Анти-cd79b антитела и иммуноконъюгаты и способы их применения

Анти-cd79b антитела и иммуноконъюгаты и способы их применения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Перекрестная ссылка на родственные заявки

В настоящей заявке, поданной в соответствии со статьей 37, § 1.53(b) Свода Федеральных Правил (CFR), испрашивается приоритет предварительной заявки на патент США № 60/950052, поданной 16 июля 2007 г., предварительной заявки на патент США рег. № 61/025137, поданной 31 января 2008 г., предварительной заявки на патент США рег. № 61/032790, поданной 29 февраля 2008 г., и предварительной заявки на патент США рег. № 61/054709, поданной 20 мая 2008 г., в соответствии со статьей 35, § 119(е) Кодекса законов США, где описание каждой заявки во всей своей полноте вводится в настоящую заявку посредством ссылки.

Область, к которой относится изобретение

Настоящая группа изобретений относится к композициям, которые могут быть использованы для лечения гемопоэтической опухоли у млекопитающих, и к способам применения таких композиций.

Уровень техники

В США злокачественные опухоли (рак), после болезней сердца, являются вторым лидирующим заболеванием, приводящим к летальному исходу (Boring et al., CA Cancel J. Clin. 43:7 (1993)). Рак характеризуется увеличением числа патологических или опухолевых клеток, происходящих от нормальной ткани, которая пролифирует с образованием опухолевой массы и инвазией смежных тканей такими неопластическими опухолевыми клетками, с образованием злокачественных клеток, которые, в конечном счете, распространяются через систему кровообращения или лимфатическую систему в региональные лимфоузлы и в периферические области по механизму, называемому метастазированием. При раке клетки пролиферируют в условиях, при которых нормальные клетки расти не могут. Само раковое заболевание проявляется в различных формах широкого ряда, характеризующихся различной степенью инвазивности и агрессивности.

Раковые заболевания, в которых участвуют клетки, образующиеся в процессе гемопоэза, то есть в процессе, благодаря которому образуются клеточные элементы крови, такие как лимфоциты, лейкоциты, тромбоциты, эритроциты и природные клетки-киллеры, называются раком гемопоэтической системы. Лимфоциты, которые могут быть обнаружены в крови и в лимфатической ткани и играют решающую роль в иммунном ответе, подразделяются на два основных класса: В-лимфоциты (В-клетки) и Т-лимфоциты (Т-клетки), которые опосредуют гуморальный и клеточно-опосредуемый иммунный ответ, соответственно.

B-клетки созревают в костном мозге и покидают костный мозг, экспрессируя на своей поверхности антигенсвязывающее антитело. После того, первого контакта «необученных» В-клеток с антигеном, для которого мембраносвязанное антитело является специфическим, клетки начинают быстро делиться, а их потомство дифференцируется в В-клетки памяти и эффекторные клетки, называемые «плазматическими клетками». В-клетки памяти имеют более продолжительное время жизни и продолжают экспрессировать мембраносвязанное антитело, которое обладает такой же специфичностью, как и исходные родительские клетки. Плазматические клетки не продуцируют мембраносвязанное антитело, а вместо этого они продуцируют антитело в форме, которая может секретироваться. Секретируемыми антителами являются основные эффекторные молекулы гуморального иммунного ответа.

T-клетки созревают в тимусе и создают условия для пролиферации и дифференцировки незрелых Т-клеток. В процессе своего созревания T-клетки претерпевают реаранжировку генов, которая приводит к продуцированию Т-клеточного рецептора, и подвергаются позитивному и негативному отбору, который облегчает определение фенотипа клеточной поверхности зрелых Т-клеток. Характерными маркерами клеточной поверхности зрелых Т-клеток являются комплексы CD3:T-клеточный рецептор и один из корецепторов, CD4 или CD8.

В попытке выявления эффективных клеточных мишеней для противораковой терапии были проведены исследования по идентификации трансмембранных или других мембраносвязанных полипептидов, которые специфически экспрессируются на поверхности раковых клеток одного или нескольких конкретных типов по сравнению с одной или несколькими нормальными нераковыми клетками. В большинстве случаев такие мембраносвязанные полипептиды в большом количестве экспрессируются на поверхности раковых клеток, но не на поверхности нераковых клеток. Идентификация таких ассоциированных с опухолью полипептидов-антигенов клеточной поверхности дает возможность специфически разрушать раковые клетки-мишени путем терапии с использованием антител. В этой связи следует отметить, что терапия на основе антител оказалась очень эффективной для лечения некоторых раковых опухолей. Так, например, герцептин (HERCEPTIN®) и ритуксан (RITUXAN®) (оба этих антитела поставляются компанией Genentech Inc., South San Francisco, California) представляют собой антитела, которые с успехом применялись для лечения рака молочной железы и неходжкинской лимфомы, соответственно. Более конкретно, HERCEPTIN® представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, которое было получено методами рекомбинантных ДНК и которое селективно связывается с внеклеточным доменом протоонкогена рецептора человеческого эпидермального фактора роста 2 (HER2). Сверхэкспрессия белка HER2 наблюдалось в 25-30% случаев заболеваний первичным раком молочной железы. RITUXAN® представляет собой генетически сконструированное химерное моноклональное антитело «мышь/человек», направленное против антигена CD20, находящегося на поверхности нормальных и злокачественных В-лимфоцитов. Оба эти антитела рекомбинантно продуцируются в клетках СНО.

В попытке выявления эффективных клеточных мишеней для противораковой терапии были проведены исследования по идентификации (1) полипептидов, которые не являются мембраносвязанными и которые, в отличие от нераковых нормальных клеток конкретных типов, специфически продуцируются одной или несколькими раковыми клетками конкретных типов, (2) полипептидов, которые продуцируются раковыми клетками на уровне экспрессии, значительно превышающем уровень экспрессии полипептидов одной или несколькими нормальными нераковыми клетками, или (3) полипептидов, экспрессия которых, в частности, ограничивается тканями одного типа (или очень ограниченного числа тканей других типов), пораженными и не пораженными раком (например, нормальной тканью предстательной железы и опухолевой тканью предстательной железы). Такие полипептиды могут быть постоянно локализованы внутри клеток, либо они могут секретироваться раковыми клетками. Кроме того, такие полипептиды могут экспрессироваться не самими раковыми клетками, а клетками, которые продуцируют и/или секретируют полипептиды, оказывающие потенцирующее действие на раковые клетки или действие, стимулирующее рост раковых клеток. В большинстве случаев такими секретируемыми полипептидами являются белки, которые обеспечивают раковым клеткам, но не нормальным клеткам, преимущественный рост, и такими полипептидами являются, например, ангиогенные факторы, факторы клеточной адгезии, факторы роста и т.п. При этом предполагается, что идентификация антагонистов указанных полипептидов, которые не являются мембраносвязанными, позволит выявлять эффективные терапевтические средства для лечения указанных раковых заболеваний. Кроме того, идентификация характера экспрессии таких полипептидов может быть использована для диагностики конкретных раковых опухолей у млекопитающих.

Несмотря на упомянутые выше успехи в противораковой терапии млекопитающих, необходимость в получении дополнительных терапевтических средств, способных детектировать присутствие опухоли у млекопитающих и эффективно ингибировать рост опухолевых клеток, соответственно, остается особенно актуальной. В соответствии с этим, целью настоящего изобретения является идентификация полипептидов, а именно мембраносвязанных, секретируемых полипептидов или внутриклеточных полипептидов, экспрессия которых, в частности, ограничивается тканями только одного типа (или очень ограниченного числа тканей других типов), гемопоэтическими тканями, пораженными и не пораженными раком; и применение таких полипептидов и нуклеиновых кислот, кодирующих указанные полипептиды, для получения композиций согласно изобретению, которые могут быть использованы в целях терапии и/или диагностики гемопоэтического рака у млекопитающих.

CD79 представляет собой сигнальный компонент В-клеточного рецептора, состоящий из ковалентно связанного гетеродимера, содержащего CD79a (Igα, mb-1) и CD79b (Igβ, B29). Каждый из CD79a и CD79b содержит внеклеточный домен иммуноглобулина (Ig), трансмембранный домен, внутриклеточный сигнальный домен и домен активации иммунорецептора, имеющий тирозиновый мотив (ITAM). CD79 экспрессируется на B-клетках и в клетках неходжкинской лимфомы (НХЛ) (Cabezudo et al., Haematologica, 84:413-418 (1999); D'Arena et al., Am. J. Hematol., 64:275-281 (2000); Olejniczak et al., Immunol. Invest., 35:93-114 (2006)). Все CD79a и CD79b и sIg необходимы для поверхностной экспрессии CD79 (Matsuuchi et al., Curr. Opin. Immunol., 13(3):270-7 (2001)). Средний уровень поверхностной экспрессии CD79b на НХЛ аналогичен его экспрессии на нормальных В-клетках, но в более широких пределах (Matsuuchi et al., Curr. Opin. Immunol., 13(3):270-7 (2001)).

Что касается экспрессии CD79b, то можно сказать, что он более эффективен в продуцировании терапевтических антител против антигена CD79b и обладает минимальной антигенностью или вообще не обладает антигенностью при его введении пациентам, а в частности, при продолжительном лечении. Настоящее изобретение удовлетворяет всем этим и другим требованиям. Настоящее изобретение относится к анти-CD79b антителам, которые не имеют недостатков, присущих современным терапевтическим композициям, а также обладают другими преимуществами, которые будут очевидны из нижеследующего подробного описания.

Использование конъюгатов «антитело-лекарственное средство» (ADC), то есть иммуноконъюгатов, в целях локальной доставки цитотоксических или цитостатических агентов, например, лекарственных средств, для уничтожения или подавления роста опухолевых клеток при лечении рака (Lambert J. (2005) Curr. Opinion in Pharmacology 5:543-549; Wu et al., (2005) Nature Biotechnology 23(9):1137-1146; Payne G. (2003) Cancer Cell 3:207-212; Syrigos & Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614; Niculescu-Duvaz & Springer (1997) Adv. Drg. Del. Rev. 26:151-172; патент США № 4975278) позволяет осуществлять направленную доставку лекарственного средства в опухоли и обеспечивать их аккумуляцию внутри клеток, тогда как системное введение этих неконъюгированных лекарственных средств может приводить к продуцированию уровней токсичности, которые являются неприемлемыми для нормальных клеток и недостаточными для уничтожения опухолевых клеток (Baldwin et al., 1986, Lancet pp. (Mar. 15, 1986):603-05; Thorpe, 1985, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review” in Monoclonal Antibodies 84:Biological And Clinical Applications, A. Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506). В попытках повысить терапевтический индекс, то есть максимально повысить эффективность и максимально снизить токсичность ADC, все усилия были направлены на повышение селективности поликлональных антител (Rowland et al. (1986), Cancer Immunol. Immunother. 21:183-87) и моноклональных антител (mAb), а также на улучшение таких свойств, как связывание с лекарственным средством и высвобождение лекарственных средств (Lambert J. (2005) Curr. Opinion in Pharmacology 5:543-549). Лекарственными средствами, используемыми в конъюгатах «антитело-лекарственное средство», являются бактериальные белковые токсины, такие как дифтерийный токсин, растительные белковые токсины, такие как рицин, и небольшие молекулы, такие как ауристатины, гельданамицин (Mandler et al., (2000) J. of the Nat.Cancer Inst. 92 (19):1573-1581; Mandler et al. (2000), Bioorganic & Med. Chem. Letters 10:1025-1028; Mandler et al. (2002), Bioconjugate Chem. 13:786-791), майтанзиноиды (ЕР 1391213; Liu et al., (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623), калихеамицин (Lode et al. (1998) Cancer Res. 58:2928; Hinman et al. (1993) Cancer Res. 53:3336-3342), дауномицин, доксорубицин, метотрексат и виндезин (Rowland et al. (1986) см. выше). Лекарственные средства могут оказывать влияние на цитотоксические и цитостатические механизмы, включая связывание с тубулином, связывание с ДНК или ингибирование топоизомеразы. Некоторые цитотоксические лекарственные средства, при их конъюгировании с крупными антителами или лигандами белков-рецепторов, имеют тенденцию к потере или уменьшению активности.

Лекарственные средства, а именно ауристатиновые пептиды, ауристатин Е (АЕ) и монометилауристатин (ММАЕ), т.е. синтетические аналоги доластатина (WO 02/088172), были конъюгированы: (i) с химерными моноклональными антителами cBR96 (специфичными к антигену Lewis Y на карциномах); (ii) с сАС10, которое является специфичным к CD30, присутствующему на гематологических злокачественных опухолях (Klussman et al. (2004) Bioconjugate Chemistry 15(4):765-773; Doronina et al. (2003) Nature Biotechnology 21(7):778-784; Francisco et al. (2003) Blood 102(4):1458-1465; публикация заявки на патент США 2004/0018194); (iii) с анти-CD20 антителами, такими как ритуксан (WO 04/032828), используемый для лечения CD20-экспрессирующих раковых опухолей и иммунных расстройств; (iv) с анти-EphB2R антителом 2Н9, используемыми для лечения рака прямой и ободочной кишки (Mao et al. (2004) Cancer Research 64(3):781-788); (v) с антителом против Е-селектина (Bhaskar et al. (2003) Cancer Res. 63:6387-6397); (vi) с трастузумабом (HERCEPTIN®, заявка США 2005/0238649), и (vii) анти-CD30 антителами (WO 03/043583). Варианты ауристатина Е описаны в патентах США 5767237 и 6124431. Монометилауристатин Е, конъюгированный с моноклональными антителами, описан в работе Senter et al., Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volume 45, Abstract Number 623, опубликованной 28 марта 2004 г. Ауристатиновые аналоги ММАЕ и MMAF были конъюгированы с различными антителами (заявка США 2005/0238649).

Стандартный метод присоединения, т.е. ковалентного связывания молекулы лекарственного средства с антителом, по существу позволяет получить гетерогенную смесь молекул, в которых лекарственные средства присоединены в различных участках молекулы антитела. Так, например, цитотоксические лекарственные средства обычно конъюгируют с антителами посредством большого количества лизиновых остатков антитела с получением гетерогенной смеси конъюгата “антитело-лекарственное средство”. В зависимости от условий реакции гетерогенная смесь обычно содержит определенное число антител, к которым присоединены от 0 и примерно до 8 или более молекул связанных лекарственных средств. Кроме того, в каждой подгруппе конъюгатов, с отношением молекул лекарственного средства к молекулам антитела, равным конкретному целому числу, может присутствовать гетерогенная смесь, в которой молекула лекарственного средства присоединена в различных участках антитела. Аналитические и препаративные методы могут быть неподходящими для разделения и характеризации молекул-конъюгатов “антитело-лекарственное средство” в гетерогенной смеси, полученной в результате реакции конъюгирования. Антитела представляют собой крупные, сложные и отличающиеся по своей структуре биомолекулы, которые в большинстве случаев имеют множество реакционноспособных функциональных групп. Способность этих групп реагировать с линкерными реагентами и промежуточными соединениями “лекарственное средство-линкер” зависит от таких факторов, как рН, концентрация, концентрация соли и присутствие сорастворителей. Кроме того, способ многостадийного конъюгирования может оказаться невоспроизводимым, что обусловлено трудностями регуляции условий реакции и характеризации реагентов и промежуточных соединений.

В отличие от большинства аминов, которые являются протонированными и менее нуклеофильными при рН~7, тиолы цистеинов являются реакционноспособными при нейтральном рН. Поскольку свободные тиоловые (RSH, сульфгидрильные) группы являются относительно реакционноспособными, то белки, содержащие цистеиновые остатки, часто имеют окисленную форму и представляют собой связанные с дисульфидом олигомеры, либо они содержат внутренние мостиковые дисульфидные группы. Внеклеточные белки обычно не содержат свободных тиоловых групп (Garman, 1997, Non-Radioactive Labelling: A Practical Approach, Academic Press, London, page 55). Тиоловые группы цистеина антитела обычно являются более реакционноспособными, то есть более нуклеофильными по отношению к электрофильным реагентам конъюгирования, чем аминогруппы или гидроксильные группы антитела. Цистеиновые остатки были введены в белки методами генной инженерии с образованием ковалентных связей с лигандами или с образованием новых внутримолекулярных дисульфидных связей (Better et al. (1994) J. Biol. Chem. 13:9644-9650; Bernhard et al. (1994) Bioconjugate Chem. 5:126-132; Greenwood et al. (1994) Therapeutic Immunology 1:247-255; Tu et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci USA 96:4862-4867; Kanno et al. (2000) J. of Biotechnology, 76:207-214; Chmura et al. (2001) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 98(15):8480-8484; патент США 6248564). Однако конструирование тиоловых групп цистеина путем замены различных аминокислотных остатков белка цистеиновыми остатками может быть связано с определенными проблемами, особенно, если присутствуют несвязанные (свободные Cys) остатки или остатки, которые являются относительно доступными для реакции или окисления. В концентрированных растворах белка, независимо от того, присутствуют ли они в периплазме E. coli, супернатантах культуры, или являются частично или полностью очищенными белками, несвязанные остатки Cys на поверхности белка могут связываться и окисляться с образованием межмолекулярных дисульфидов, а следовательно и димеров или мультимеров белка. Образование дисульфидных димеров сообщает новому остатку Cys неспособность образовывать конъюгаты с лекарственным средством, лигандом или другой меткой. Кроме того, если белок в результате окисления образует внутримолекулярную дисульфидную связь между новым сконструированным Cys и уже имеющимся остатком Cys, то обе тиоловые группы Cys становятся недоступными для функционирования в активном центре и к взаимодействию. Кроме того, такой белок может становиться неактивным или неспецифичным в результате неправильной укладки или потери третичной структуры (Zhang et al. (2002) Anal. Biochem. 311:1-9).

Сконструированные на основе цистеина антитела были получены в виде FAB-фрагментов антител (тио-Fab) и экспрессированы как полноразмерные моноклональные антитела IgG (тио-Mab) (Junutula, J.R. et al. (2008) J. Immunol Methods 332:41-52; заявка США 2007/0092940, содержание которых вводится в настоящее описание посредством ссылки). Антитела тио-Fab и тио-Mab были конъюгированы посредством линкеров в положениях нововведенных тиолов цистеина с использованием реагирующих с тиолом линкерных реагентов и реагентов «лекарственное средство-линкер» с получением конъюгатов «антитело-лекарственное средство» (тио-ADC).

Все цитируемые здесь работы, включая патентные заявки и публикации, во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к анти-CD79b антителам или к их функциональным фрагментам, а также к способу их применения для лечения гемопоэтических опухолей.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к антителу, которое связывается предпочтительно специфически с любым из вышеописанных или нижеописанных полипептидов. Таким антителом является, но необязательно, моноклональное антитело, фрагмент антитела, включая Fab-, Fab'-, F(ab')₂- и Fv-фрагмент, диантитело, однодоменное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело, одноцепочечное антитело или антитело, которое конкурентно ингибирует связывание антитела против полипептида CD79b с его соответствующим антигенным эпитопом. Антитела согласно изобретению могут быть, но необязательно, конъюгированы с рост-ингибирующим агентом или с цитотоксическим средством, таким как токсин, включая, например, ауристатин, майтанзиноид, производное долостатина или калихеамицин, антибиотик, радиоактивный изотоп, нуклеолитический фермент или т.п. Антитела согласно изобретению могут быть, но необязательно, продуцированы в клетках СНО или в бактериальных клетках, а предпочтительно индуцируют гибель клеток, с которыми они связываются. Антитела согласно изобретению, используемые в целях детектирования, могут быть детектируемо помечены, присоединены к твердому носителю или т.п.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к гуманизированному анти-CD79b антителу, где аффинность одновалентного антитела (например, аффинность антитела, используемого в качестве Fab-фрагмента против CD79b) или аффинность двухвалентной формы антитела против CD79b (например, аффинность антитела, используемого в качестве IgG-фрагмента против CD79b) по существу аналогична, ниже или выше аффинности одновалентного или аффинности двухвалентного, соответственно, мышиного антитела (например, аффинности мышиного антитела, используемого в качестве Fab-фрагмента или IgG-фрагмента против CD79b), или химерного антитела (например, аффинности химерного антитела, используемого в качестве Fab-фрагмента или IgG-фрагмента против CD79b), содержащего последовательность вариабельного домена легкой и тяжелой цепи или состоящего или по существу состоящего из указанной последовательности, представленной на фигурах 7A-B (SEQ ID NO: 10) и на фигурах 8A-B (SEQ ID NO: 14).

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится гуманизированному анти-CD79b антителу, где аффинность указанного антитела в его двухвалентной форме по отношению к CD79b (например, аффинность антитела типа IgG против CD79b) составляет 0,4 нМ, 0,2 нМ или 0,5 нМ.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к антителу, которое связывается с CD79b, где указанное антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из группы, состоящей из:

(i) HVR-L1, содержащей последовательность A1-A15, где A1-A15 представляет собой KASQSVDYDGDSFLN (SEQ ID NO: 131),

(ii) HVR-L2, содержащей последовательность B1-B7, где B1-B7 представляет собой AASNLES (SEQ ID NO: 132),

(iii) HVR-L3, содержащей последовательность C1-C9, где C1-C9 представляет собой QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 133),

(iv) HVR-H1, содержащей последовательность D1-D10, где D1-D10 представляет собой GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 134),

(v) HVR-H2, содержащей последовательность E1-E18, где E1-E18 представляет собой GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 135), и

(vi) HVR-H3, содержащей последовательность F1-F10, где F1-F10 представляет собой TRRVPVYFDY (SEQ ID NO: 136).

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к антителу, которое связывается с CD79b, где указанное антитело содержит по меньшей мере один вариант HVR, где указанный вариант HVR содержит модификацию по меньшей мере одного остатка последовательности, представленной в SEQ ID NO: 131, 132, 133, 134, 135 или 136.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к антителу, включающему вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательность HVR1-HC, HVR2-HC и/или HVR3-HC, представленную на фигуре 15 (SEQ ID NO: 164-166).

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к антителу, включающему вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательность HVR1-LC, HVR2-LC и/или HVR3-LC, представленную на фигуре 15 (SEQ ID NO: 156-158).

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к антителу, включающему вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательность HVR1-HC, HVR2-HC и/или HVR3-HC, представленную на фигуре 16 (SEQ ID NO: 183-185).

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к антителу, включающему вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательность HVR1-LC, HVR2-LC и/или HVR3-LC, представленную на фигуре 16 (SEQ ID NO: 175-177).

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к антителу, включающему вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательность HVR1-HC, HVR2-HC и/или HVR3-HC, представленную на фигуре 17 (SEQ ID NO: 202-204).

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к антителу, включающему вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательность HVR1-LC, HVR2-LC и/или HVR3-LC, представленную на фигуре 17 (SEQ ID NO: 194-196).

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к антителу, включающему вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательность HVR1-HC, HVR2-HC и/или HVR3-HC, представленную на фигуре 18 (SEQ ID NO: 221-223).

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к антителу, включающему вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательность HVR1-LC, HVR2-LC и/или HVR3-LC, представленную на фигуре 18 (SEQ ID NO: 213-215).

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к анти-CD79b антителу, содержащему вариабельный домен тяжелой цепи, выбранный из SEQ ID NO: 170, 189, 208 или 227. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к анти-CD79b антителу, содержащему вариабельный домен легкой цепи, выбранный из SEQ ID NO: 169, 188, 207 или 226.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к сконструированному на основе цистеина анти-CD79b антителу, содержащему одну или несколько свободных цистеиновых аминокислот и последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 251-298. Сконструированное на основе цистеина анти-CD79b антитело может связываться с полипептидом CD79b. Сконструированное на основе цистеина анти-CD79b антитело может быть получено способом, включающим замену одного или нескольких аминокислотных остатков родительского анти-CD79b антитела цистеином.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к сконструированному на основе цистеина анти-CD79b антителу, содержащему одну или несколько свободных аминокислот цистеинов, где указанное сконструированное на основе цистеина анти-CD79b антитело связывается с полипептидом CD79b, и где указанное антитело было получено способом, включающим замену одного или нескольких аминокислотных остатков родительского анти-CD79b антитела цистеином, где указанное родительское антитело содержит по меньшей мере одну последовательность HVR, выбранную из:

(a) HVR-L1, содержащей последовательность A1-A15, где A1-A15 представляет собой KASQSVDYDGDSFLN (SEQ ID NO: 131) или KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 137);

(b) HVR-L2, содержащей последовательность B1-B7, где B1-B7 представляет собой AASNLES (SEQ ID NO: 132);

(c) HVR-L3, содержащей последовательность C1-C9, где C1-C9 представляет собой QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 133);

(d) HVR-H1, содержащей последовательность D1-D10, где D1-D10 представляет собой GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 134);

(e) HVR-H2, содержащей последовательность E1-E18, где E1-E18 представляет собой GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 135); и

(f) HVR-H3, содержащей последовательность F1-F10, где F1-F10 представляет собой TRRVPVYFDY (SEQ ID NO: 136) или TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 138).

Сконструированным на основе цистеина анти-CD79b антителом может быть моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело, одноцепочечное антитело или антитело, которое конкурентно ингибирует связывание антитела против полипептида CD79b с его соответствующим антигенным эпитопом. Антитела согласно изобретению могут быть, но необязательно, конъюгированы с рост-ингибирующим агентом или с цитотоксическим средством, таким как токсин, включая, например, ауристатин или майтанзиноид. Антитела согласно изобретению могут быть, но необязательно, продуцированы в клетках СНО или в бактериальных клетках, а предпочтительно эти антитела ингибируют рост или пролиферацию клеток, с которыми они связываются, или индуцируют гибель этих клеток. Антитела согласно изобретению, используемые в диагностических целях, могут быть детектируемо помечены, присоединены к твердому носителю или т.п.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к способам получения антитела согласно изобретению. Так, например, настоящее изобретение относится к способу получения анти-CD79b антитела (которое, как определено в настоящей заявке, включает полноразмерное антитело и его фрагменты), где указанный способ включает экспрессию в подходящей клетке-хозяине рекомбинантного вектора согласно изобретению, кодирующего указанное антитело (или его фрагмент), и выделение указанного антитела.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей антитело согласно изобретению или конъюгат ««антитело-лекарственное средство» согласно изобретению и фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель или наполнитель.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к промышленному изделию, содержащему контейнер, и к композиции, содержащейся в этом контейнере, где указанная композиция включает одно или несколько анти-CD79b антител согласно изобретению.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к набору, содержащему первый контейнер, включающий композицию, содержащую одно или несколько анти-CD79b антител согласно изобретению, и второй контейнер, содержащий буфер.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к применению анти-CD79b антитела согласно изобретению в целях получения лекарственного препарата для терапевтического и/или профилактического лечения заболевания, такого как рак, опухоль и/или клеточно-пролиферативное расстройство.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к применению промышленного изделия согласно изобретению в целях получения лекарственного препарата для терапевтического и/или профилактического лечения заболевания, такого как рак, опухоль и/или клеточно-пролиферативное расстройство.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к применению набора согласно изобретению в целях получения лекарственного препарата для терапевтического и/или профилактического лечения заболевания, такого как рак, опухоль и/или клеточно-пролиферативное расстройство.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к способу ингибирования роста клеток, экспрессирующих CD79b, где указанный способ включает контактирование указанной клетки с антителом согласно изобретению и тем самым ингибирование роста указанной клетки. В одном из вариантов изобретения указанное антитело конъюгировано с цитотоксическим средством. В одном из вариантов изобретения указанное антитело конъюгировано с рост-ингибирующим агентом.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к способу терапевтического лечения млекопитающего, страдающего раковой опухолью, содержащей клетки, экспрессирующие CD79b, где указанный способ включает введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества антитела согласно изобретению и тем самым эффективное лечение указанного млекопитающего. В одном из вариантов изобретения указанное антитело конъюгировано с цитотоксическим средством. В одном из вариантов изобретения указанное антитело конъюгировано с рост-ингибирующим агентом.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к способу лечения или предупреждения клеточно-пролиферативного расстройства, ассоциированного с повышенным уровнем экспрессии CD79b, где указанный способ включает введение индивидууму, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества антитела согласно изобретению и тем самым эффективное лечение или предупреждение указанного клеточно-пролиферативного расстройства. В одном из вариантов изобретения указанным пролиферативным расстройством является рак. В одном из вариантов изобретения указанное антитело конъюгировано с цитотоксическим средством. В одном из вариантов изобретения указанное антитело конъюгировано с рост-ингибирующим агентом.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к способу ингибирования роста клеток, который по меньшей мере частично зависит от рост-потенцирующего действия CD79b, где указанный способ включает контактирование указанной клетки с эффективным количеством антитела согласно изобретению и тем самым ингибирование роста указанных клеток. В одном из вариантов изобретения указанное антитело конъюгировано с цитотоксическим средством. В одном из вариантов изобретения указанное антитело конъюгировано с рост-ингибирующим агентом.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к способу терапевтического лечения опухоли у млекопитающего, рост которой, по меньшей мере частично, зависит от рост-потенцирующего действия CD79b, где указанный способ включает контактирование указанной клетки с эффективным количеством антитела согласно изобретению и тем самым эффективное лечение указанной опухоли. В одном из вариантов изобретения указанное антитело конъюгировано с цитотоксическим средством. В одном из вариантов изобретения указанное антитело конъюгировано с рост-ингибирующим агентом.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к способу лечения рака, включающему введение пациенту фармацевтической композиции, содержащей описанный здесь иммуноконъюгат и приемлемый разбавитель, носитель или наполнитель.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к способу ингибирования пролиферации В-клеток, включающему обработку клеток иммуноконъюгатом, содержащим антитело согласно изобретению, в условиях, благоприятствующих связыванию иммуноконъюгата с CD79b.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к способу детектирования присутствия CD79b в образце, который, как предполагается, содержит CD79b, где указанный способ включает обработку указанного образца антителом согласно изобретению и определение уровня связывания указанного антитела с CD79b в указанном образце, где связывание указанного антитела с CD79b в указанном образце является показателем присутствия указанного белка в данном образце.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к способу диагностики клеточно-пролиферативного расстройства, ассоциированного с увеличением числа клеток, таких как В-клетки, экспрессирующие CD79b, где указанный способ включает контактирование тестируемых клеток в биологическом образце с любыми из вышеупомянутых антител; определение уровня антитела, связанного с тестируемыми клетками в образце, посредством детектирования связывания указанного антитела с CD79b; и сравнение уровней антитела, связанного с клетками в контрольном образце, где уровень связанного антитела нормализуют по числу CD79b-экспрессирующих клеток в тестируемых и контрольных образцах, и где более высокий уровень связанного антитела в тестируемом образце по сравнению с контрольным образцом указывает на наличие клеточно-пролиферативного расстройства, ассоциированного с клетками, экспрессирующими CD79b.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к способу детектирования растворимого CD79b в крови или сыворотке, где указанный способ включает контактирование указанной тестируемой пробы крови или сыворотки, взятой у млекопитающего, у которого подозревается В-клеточно-пролиферативное расстройство, с анти-CD79b антителом согласно изобретению и детектирование увеличения уровня растворимого CD79b в тестируемой пробе крови по сравнению с его уровнем в контрольной пробе крови или сыворотки, взятой у здорового млекопитающего.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к способу связывания антитела согласно изобретению с клеткой, экспрессирующей CD79b, где указанный способ включает контактирование указанной клетки с указанным антителом согласно изобретению. В одном из вариантов изобретения указанное антитело конъюгировано с цитотоксическим агентом. В одном из вариантов изобретения указанное антитело конъюгировано с рост-ингибирующим агентом.

Краткое описание фигур

На фигуре 1 представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 1) кДНК PRO36249, где SEQ ID NO: 1 представляет собой клон, обозначенный “DNA225786” (также называемый здесь “CD79b”). Нуклеотидная последовательность кодирует CD79b со старт- и стоп-кодонами, которые выделены жирным шрифтом и подчеркнуты.

На фигуре 2 представлена аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 2), происходящая от кодирующей последовательности SEQ ID NO: 1, представленной на фигуре 1.

На фигуре 3 представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 3) легкой цепи химерного мышиного анти-CD79b антитела (chMA79b) IgG1 (MA79b представляет собой мышиное моноклональное анти-CD79b антитело). Нуклеотидная последовательность кодирует легкую цепь chMA79b со старт- и стоп-кодонами, которые выделены жирным шрифтом и подчеркнуты.

На фигуре 4 представлена аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 4), не содержащая первых 18 аминокислот сигнальной последовательности и происходящая от кодирующей последовательности SEQ ID NO: 3, представленной на фигуре 3. Вариабельные области не подчеркнуты.

На фигуре 5 представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 5) тяжелой цепи химерного мышиного антитела (chMA79b) IgG1 (MA79b представляет собой мышиное моноклональное анти-CD79b антитело). Нуклеотидная последовательность кодирует тяжелую цепь chMA79b со старт- и стоп-кодонами, которые выделены жирным шрифтом и подчеркнуты.

На фигуре 6 представлена аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 6), не содержащая первых 18 аминокислот сигнальной последовательности и последнего лизина (К) перед стоп-кодоном