Иммуносупрессорные полипептиды и нуклеиновые кислоты

Иммуносупрессорные полипептиды и нуклеиновые кислоты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники

Данное изобретение в общем относится к полипептидам, которые связывают CD80 и/или CD86, нуклеиновой кислоте, кодирующей такие полипептиды, и способам получения и применения таких полипептидов и нуклеиновых кислот.

Уровень техники

Т-клетки играют главную роль в инициации и регуляции иммунных ответов. Для того чтобы произошла полная активация Т-клеток, необходимы, по меньшей мере, два отдельных сигнальных события. Первый сигнал создается путем взаимодействия Т-клеточных рецепторов (ТКР), экспрессирующихся на Т-клетках специфическими антигенами (Ag), представленными в контексте молекул главного комплекса гистосовместимости (ГКГ), экспрессирующихся на антиген-презентирующих клетках (АПК). Второй (костимуляторный) сигнал является результатом взаимодействия между костимуляторными лигандами, экспрессирующимися на АПК, и их соответствующими рецепторами, экспрессирующимися на Т-клетках. Доминантный костимуляторный путь включает взаимодействие между CD80 (В7-1 или В7,1) и CD86 (В7-2 или В7,2) лигандами, экспрессирующимися на АПК с CD28 и CTLA-4 (также известным как CD 152), экспрессирующихся, главным образом, на Т-клетках. CTLA-4 (цитотоксический антиген 4Т-лимфоцита) и CD28 служат в качестве рецепторов для CD80 и CD86 лигандов.

Позитивная передача сигнала опосредуется через CD28 рецептор. Связывание CD80 и/или CD86 лиганда(ов) с CD28 снижает порог Т-клеточной активации путем стимуляции формирования иммунологических синапсов (Viola A. et al., Science 283:680-682 (1999)). Дополнительно, CD28 костимуляция активирует или усиливает продукцию факторов, направленных на Т-клеточную пролиферацию и выживание, таких как интерлейкин-2 (IL-2), NF-κВ (фактор транскрипции каппа В) и BcI-XL (Norton S. D. et at., J. Immunol. 149:1556-1561 (1992); Vella A. T. et al., J. Immunol. 158: 4714-4720 (1997)). In vivo CD28-дефицитные мыши имеют сильно подавленный иммунитет и демонстрируют слабые антиген-специфичные Т-клеточные ответы (Green, J. M. et al., Immunity 1:501-508 (1994)). Т-клеточная анергия или толерантность может возникать, когда Т-клетки активируются в отсутствие костимуляторного сигнала.

Негативная передача сигнала опосредуется через рецептор CTLA-4. Каждый из CD80 и CD86 лигандов связывается с высокой авидностью с CTLA-4 и уравновешивает иммунопролиферативные ответы, идущие от CD28 передачи сигнала. Потенциальный механизм передачи сигнала CTLA-4 включает конкурентное связывание костимуляторных молекул CD80/CD86 (Masteller, E. M. et al., J. Immunol. 164:5319 (2000)), ингибирование ТКР передачи сигнала путем привлечения фосфатаз к иммуносинапсу (Lee K. M. et al., Science 282:2263 (1998)) и нарушение иммунологического синапса (Pentcheva-Hoang Т. et al., Immunity 21:401 (2004); Chikuma S. et al., J. Exp. Med 197:129 (2003); Schneider H. et al., Science 313: 1972 (2006)). In vivo CTLA-4 дефицитные мыши демонстрируют глубоко аутоиммунные фенотипы, характеризующиеся обширной тканевой инфильтрацией и разрушением органов (Waterhouse P. et al., Science 270:985 (1995)).

Терапевтические агенты, разработанные для того, чтобы противодействовать CD80/CD86 костимуляторному пути передачи сигнала, такие как растворимый человеческий CTLA-4-Ig, выполняют обязательства по лечению аутоиммунных заболеваний и нарушений. Данное изобретение обеспечивает преимущественные молекулы, имеющие улучшенные способности модулировать или подавлять передачу сигнала через CD80/CD86 костимуляторный путь и способы применения таких молекул для выбранного и дифференциального управления Т-клеточными ответами. Такие молекулы находят полезное использование в различных применениях, обсуждаемых в деталях ниже.

Краткое описание изобретения

В первом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный полипептид CTLA-4, включающий аминокислотную последовательность, которая отличается от аминокислотной последовательности внеклеточного домена человеческого CTLA-4, представленной в SEQ ID NO (идентификационный номер последовательности): с 159 по 15 аминокислотным остаткам, где изолированный или рекомбинантный полипептид CTLA-4 имеет способность связывать CD80 или CD86 или внеклеточный домен обоих и/или имеет способность подавлять или ингибировать иммунный ответ.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может иметь, по меньшей мере, 90% идентичность последовательности или, по меньшей мере, 95%, по меньшей мере, 96%, по меньшей мере, 97%, по меньшей мере, 98% или, по меньшей мере, 99% идентичность последовательности к аминокислотной последовательности SEQ ID NO:36. Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать аминокислотную последовательность SEQ ID NO:36.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может иметь, по меньшей мере, 90% идентичность последовательности или, по меньшей мере, 95%, по меньшей мере, 96%, по меньшей мере, 97%, по меньшей мере, 98%, или, по меньшей мере, 99% идентичность последовательности к аминокислотной последовательности SEQ ID NO:50. Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать аминокислотную последовательность SEQ ID NO:50.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может иметь способность связывать человеческий CD80 или человеческий CD86 или их внеклеточный домен.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать аминокислотную последовательность длиной 124 аминокислотных остатка.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать одну аминокислотную замену в аминокислотном положении, выбранном из группы, включающей аминокислотные положения, соответствующие положению 50, 54, 55, 56, 64, 65, 70 или 85 относительно SEQ ID NO:159.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать две, три или четыре аминокислотные замены в аминокислотных положениях, выбранных из группы, включающей аминокислотные положения, соответствующие положению 50, 54, 55, 56, 64, 65, 70 или 85 относительно SEQ ID NO:159.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать аминокислотную замену в положении 70 относительно SEQ ID NO:159, такую как замена S70F. Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать аминокислотную замену в положении 104 относительно SEQ ID NO:159, такую как замена L104E.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать аминокислотную замену в положении 30 относительно SEQ ID NO:159, такую как замена T30N/D/A или замена T30N.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать аминокислотную замену в положении 64 относительно SEQ ID NO:159, такую как замена S64P.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать аминокислотную замену в положении 50 относительно SEQ ID NO:159, такую как замена А50М.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать аминокислотную замену в положении 54 относительно SEQ ID NO:159, такую как замена M54K/V или замена M54K.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать аминокислотную замену в положении 65 относительно SEQ ID NO:159, такую как замена I65S.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать аминокислотную замену в положении 56 относительно SEQ ID NO:159, такую как замена N56D.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать аминокислотную замену в положении 55 относительно SEQ ID NO:159, такую как замена G55E.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать аминокислотную замену в положениях 85 относительно SEQ ID NO:159, такую как замена М85А.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может включать аминокислотную замену в положении 24 относительно SEQ ID NO:159, такую как замена A24E/S или замена А24Е.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может иметь аффинность связывания к CD86 или его внеклеточному домену, которая практически равна или больше, чем аффинность связывания мономерного внеклеточного домена человеческого CTLA-4 к внеклеточному домену CD86 или CD86.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может иметь аффинность связывания к CD80 или его внеклеточному домену, которая больше, чем аффинность связывания мономерного внеклеточного домена человеческого CTLA-4 к внеклеточному домену CD80 или CD80.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может иметь способность подавлять иммунный ответ.

Полипептид согласно первому аспекту данного изобретения может иметь способность ингибировать Т-клеточную активацию или Т-клеточную пролиферацию.

Во втором аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный полипептидный мультимер, включающий, по меньшей мере, два полипептида согласно первому аспекту данного изобретения.

В третьем аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный слитый белок, включающий (а) полипептид согласно первому аспекту данного изобретения и (b) второй полипептид, где второй полипептид является Ig Fc полипептидом и где слитый белок имеет способность связывать CD80 и/или CD86 или внеклеточный домен каждого или обоих и/или способность модулировать или регулировать иммунный ответ.

В четвертом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный димерный слитый белок, включающий два мономерных слитых белка согласно третьему аспекту данного изобретения.

В пятом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированную или рекомбинантную нуклеиновую кислоту, включающую нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид согласно первому аспекту данного изобретения, мультимер согласно второму аспекту данного изобретения, слитый белок согласно третьему аспекту данного изобретения или димерный слитый белок согласно четвертому аспекту данного изобретения.

В шестом аспекте данное изобретение обеспечивает вектор, включающий нуклеиновую кислоту согласно пятому аспекту данного изобретения.

В седьмом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированную или рекомбинантную клетку-хозяина, включающую полипептид согласно первому аспекту данного изобретения, мультимер согласно второму аспекту данного изобретения, слитый белок согласно третьему аспекту данного изобретения, димерный слитый белок согласно четвертому аспекту данного изобретения, нуклеиновую кислоту согласно пятому аспекту данного изобретения и/или вектор согласно шестому аспекту данного изобретения.

В восьмом аспекте данное изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, включающую фармацевтически приемлемый наполнитель, фармацевтически приемлемый носитель, или фармацевтически приемлемый растворитель и один или более из следующего: полипептид согласно первому аспекту данного изобретения, мультимер согласно второму аспекту данного изобретения, слитый белок согласно третьему аспекту данного изобретения, димерный слитый белок согласно четвертому аспекту данного изобретения, нуклеиновая кислота согласно пятому аспекту данного изобретения, вектор согласно шестому аспекту данного изобретения и/или клетка-хозяин согласно седьмому аспекту данного изобретения.

В девятом аспекте данное изобретение обеспечивает способ для подавления иммунного ответа, где указанный способ, включающий контакт В7-позитивной клетки с эффективным количеством, по меньшей мере, одного из: полипептид согласно первому аспекту данного изобретения, мультимер согласно второму аспекту данного изобретения, слитый белок согласно третьему аспекту данного изобретения, димерный слитый белок согласно четвертому аспекту данного изобретения, нуклеиновая кислота согласно пятому аспекту данного изобретения, вектор согласно шестому аспекту данного изобретения и/или клетка-хозяин согласно седьмому аспекту данного изобретения, подавление иммунного ответа, где иммунный ответ, таким образом, подавляется.

В десятом аспекте данное изобретение обеспечивает полипептид согласно первому аспекту данного изобретения, мультимер согласно второму аспекту данного изобретения, слитый белок согласно третьему аспекту данного изобретения, димерный слитый белок согласно четвертому аспекту данного изобретения, нуклеиновую кислоту согласно пятому аспекту данного изобретения, вектор согласно шестому аспекту данного изобретения и/или клетку-хозяина согласно седьмому аспекту данного изобретения для применения в подавлении иммунного ответа.

В одиннадцатом аспекте данное изобретение обеспечивает применение полипептида согласно первому аспекту данного изобретения, мультимера согласно второму аспекту данного изобретения, слитого белка согласно третьему аспекту данного изобретения, димерного слитого белка согласно четвертому аспекту данного изобретения, нуклеиновой кислоты согласно пятому аспекту данного изобретения, вектора согласно шестому аспекту данного изобретения и/или клетки-хозяина согласно седьмому аспекту данного изобретения в производстве медикамента для подавления иммунного ответа.

В двенадцатом аспекте данное изобретение обеспечивает конъюгат, включающий полипептид согласно первому аспекту данного изобретения, мультимер согласно второму аспекту данного изобретения, слитый белок согласно третьему аспекту данного изобретения или димерный слитый белок согласно четвертому аспекту данного изобретения, и неполипептидную часть, ковалентно прикрепленную к такому полипептиду, мультимеру, слитому белку или димерному слитому белку, где указанный конъюгат имеет способность подавлять иммунный ответ.

Другие аспекты изобретения описаны ниже.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный полипептид, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательности с, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS (идентификационные номера последовательностей): 1-73, где полипептид связывает CD80 или CD86 или внеклеточный домен (ВКД) каждого, и/или имеет способность подавлять или ингибировать иммунный ответ.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный полипептид, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%), или 100% идентичность последовательности с, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:1-73, где полипептид имеет аффинность связывания к человеческому CD86 внеклеточному домену или внеклеточному домену человеческого CD80, которая практически равна или больше, чем аффинность связывания человеческого CTLA-4 к внеклеточному домену человеческого CD86 или внеклеточному домену человеческого CD80 соответственно, и где полипептид необязательно имеет способность подавлять иммунный ответ. Некоторые такие полипептиды имеют аффинность связывания к человеческому CD86 внеклеточному домену, которая больше, чем аффинность связывания внеклеточного домена человеческого CTLA-4 к внеклеточному домену человеческого CD86. Некоторые такие полипептиды имеют аффинность связывания к внеклеточному домену человеческого CD80, которая больше, чем аффинность связывания внеклеточного домена человеческого CTLA-4 к внеклеточному домену человеческого CD80.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный мутантный полипептид CTLA-4, включающий аминокислотную последовательность, которая (а) отличается от аминокислотной последовательности внеклеточного домена человека CTLA-4, представленного в SEQ ID NO:159 по не более чем 10, 9, 8, 7 или 6 аминокислотным остаткам (например, не более чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотным остаткам), и (b) включает, по меньшей мере, одну аминокислотную замену в аминокислотном положении, соответствующем положению 50, 54, 55, 56, 64, 65, 70 или 85 относительно SEQ ID NO:159, где мутантный полипептид CTLA-4 имеет способность связывать CD80 или CD86 или внеклеточный домен каждого и/или имеет способность подавлять или ингибировать иммунный ответ.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный полипептид, который включает аминокислотную последовательность, включающую (i), по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательности к аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:1-73 и (ii) остаток фенилаланина в аминокислотном положении, соответствующем положению 70 указанной аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO:1-73, где полипептид имеет способность связывать CD80 и/или CD86 или внеклеточный домен каждого или обоих и/или имеет способность подавлять или ингибировать иммунный ответ.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный мутантный полипептид CTLA-4, который связывает CD80 и/или CD86 и/или внеклеточный домен каждого или обоих, и/или способен подавлять иммунный ответ, где указанный полипептид включает аминокислотную последовательность, которая (а) отличается от аминокислотной последовательности полипептида внеклеточного домена человеческого CTLA-4, представленного в SEQ ID NO:159 по не более чем 10, 9, 8, 7 или 6 аминокислотным остаткам (например, не более чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотным остаткам), и (b) включает, по меньшей мере, одну аминокислотную замену, где указанная, по меньшей мере, аминокислотная замена включает S70F, где положения аминокислотных остатков пронумерованы в соответствии с SEQ ID NO:159.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный мутантный полипептид CTLA-4, включающий аминокислотную последовательность, которая (а) отличается от аминокислотной последовательности внеклеточного домена человека CTLA-4, представленного в SEQ ID NO:159 по не более чем 11, 10, 9, 8, 7 или 6 аминокислотным остаткам (например, не более чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 аминокислотным остаткам), и (b) включает, по меньшей мере, одну аминокислотную замену в положении аминокислотных остатков, соответствующему положению 24, 30, 32, 50, 54, 55, 56, 64, 65, 70 или 85 относительно SEQ ID NO:159, где мутантный полипептид CTLA-4 имеет способность связывать CD 80 или CD 86 или внеклеточный домен каждого и/или имеет способность подавлять или ингибировать иммунный ответ.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный полипептид, включающий аминокислотную последовательность, которая (а) отличается от аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:31 по не более чем 10, 9, 8, 7 или 6 аминокислотным остаткам (например, не более чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотным остаткам), и (b) включает, по меньшей мере, один из следующего: остаток метионина в положении, соответствующем положению 50 SEQ ID NO:31, остаток лизина в положении, соответствующем положению 54 SEQ ID NO:31, остаток глутаминовой кислоты в положении, соответствующем положению 55 SEQ ID NO:31, остаток пролина в положении, соответствующем положению 64 SEQ ID NO:31, остаток серина в положении, соответствующем положению 65 SEQ ID NO:31, остаток фенилаланина в положении, соответствующем положению 70 SEQ ID NO:31, где положения аминокислотных остатков пронумерованы в соответствии с SEQ ID NO:31, и полипептид связывает CD80 и/или CD86 и/или ВКД каждого или обоих и/или ингибирует иммунный ответ.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный димер слитого белка, включающий два мономерных слитых белка, связанных посредством, по меньшей мере, одной дисульфидной связи, сформированной между двумя остатками цистеина, присутствующими в каждом мономерном мутантном слитом белке, где каждый мономерный слитый белок включает (а) полипептид, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность с, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:1-73 и (b) полипептид Ig Fc, где димер слитого белка имеет способность связывать CD80 и/или CD86, и/или CD80-Ig и/или CD86-Ig, и/или имеет способность ингибировать или подавлять иммунный ответ.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный димер слитого белка, включающий два мономерных слитых белка, каждый такой мономерный слитый белок, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательности с, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:74-79, 197-200, 205-214 и 219-222, где полипептид связывает CD80 и/или CD86, и/или его внеклеточный домен и/или подавляет иммунный ответ, или ее комплементарную полинуклеотидную последовательность.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный димер слитого белка, включающий два мономерных слитых белка, где каждый мономерный слитый белок включает: (1) полипептид, включающий аминокислотную последовательность, которая отличается от аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:1-73 по не более чем 10, 9, 8, 7 или 6 аминокислотным остаткам (например, не более чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотным остаткам), и где аминокислотный остаток в аминокислотной последовательности в положении 41, 50, 54, 55, 56, 64, 65, 70 или 85 идентичен аминокислотному остатку в соответствующем положении указанной выбранной аминокислотной последовательности, и (2) полипептид Ig Fc, где димер слитого белка связывает CD80 и/или CD86, и/или ингибирует иммунный ответ.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный димер слитого белка, включающий два мономерных слитых белка, где каждый мономерный слитый белок включает: (1) полипептид мутантного внеклеточного домена CTLA-4, включающий аминокислотную последовательность, которая (i) отличается от аминокислотной последовательности внеклеточного домена человеческого CTLA-4, представленного в SEQ ID NO:159 по не более чем 10, 9, 8, 7 или 6 аминокислотным остаткам (например, не более чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотным остаткам), и (ii) включает, по меньшей мере, одну аминокислотную замену в аминокислотном положении, соответствующем положению 50, 54, 55, 56, 64, 65, 70 или 85 относительно аминокислотной последовательности SEQ ID NO:159; и (2) полипептид Ig Fc, где димер слитого белка связывает CD80 и/или CD86, и/или подавляет или ингибирует иммунный ответ. Некоторые такие димеры слитого белка включают одну или несколько замен в аминокислотных положениях относительно SEQ ID NO:159, выбранных из группы, включающей А50М, M54K, G55E, N56D, S64P, I65S и S70F; и (2) полипептид Ig Fc, причем Ig Fc полипептид необязательно является IgG2 Fc полипептидом, где мутантный димер CTLA-4-Ig связывает hCD80 и/или hCD86, и/или подавляет или ингибирует иммунный ответ.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный полипептид, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательности к аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:50 и SEQ ID NO:56, где полипептид (i) связывает CD80 и/или CD86 или внеклеточный домен каждого или обоих, и/или (ii) подавляет иммунный ответ.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированный или рекомбинантный полипептид, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100% идентичность последовательности к аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:74-79, 197-200, 205-214 и 219-222, где полипептид (i) связывает CD80 и/или CD86 или внеклеточный домен каждого или обоих, (ii) связывает слитый белок CD80-Ig и/или слитый белок CD86-Ig, и/или (iii) подавляет иммунный ответ.

Также обеспечивается изолированный или рекомбинантный димер слитого белка, включающий два мономерных слитых белка, связанных посредством, по меньшей мере, одной дисульфидной связи, сформированной между двумя остатками цистеина, присутствующими в каждом мономерном мутантном слитом белке, где каждый мономерный слитый белок включает (а) полипептид, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 95% идентичность с, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:197, SEQ ID NO:198, SEQ ID NO:199, и SEQ ID NO:200 и (b) полипептид Ig Fc, где димер слитого белка имеет (i) способность связывать CD80 и/или CD86 и/или внеклеточный домен CD80 и/или CD86, (ii) способность связывать CD80-Ig и/или CD86-Ig, и/или (iii) имеет способность ингибировать или подавлять иммунный ответ.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированную или рекомбинантную нуклеиновую кислоту, включающую полинуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательности с, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:1-79, 197-200, 205-214 и 219-222, где полипептид связывает CD80 и/или CD86 и/или внеклеточный домен каждого или обоих, и/или имеет способность подавлять иммунный ответ, или ее комплементарную полинуклеотидную последовательность.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированную или рекомбинантную нуклеиновую кислоту, включающую полинуклеотидную последовательность, которая кодирует слитый белок, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательности с, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:74-79, 197-200, 205-214, и 219-222, где полипептид связывает CD80 и/или CD86, и/или его внеклеточный домен и/или подавляет иммунный ответ, или ее комплементарную полинуклеотидную последовательность.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированную или рекомбинантную нуклеиновую кислоту, включающую: (а) полинуклеотидную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательности с, по меньшей мере, одной полинуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:80-158, 201-204, 223, и 224; (b) комплементарную полинуклеотидную последовательность (а) или (с) фрагмент любой полинуклеотидной последовательности (а) или (b), где нуклеиновая кислота кодирует полипептид, который связывает CD80 и/или CD86, и/или внеклеточный домен каждого или обоих, и/или имеет способность подавлять или ингибировать иммунный ответ.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированную или рекомбинантную нуклеиновую кислоту, включающую полинуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, который включает аминокислотную последовательность (а), которая отличается от аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:1-73 по не более чем 10, 9, 8, 7, или 6 аминокислотным остаткам (например, не более чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотным остаткам), и (b) где аминокислотный остаток в аминокислотной последовательности в положении 41, 50, 54, 55, 56, 64, 65, 70 или 85 идентичен аминокислотному остатку в соответствующем положении указанной аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:1-73, где полипептид связывает CD80 и/или CD86, и/или внеклеточный домен каждого или обоих, и/или ингибирует иммунный ответ, или ее комплементарную полинуклеотидную последовательность.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированную или рекомбинантную нуклеиновую кислоту, включающую полинуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, включающий аминокислотную последовательность, которая (а) отличается от аминокислотной последовательности внеклеточного домена человека CTLA-4, представленной в SEQ ID NO:159 по не более чем 10, 9, 8, 7 или 6 аминокислотным остаткам (например, не более чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, или 10 аминокислотным остаткам), и (b) включает, по меньшей мере, одну аминокислотную замену в аминокислотном положении, соответствующем положению 50, 54, 55, 56, 64, 65, 70 или 85 относительно SEQ ID NO:159, где указанный полипептид имеет способность связывать CD80 и/или CD86 и/или внеклеточный домен каждого, и/или имеет способность подавлять или ингибировать иммунный ответ, или ее комплементарную полинуклеотидную последовательность.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированную или рекомбинантную нуклеиновую кислоту, включающую полинуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, включающий аминокислотную последовательность, имеющую (i), по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100% идентичность к аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:1-73 и (ii) остаток фенилаланина в аминокислотном положении, соответствующем положению 70 указанной аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO:1-73, где полипептид связывает hCD80 и/или hCD86 или его ВКД и/или ингибирует иммунный ответ, где указанная аминокислотная замена необязательно включает S70F, или ее комплементарную полинуклеотидную последовательность.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированную или рекомбинантную нуклеиновую кислоту, включающую полинуклеотидную последовательность, которая кодирует рекомбинантный димер полипептида, включающий два полипептида, где каждый такой полипептид включает аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность к последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:1-73, где димер связывает hCD80 и/или hCD86 и/или ингибирует иммунный ответ, или ее комплементарную полинуклеотидную последовательность.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированную или рекомбинантную нуклеиновую кислоту, включающую полинуклеотидную последовательность, которая кодирует слитый белок, включающий (а) полипептид, включающий аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность с, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:1-73, и (b) Ig полипептид, где слитый белок связывает CD80 и/или CD86, и/или имеет способность подавлять иммунный ответ, или ее комплементарную полинуклеотидную последовательность.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированную или рекомбинантную нуклеиновую кислоту, включающую полинуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, включающий аминокислотную последовательность, которая (а) отличается от аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:31 по не более чем 10, 9, 8, 7 или 6 аминокислотным остаткам (например, не более чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотным остаткам), и (b) включает, по меньшей мере, один из следующего: остаток метионина в положении, соответствующем положению 50 SEQ ID NO:31, остаток лизина в положении, соответствующем положению 54 SEQ ID NO:31, остаток глутаминовой кислоты в положении, соответствующем положению 55 SEQ ID NO:31, остаток пролина в положении, соответствующем положению 64 SEQ ID NO:31, остаток серина в положении, соответствующем положению 65 SEQ ID NO:31, остаток фенилаланина в положении, соответствующем положению 70 SEQ ID NO:31, где положения аминокислотных остатков пронумерованы в соответствии с SEQ ID NO:31 и где полипептид связывает CD80 и/или CD86, и/или ингибирует иммунный ответ, или ее комплементарную полинуклеотидную последовательность.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает вектор экспрессии, включающий: (i) первую полинуклеотидную последовательность, которая кодирует первый полипептид, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность с, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:1-73, где указанный первый полипептид связывает человеческий CD86 и/или человеческий CD80, и/или внеклеточный домен каждого или обоих, и/или подавляет иммунный ответ, и (ii) вторую полинуклеотидную последовательность, которая кодирует второй полипептид, включающий шарнир, полипептид СН2 домена и СН3 домена иммуноглобулина (Ig), причем Ig полипептид необязательно является человеческим IgG2 Fc полипептидом.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает изолированную или рекомбинантную клетку-хозяина, трансфектированную с нуклеиновой кислотой, кодирующей слитый белок, причем нуклеиновая кислота включает: (i) первую нуклеотидную последовательность, кодирующую первый полипептид, включающий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность с, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NOS:1-73, где указанный первый полипептид имеет способность связывать человеческий CD86 и/или человеческий CD80 и/или внеклеточный домен каждого или обоих, и/или имеет способность подавлять иммунный ответ; и (ii) вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую второй полипептид, включающий шарнир, полипептид СН2 домена и СН3 домена иммуноглобулина (Ig), причем Ig полипептид необязательно является человеческим IgG2 Fc полипептидом, где клетка-хозяин способна экспрессировать слитый белок.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает способ подавления иммунного ответа, где указанный способ включает контакт В7-позитивной клетки с эффективным количеством, по меньшей мере, одного полипептида, конъюгата, нуклеиновой кислоты, вектора или клетки согласно изобретению, чтобы подавлять иммунный ответ, где иммунный ответ, таким образом, подавляется.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает способ модулирования взаимодействия Т-клеток, экспрессирующих CD28 и/или CTLA-4, с В7-позитивными клетками, где способ включает контакт В7-позитивных клеток с эффективным количеством, по меньшей мере, одного полипептида, конъюгата, нуклеиновой кислоты, вектора или клетки по данному изобретению, чтобы модулировать взаимодействие В7-позитивных клеток с CD28-позитивными Т-клетками и/или CTLA-4-позитивными Т-клетками, где модулируется взаимодействие В7-позитивных клеток с CD28-позитивными Т-клетками и/или CTLA-4-позитивными Т-клетками.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает способ ингибирования взаимодействия CD28-позитивных Т-клеток и/или CTLA-4-позитивных Т-клеток с В7- позитивными клетками, где способ включает контакт B7-позитивных клеток с эффективным количеством, по меньшей мере, одного полипептида, конъюгата, нуклеиновой кислоты, вектора или клетки согласно изобретению, где ингибируется взаимодействие CD28-позитивных Т-клеток и/или CTLA-4-позитивных Т-клеток с В7-позитивными клетками.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает способ ингибирования взаимодействия СВ28-позитивных Т-клеток с В7-позитивными клетками у субъекта, где указанный способ включает введение субъекту эффективного количества, по меньшей мере, одного полипептида, конъюгата, нуклеиновой кислоты, вектора или клетки согласно изобретению, где ингибируется взаимодействие эндогенных CD28-позитивных Т-клеток с эндогенными В7-позитивными клетками у субъекта.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает способ лечения субъекта, имеющего заболевание или нарушение иммунной системы, опосредованный путем взаимодействия эндогенных Т-клеток с эндогенными клетками, экспрессирующими CD80 и/или CD86, где указанный способ включает введение субъекту, который нуждается в таком лечении, терапевтически эффективного количества, по меньшей мере, одного полипептида, конъюгата, нуклеиновой кислоты, вектора или клетки согласно изобретению, где взаимодействие(я) между эндогенными Т-клетками и эндогенными клетками, экспрессирующими указанный CD80 и/или указанный CD86, ингибируется, таким образом, проводя лечение иммунного заболевания или нарушения у субъекта.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает способ ингибирования отторжения ткани или органа, трансплантированного от донора к субъекту-реципиенту, где способ включает введение субъекту-реципиенту, который в этом нуждается, терапевтически эффективного количества, по меньшей мере, одного полипептида, конъюгата, нуклеиновой кислоты, вектора или клетки согласно изобретению, таким образом, ингибируя отторжение ткани или органа, трансплантированного субъекту-реципиенту.

В другом аспекте данное изобретение обеспечивает способ получения слитого белка, где способ включает: (1) культивирование клетки-хозяина, трансформированной с нуклеиновой кислотой в клеточной среде, где нуклеиновая кислота включает (i) первую нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, имеющую, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичнос