Способ и средство активации irf-3 для лечения и профилактики заболеваний, вызываемых (+) phk-содержащими вирусами

Способ и средство активации irf-3 для лечения и профилактики заболеваний, вызываемых (+) phk-содержащими вирусами

Реферат

Область техники

Данное изобретение относится к медицине, в частности к применению глутарилгистамина или его фармацевтически приемлемой соли для профилактики и лечения заболеваний, вызываемых (+)РНК-содержащими вирусами.

Уровень техники

Вирусные инфекции являются огромной проблемой для здравоохранения. Количество лицензированных антивирусных препаратов в отношении большинства опасных и особо опасных вирусных инфекций не разработаны, а существующие нередко являются токсичными для человека или обладают недостаточной эффективностью. Большинство существующих или находящихся в разработке препаратов действуют через специфическое взаимодействие с определенными вирусными белками. Такие препараты имеют ограниченный спектр действия и способствуют быстрому появлению резистентных вариантов вирусов. В системе классификации вирусов по Балтимору к IV классу относятся вирусы, содержащие одноцепочечную (+)РНК. К этому классу принадлежат представители рода энтеровирусов из семейства пикорнавирусов и рода флавивирусов из семейства флавивирусов.

Перечисленные группы вирусов выработали эффективную стратегию подавления антивирусных программ клетки. Столь агрессивная стратегия подавления системы клеточной противовирусной защиты приводит к высокой контагиозности и патогенности данных групп вирусов, подтверждаемой списком заболеваний, вызываемых представителями рода энтеровирусов (полиомиелит, вирусный ринит (риновирусная простуда), инфекция, вызванная энтеровирусом 71) и представителями рода флавивирусов (желтая лихорадка, лихорадки Западного Нила и денге, клещевого энцефалита, энцефалита Сент-Луис, энцефалита долины Муррей).

Среди представителей рода энтеровирусов в настоящее время наибольшую проблему составляют человеческие риновирусы. Риновирусы вызывают у человека и животных воспалительные заболевания верхних дыхательных путей, размножаясь в клетках слизистой оболочки носоглотки. Риновирусы ответственны за как минимум 80% простудных заболеваний. Помимо огромного экономического ущерба (20 млн человек/часов в США ежегодно), риновирусные инфекции вызывают большое количество осложнений, таких как синусит и воспаление среднего уха и часто обнаруживаются при вирусологическом обследовании детей, больных пневмонией. Также у детей-астматиков риновирусная инфекция является причиной обострения в 80% случаев. У взрослых, риновирусы могут вызывать как обострение астмы, так и хронической обструктивной болезни легких, хронического бронхита, муковисцидоза и были изолированы у больных пневмонией при иммунодефицитных состояниях.

В связи с тем, что существует более 100 антигенных разновидностей риновирусов, создание эффективной вакцины не представляется возможным (Palmenberg, А.С.; Spiro, D; Kuzmickas, R; Wang, S; Djikeng, A; Rathe, JA; Fraser-Liggett, CM; Liggett, SB (2009). "Sequencing and Analyses of All Known Human rhinovirus Genomes Reveals Structure and Evolution". Science 324 (5923): 55-9. doi:10.1126/science.1165557. PMID 19213880.). Кроме того, не существует эффективного химиотерапевтического средства для лечения риновирусной инфекции.

Энтеровирус типа 71 (EV71) был впервые выделен в 1970-1972 гг. от больных асептическим менингитом и больного энцефалитом в Калифорнии. Важно отметить, что в тяжелых случаях вирус приводит к развитию неврологических нарушений, таких как менингит, паралич и энцефалит. Вирус распространяется в условиях антисанитарии. При заражении вирусом EV71 поднимается температура, появляется сыпь на коже рук и ног, на ладонях, стопах, отек конечностей, возникают язвы в ротовой полости. В тяжелой форме энтеровирус может привести к летальному исходу. Как отмечается, энтеровирус-71 - один из наиболее «тяжелых» из общего числа энтеровирусов человека. Этот вирус может вызывать крупные вспышки с летальными исходами. За последние 40 лет зарегистрировано 3 волны вспышек этой инфекции: в 1969-1978 годах в США, Австралии, Болгарии, Японии, в 1985-1991 годах - Гонконг, Бразилия, Тайвань и в 1996-2006 годах - Малайзия, Канада, Китай, Вьетнам, Япония. Например, в 1998 году на Тайване было зарегистрировано почти полтора миллиона случаев заболеваний, вызванных энтеровирусом-71, 78 человек скончались. В 2006-2007 годах вспышки и отдельные случаи энтеровируса-71 имели место в Индии, Таиланде, Китае, Малайзии, Брунее, Японии. Вакцины против энтеровируса-71 не существует, а неспецифическая терапия не разработана.

Род флавивирусов включает более 100 вирусов, из которых 2/3 связаны с членистоногими переносчиками вирусов, патогенных для человека. Эти вирусы вызывают различные заболевания от эфемерной лихорадки до геморрагической лихорадки и энцефалитов.

Лихорадка Западного Нила (синонимы: западно-нильский энцефалит, энцефалит Западного Нила; West-Nile encephalitis - англ.; Encephalitis Nili occidentalis - лат.) - вирусное заболевание, характеризующееся лихорадкой, менингитом, системным поражением слизистых оболочек и лимфатических узлов. Инфекция передается человеку с укусами кровососущих насекомых, чаще всего - комаров рода кулекс (Culex pipiens). Лихорадка Западного Нила широко распространена в Северной Африке, странах Средиземноморья, а также в Индии и Индонезии. Природные очаги лихорадки существуют на территории Азербайджана, Армении, Казахстана, Молдавии, Туркмении, Таджикистана, а также Астраханской и Волгоградской областей России. Flavivirus - род вирусов, передающихся преимущественно членистоногими (клещами и комарами). С 1999 года лихорадка распространилась по всей территории США. Согласно данным Центра по контролю и профилактике заболеваний (CDC), по состоянию на 21 августа 2012 г. в 38 штатах отмечено 1118 случаев заражения, 41 человек погибли, из них 200 случаев и 10 погибших - только в Далласе и его окрестностях.

Лихорадка денге (синонимы: костоломная лихорадка, суставная лихорадка, лихорадка жирафов, пятидневная лихорадка, семидневная лихорадка, финиковая болезнь; dengue - англ., dengue-awn - нем., франц., исп.; dangy-fever, breakbonefever - лат.; denguero - итал.) - вирусное заболевание, широко распространенное в тропических и субтропических регионах. Иногда встречается и в зонах умеренного климата. Так, серьезные вспышки заболеваемости отмечались в Техасе в 1922 г. и в Греции в 1927 г. Последняя эпидемия в США была зарегистрирована в середине 1940-х годов. Лихорадка денге проявляется через 5-6 дней после заражения. Характеризуется внезапным повышением температуры, которое продолжается 5-7 дней, головной болью, сильной болью в суставах и мышцах, иногда сыпью. За этим следует период физического истощения и депрессии длительностью не менее недели. Вирусы-возбудители лихорадки денге очень близки к вирусам желтой лихорадки и почти повсеместно переносятся тем же видом комаров (в основном Aedes aegypti), что и вирус желтой лихорадки. Выявлено четыре близких серотипа вируса денге. Заражение каждым из них оставляет после себя достаточно прочный иммунитет, но он практически не распространяется на другие серотипы. В 1950-х годах в Юго-Восточной Азии были зарегистрированы две крайне тяжелые формы заболевания: геморрагическая лихорадка денге и шоковый синдром денге. Они вызывали у маленьких детей прострацию и смерть, причем число смертельных случаев было очень велико. Причины столь тяжелого течения болезни остаются неясными. Возможно, мутации некоторых штаммов вируса денге привели к образованию более патогенных форм. Не исключено также, что имело место повторное, в течение короткого срока, заражение другими серотипами вируса, что привело к нарушению иммунных механизмов. Специфических средств лечения лихорадки денге не существует. При геморрагической лихорадке и шоковом синдроме используют кортикостероиды и антибиотики, но их эффективность не доказана. В случаях шокового синдрома рекомендуются меры по поддержанию водного баланса организма и применение средств, увеличивающих объем плазмы. Продолжается разработка вакцин против лихорадки денге, но пока без определенных результатов. Более того, если будет доказано, что развитие тяжелых геморрагических и шоковых синдромов обусловлено сенсибилизацией (повышением чувствительности) иммунной системы, то сама целесообразность иммунизирующей вакцинации окажется сомнительной.

Клещевой энцефалит (весеннее-летний, таежный, русский, дальневосточный; tick-borne encephalitis - англ.; Encephalitis ocarina - лат.) - природно-очаговая трансмиссивная (передающаяся клещами) вирусная инфекция, характеризующаяся преимущественным поражением центральной нервной системы. Инкубационный период заболевания длится 7-14 суток, возможно дольше. Обычно начинается с лихорадки и миалгии, которые длятся 2-4 суток. Полагают, что этот период соответствует вирусемии. Затем на несколько дней наступает кратковременная ремиссия, после чего возникает вторая волна лихорадки и появляются менингеальные симптомы. Спектр клинических проявлений этой стадии болезни довольно широк - от серозного менингита, свойственного относительно молодым людям, до тяжелейшего энцефалита с комой, эпилептическими припадками, тремором и двигательными нарушениями, длящегося 7-10 суток. Поражение спинного и продолговатого мозга чревато параличом дыхательных мышц и мышц плечевого пояса. Большинство больных выздоравливают, но иногда остаются тяжелые неврологические дефекты. Этиотропного лечения этой инфекции не существует. Выпускаются эффективные инактивированные вакцины против клещевого энцефалита с солями алюминия в качестве адъюванта. Вакцина против клещевого энцефалита австрийского производства обеспечивает противовирусный иммунитет, если ее вводить дважды с интервалом 0,5-3 мес. Остальные вакцины примерно столь же эффективны. В редких случаях вакцинация осложняется синдромом Гийена-Барре, поэтому она показана только людям, проживающим в природных очагах или посещающим их в весенне-летний период. В природных очагах инфицировано от 0,2 до 4,0% клещей, поэтому в случае обнаружения на теле присосавшихся клещей встает вопрос об экстренной иммунопрофилактике. Можно незамедлительно прибегнуть к введению иммуноглобулина против клещевого энцефалита, однако у многих людей существуют противопоказания к его введению в силу наличия проявлений аллергических реакций организма.

Заболевание энцефалит Сент-Луис (Saint-Lois encephalitis - анг.; Encephalitis Americana - лат.) эндемично для большей территории США, Мексики, Аргентины, Суринама, стран Карибского бассейна, Колумбии, юга Канады. Во время вспышки заболевание охватывает от сотен до тысячи человек с 15-30% летальностью. В Северной Америке природные очаги поддерживаются дикими птицами и комарами рода Culex. Начало заболевание внезапное, с лихорадкой, тошнотой, рвотой, головной болью, менингеальным синдромом. Затем появляется атаксия, нарушение речи, непроизвольное мочеиспускание, спутанность сознания, тремор. Возможное молниеносное течение. В 5% случаев развиваются остаточные изменения ЦНС. До настоящего времени специфических средств профилактики и лечения заболевания не разработаны. Попытки разработать вакцину не увенчались успехом. Так, применение формолвакцины из мозга зараженных мышей создает у привитых людей лишь кратковременный иммунитет. Применяют лишь патогенетические и симптоматические средства.

Заболевание энцефалит долины Муррей (Murray Valley encephalitis - англ.; Encephalitis Avstralia - лат.) эндемично для территории Австралии, Новой Зеландии и окружающей территории. Во время сезонной вспышки летальность достигает 20-50%. В Австралии природные очаги поддерживаются дикими птицами (цаплями) и комарами рода Culex. Заболевание сопровождается лихорадкой, головной болью, менингиальным синдромом, нередко параличами. До настоящего времени специфических средств профилактики и лечения заболевания не разработаны. Применяют лишь патогенетические и симптоматические средства.

Следует отметить, что единственным химиотерапевтическим средством, оказывающим некоторый положительный эффект при инфекциях, вызываемых (+)РНК-содержащими вирусами, является рибавирин. Однако рибавирин является относительно токсичным средством, часто вызывающим анемию. Основной его особенностью является длительное депонирование в эритроцитах. В результате, следы рибавирина обнаруживаются даже через 6 месяцев после окончания курса терапии. Упоминается также о тератогенном действии рибавирина.

Раскрытие изобретения

Авторами изобретения неожиданно обнаружено, что глутарилгистамин может использоваться в качестве нетоксичного противовирусного средства при инфекциях, вызываемых вирусами, относящимися к родам энтеровирус и флавивирус (без ограничения перечисленными).

С учетом изложенного, настоящее изобретение относится к средству для лечения и/или профилактики заболеваний, вызываемых (+)РНК-содержащими вирусами, принадлежащими роду энтеровирусов или роду флавивирусов, представляющему собой глутарилгистамин, который соответствует следующей формуле

Глутарилгистамин, согласно изобретению, вводится в твердой лекарственной форме.

Изобретение далее охватывает способ профилактики и лечения заболеваний, вызываемых (+)РНК-содержащими вирусами, принадлежащими роду энтеровирусов или роду флавивирусов, предусматривающий введение пациенту эффективного количества глутарилгистамина или его фармацевтически приемлемой соли.

Вирус, принадлежащий семейству энтеровирусов, может быть выбран из группы, включающей риновирусы и энтеровирус типа 71. Вирус, принадлежащий к семейству флавивирусов, может быть выбран из группы, включающей вирус Западного Нила, вирус денге, вирус клещевого энцефалита, вирус энцефалита Сент-Луис, вирус энцефалита долины Муррей и вирус желтой лихорадки. Доза глутарилгистамина или его фармацевтически приемлемой соли может составлять приблизительно 0,1-30 мг/кг массы тела пациента. При этом разовая доза глутарилгистамина может составлять приблизительно 100 мг. Предпочтительная длительность приема глутарилгистамина составляет от 5 дней до 12 месяцев. В одном из вариантов изобретения, осуществляют профилактику или лечение обострений астмы, бронхита и муковисцидоза, вызванных риновирусом.

Далее, изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения заболеваний, вызываемых (+)РНК-содержащими вирусами, принадлежащими роду энтеровирусов или роду флавивирусов, содержащей эффективное количество глутарилгистамина или его фармацевтически приемлемой соли. Эффективное количество глутарилгистамина или его фармацевтически приемлемой соли, предпочтительно, составляет 0,1-30 мг/кг массы тела. При этом доза глутарилгистамина может составлять 100 мг при введении 1 раз в день.

Изобретение также относится к набору для лечения заболеваний, вызываемых (+)РНК-содержащими вирусами, принадлежащими роду энтеровирусов или роду флавивирусов, включающему композицию по изобретению и инструкции по ее применению.

Кроме этого, изобретение относится к применению глутарилгистамина или его фармацевтически приемлемой соли для производства фармацевтической композиции для лечения заболеваний, вызываемых (+)РНК-содержащими вирусами, принадлежащими к роду энтеровирусов или роду флавивирусов. Изобретение также включает применение глутарилгистамина или его фармацевтически приемлемой соли для лечения заболеваний, вызываемых (+)РНК-содержащими вирусами, принадлежащими роду энтеровирусов или роду флавивирусов.

В качестве фармацевтически приемлемых солей глутарилгистамина в настоящем изобретении могут быть использованы его соли с щелочными и щелочноземельными металлами, предпочтительно натриевая, калиевая, литиевая соли.

Глутарилгистамин или его соли вводят в эффективном количестве, которое обеспечивает желаемый терапевтический результат.

Глутарилгистамин или его соли могут быть введены пациенту в дозах, составляющих от 0,1 до 30 мг/кг веса тела человека в день, предпочтительно в дозах от 0,3 до 1,5 мг/кг один или более раз в день.

При этом следует отметить, что конкретная доза для каждого конкретного пациента будет зависеть от многих факторов, таких как возраст, вес тела, пол, общее состояние здоровья и режим питания пациента, время и способ введения лекарственного средства, скорость его выведения из организма, а также тяжесть заболевания у данного индивида, подвергаемого лечению.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению содержат глутарилгистамин или его фармацевтически приемлемую соль в количестве, эффективном для достижения желаемого результата, и могут быть приготовлены в виде стандартных лекарственных форм (например, в твердой, полутвердой или жидкой формах), содержащих глутарилгистамин или его соль в качестве активного ингредиента в смеси с носителем или наполнителем, пригодным для внутримышечного, внутривенного, перорального, сублингвального, ингаляционного, интраназального, интраректального и трансдермального применения. Активный ингредиент может быть включен в композицию вместе с обычно используемыми нетоксичными фармацевтически приемлемыми носителями, пригодными для изготовления растворов, таблеток, пилюль, капсул, драже, суппозиториев, эмульсий, суспензий, мазей, гелей, пластырей и любых других лекарственных форм.

В качестве наполнителей могут быть использованы различные вещества, такие как сахариды, например глюкоза, лактоза или сахароза, маннит или сорбит, производные целлюлозы и/или фосфаты кальция, например, трикальций фосфат или кислый фосфат кальция; в качестве связующего компонента могут быть использованы такие, как крахмальная паста, например, кукурузный, пшеничный, рисовый, картофельный крахмал, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы и/или поливинилпирролидон. При необходимости могут быть использованы разрыхляющие агенты, такие как вышеупомянутые крахмалы и карбоксиметилкрахмал, поперечно сшитый поливинилпирролидон, агар или альгиновая кислота или ее соль, такая как альгинат натрия.

Могут быть использованы необязательные добавки, такие как агенты, регулирующие текучесть, и смазывающие агенты, такие как диоксид кремния, тальк, стеариновая кислота и ее соли, такие как стеарат магния или стеарат кальция, и/или пропиленгликоль.

В качестве добавок могут быть также использованы стабилизаторы, загустители, красители и отдушки.

В качестве мазевой основы могут быть использованы углеводородные мазевые основы, такие как вазелин белый и желтый (Vaselinum album, Vaselinum flavum), вазелиновое масло (Oleum Vaselini), мазь белая и жидкая (Unguentum album, Unguentum flavum), а в качестве добавок для придания более плотной консистенции - такие как твердый парафин и воск; абсорбтивные мазевые основы, такие как гидрофильный вазелин (Vaselinum hydrophylicum), ланолин (Lanolinum), кольдкрем (Unguentum leniens); мазевые основы, смываемые водой, такие как гидрофильная мазь (Unguentum hydrophylum); водорастворимые мазевые основы, такие как полиэтиленгликолевая мазь (Unguentum Glycolis Polyaethyleni), бентонитовые основы и другие.

В качестве основы для гелей могут быть использованы метилцеллюлоза, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, оксипропилцеллюлоза, полиэтиленгликоль или полиэтиленоксид, карбопол.

В качестве основы для суппозитория могут быть использованы основы, не растворимые в воде, такие как масло какао; основы, растворимые в воде или смешиваемые с водой, такие как желатино-глицериновые или полиэтиленоксидные; комбинированные основы - мыльно-глицериновые.

При приготовлении стандартной лекарственной формы количество активного ингредиента, используемого в комбинации с носителем, может варьироваться в зависимости от реципиента, подвергающегося лечению, от конкретного способа введения лекарственного средства.

Так, например, при использовании глутарилгистамина или его солей в виде растворов для инъекций, содержание активного агента в них составляет 0,1-5%. В качестве разбавителей могут быть использованы 0,9% раствор хлорида натрия, дистиллированная вода, раствор новокаина для инъекций, раствор Рингера, раствор глюкозы, специфические добавки для растворения. При введении в организм глутарилгистамина или его солей в виде таблеток и суппозиториев их количество составляет 10-300 мг на стандартную лекарственную форму.

Лекарственные формы настоящего изобретения получают по стандартным методикам, таким как, например, процессы смешивания, гранулирования, формирования драже, растворения и лиофилизации.

Следует отметить, что при длительном применении глутарилгистамина или его солей в терапевтических дозах и в дозах, на порядок превышающих терапевтические, не выявлено отрицательных побочных действий.

Осуществление изобретения

Далее приведено детальное описание экспериментальных примеров, подтверждающих эффективность глутарилгистамина для профилактики и лечения заболеваний в соответствии с данным изобретением, где приведенные примеры не предназначены для ограничения объема изобретения.

Пример 1

Противовирусное действие глутарилгистамина в отношении риновируса человека на экспериментальной модели in vivo

Для проведения исследований был использован штамм риновируса человека (HRV 1B), предварительно адаптированный к размножению в легких у мышей.

Специфичность HRV контролировали путем постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР), Real-time ПЦР (АмплиСенс, Россия) и двухраундовой ПЦР со специфическими праймерами с РНК, выделенной с помощью «Рибо-сорб» производства «Амплисенс» из суспензии легких и трахеи зараженных HRV мышей.

Белых мышей Balb/c, самцов, весом 8-10 г заражали вируссодержащим материалом интраназально, под легким эфирным наркозом в объеме 0,05 мл/мышь.

Работу с мышами проводили согласно инструкциям по работе с лабораторными животными. Перед исследованием животных подвергали 5-дневному карантину.

Животные получали стандартный рацион питания и содержались в равноценных условиях. Мышей в опытах распределяли в группы по 10 животных в каждой.

Глутарилгистамин вводили перорально 1 раз в сутки, начиная через 12 часов после инфицирования мышей HRV в течение 3 последующих дней. Мышам контрольной группы вводили в тех же условиях физраствор.

Глутарилгистамин вводили в дозе 15 и 30 мг/кг.

Для определения инфекционного титра HRV в суспензиях трахеи и легких мышей через 48 и 72 часа после инфицирования, исследовали 10% суспензии индивидуально от каждой особи серией 10-кратных разведении на культуре клеток Hela. Результат учитывали в ПЦР через 2 суток инкубации при 33°C.

Для каждого разведения изучаемой пробы использовали четыре лунки планшета для которых вычисляли среднее значение титра вируса. За титр вируса принимали то наибольшее разведение супернатанта зараженной культуры, в котором идентифицировалась РНК вируса в ПЦР. Титр выражали обратным значением разведения вируса, в котором определяли РНК HRV (lg/мл представлен как среднее значение lg±m).

Статистический анализ результатов проведен с применением ПО Microsoft Excel

Эффективность глутарилгистамина оценивали по подавлению репродукции вируса в легких через 48 и 72 часа после инфицирования вирусом HRV.

Критериями оценки эффективности глутарилгистамина in vivo являлись снижение накопления вируса в легких, определяемое по инфекционному титру в культуре клеток Hela и непосредственно в суспензиях легких мышей методом ПЦР.

Результаты определения инфекционной активности HRV в суспензиях легких мышей на культуре клеток Hela представлены в таблице 1.

Титрование суспензии легких зараженных HRV мышей показало, что вирус размножается в легких, достигая через 48 часов максимального значения 4,1 lg, а через 72 часа значения 3,2 lg в контрольных группах. Применение глутарилгистамина приводило к достаточно выраженному снижению инфекционной активности HRV на 2,6 и 2,2 lg соответственно, при использовании глутарилгистамина в дозе 30 мг/кг.

При изучении эффективности глутарилгистамина в отношении HRV инфекции у мышей по подавлению и активности вируса непосредственно в суспензиях легких методом ПЦР получены аналогичные результаты. При проведении ПЦР в реальном времени зафиксировано значительное снижение количества копий вирусной РНК через 48 и 72 часа после инфицирования - от 10 до 100 раз в группах мышей, которым вводили глутарилгистамин, по сравнению с контрольными группами.

Таким образом, в настоящем примере показана возможность использования глутарилгистамина в качестве эффективного противовирусного средства, специфически снижающего репродукцию риновируса человека.

Таблица 1
Инфекционный титр вируса HRV в легких мышей на 48 и 72 часа
Препарат	Всего животных в каждой группе (n)	Инфекционный титр вируса в легких lg TCID50	Подавление репродукции вируса (Δlg)	P
Глутарилгистамин 15 мг/кг (48 ч)	10	2,8±0,4	1,3	0,01
Глутарилгистамин 30 мг/кг (48 ч)	10	1,5±0,3	2,6	0,001
Физиологический раствор (48 ч)	10	4,1±0,4
Глутарилгистамин 15 мг/кг (72 ч)	10	2,1±0,3	1,1
Глутарилгистамин 30 мг/кг (72 ч)	10	1,0±0,3	2,2	0,01
Физиологический раствор (72 ч)	10	3,2±0,4

Пример 2

Изучение эффективности глутарилгистамина в отношении экспериментальной формы лихорадки Западного Нила (ЛЗН).

В работе использовали вирус западного Нила, штамм Eg101. Наблюдение за инфицированными животными проводили в течение 21 суток. При этом контролировали их гибель, оценивали показатель среднего времени жизни белых мышей в опытной и контрольных группах.

Основными критериями оценки эффективности in vivo являлись показатели защиты лабораторных животных от гибели и среднее время жизни животных в группе.

Для оценки протективной эффективности глутарилгистамина белых мышей инфицировали подкожно в дозе 10ЛД₅₀. Глутарилгистамин вводили перорально по следующим схемам: профилактика - в дозе 5 мг/кг в течение 4 суток до инфицирования раз в день и за 1 ч до инфицирования; в дозе 30 мг/кг однократно 1 раз в неделю; лечение - в дозе 5 мг/кг через 24 ч после инфицирования и далее в течение 7 суток; в дозе 30 мг/кг 1 раз в сутки через 24 и 48 ч после инфицирования, затем 15 мг/кг 1 раз через 72, 96 и 120 ч.

Результаты оценки эффективности, представленные в таблице 2, свидетельствуют о том, что глутарилгистамин эффективно защищает инфицированных мышей от гибели при применении его по профилактической и лечебной схемам в дозе 5 мг/кг. Защита от гибели составила 42,9% и 37,8 соответственно. При этом наблюдали значительное (на 4,2 и 2,8 суток, соответственно) увеличение показателя времени жизни животных в группе.

Таблица 2
Результаты изучения эффективности глутарилгистамина в отношении экспериментальной формы лихорадки Западного Нила у белых мышей
Лекарственное средство	Схема	Коэффициент защиты, %	Среднее время жизни, сутки	Удлинение среднего времени жизни, Δ, сутки
Глутарилгистамин	-96 ч, -72 ч, -48 ч, -24 ч, -1 ч	42,9	11,2	4,2
+24 ч, +48 ч, +72 ч, +96 ч, +120 ч, +144 ч, +168 ч	37,8	9,8	2,8
Контроль дозы вируса (без препарата)	-	7,0	-
Контроль стада	-	21,0	-

При второй профилактической схеме (таблица 3) защитная эффективность глутарилгистамина в дозе 30 мг/кг в отношении экспериментальной формы лихорадки Западного Нила у белых мышей при однократном применении за 144 ч до заражения составила 40,0%, а удлинение среднего времени жизни животных - 3,7 суток.

Таблица 3
Результаты оценки профилактической эффективности глутарилгистамина в отношении экспериментальной формы лихорадки Западного Нила у белых мышей при однократном применении до заражения
Препарат	Доза препарата, мг/кг	Схема применения препарата	Защита от гибели, %	Среднее время жизни животных в группе, сутки	Удлинение среднего время жизни животных в группе, Δ, день
Глутарилгистамин	30	-144 ч	40,0	10,8	3,7
Контроль дозы вируса (без препарата)	-	7,1	-
Контроль стада		21,0

Результаты оценки эффективности глутарилгистамина, представленные в таблице 4, свидетельствуют о том, что средство эффективно защищает инфицированных мышей от гибели при применении его по лечебной схеме (2 дня по 30 мг/кг ежедневно однократно, затем 3 суток по 15 мг/кг ежедневно однократно). Защита от гибели составила 50,0%, а увеличение показателя времени жизни животных в группе составило 3,5 суток. Препарат сравнения рибавирин защищал от гибели 50% животных при профилактике в дозе 20 мг/кг. Следует отметить, что при лечебной схеме защитная эффективность рибавирина составила всего 10,0%.

Таким образом, глутарилгистамин в отношении экспериментальной формы лихорадки западного Нила (ЛЗН) эффективно защищает от гибели инфицированных животных.

Таблица 4
Результаты оценки лечебной эффективности глутарилгистамина в отношении экспериментальной формы лихорадки Западного Нила у белых мышей
Препарат	Доза препарата, мг/кг	Схема применения препарата	Защита от гибели, процент	Среднее время жизни животных в группе, сутки	Удлинение среднего время жизни животных в группе, Δ, день
Глутарилгистамин	30/15	+24 ч, +48 ч, +72 ч, +96 ч, +120 ч	50,0	11,5	4,5
Рибавирин	20	10,0	7,2	0,2
Контроль дозы вируса (без препарата)	-	7,0	-
Контроль стада		21,0

Пример 3

Изучение эффективности глутарилгистамина в отношении экспериментальной формы вируса клещевого энцефалита (КЭ)

Оценку эффективности глутарилгистамина в отношении экспериментальной формы КЭ проводили с использованием белых мышей массой 9-10 г, подкожно инфицированных вирусом КЭ, штамм Софьин, в дозе 30ЛД₅₀. Глутарилгистамин вводили перорально в дозе 5 мг/кг: по профилактической схеме (за 5 суток до инфицирования, ежедневно один раз в сутки); по лечебно-профилактической схеме (за 5 суток до инфицирования, в течение 7 суток после инфицирования, ежедневно один раз в сутки); по лечебной схеме (через 24 ч после инфицирования, в течение 7 суток, ежедневно 1 раз в сутки). По профилактической схеме в дозе 30 мг/кг однократно 1 раз в неделю. По лечебной схеме в дозе 30 мг/кг 1 раз в сутки через 24 и 48 ч после инфицирования, затем 15 мг/кг 1 раз через 72, 96 и 120 ч.

В качестве референс-препарата использован рибавирин - по схеме экстренной профилактики в дозе 20 мг/кг.

Результаты исследований, представленные в таблице 5, свидетельствуют о том, что наибольшая противовирусная эффективность глутарилгистамина выявлена при применении его по лечебно-профилактической схеме. Показано, что защита от гибели составляет 40%, увеличение показателя СВЖ - 4,2 суток. При применении по лечебной или профилактической схемам защитная эффективность глутарилгистамина составила 35%.

Таблица 5
Результаты изучения эффективности глутарилгистамина в отношении экспериментальной формы КЭ у белых мышей
Лекарственное средство	Схема введения лекарственного средства	СВЖ, сутки	Удлинение СВЖ, сутки	Защита от гибели, %
Глутарилгистамин	-96 ч, -72 ч, -48 ч, -24 ч, -1 ч	15,1	3,9	35,0
-120 ч, -96 ч, -72 ч, -48 ч, -24 ч, +1 ч, +24 ч, +48 ч, +72 ч, +96 ч, +120 ч, +144 ч	15,4	4,2	40,0
+1 ч, +24 ч, +48 ч, +72 ч, +96 ч, +120 ч, +144 ч	13,6	2,4	35,0
Рибавирин®	+1 ч, +24 ч, +48 ч, +72 ч, +96 ч, +120 ч, +144 ч	15,0	3,8	35,0
Контроль дозы вируса (без препарата)	-	11,2
Контроль дозы	-	21,0	-	-

«-» - введение лекарственного средства до инфицирования;
«+» - введение лекарственного средства после инфицирования

При второй профилактической схеме (таблица 6) защитная эффективность глутарилгистамина в дозе 30 мг/кг в отношении экспериментальной формы клещевого энцефалита у белых мышей при однократном применении за 144 ч до заражения составила 30,0%, а удлинение среднего времени жизни животных - 3,1 суток.

Таблица 6
Результаты оценки профилактической эффективности глутарилгистамина в дозе 30 мг/кг в отношении экспериментальной формы клещевого энцефалита у белых мышей при однократном применении до заражения
Лекарственное средство	Схема введения лекарственного средства	СВЖ, сутки	Удлинение СВЖ, сутки	Защита от гибели, %
Глутарилгистамин	-144 ч	10,5	3,1	30,0
Контроль дозы вируса (без препарата)	7,4
Контроль стада	21,0

Результаты оценки эффективности, представленные в таблице 7 свидетельствуют о том, что глутарилгистамин эффективно защищает инфицированных мышей от гибели при применении его по лечебной схеме (2 дня по 30 мг/кг ежедневно однократно, затем 3 суток по 15 мг/кг ежедневно однократно). Защита от гибели составила 40,0%, а увеличение показателя времени жизни животных в группе составило 3,2 суток. Следует отметить, что при лечебной схеме защитная эффективность рибавирина составила всего 15,0%.

Таким образом, глутарилгистамин в отношении экспериментальной формы клещевого энцефалита эффективно защищает от гибели инфицированных животных.

Таблица 7
Результаты оценки лечебной эффективности глутарилгистамина в дозе 30/15 мг/кг в отношении экспериментальной формы клещевого энцефалита у белых мышей
Лекарственное средство	Схема введения лекарственного средства	СВЖ, сутки	Удлинение СВЖ, сутки	Защита от гибели, %
Глутарилгистамин	+24 ч, +48 ч, +72 ч, +96 ч, +120 ч	10,1	3,2	40,0
Рибавирин	7,2	0,3	15,0
Контроль дозы вируса (без препарата)	6,9
Контроль стада	21,0

Пример 4

Изучение эффективности глутарилгистамина в отношении экспериментальной формы лихорадки денге

Для оценки противовирусной активности белых мышей инфицировали интрацеребрально вирусом лихорадки денге. Глутарилгистамин вводили перорально по следующим схемам: профилактика - в дозе 5 мг/кг в течение 4 суток до инфицирования раз в день и за 1 ч до инфицирования; в дозе 30 мг/кг однократно 1 раз в неделю; лечение - в дозе 5 мг/кг через 24 ч после инфицирования и далее в течение 7 суток; в дозе 30 мг/кг 1 раз в сутки через 24 и 48 ч; затем 15 мг/кг 1 раз в сутки через 72, 96 и 120 ч после инфицирования. Наблюдение за инфицированными животными проводили в течение 21 суток. Изучение биопроб осуществляли на 5 сутки после заражения.

Результаты оценки эффективности, представленные в таблице 8, свидетельствуют о том, что глутарилгистамин эффективно подавляет размножение вируса денге в крови белых мышей при применении его по профилактической и лечебной схемам в дозе 5 мг/кг. Коэффициент ингибирования накопления вируса составил 95,5%.

Таблица 8
Результаты изучения эффективности подавления размножения вируса денге в крови интрацеребрально инфицированных белых мышей в дозе 5 мг/кг в отношении экспериментальной формы лихорадки денге у белых мышей.
Препарат	Схема	Уровень накопления вируса в крови, lg БОЕ/мл	Снижение уровня накопления вируса, lg	Коэффициент ингибирования накопления вируса, %
Глутарилгистамин	-96 ч, -72 ч, -48 ч, -24 ч, -1 ч	5,0	1,6	95,5
+24 ч, +48 ч, +72 ч, +96 ч, +120 ч, +144 ч, +168 ч	4,8	1,8	98,6
Контроль дозы вируса (без препарата)	6,6

Результаты оценки эффективности, представленные в таблице 9, свидетельствуют о том, что глутарилгистамин эффективно подавляет размножение вируса денге в крови белых мышей при применении его по лечебной схеме (2 дня по 30 мг/кг ежедневно однократно, затем 3 суток по 15 мг/кг ежедневно однократно). Коэффициент ингибирования накопления вируса составил 99,6%. Следует отметить, что при лечебной схеме коэффициент подавления размножения вируса в крови животных для рибавирина составил лишь 83,4%.

Таким образом, глутарилгистамин в отношении лихорадки денге эффективно подавляет репликацию вируса у инфицированных животн