Производные лантионина

Производные лантионина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к новому соединению, проявляющему активность агониста CaSR, и пищевой композиции, содержащей новое соединение, а также придающее кокуми средство.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

В последние годы возрастают потребности, связанные с вкусовыми ощущениями, вследствие, например, диверсификации пищевых привычек человека, и это соответственно ведет к росту потребности в разработке превосходного придающего кокуми средства, которое может придавать «кокуми» различным продуктам питания. При этом кокуми нельзя выразить просто в понятиях пяти основных вкусов, т.е. сладкого вкуса, соленого вкуса, кислого вкуса, горького вкуса и вкуса, называемого «умами», и, таким образом, он обозначает вкусовые ощущения, которые усиливаются даже в пограничных вкусах, относящихся к указанным выше пяти основным вкусам, таких как густая консистенция, рост (заполненность рта), непрерывность и гармония, в дополнение к предшествующим пяти основным вкусам.

С другой стороны, «кальцийчувствительный рецептор» (CaSR), также называемый «кальциевым рецептором», сигналы, испускаемые кальцийчувствительным рецептором, могут управлять различными видами функций в живом организме, и вещества, обладающие активностью агониста CaSR, таким образом, можно использовать в качестве придающего кокуми средства в продуктах питания или т.п. (см. патентный документ 1 и непатентный документ 1, указанные ниже).

Кроме того, в течение длительного времени глутатион был известен в качестве соединения, обладающего придающей кокуми активностью. Однакой глутатион содержит цистеин в своей молекуле, который представляет собой содержащую атом серы аминокислоту, и, следовательно, он будет вызывать множество проблем, подлежащих преодолению, связанных, например, со стабильностью и испусканием плохого запаха.

Соответственно, желательно проводить поиск разнообразных соединений, которые обладают активностью агониста CaSR, чтобы найти вещество, которое обладает более превосходной придающей кокуми функцией, в частности, придающей начальный вкус кокуми функцией, которое обладает превосходной стабильностью, которое можно легко получать при низкой стоимости и которое может придавать кокуми различным продуктам питания; и обеспечить придающее кокуми средство, которое содержит такое полезное вещество, и композицию придающего кокуми средства, которая аналогичным образом содержит это вещество и другое вещество, обладающее активностью агониста CaSR, в комбинации.

ЛИТЕРАТУРА ИЗВЕСТНОГО УРОВНЯ ТЕХНИКИ

Патентный документ

Патентный документ 1: брошюра опубликованного международного патента № 2007/055393.

Непатентный документ

Непатентный документ 1: The Journal of Biological Chemistry, 2010, 285 (2), pp. 1016-22.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Главная цель настоящего изобретения состоит в поиске разнообразных соединений, обладающих активностью агониста CaSR, для того, чтобы получить вещество, обладающее более превосходной придающей кокуми функцией, и более конкретно, в том, чтобы предоставить придающее кокуми средство, которое содержит указанное выше вещество, и композицию придающего кокуми средства, которая аналогичным образом содержит указанное выше вещество и другое вещество, также обладающее активностью агониста CaSR, в комбинации. Дополнительная цель настоящего изобретения состоит в том, чтобы предоставить пищевую композицию, содержащую вещество в предварительно определяемой концентрации.

Авторы данного изобретения провели тщательное исследование различных соединений и в результате обнаружили, что производное лантионина, имеющее структуру, представленную следующей общей формулой (I), которое является новым соединением (далее это соединение будет обозначаться как соединение по настоящему изобретению или производное лантионина по (или в соответствии с) настоящим изобретением), обладает высокой активностью агониста CaSR и чрезвычайно превосходной придающей кокуми функцией. Авторы данного изобретения также обнаружили, что добавление соединения по настоящему изобретению, обнаруженного таким образом, сделает возможным получение подходящей пищевой композиции, у которой кокуми (богатый вкус) усилен или улучшен. Таким образом, авторы настоящего изобретения выполнили настоящее изобретение.

Более конкретно, настоящее изобретение в настоящем документе предусматривает соединение, которое имеет структуру, представленную следующей общей формулой (I), или его съедобную соль:

(I)

где каждый R1 и R2 независимо представляет собой атом водорода или низшую алкильную группу, содержащую от 1 до 3 углеродных атомов;

A представляет собой метиленовую группу или оксигруппу (-О-); и

X представляет собой алкиленовую группу, которая содержит от 1 до 5 углеродных атомов, при условии, что одна из метиленовых групп, в составе алкиленовой группы, может быть заменена на тиогруппу (-S-), дисульфидную группу (-S-S-), оксигруппу (-O-), иминогруппу (-NH-) или алкилиминогруппу, содержащую от 1 до 3 углеродных атомов (-NRa-, где Ra представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 3 углеродных атомов), и что алкиленовая группа может быть дополнительно замещена 1-6 алкильными группами, каждая из которых содержит от 1 до 3 углеродных атомов.

Кроме того, настоящее изобретение относится к пищевой композиции, содержащей соединение, представленное указанной выше формулой (I), или его съедобную соль в количестве в диапазоне от 10 частей на миллиард до 99,9% по массе (далее ее также обозначают как «пищевая композиция по настоящему изобретению»).

Настоящее изобретение дополнительно относится к придающему кокуми средству, содержащему, в качестве эффективного компонента, соединение, представленное указанной выше формулой (I), или его съедобную соль (далее его также обозначают как «придающее кокуми средство по настоящему изобретению»).

Кроме того, настоящее изобретение аналогичным образом предусматривает композицию придающего кокуми средства, которая содержит (a) соединение, представленное указанной выше общей формулой (I), или его съедобную соль; и (b) одну или по меньшей мере две аминокислоты или пептида, выбранные из группы, состоящей из γ-Glu-X-Gly (где X представляет собой аминокислоту или производное аминокислоты), γ-Glu-Val-Y (где Y представляет собой аминокислоту или производное аминокислоты), γ-Glu-Abu, γ-Glu-Ala, γ-Glu-Gly, γ-Glu-Cys, γ-Glu-Met, γ-Glu-Thr, γ-Glu-Val, γ-Glu-Orn, Asp-Gly, Cys-Gly, Cys-Met, Glu-Cys, Gly-Cys, Leu-Asp, D-Cys, γ-Glu-Met (O), γ-Glu-γ-Glu-Val, γ-Glu-Val-NH₂, γ-Glu-Val-ol, γ-Glu-Ser, γ-Glu-Tau, γ-Glu-Cys (S-Me) (O), γ-Glu-Leu, γ-Glu-Ile, γ-Glu-t-Leu и γ-Glu-Cys (S-Me).

Кроме того, настоящее изобретение также относится к соединению, имеющему структуру, представленную следующей общей формулой (IA), или его химически приемлемой соли, которые можно использовать в качестве промежуточных соединений для получения соединения, представленного указанной выше общей формулой (I), или его съедобной соли:

(IA)

где каждый R1' и R2' независимо представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 углеродных атомов;

R3' представляет собой атом водорода, алкильную группу, содержащую от 1 до 4 углеродных атомов, бензильную группу или 9-флуоренилметильную группу;

R4' представляет собой трет-бутоксикарбонильную группу, бензилоксикарбонильную группу или 9-флуоренилметилоксикарбонильную группу;

R5' представляет собой гидроксильную группу, алкоксигруппу, содержащую от 1 до 4 углеродных атомов, бензилоксигруппу, аминогруппу (-NH₂) или алкиламиногруппу, содержащую от 1 до 3 углеродных атомов;

A представляет собой метиленовую группу или оксигруппу; и

X представляет собой алкиленовую группу, содержащую от 1 до 5 углеродных атомов, при условии, что одна из метиленовых групп, включенных в алкиленовую группу, может быть заменена на тиогруппу, дисульфидную группу, оксигруппу, иминогруппу или алкилиминогруппу, содержащую от 1 до 3 углеродных атомов, и что алкиленовая группа может быть дополнительно замещена 1-6 алкильными группами, каждая из которых содержит от 1 до 3 углеродных атомов.

Настоящее изобретение также может предусматривать придающее кокуми средство и композицию придающего кокуми средства, которые обладают чрезвычайно превосходной придающей кокуми функцией и превосходной стабильностью и которые легко получать при низкой стоимости. Кроме того, настоящее изобретение аналогичным образом может предусматривать превосходную пищевую композицию, которая содержит вещество, обладающее превосходной придающей кокуми функцией, в концентрации, равной или превышающей предварительно определяемый уровень.

ВАРИАНТ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Далее настоящее изобретение описано более подробно.

В настоящем изобретении, используемый в настоящем документе термин «алкильная группа, содержащая от 1 до 3 углеродных атомов» обозначает линейную или разветвленную алкильную группу, и более конкретно, алкильная группа, содержащая от 1 до 3 углеродных атомов, может представлять собой, например, метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу и изопропильную группу, и предпочтительно используемое в настоящем документе включает, например, метильную группу или этильную группу.

Кроме того, используемый в настоящем документе термин «алкилиминогруппа, содержащая от 1 до 3 углеродных атомов» обозначает иминогруппу, замещенную алкильной группой, содержащей от 1 до 3 углеродных атомов, такой как те, что перечислены выше.

Предпочтительно используемое в настоящем изобретении в качестве соединений, представленных указанной выше общей формулой (I), включают те, что точно определены ниже:

Соединения, представленные общей формулой (I), где каждый R1 и R2 предпочтительно представляет собой атом водорода;

A предпочтительно представляет собой метиленовую группу;

X предпочтительно представляет собой триметиленовую группу, в которой одна из метиленовых групп, включенных в нее, заменена на тиогруппу и, в частности, группу: -CH₂-S-CH₂-; или

X предпочтительно представляет собой тетраметиленовую группу, в которой одна из ее метиленовых групп заменена на тиогруппу, или триметиленовую группу, которая замещена алкильной группой, содержащей от 1 до 3 углеродных атомов, и одна из метиленовых групп которой заменена на тиогруппу, и X, в частности, предпочтительно представляет собой группу, выбранную из -СН₂-S-СН₂-CH₂-, -CH(CH₃)-S-CH₂- или -CH₂-S-CH(CH₃)-; или

X аналогичным образом предпочтительно представляет собой триметиленовую группу.

В отношении углеродных атомов a и b, присутствующих в структуре кольца в соединении, представленном общей формулой (I), соединения, имеющие любую возможную стерическую конфигурацию, можно использовать в настоящем изобретении, но их предпочтительная конфигурация представляет собой ту, что представлена следующими общими формулами (I-1) и (I-2), при этом конфигурация, представленная формулой (I-1), является особенно предпочтительной. Кроме того, в отношении углерода с, присутствующего в соединении, предпочтительными являются соединения, каждое из которых имеет S-конфигурацию:

Более конкретно, соединения, точно определенные ниже, или их съедобные соли предпочтительно используют в настоящем изобретении в качестве соединений, представленных общей формулой (I), или их съедобных солей:

Соединения, представленные общей формулой (I), в которой каждый R1 и R2 представляет собой атом водорода; A представляет собой метиленовую группу; и X представляет собой триметиленовую группу, замещенную тиогруппой;

Соединения, представленные следующей общей формулой (I-1а):

(I-1a)

Соединения, представленные следующей общей формулой (IIa):

(IIa)

Соединения, имеющие следующую стерическую конфигурацию и представленные указанной выше общей формулой (IIa); среди этих соединений любое из соединений, представленных следующими структурными формулами 8a-8d, можно использовать в настоящем изобретении, при этом, в частности, предпочтительно в настоящем документе используют соединение структурной формулы 8b:

Соединения, представленные указанной выше общей формулой (I), в которых каждый R1 и R2 представляет собой атом водорода; A представляет собой метиленовую группу; X представляет собой тетраметиленовую группу, замещенную тиогруппой, или триметиленовую группу, замещенную алкильной группой, содержащей от 1 до 3 углеродных атомов, и в которой одну из ее метиленовых групп заменяют на тиогруппу;

Соединения, представленные следующими общими формулами (IIb) и (IIc):

(IIb)

(IIc)

где R представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 3 углеродных атомов.

Конкретные примеры указанных выше съедобных солей включают, например, соли аммония, соли щелочных металлов (их примерами являются, например, соли натрия и соли калия, которые предпочтительно используют в настоящем изобретении) и соли щелочноземельных металлов (их примерами являются, например, соли кальция и соли магния, которые предпочтительно используют в настоящем изобретении); и соли органических оснований, такие как соли лизина и альгинаты для достаточно кислых соединений в соответствии с настоящим изобретением. Кроме того, съедобные соли могут аналогичным образом включать, например, неорганические соли, например, соляной кислоты; или соли органических кислот, таких как уксусная кислота, лимонная кислота, молочная кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота и яблочная кислота для достаточно основных соединений в соответствии с настоящим изобретением.

Кроме того, примеры указанных выше химически приемлемых солей включают те, что перечислены выше в связи со съедобными солями.

Способы получения

Типичные способы получения соединений по настоящему изобретению подробно описаны ниже:

В этой связи, иногда будет эффективным, с точки зрения методики получения, в следующих способах получения, замещать некоторые функциональные группы, входящие в исходные вещества или промежуточные соединения, подходящими защитными группами, т.е. группами, каждую из которых можно легко превратить в исходные функциональные группы, в зависимости от типов функциональных групп. Впоследствии, в случае необходимости, защитные группы можно удалить для того, чтобы таким образом получить каждое желаемое соединение. В качестве функциональных групп могут быть перечислены, например, аминогруппа, гидроксильная группа и карбоксильнаЯ группа, и примеры защитных групп для них включают, например, трет-бутоксикарбонильную группу (Boc), бензилоксикарбонильную группу (Cbz) и 9-флуоренилметоксикарбонильную группу (Fmoc) в качестве защитных групп для аминогрупп; и трет-бутильную группу (t-Bu) и бензильную группу (Bn или Bzl) в качестве защитных групп для карбоксильной группы. Эти защитные группы, которые могут быть использованы в настоящем документе, более подробно описаны в статье, названной: «Protective Groups in Organic Synthesis», третье издание, авторы T.W. Green & P.G.M. Wuts, публикация JOHN WILLY & SONS, INC. Эти защитные группы можно соответствующим образом выбирать и использовать, при этом принимая во внимание конкретные условия реакции, подлежащие использованию. Способ, раскрытый в указанной выше ссылочной статье, можно соответствующим образом применять для введения защитной группы и для ее удаления (разблокирование). Например, это показывает, что функциональные группы Prot 1 и Prot 2, описанные в следующем способе получения, используют в качестве таких функциональных групп, но настоящее изобретение не ограничено этими конкретными примерами.

Соединение, представленное общей формулой (I) в соответствии с настоящим изобретением, например, можно получать в соответствии со схемой синтеза I, подробно изложенной ниже:

Схема синтеза I

Где определения заместителей, встречающихся в этих формулах, аналогичны тем, что точно определены выше в связи с указанной выше общей формулой (I) или (IA).

Соединение (X) конденсируют с производным глутаминовой кислоты (XI) в присутствии основания, при этом используя конденсирующий агент, чтобы таким образом получить соединение γ-глутамила (XII). Впоследствии, все защитные группы для карбоксильных и аминогрупп соединения (XII) удаляют, чтобы таким образом получить желаемое соединение (I).

Соединение, представленное общей формулой (I), полученное в соответствии с указанным выше способом, можно выделять и очищать любым известным способом, таким как концентрация при пониженном давлении, экстракция растворителем, кристаллизация и/или хроматографический способ.

Кроме того, соединение, представленное указанной выше общей формулой, в которой каждый R1' и R2' представляет собой атом водорода, и X представляет собой группу: -CH₂-S-СН₂-, в качестве примера исходного вещества (X), например, можно получать в соответствии со следующей схемой синтеза II, приведенной ниже:

Схема синтеза II

где Prot 1-Prot 4 независимо представляют собой подходящие защитные группы, соответственно.

Если объяснять подробно, соединение (III) сначала восстанавливают трифенилфосфином или т.п., с образованием тиола (IV). Затем соединение простого тиоэфира (VI) получают посредством реакции между полученным соединением (IV) и алкилгалогенидом в присутствии основания. После частичного удаления защитных групп с получаемого соединения (VI), последнее превращают в циклическое соединение (VIII) в присутствии основания, при этом используя конденсирующий агент. После удаления защитной группы аминогруппы, присутствующей на соединении (VIII), полученное соединение конденсируют с производным глутаминовой кислоты (X) с использованием подходящего конденсирующего агента.

Соединение, представленное общей формулой (X), полученное в соответствии с указанными выше процедурами, может быть выделено и очищено любым известным способом, таким как концентрация при пониженном давлении, экстракция растворителем, кристаллизация и/или хроматографический способ.

Указанное выше исходное вещество (X), в котором X представляет собой тетраметиленовую группу, замещенную тиогруппой, можно синтезировать в соответствии, например, со следующей схемой синтеза III, и в соответствии с аналогичным способом, используемым для получения указанного выше соединения:

Схема синтеза III

Где определения заместителей, встречающихся в этих соединениях, аналогичны тем, что уже точно определены выше, и n равно 2.

Указанное выше исходное вещество (X), в котором X представляет собой триметиленовую группу, замещенную тиогруппой, которая замещена алкильной группой, содержащей от 1 до 3 углеродных атомов, можно синтезировать в соответствии со следующей схемой синтеза IV, и в соответствии с аналогичными процедурами, использованными выше, в связи с получением указанного выше соединения:

Схема синтеза IV

Где определения заместителей, встречающихся в этих соединениях, аналогичны тем, что уже точно определены выше.

Указанное выше исходное вещество (X), в котором X представляет собой триметиленовую группу, замещенную оксигруппой, можно синтезировать в соответствии, например, со следующей схемой синтеза V:

Схема синтеза V

1) Способ синтеза циклических соединений с использованием производных азиридина:

2) Способ синтеза циклических соединений посредством межмолекулярной этерификации:

3) Способ синтеза циклических соединений посредством внутримолекулярной этерификации:

Производное лантионина в соответствии с настоящим изобретением обладает превосходным придающим кокуми эффектом по отношению к другому веществу, и, следовательно, производное можно использовать в качестве придающего кокуми средства. Производное лантионина в соответствии с настоящим изобретением можно использовать таким образом, чтобы встраивать его в пищевую композицию, которой следует придать желаемый кокуми, в количестве в диапазоне от 10 частей на миллиард до 99,9% по массе, предпочтительно от 0,05 м.д. до 99,9% по массе и более предпочтительно от 0,1 м.д. до 99,9% по массе, основываясь на общей массе пищевой композиции. Более конкретно, согласно другому аспекту, настоящее изобретение относится к пищевой композиции, содержащей производное лантионина, и предпочтительно к пищевой композиции, содержащей производное лантионина в количестве в диапазоне от 0,05 м.д. до 99,9%.

Кроме того, если используют производное лантионина в соответствии с настоящим изобретением в комбинации с по меньшей мере одним другим исходным веществом для приправы, выбранным из группы, состоящей из аминокислот, таких как глутамат натрия (MSG), нуклеиновых кислот, таких как инозинмонофосфат (IMP), неорганических солей, таких как хлорид натрия, органических кислот, таких как лимонная кислота, и различных типов дрожжевых экстрактов, упомянутое выше может предоставлять предпочтительную приправу, которая обладает усиленным кокуми по сравнению с таковым, наблюдаемым при использовании самого по себе такого другого исходного вещества для приправы. Специалист в данной области может соответствующим образом задать концентрацию производного лантионина в соответствии с настоящим изобретением, когда используют то же самое в комбинации с указанным выше другим исходным веществом для приправы, при этом принимая во внимание результаты сенсорной или органолептической оценки. Однако в одном из примеров будет достаточно использовать производное лантионина в соответствии с настоящим изобретением в количестве в диапазоне приблизительно от 0,1 м.д. приблизительно до 500 м.д., как выражают в единицах конечной концентрации.

В настоящем изобретении термин «кокуми» обозначает вкус, который нельзя выразить посредством пяти основных вкусов, т.е. сладкого вкуса, соленого вкуса, кислого вкуса, горького вкуса и умами (восхитительность), и более конкретно, термин обозначает вкус, который усиливается даже в пограничных вкусах по отношению к указанным выше пяти основным вкусам, таких как густая консистенция, рост (заполненность рта), непрерывность и гармония, в дополнение к усилению указанных выше пяти основных вкусов. В этом отношении, термин «придающий кокуми» обозначает, что усиливаются не только пять основных вкусов, представленных сладким вкусом, соленым вкусом, кислым вкусом, горьким вкусом и вкусом умами, но также пограничные вкусы по отношению к указанным выше пяти основным вкусам, такие как густая консистенция, рост (заполненность рта), непрерывность и гармония, придаются любой желаемой пище. Альтернативно, это аналогичным образом можно называть как «эффект, усиливающий вкус». Соответствующим образом, соединение по настоящему изобретению можно аналогичным образом обозначать как «усилитель вкуса». Соединение по настоящему изобретению можно использовать в качестве усилителя сладкого вкуса, усилителя соленого вкуса, усилителя кислого вкуса, усилителя горького вкуса или усилителя умами.

Кроме того, вкусовые ощущения должны варьировать с течением времени после еды, и это можно обозначить как начальный вкус, средний вкус и остаточный вкус по порядку с течением времени после еды. Это просто относительная концепция. Однако, говоря в общем, начальный вкус, средний вкус и остаточный вкус определяют как воспринимаемые посредством вкусов в течение времени в диапазоне от 0 до 2 секунд, в течение времени в диапазоне от 2 до 5 секунд или после 5 секунд и далее, после еды, соответственно. Кроме того, комбинированный начальный и средний вкусы совместно обозначают как «начально-средний вкус», и комбинированные средний и остаточный вкусы совместно обозначают как «средне-остаточный вкус». Кроме того, «начально-средний вкус» определяют как вкус, воспринимаемый в течение времени в диапазоне от 0 до 5 секунд после еды, а «средне-остаточный вкус» определяют как вкус, воспринимаемый в течение времени в диапазоне от 2 секунд приблизительно до 30 секунд после еды. Что касается оценки на основе указанных выше трех делений, дегустаторам (людям, которые съедают образец и оценивают его вкус) будет сложно сконцентрировать свое внимание на оценке каждого конкретного образца, и, следовательно, обыкновенным является то, что, как правило, используют оценку на основе двух делений.

Эффект вещества, обладающего CaSR активностью, оказываемый на ощущение кокуми и аромата, можно подтвердить с помощью способа, такого как органолептический тест для оценки вкуса образца дегустаторами. В качестве органолептического теста для оценки вкуса образца можно отметить, например, тест, раскрытый в примерах в настоящем описании патента, но настоящее изобретение не ограничено этими конкретными способами.

В этом описании термин «CaSR» обозначает кальцийчувствительный рецептор, который относится к классу С семидоменного трансмембранного рецептора, и его также обозначают как кальциевый рецептор. В этом описании термин «агонист CaSR» обозначает вещество, которое связывается с CaSR, чтобы тем самым активировать его. Кроме того, термин «активировать CaSR», используемый в этом описании, обозначает, что лиганд связан с CaSR, чтобы активировать связанный нуклеотидом гуанином белок и тем самым передавать сигналы. Кроме того, термин «активность агониста CaSR» обозначает такие свойства вещества, что он может быть связан с CaSR, чтобы таким образом активировать его.

Способ скрининга соединения, обладающего такой активностью агониста CaSR, который содержит следующие стадии, будет конкретно описан ниже, но настоящее изобретение не ограничено этими стадиями.

1) Стадия добавления тестируемого вещества в систему для определения активности CaSR для определения активности CaSR и определения активности CaSR тестируемого вещества;

2) Стадия сравнения активности CaSR, наблюдаемой при добавлении тестируемого вещества, с таковой, наблюдаемой без добавления тестируемого вещества;

3) Стадия выбора конкретного тестируемого вещества, которое проявляет активность агониста CaSR при добавлении тестируемого вещества.

Активность CaSR можно определить, например, посредством использования системы для определения, в которой используют клетку, способную экспрессировать CaSR. Клетка может представлять собой клетку, способную эндогенно экспрессировать CaSR, или рекомбинантную клетку, несущую ген CaSR, экзогенно введенный в нее. Указанная выше система для определения активности CaSR не ограничена какой-либо одной конкретной, поскольку она может определять связь (реакцию) между активацией вещества и CaSR при добавлении внеклеточного лиганда (активирующего вещества), специфичного к CaSR; или она может передавать поддающиеся обнаружению сигналы в клетке в ответ на формирование связи (реакции) между активирующим веществом и CaSR. Когда CaSR активность обнаруживают посредством реакции с тестируемым веществом, о тестируемом веществе можно таким образом судить, что оно обладает CaSR-стимулирующей активностью.

В качестве указанного выше CaSR предпочтительным является CaSR человека, кодируемый геном CaSR человека, зарегистрированным под номером доступа GenBank NM_000388. В этой связи, CaSR не ограничен белком, кодируемым геном, имеющим указанную выше последовательность гена, и может представлять собой белки, каждый из которых кодируется любым геном, обладающим гомологией с указанной выше последовательностью не менее чем 60%, предпочтительно не менее чем 80% и более предпочтительно не менее чем 90%, поскольку ген может кодировать белок, обладающий функцией CaSR. В то же время функцию CaSR можно проверять посредством экспрессии этих генов внутри клетки и определения какого-либо изменения электрического тока, наблюдаемого при добавлении кальция, или какого-либо изменения концентрации ионов кальция внутри клеток.

Источники указанного выше CaSR не ограничены конкретными источниками, и их конкретные примеры включают не только CaSR, полученные от человека, но также те, что получены от животных других видов, включая, например, мышь, крысу и собаку.

Как описано выше, активность CaSR можно подтверждать посредством, например, живых клеток, которые могут экспрессировать CaSR или его фрагмент, клеточных мембран, которые могут экспрессировать CaSR или его фрагмент, или системы in vitro, содержащей CaSR или белок в качестве его фрагмента.

Далее приведен пример такого способа для подтверждения активности CaSR, в котором используют живую клетку, но настоящее изобретение не ограничено этим способом.

Экспрессию CaSR осуществляют посредством культивирования клеток, таких как овоциты, взятые у ксенопуса, клетки яичника, полученные от хомяка, или эмбриональные клетки почек человека. Более конкретно, экспрессию CaSR можно реализовать посредством введения в клетки-хозяева продукта, полученного посредством трансформации плазмиды, содержащей экзогенные гены с клонированным геном CaSR в форме рекомбинантной плазмиды per se, или кРНК, полученной посредством рекомбинантной плазмиды, в качестве матрицы. Можно использовать электрофизиологический способ или флуоресцентный индикатор для обнаружения какого-либо повышения содержания кальция в клетках для обнаружения возникновения какой-либо желаемой реакции.

Сначала экспрессию CaSR подтверждают посредством обнаружения ответа на кальций или специфическое средство активации. В настоящем документе используют овоциты, которые показывают образование внутриклеточного электрического тока в ответ на концентрацию кальция порядка приблизительно 5 мМ; или культивируемые клетки, для которых наблюдают испускание флуоресценции вследствие флуоресцентного индикатора. Затем повторяют аналогичные процедуры, использованные выше, в то время как изменяется концентрация кальция, чтобы таким образом определить зависимость от концентрации кальция. Впоследствии получают раствор тестируемого вещества, обладающего концентрацией в диапазоне приблизительно от 1 мкМ приблизительно до 1 мКМ, получаемый раствор добавляют к овоцитам или культивируемым клеткам и измеряют активность CaSR в присутствии указанного выше тестируемого вещества, чтобы таким образом определить активность агониста CaSR для тестируемого вещества.

Кроме того, в качестве тестов для определения активности CaSR, можно перечислить, например, те, которые описаны в дальнейших примерах тестов в этом описании, но настоящее изобретение вовсе не ограничено этими конкретными тестами.

В композиции придающего кокуми средства в соответствии с настоящим изобретением аминокислоты или пептиды, используемые в комбинации с производным лантионина по настоящему изобретению, представляют собой одну или по меньшей мере две аминокислоты или пептида, выбранные из группы, состоящей из γ-Glu-X-Gly, где X представляет собой аминокислоту или производное аминокислоты, γ-Glu-Val-Y, где Y представляет собой аминокислоту или производное аминокислоты, γ-Glu-Abu, γ-Glu-Ala, γ-Glu-Gly, γ-Glu-Cys, γ-Glu-Met, γ-Glu-Thr, γ-Glu-Val, γ-Glu-Orn, Asp-Gly, Cys-Gly, Cys-Met, Glu-Cys, Gly-Cys, Leu-Asp, D-Cys, γ-Glu-Met (O), γ-Glu-γ-Glu-Val, γ-Glu-Val-NH₂, γ-Glu-Val-ol, γ-Glu-Ser, γ-Glu-Tau, γ-Glu-Cys (S-Me) (O), γ-Glu-Leu, γ-Glu-Ile, γ-Glu-t-Leu и γ-Glu-Cys (S-Me). В этом отношении термин «аминокислота» включает нейтральные аминокислоты, такие как Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gln, Pro, Hyp и t-Leu; кислые аминокислоты, такие как Asp и Glu; основные аминокислоты, такие как Lys, Arg и His; ароматические аминокислоты, такие как Phe, Tyr и Trp; и гомосерин, цитруллин, орнитин, α-аминомасляную кислоту, норвалин, норлейцин и таурин. Кроме того, аминокислоты или пептиды, используемые в комбинации с производным лантионина по настоящему изобретению, могут аналогичным образом представлять собой, например, искусственно синтезированные аминокислоты (каждая обладает небелковой конфигурацией), такие как трет-лейцин, циклолейцин, α-аминоизомасляная кислота, L-пеницилламин, аллотреонин и аллоизолейцин. В этой связи символ X, встречающийся в пептиде: γ-Glu-X-Gly, может представлять собой одну из указанных выше аминокислот или их производных, но предпочтительно он представляет собой аминокислоту или ее производное, отличное от цистеина (Cys).

В этом описании аминокислотные остатки обозначают в терминах следующих сокращений, соответственно:

(1) Gly: Глицин; (2) Ala: Аланин; (3) Val: Валин; (4) Leu: Лейцин; (5) Ile: Изолейцин; (6) Met: Метионин; (7) Phe: Фенилаланин; (8) Tyr: Тирозин; (9) Trp: Триптофан; (10) His: Гистидин; (11) Lys: Лизин; (12) Arg: Аргинин; (13) Ser: Серин; (14) Thr: Треонин; (15) Asp: Аспарагиновая кислота; (16) Glu: Глутаминовая кислота; (17) Asn: Аспарагин; (18) Gin: Глутамин; (19) Cys: Цистеин; (20) Pro: Пролин; (21) Orn: Орнитин; (22) Sar: Саркозин; (23) Cit: Цитруллин; (24) N-Val (или Nva): Норвалин (2-аминовалериановая кислота); (25) N-Leu (или Nle): Норлейцин; (26) Abu: α-Аминомасляная кислота; (27) Tau: Таурин; (28) Hyp: Гидроксипролин; (29) t-Leu: Трет-лейцин; (30) Cle: Циклолейцин; (31) Aib: α-Аминоизомасляная кислота (2-метилаланин); (32) Pen: L-Пеницилламин; (33) allo-Thr: Аллотреонин; (34) allo-Ile: Аллоизолейцин.

Кроме того, термин «производное аминокислоты» обозначает различные типы производных указанных выше аминокислот, и такие производные включают, например, особые аминокислоты, искусственно синтезированные аминокислоты, аминоспирты или указанные выше аминокислоты, в которых концевые карбонильные группы и/или аминогруппы или их боковые цепи, такие как тиоловая группа цистеина, замещены различными заместителями. Конкретные примеры таких заместителей включают алкильные группы, ацильные группы, гидроксильную группу, аминогруппы, алкиламиногруппы, нитрогруппы, сульфонильные группы и различные типы защитных групп. Конкретные примеры указанных выше производных аминокислот включают N-γ-нитроаргинин: Arg (NO₂); S-нитроцистеин: Cys (SNO); S-метилцистеин: Cys (S-Me); S-аллилцистеин: Cys (S-аллил); валинамид: Val-NH₂; и валинол (2-амино-3-метил-1-бутанол): Val-ol. В этой связи пептид: γ-Glu-Cys (SNO)-Gly, используемый в этом описании, представляет собой пептид, представленный следующей структурной формулой, и символ (O), встречающийся в указанных выше формулах: γ-Glu-Met (O) и γ-Glu-Cys (S-Me) (O) обозначает, что каждый из этих пептидов имеет сульфоксидную структуру. Символ (γ), встречающийся в γ-Glu, обозначает, что другой аминокислотный остаток связан с глутаминовой кислотой посредством карбоксильной группы, присутствующей в γ-положении последней.

S-Нитрозоглутатион (GNSO)

Производные лантионина и указанные выше аминокислоты или пептиды, используемые в комбинации с производными лантионина, при наличии, могут являться коммерчески доступными. Кроме того, их можно аналогичным образом получать, в случае необходимости, в соответствии с любым известным способом, таким как (1) химический способ получения или (2) способ получения с использованием фермента, причем способ химического синтеза является более удобным. Когда химически синтезируют производное лантионина и аминокислоту или пептид, используемый в комбинации с ним, пептид может быть полусинтетическим или синтетическим с использованием устройства пептидного синтеза. Можно перечислить, например, способ твердофазного синтеза пептидов в качестве указанного выше способа химического синтеза. Пептид, синтезированный в соответствии с указанным выше способом, можно очистить посредством обычного способа, такого как способ ионообменной хроматографии, способ высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенными фазами или способ аффинной хроматографии. Такой способ твердофазного синтеза пептидов и последующий способ очистки пептидов хорошо известен в данной области.

Кроме того, при получении производного лантионина и аминокислоты или пептида, используемого в комбинации