максимизации вероятности того, что аффинность будет сохраняться в реконструированном антителе, важно осуществлять соответствующий отбор каркасного участка. Известно, что последовательности каркасных участков служат для поддержания CDR в их правильной пространственной ориентации для взаимодействия с антигеном, и что каркасные остатки могут иногда даже принимать участие в связывании антигена. Для поддержания аффинности антитела к его антигену целесообразно выбирать последовательности человеческих каркасных участков, обладающие наибольшим подобием с последовательностями каркасных участков грызунов. Затем может оказаться необходимым заменять одну или несколько аминокислот в последовательности человеческого каркасного участка на соответствующий остаток в каркасном участке грызунов для того, чтобы избежать потери аффиности. Эту замену можно осуществлять с помощью компьютерного моделирования.

Настоящее изобретение относится к новым способам и композициям, которые содержат обладающие высокой специфичностью и высокой эффективность антитела, прежде всего химерные антитела, включая их фрагменты, более конкретно частично или полностью гуманизированные антитела, включая их фрагменты, которые обладают способностью распознавать и связываться со специфическими эпитопами ряда β-амилоидных антигенов, которые могут презентоваться антителу в мономерной, димерной, тримерной и т.д., полимерной форме, в форме агрегата, волокон, филаментов или в конденсированной форме бляшки. Антитела, предлагаемые в настоящем изобретении, наиболее предпочтительно применять для лечения амилоидоза, группы заболеваний и нарушений, ассоциированных с образованием амилоидных бляшек, включая вторичный амилоидоз и связанный с возрастом амилоидоз, включая (но не ограничиваясь только ими) неврологические заболевания, такие как болезнь Альцгеймера (AD), деменция, связанная с тельцами Леви, синдром Дауна, наследственная церебральная геморрагия с амилоидозом (голландского типа); комплекс деменции Гуама-Паркинсона, а также другие заболевания, которые обусловлены или ассоциированы с амилоидоподобными белками, такие как прогрессирующий надъядерный паралич, рассеянный склероз; болезнь Крейцфельдта-Якоба, наследственная церебральная геморрагия с амилоидозом (голландского типа), болезнь Паркинсона, связанная с ВИЧ деменция, ALS (амиотрофический боковой склероз), диабет взрослых; старческий сердечный амилоидоз; эндокринные опухоли и другие заболевания, включая дегенерацию желтого пятна, но не ограничиваясь указанными заболеваниями.

Краткое изложение сущности изобретения

Одним из вариантов осуществления изобретения является химерное антитело или его фрагмент, либо гуманизированное антитело или его фрагмент, которое/который распознает и связывается по меньшей мере с одним индивидуальным определенным сайтом связывания, прежде всего по меньшей мере с двумя индивидуальными сайтами связывания и более предпочтительно по меньшей мере с тремя индивидуальными сайтами связывания на β-амилоидном белке, при этом каждый из указанного одного, указанных по меньшей мере двух, указанных по меньшей мере трех сайтов связывания содержит по меньшей мере один или два последовательно расположенных аминокислотных остатка, которые преимущественно участвуют в связывание антитела.

В частности, химерное антитело или его фрагмент, либо гуманизированное антитело или его фрагмент, предлагаемое/предлагаемый в изобретении, связывается по меньшей мере с двумя, прежде всего по меньшей мере с тремя индивидуальными сайтами связывания на β-амилоидном белке, при этом по меньшей мере два из трех индивидуальных сайтов связывания содержат по меньшей мере два последовательно расположенных аминокислотных остатка, которые преимущественно участвуют в связывание антитела, и по меньшей мере один из трех индивидуальных сайтов связывания содержит по меньшей мере один аминокислотный остаток.

По меньшей мере два индивидуальных сайтов связывания, которые содержат по меньшей мере два последовательно расположенных аминокислотных остатка, преимущественно участвующих в связывании антитела, локализованы в непосредственной близости относительно друг друга на антигене, разделены и/или фланкированы по меньшей мере одним аминокислотным остатком, который не участвует в связывании антитела, или участвует в существенно меньшей степени по сравнению с двумя указанными последовательно расположенными аминокислотными остатками, формируя тем самым конформационный прерывистый эпитоп.

По меньшей мере три индивидуальных сайта связывания, которые содержат по меньшей мере два последовательно расположенных аминокислотных остатка и по меньшей мере один аминокислотный остаток соответственно, преимущественно участвующих в связывании антитела, локализованы в непосредственной близости относительно друг друга на эпитопе, разделены и/или фланкированы по меньшей мере одним аминокислотным остатком, который не участвует в связывании антитела или участвует в существенно меньшей степени по сравнению с аминокислотными остатками, которые преимущественно участвуют в связывание антитела, формируя тем самым конформационный прерывистый эпитоп.

В частности, предложено химерное антитело или его фрагмент, либо гуманизированное антитело или его фрагмент, которое/который распознает и связывается по меньшей мере с одним индивидуальным сайтом связывания, прежде всего по меньшей мере с двумя индивидуальными сайтами связывания, более предпочтительно по меньшей мере с тремя индивидуальными сайтами связывания на β-амилоидном белке, при этом каждый из указанного по меньшей мере одного или указанных по меньшей мере двух сайтов связывания содержит по меньшей мере два последовательно расположенных аминокислотных остатка, которые преимущественно участвуют в связывание антитела, где по меньшей мере два последовательно расположенных аминокислотных остатка, образующие первый сайт связывания, представляют собой -Phe-Phe-, встроенные в следующую коровую последовательность (SEQ ID NO: 9):

Хаа₃-Phe-Phe-Xaa₄-Xaa₅-Xaa₆, где

Хаа₃ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Ala, Val, Leu, норлейцин. Met, Phe и Ile;

Xaa₄ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Ala, Val, Leu, Ser и Ile;

Хаа₅ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Glu и Asp;

Хаа₆ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Glu и Asp, и где указанные аминокислотные Хаа₃, Xaa₄, Xaa₅ и Хаа₆ не участвуют в связывании антитела, или участвуют в существенно меньшей степени по сравнению с сайтом связывания -Phe-Phe-.

Другим вариантом изобретения является химерное антитело или его фрагмент или гуманизированное антитело или его фрагмент, в котором

Хаа₃ обозначает Val или Leu, но предпочтительно Val;

Xaa₄ обозначает Ala или Val, но предпочтительно Ala;

Xaa₅ обозначает Glu or Asp, но предпочтительно Glu;

Хаа₆ обозначает Glu or Asp, но предпочтительно Asp.

В частности, предложено химерное антитело или его фрагмент, либо гуманизированное антитело или его фрагмент, которое/который распознает и связывается по меньшей мере с одним индивидуальным сайтом связывания, прежде всего по меньшей мере с двумя индивидуальными сайтами связывания, более предпочтительно по меньшей мере с тремя индивидуальными сайтами связывания на β-амилоидном белке, при этом указанные индивидуальные сайты связывания содержат по меньшей мере один и по меньшей мере два последовательно расположенных аминокислотных остатка соответственно, которые преимущественно участвуют в связывание антитела, где по меньшей мере два последовательно расположенных аминокислотных остатка, образующие первый сайт связывания, представляют собой -Phe-Phe-, и по меньшей мере один аминокислотный остаток представляет собой -His-, встроенные в следующую коровую последовательность:

-Xaa₁-His-Xaa₃-Xaa₄-Xaa₅-Xaa₆-Phe-Phe-Xaa₇-Xaa₈- Xaa₉, в которой

Xaa₁ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей His, Asn, Gln, Lys и Arg,

Хаа₃ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Asn и Gln,

Хаа₄ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей His, Asn, Gln, Lys и Arg,

Xaa₅ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Ala, Val, Leu, Ser и Ile;

Хаа₆ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Ala, Val, Leu, норлейцин, Met, Phe и Ile,

Хаа₇ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Ala, Val, Leu и Ile,

Xaa₈ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Glu и Asp,

Хаа₉ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Glu и Asp, и где аминокислотные остатки Xaa₁, Хаа₃, Хаа₆, Хаа₇, Xaa₈ и Хаа₉ не участвуют в связывании антитела или участвуют в существенно меньшей степени по сравнению с сайтом связывания -His- и -Phe-Phe- соответственно.

Другим вариантом осуществления изобретения является химерное антитело или его фрагмент, либо гуманизированное антитело или его фрагмент, в котором

Хаа₃ обозначает Gln или Asn, но предпочтительно Gln;

Хаа₄ обозначает Lys;

Xaa₅ обозначает Leu;

Хаа₆ обозначает Val или Leu, но предпочтительно Val;

Хаа₇ обозначает Ala или Val, но предпочтительно Ala;

Хаа₈ обозначает Glu или Asp, но предпочтительно Glu; и

Хаа₉ обозначает Asp или Glu, но предпочтительно Asp.

Следующим вариантом осуществления изобретения является химерное антитело или его фрагмент, либо гуманизированное антитело или его фрагмент, которое/который распознает и связывается по меньшей мере с одним индивидуальным сайтом связывания, прежде всего по меньшей мере с двумя индивидуальными сайтами связывания, более предпочтительно по меньшей мере с тремя индивидуальными сайтами связывания на β-амилоидном белке, при этом каждый из указанного по меньшей мере одного или по меньшей мере из указанных двух индивидуальных сайтов связывания содержит по меньшей мере два последовательно расположенных аминокислотных остатка, которые преимущественно участвуют в связывании антитела, где по меньшей мере два последовательно расположенных аминокислотных остатка, образующие второй сайт связывания, представляют собой -Lys-Leu-, встроенные в следующую коровую последовательность (SEQ ID NO: 10):

Xaa₁-Xaa₂-Lys-Leu-Xaa₃, в которой

Xaa₁ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей His, Asn, Gln Lys и Arg;

Хаа₃ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Asn и Gln;

Хаа₃ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Ala, Val, Leu, норлейцин, Met, Phe и Ile; и где аминокислотные остатки Хаа₃, Хаа₃ не участвуют в связывании антитела, или участвуют в существенно меньшей степени по сравнению с сайтом связывания -Lys-Leu-.

Следующим вариантом осуществления изобретения является химерное антитело или его фрагмент, либо гуманизированное антитело или его фрагмент, которое/который распознает и связывается по меньшей мере с одним индивидуальным сайтом связывания, прежде всего по меньшей мере с двумя индивидуальными сайтами связывания, более предпочтительно по меньшей мере с тремя индивидуальными сайтами связывания на β-амилоидном белке, при этом указанные индивидуальные сайты связывания содержат по меньшей мере один и по меньшей мере два последовательно расположенных аминокислотных остатка соответственно, которые преимущественно участвуют в связывании антитела, где по меньшей мере один и по меньшей мере два последовательно расположенных аминокислотных остатка, которые разделены по меньшим мере одним аминокислотным остатком, не участвующим в связывании антитела или участвующим в существенно меньшей степени по сравнению с аминокислотными остатками, которые преимущественно участвуют в связывание антитела, представляют собой -His- и -Lys-Leu- соответственно, встроенные в следующую коровую последовательность:

His-Xaa₂-Lys-Leu-Xaa₃-Хаа₄-Хаа₅-Хаа₆-Xaa₇-Xaa₈-, в которой

Хаа₂ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Asn и Gln;

Хаа₃ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Ala, Val, Leu, норлейцин, Met, Phe и Ile;

Хаа₄ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Ala, Val, Leu, норлейцин, Met, Phe и Ile;

Xaa₅ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Ala, Val, Leu, норлейцин, Met, Phe и Ile;

Хаа₆ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Ala, Val, Leu, Ser и Ile;

Хаа₇ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Glu и Asp;

Xaa₈ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Glu и Asp,

и где аминокислотные остатки Хаа₂, Хаа₃, Хаа₆, Хаа₇, Xaa₈ не участвуют в связывании антитела, или участвуют в существенно меньшей степени по сравнению с сайтом связывания -His- и -Lys-Leu- соответственно.

Другим вариантом осуществления изобретения является химерное антитело или его фрагмент, либо гуманизированное антитело или его фрагмент, в котором

Хаа₂ обозначает Gln или Asn, но предпочтительно Gln;

Хаа₃ обозначает Val или Leu, но предпочтительноу Val;

Хаа₄ обозначает Phe;

Хаа₅ обозначает Phe;

Хаа₆ обозначает Ala или Val, но предпочтительно Ala;

Хаа₇ обозначает Glu или Asp, но предпочтительно Glu; и

Xaa₈ обозначает Asp или Glu, но предпочтительно Asp.

Следующим вариантом осуществления изобретения является химерное антитело или его фрагмент, либо гуманизированное антитело или его фрагмент, которое/который распознает и связывается по меньшей мере с двумя индивидуальными сайтами связывания на β-амилоидном белке, при этом каждый из по меньшей мере двух указанных сайтов связывания содержит по меньшей мере два последовательно расположенных аминокислотных остатка, которые преимущественно участвуют в связывании антитела, где по меньшей мере два последовательно расположенных аминокислотных остатка, которые разделены по меньшим мере одним аминокислотным остатком, не участвующим в связывании антитела, или участвующим в существенно меньшей степени по сравнению с последовательно расположенными, аминокислотными остатками, такими как -Phe-Phe- и -Lys-Leu- соответственно, образуют первый и второй сайт связывания, встроенные в следующую коровую последовательность:

Xaa₁-Xaa₂-Lys-Leu-Xaa₃-Phe-Phe-Xaa₄-Xaa₃-Xaa₆, в которой

Xaa₁ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей His, Asn, Gln Lys и Arg;

Хаа₂ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Asn и Gln;

Хаа₃ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Ala, Val, Leu, норлейцин. Met, Phe и Ile;

Хаа₄ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Ala, Val, Leu, Ser и Ile;

Хаа₅ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Glu и Asp;

Хаа₆ обозначает аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей Glu и Asp, и где аминокислотные остатки Хаа₂, Хаа₃, Хаа₄, Хаа₅ и Хаа₆ не участвуют в связывании антитела, или участвуют в существенно меньшей степени по сравнению с сайтом связывания -Lys-Leu- и -Phe-Phe- соответственно.

Следующим вариантом осуществления изобретения является химерное антитело или его фрагмент, либо гуманизированное антитело или его фрагмент, которое/который распознает и связывается по меньшей мере с одним индивидуальным сайтом связывания, прежде всего по меньшей мере с двумя индивидуальными сайтами связывания, более предпочтительно по меньшей мере с тремя индивидуальными сайтами связывания на β-амилоидном белке, при этом указанные индивидуальные сайты связывания содержат по меньшей мере один и по меньшей мере два последовательно расположенных аминокислотных остатка соответственно, которые преимущественно участвуют в связывании антитела, где по меньшей мере один и по меньшей мере два последовательно расположенных аминокислотных остатка разделены по меньшим мере одним аминокислотным остатком, не участвующим в связывании антитела или участвующим в существенно меньшей степени по сравнению с аминокислотными остатками, которые преимущественно участвуют в связывании антитела, и г