Кристаллические формы (r)-5-[3-хлор-4-(2, 3-дигидроксипропокси)бенз[z]илиден]-2-([z]-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она

Кристаллические формы (r)-5-[3-хлор-4-(2, 3-дигидроксипропокси)бенз[z]илиден]-2-([z]-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящее изобретение относится к кристаллическим формам (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она (здесь далее как «СОЕДИНЕНИЕ»), способам их получения, фармацевтическим композициям, содержащим данные кристаллические формы, и к их применению в качестве соединений, улучшающих сосудистую функцию, и в качестве иммуномодулирующих агентов, самих по себе или в комбинации с другими активными соединениями или лекарственными средствами.

Предпосылки создания изобретения

Получение (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она и его медицинское использование описаны в заявке WO 2005/054215.

Неожиданно было установлено, что при определенных условиях могут быть обнаружены кристаллические формы (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она и данные кристаллические формы обладают преимущественными свойствами, особенно по сравнению с аморфным СОЕДИНЕНИЕМ, раскрытым в WO 2005/054215. Данные преимущества заключаются в лучшей текучести, более высокой термодинамической стабильности, меньшей гигроскопичности, иной растворимости, высокой чистоте, улучшенной воспроизводимости при получении (например, лучшими параметрами фильтрования и лучшей воспроизводимостью образования твердого вещества), определенной морфологии и/или лучшей стабильности во времени.

Описание фигур

На фиг.1 показана рентгеновская порошковая дифрактограмма СОЕДИНЕНИЯ в аморфной форме.

На фиг.2 показана рентгеновская порошковая дифрактограмма СОЕДИНЕНИЯ в кристаллической форме А, полученной в примере 1. На данной рентгеновской дифрактограмме показаны пики, имеющие относительную интенсивность по сравнению с наиболее интенсивным пиком диаграммы, в процентах (относительная интенсивность пика в круглых скобках) при измеренных углах рефракции 2θ: 4,2° (6,2%), 6,3° (6,3%), 7,0° (79,8%), 8,7° (5,9%), 11,2° (56,0%), 12,6° (100,0%), 14,9° (9,5%), 16,6° (59,0%), 17,4° (11,7%), 18,8° (59,5%), 21,3° (47,0%), 23,6° (52,0%), 24,8° (28,3%), 26,0° (45,5%), 27,1° (19,0%) и 28,5° (21,0%).

На фиг.3 показана рентгеновская порошковая дифрактограмма СОЕДИНЕНИЯ в кристаллической форме С, полученной в примере 2. На данной рентгеновской дифрактограмме показаны пики, имеющие относительную интенсивность по сравнению с наиболее интенсивным пиком диаграммы, в процентах (относительная интенсивность пика в круглых скобках) при измеренных углах рефракции 2θ: 10,5° (36,3%), 11,1° (19,2%), 11,4° (47,9%), 13,6° (26,5%), 13,9 (34,2%), 16,3° (23,4%), 18,0° (12,3%), 18,2° (9,6%), 18,9° (16,7%), 20,8° (100,0%), 21,5° (18,5%), 22,2° (74,7%), 23,4° (63,2%), 24,1° (29,8%), 25,7° (37,3%), 26,8° (18,4%), 27,4° (17,4%), 27,7° (25,4%), 27,9° (24,1%), 28,7° (36,8%), 29,3° (19,6%) и 31,7° (21,8%).

На фиг.4 показана рентгеновская порошковая дифрактограмма соединения, полученная с использованием способа 2, в кристаллической форме III, полученной в примере 3. На данной рентгеновской дифрактограмме показаны пики, имеющие относительную интенсивность по сравнению с наиболее интенсивным пиком диаграммы, в процентах (относительная интенсивность пика в круглых скобках) при измеренных углах рефракции 2θ (только избранные пики): 8,5° (30%), 10,7° (59%), 14,7° (37%), 15,2° (42%), 18,0° (52%), 22,4° (100%), 23,4° (85%) и 26,9° (62%).

На фиг.5 показана рентгеновская порошковая дифрактограмма соединения в кристаллической форме II, полученной в примере 4. На данной рентгеновской дифрактограмме показаны пики, имеющие относительную интенсивность по сравнению с наиболее интенсивным пиком диаграммы, в процентах (относительная интенсивность пика в круглых скобках) при измеренных углах рефракции 2θ: 6,4° (92,3%), 8,9° (16,5%), 11,9° (19,3%), 13,2° (75,0%), 16,9° (28,0%), 18,6° (37,0%), 19,3° (70,1%), 20,8° (82,6%) и 25,3° (100,0%).

На рентгеновских порошковых дифрактограммах на фиг.1, 2, 3, 4 и 5 угол рефракции 2θ отображен на горизонтальной оси, а частота импульсов на вертикальной оси.

Подробное описание изобретения

i) Настоящее изобретение относится к кристаллической форме, такой как по существу чистая кристаллическая форма, (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она, содержащей от 0 до 2 эквивалентов Н₂О на эквивалент (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она.

ii) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по варианту i), содержащей от 0 до 1 эквивалента H₂O на эквивалент (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она.

iii) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по варианту i), содержащей от 0 до 0,5 эквивалента Н₂О на эквивалент (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она.

iv) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по варианту i), содержащей 0,5 эквивалента Н₂О на эквивалент (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она.

v) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по варианту i), в которой (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-он находится в безводной форме.

vi) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii), содержащей от 0,1 до 2 эквивалентов пропионовой кислоты на эквивалент (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она.

vii) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iv), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 7,0°, 11,2° и 12,6°.

viii) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и v), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 10,5°, 22,2° и 23,4°.

ix) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и vi), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 10,7°, 15,2° и 22,4°.

х) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и v), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 6,4°, 13,2° и 25,3°.

xi) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iv), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 7,0°, 11,2°, 12,6°, 16,6°, 18,8°, 21,3°, 23,6° и 26,0°.

xii) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и v), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 10,5°, 11,1°, 11,4°, 13,6°, 13,9°, 16,3°, 20,8°, 22,2°, 23,4°, 24,1°, 25,7°, 27,7°, 27,9°, 28,7° и 29,3°.

xiii) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и vi), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 8,5°, 19,7°, 14,7°, 15,2°, 18,9°, 22,4° и 23,4°.

xiv) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и v), характеризующейся наличием пиков на рентгеновской порошковой дифрактограмме при следующих углах рефракции 2θ: 6,4°, 13,2°, 16,9°, 18,6°, 19,3°, 29,8° и 25,3°.

xv) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iv), для которой по существу характерна порошковая рентгенограмма, как показана на фиг.2.

xvi) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и v), для которой по существу характерна порошковая рентгенограмма, как показана на фиг.3.

xvii) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному i)-iii) и vi), для которой по существу характерна порошковая рентгенограмма, как показана на фиг.4.

xviii) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii) и v), для которой по существу характерна порошковая рентгенограмма, как показана на фиг.5.

xix) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iv), vii), xi) и xv), имеющей температуру плавления около 113°С, определенной дифференциальной сканирующей калориметрии, с использованием методики, раскрытой в настоящей заявке.

хх) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii), v), viii), xii) и xvi), имеющей температуру плавления около 133°С, определенной дифференциальной сканирующей калориметрии, с использованием методики, раскрытой в настоящей заявке.

xxi) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме по одному из вариантов i)-iii), v), x), xiv) и xviii), имеющей температуру плавления около 101°С, определенной дифференциальной сканирующей калориметрии, с использованием методики, раскрытой в настоящей заявке.

xxii) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме А по одному из вариантов i)-iv), vii), xi), xv) и xix), полученной путем:

i) растворения аморфного (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она (251,1 г) при нагревании в ацетонитриле (1,25 л);

ii) установления внутренней температуры на уровне 58°С при перемешивании лопастной мешалкой при 350 об/мин;

iii) добавления деонизированной воды (1 л) аликвотами по 250 мл (минимальная внутренняя температура = 45°С) с получением при перемешивании прозрачного раствора;

iv) доведения внутренней температуры до 55°С и добавления еще одной дополнительной аликвоты воды (250 мл) с получением при перемешивании прозрачного раствора;

v) установления температуры раствора на уровне 59,5-60°С;

vi) охлаждения раствора до 12°С около 2 ч (скорость охлаждения = 0,4°С/мин); и

vii) перемешивания суспензии при 12°С в течение 18 ч.

xxiii) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме С по одному из вариантов i)-iii), v), viii), xii), xvi) и хх), полученной путем:

i) суспендирования кристаллической формы А (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она (20,0 г) в метил-трет-бутиловом эфире (100 мл);

ii) перемешивания механической мешалкой при комнатной температуре с получением высоковязкой пасты, которую превращают в жидкотекущую суспензию четко выраженного желтого цвета при перемешивании в течение 40 ч; и

iii) отфильтровывания твердого вещества и высушивания его в течение 4 ч под вакуумом при комнатной температуре.

xxiv) В еще одном варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме III по одному из вариантов i)-iii), vi), ix), xiii) и xvii), полученной путем:

i) добавления 1 мл пропионовой кислоты к кристаллической форме A (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она (0,5 г);

ii) встряхивания образца до полного растворения твердого вещества;

iii) выдерживания образца в течение ночи при комнатной температуре; и

iv) отфильтровывания твердого вещества.

xxv) В другом варианте осуществления изобретение относится к кристаллической форме II по одному из вариантов i)-iii), v), x), xiv), xviii) и xxi), полученной путем:

i) выдерживания кристаллической формы III (R)-5-[3-хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-она в глубоком вакууме (<0,1 мбар) в течение одной недели; и

ii) выдерживания продукта на открытом воздухе при комнатной температуре и относительной влажности около 40% в течение ночи.

Термин «по существу чистый» в контексте настоящего изобретения означает, что по крайней мере 90, предпочтительно по крайней мере 95 и более предпочтительно по крайней мере 99% по массе кристаллов соединения присутствуют в кристаллической форме настоящего изобретения, в частности в отдельной кристаллической форме настоящего изобретения.

При обозначении пиков, например на рентгеновской порошковой дифрактограмме, общим приближением является представление на основе соотношения S/N (S = сигнал, N = шум). Согласно этому определению, когда говорят о наличии пика на рентгенограмме, то под этим понимают, что данный пик на дифрактограмме определен соотношением S/N (где S = сигнал, N = шум), большим чем х (х представляет собой числовое значение более 1), обычно более 2, особенно более 3.

В данном контексте, если говорят, что кристаллическая форма по существу характеризуется на рентгеновской порошковой дифрактограмме, такой как показана на фиг.2, фиг.3, фиг.4 и фиг.5, соответственно, то под термином «по существу» подразумевают, что присутствуют, по меньшей мере, основные пики диаграммы, указанные на данных фигурах, то есть такие, которые имеют относительную интенсивность более 10%, в особенности более 20%, по сравнению с наиболее интенсивными пиками на дифрактограмме. Однако специалисту в области рентгеновского анализа должно быть понятно, что относительные интенсивности на рентгеновских порошковых дифрактограммах могут сильно изменяться из-за эффектов предпочтительной ориентации.

За исключением использования применительно к температурам, в рамках настоящей заявки термин «приблизительно», указанный перед числовым значением «X», соответствует интервалу от Х-10% от Х до Х+10% от X, предпочтительно интервалу от Х-5% от Х до Х+5% от X. В случае температур, в рамках настоящей заявки термин «приблизительно», указанный перед температурой Y, соответствует интервалу от Y-10°С до Y+10°С, предпочтительно интервалу от Y-5°С до Y+5°С.

Кристаллические формы настоящего изобретения могут быть использованы в качестве лекарственных средств, например, в форме фармацевтических композиций для энтерального или парентерального введения, в частности, такого как оральное введение, и пригодны для снижения количества циркулирующих лимфоцитов и для предотвращения и/или лечения заболеваний или расстройств, обусловленных активацией иммунной системы.

Получение фармацевтических композиций может быть осуществлено методами, известными любому специалисту в данной области (см., например, Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 21^е издание (2005), часть 5, «Фармацевтическое производство» [опубликовано Lippincott Williams and Wilkins]), путем приведения кристаллических форм настоящего изобретения, необязательно в сочетании с другими терапевтически значимыми соединениями, в галенову форму введения вместе с подходящими нетоксичными, инертными, фармацевтически приемлемыми твердыми или жидкими носителями и, при желании, традиционными фармацевтическими вспомогательными средствами.

Кристаллические формы СОЕДИНЕНИЯ могут быть использованы как отдельные компоненты или как смеси с другими кристаллическими формами или аморфной формой СОЕДИНЕНИЯ.

Заболевания или расстройства, обусловленные активацией иммунной системы, которые могут подвергаться лечению и/или быть предотвращены кристаллическими формами настоящего изобретения, описаны, например в WO 2005/054215.

Предпочтительные заболевания или расстройства, подвергающиеся лечению и/или предотвращаемые кристаллическими формами настоящего изобретения, выбраны из отторжения трансплантированных органов, таких как почки, печень, сердце, легкие, поджелудочная железа, роговица и кожа; реакции «трансплантат против хозяина», обусловленной трансплантацией стволовых клеток; аутоиммунных синдромов, включая ревматоидный артрит, рассеянный склероз, воспалительные заболевания кишечника, такие как болезнь Крона и язвенный колит, псориаз, псориатический артрит, тиреоидит, такой как тиреоидит Хашимото, и увеоретинит; атопических заболеваний, такие как ринит, конъюнктивит и дерматит; астмы; диабета типа I; постинфекционных аутоиммунных заболеваний, включая ревматический полиартрит и постинфекционный гломерулонефрит; твердых опухолей и опухолевых метастаз.

Особенно предпочтительные заболевания или расстройства, подвергающиеся лечению и/или предотвращаемые кристаллическими формами настоящего изобретения, выбраны из отторжения трансплантированных органов, выбранных из почек, печени, сердца и легких; реакции «трансплантат против хозяина», обусловленной трансплантацией стволовых клеток; аутоиммунных синдромов, выбранных из ревматоидного артрита, рассеянного склероза, псориаза, псориатического артрита, болезни Крона и тиреоидита Хашимото; атопического дерматита. Самые предпочтительные заболевания или расстройства, подвергающиеся лечению и/или предотвращаемые кристаллическими формами настоящего изобретения, выбраны из рассеянного склероза и псориаза.

Также настоящее изобретение относится к способу предотвращения или лечения заболевания или расстройства, упомянутого в данном описании или в WO 2005/054215, включающему введение субъекту фармацевтически активного количества кристаллической формы настоящего изобретения.

Кроме того, кристаллические формы настоящего изобретения пригодны в комбинации с одним или несколькими иммуномодулирующими агентами для предотвращения и/или лечения заболеваний или расстройств, упомянутых в данной заявке. В соответствии с предпочтительным воплощением изобретения данные агенты выбраны из иммунодепрессантов, кортикостероидов, нестероидных противовоспалительных лекарственных средств, цитотоксичных лекарственных средств, ингибиторов адгезивных молекул, цитокинов, ингибиторов цитокина, антагонистов рецептора цитокина и рецепторов рекомбинантного цитокина.

Настоящее изобретение также относится к применению кристаллических форм настоящего изобретения для получения фармацевтической композиции, необязательно для применения в комбинации с одним или несколькими иммуномодулирующими агентами, для предотвращения или лечения заболеваний или расстройств, упомянутых в данной заявке или в WO 2005/054215.

(R)-5-[3-Хлор-4-(2,3-дигидроксипропокси)бенз[Z]илиден]-2-([(Z)-пропилимино)-3-о-толилтиазолидин-4-он может быть получен, например, так, как описано в опубликованной заявке WO 2005/054215 (в частности, см. пример 85), или при использовании методики, раскрытой в опубликованной заявке WO 2008/062376.

Экспериментальная часть

Следующие примеры более подробно иллюстрируют настоящее изобретение. Температуры даны в градусах Цельсия. Если не указано иное, комнатная температура находится в интервале 18-25°С, а проценты приведены по массе.

Используемые в данном описании сокращения:

ДСК	дифференциальная сканирующая калориметрия
Фиг.	фигура
1Н-ЯМР	протонный магнитный резонанс
ВЭЖХ	высокоэффективная жидкостная хроматография
ПТФЭ	политетрафторэтилен
q.s.	по необходимости, сколько нужно
OB	относительная влажность
кт	комнатная температура
об/мин	обороты в минуту
RRT	относительное время удерживания, указывающее на отношение времени удерживания примесей к времени удерживания активного компонента
МТБЭ	метил-тирет-бутиловый эфир
ТФУК	трифторуксусная кислота
ТГА	термогравиметрический анализ
XRPD	рентгеновская порошковая дифракция

Порошковая рентгеновская дифракция

Рентгеновские порошковые дифрактограммы для аморфного СОЕДИНЕНИЯ и СОЕДИНЕНИЯ в кристаллических формах А, С и II (фиг.1-3 и 5) получают на дифрактометре Bruker ASX/Siemens D500, с использованием СuK_α-излучения (40 кВ, 40 мА), 6-9 гониометра, автоматических входной и выходной щелей, графитного вторичного монохроматора и сцинтилляционного детектора. Функционирование прибора проверяют по сертифицированному корундовому стандарту (NIST 1976). Для съемки в условиях окружающей среды готовят образцы порошка в виде плоских пластин. Примерно 35 мг образца аккуратно помещают в выемку полированной, имеющей нулевой фон (510), кремниевой пластинки. Во время съемки образец вращают в его плоскости. Снимают данные в диапазоне углов 2θ от 2° до 42° в непрерывном режиме с шагом 0,02° 2θ и экспозицией 1 с. Дифракционные данные получают с использованием Cu-K_α1 (λ=1,5404 Å) после того, как K_α2-компонент излучения был отсечен при помощи инструментального программного обеспечения (EVA). Точность полученных в настоящей заявке значений 2θ находится в интервале ±0,1-0,2°, что в целом соответствует рентгенограммам, записанным в обычных условиях.

Способ 2 рентгеновского порошкового анализа используют для получения дифрактограмм СОЕДИНЕНИЯ в кристаллической форме III (фиг.4). Рентгенограммы получают на дифрактометре Broker D8 HTS, снабженном детектором GADDS HiStar, в отраженном CuK_α-излучении. Обычно рентгеновская лампа работает в режиме 40 кВ/40 мА. Функционирование прибора проверяют по сертифицированному корундовому стандарту (NIST 1976). Для съемки в условиях окружающей среды готовят образцы порошка в виде плоских пластин. Примерно 3 мг образца аккуратно спрессовывают на микроскопном предметном стекле. Снимают данные в интервале углов 2θ от 6° до 32° в 2 автоматически объединяемых и интегрируемых окнах программы Broker PILOT со временем накопления 180 с на каждое окно. Дифракционные данные представлены без вычета K_α2-компонента излучения и без удаления фонового сигнала. Точность полученных в настоящей заявке значений 2θ находится в интервале ±0,1-0,2°.

Дифференциальная сканирующая калориметрия

Данные дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) получают на ТА Instruments Q1000, снабженном 50-позиционным автоматическим держателем образцов. Инструмент калибруют по температуре и энергии по сертифицированному индиевому стандарту. Обычно 0,5-3 мг каждого образца в микроканальной алюминиевой чашке нагревают со скоростью 10°С в минуту, если не указано иное, от 25 до 250°С. Над образцом продувают азот со скоростью 30 мл в минуту. Температуры начала пика определяют как тангенциальные температуры пика, тогда как температуры плавления являются пиковыми температурами.

Термогравиметрический анализ

Данные термогравиметрического анализа (ТГА) получают при помощи ТА Instruments Q500 TGA, снабженного 16-позиционным автоматическим держателем образцов. Инструмент калибруют по температуре по сертифицированному алюмелю. Обычно по 3-10 мг каждого образца загружают в предварительно взвешенный платиновый тигель и алюминиевую чашку для ДСК и нагревают со скоростью 10°С в минуту от комнатной температуры до 350°С. Над образцом продувают азот со скоростью 60 мл в минуту.

Определение чистоты. ВЭЖХ

Чистоту образцов определяют при помощи системы серии Agilent HP 1100, снабженной диодным матричным детектором, используя 9 версию программного обеспечения ChemStation. Образцы защищают фольгой от света. Поддон автоматического держателя выдерживают при 4°С.

Вид метода	Обращенная фаза, градиентный
Колонка	Phenomenex Luna c18 (2), 5 мкм 150×4,6 мм
Температура колонки (°С)	35
Инъекция (мкл)	10
Детектируемая длина волны (нм)	250
Скорость элюирования (мл/мин)	1,0
Фаза А	Вода: ацетонитрил: ТФУК, 950:50:1 об/об/об
Фаза В	Вода: ацетонитрил: ТФУК, 50:950:1 об/об/об
Распределение по времени	Время (мин)	% фазы А	% фазы В
0	80	20
25	50	50
40	25	75
45	10	10
45,2	80	20
50	80	20

Пример 1: Получение формы А

Аморфное соединение (251,1 г) растворяют в ацетонитриле (1,25 л) при нагревании и внутреннюю температуру поддерживают на уровне около 58°С при перемешивании лопастной мешалкой при 350 об/мин. После этого аликвотами по 250 мл добавляют деионизированную воду (1,0 л) (минимальная внутренняя температура = 45°С), получая при перемешивании прозрачный раствор. Внутреннюю температуру увеличивают до 55°С и добавляют одну дополнительную аликвоту воды (250 мл): раствор при перемешивании становится прозрачным. Температуру раствора доводят до равновесной на уровне 59,5-60°С и затем раствор охлаждают до 12°С в течение примерно 2 ч (скорость охлаждения = 0,4°С/мин). Полученную суспензию перемешивают при 12°С в течение 18 ч и образец анализируют XRPD. Продукт представляет собой форму А.

Таблица 1.
Характеристические данные формы А
Метод	Сводные данные	Примечания
XRPD	Кристаллическое вещество: проявляется предпочтительная ориентация благодаря наличию крупных кристаллов	см. фиг.2
1Н-ЯМР	Согласуется со структурой. Значительного количества остаточного растворителя не обнаружено
ДСК	Широкий эндотермичный пик с началом около 33,6°С (около 51 Дж/г), остроконечный эндотермичный пик с началом около 108°С (около 65 Дж/г), соответствующий плавлению. Температура плавления около 113°С	см. пояснение 1) к Таблице
ТГА	Потеря 1,9% массы между температурой окружающей среды и примерно 60°С (эквивалентно 0,5 молям воды на моль СОЕДИНЕНИЯ), и потеря 19,6% массы между 225 и 340°С из-за разложения	см. пояснение 1) к Таблице
Микроскопия	Двоякопреломляющие столбчатые кристаллы длиной вплоть до са. 70 мкм и иррегулярные двоякопреломляющие частицы. Также наблюдается некоторое количество агломератов и/или конденсированных частиц	г
Высокотемператур-ная микроскопия	Плавление наблюдается между 104-119°С
Чистота, ВЭЖХ	Чистота 98,7% по площади поверхности с примесями при RRT 0,73 (0,17%), 0,96 (0,36%), 1,02 (0,35%) и 1,19 (0,22%)

Пояснения к Таблице 1

I) ТГА термограмма формы А демонстрирует потерю 1,9% массы между температурой окружающей среды и около 60°С (эквивалентно 0,5 молям воды на моль соединения) и потерю 19,6% массы между 225 и 340°С из-за разложения. Первая потеря массы соответствует широкому эндотермическому пику на ДСК с началом около 33,6°С. Вторая - остроконечному эндотермическому пику с началом около 108°С, соответствующему плавлению.

Аморфное соединение

Аморфное соединение получают способом, описанным в примере 85 опубликованной заявки WO 2005/054215. Как вариант, СОЕДИНЕНИЕ в кристаллической форме А (501 мг) растворяют в дихлорметане (5 мл). Полученный раствор фильтруют через 0,45 мкм ПТФЭ-фильтр и растворитель удаляют на роторном испарителе, получая бледно-желтую пену. Образовавшееся твердое вещество сушат при 40°С в глубоком вакууме в течение одного дня, получая продукт: NB-174-6-1 (в данном описании также как «Аморфное СОЕДИНЕНИЕ»).

Таблица 2.
Характеристические данные NB-174-6-1
Метод	Сводные данные	Примечания
XRPD	Аморфное вещество	см. фиг.1
1Н-ЯМР	Согласуется со структурой. Содержит около 0,5% масс./масс. дихлорметана	-

Пример 2: Получение формы С

Соединение в кристаллической форме А (20,0 г) суспендируют в МТБЭ (100 мл) и перемешивают механической мешалкой при КТ. Получают высоковязкую пасту, которую превращают в жидкотекущую суспензию ярко выраженного желтого цвета после перемешивания в течение 40 ч. Твердое вещество отфильтровывают и сушат в течение 4 ч под вакуумом при КТ. Продукт идентифицируют XRPD как форму С.

Таблица 3.
Характеристические данные формы С
Метод	Сводные данные	Примечания
XRPD	Кристаллическое вещество: проявляется предпочтительная ориентация благодаря наличию больших кристаллов	см. фиг.3
1Н-ЯМР	Согласуется со структурой. Содержит следы МТБЭ
ДСК	Эндотермический пик (плавление): начало около 128°С (около 92 Дж/г). Температура плавления около 133°С
ТГА	Потери массы: температура окружающей среды - 250°С (0,4%), 250-340°С (15,0% - разложение)

Метод	Сводные данные	Примечания
Микроскопия	Двоякопреломляющие столбчатые/призмовидные кристаллы длиной вплоть до са. 200 мкм и небольшие иррегулярные двоякопреломляющие частицы
Высокотемператур-ная микроскопия	Плавление наблюдается в интервале 127-138°С
Чистота, ВЭЖХ	Чистота 98,3% по площади поверхности с примесями при RRT 0,73 (0,21%), 0,96 (0,39%), 1,02 (0,37%) и 1,19 (0,52%)

Пример 3: Получение формы III

Соединение в кристаллической форме А (0,5 г) растворяют в пропионовой кислоте (1 мл). При кт в течение нескольких часов образуется твердый продукт. Твердое вещество выделяют фильтрованием, и полученное соединение представляет собой кристаллическую форму III.

Таблица 4.
Характеристические данные формы III
Метод	Сводные данные	Примечания
XRPD	Кристаллическое вещество	см. фиг.4

Пример 4: Получение формы II

Соединение в кристаллической форме III выдерживают в глубоком вакууме (<0,1 мбар) в течение 1 недели, а затем выдерживают на открытом воздухе при 0 В около 40% и КТ в течение ночи, получая СОЕДИНЕНИЕ в кристаллической форме II.

Таблица 5.
Характеристические данные формы II
Метод	Сводные данные	Примечания
XRPD	Кристаллическое вещество	см. фиг.5
1Н-ЯМР	Согласуется со структурой. Содержит 0,04 моля пропионовой кислоты на моль СОЕДИНЕНИЯ
ДСК	Эндотермические пики: начало около 82°С (около 4,5 Дж/г) и около 96°С (около 58 Дж/г). Температура плавления около 101°С
ТГА	Потери массы: температура окружающей среды - 75°С (0,3%), 75-90°С (0,3%), 90-250°С (0,6%) и 250-340°С (27,2% - разложение)

Метод	Сводные данные	Примечания
Микроскопия	Двоякопреломляющие столбчатые/игольчатые кристаллы длиной вплоть до са. 40 мкм и агломераты длиной вплоть до са. 300 мкм
Высокотемператур-ная микроскопия	Плавление наблюдается в интервале 96-106°С
Чистота, ВЭЖХ	Чистота 98,4% по площади поверхности с примесями при RRT 0,73 (0,27%), 0,96 (0,30%), 1,02 (0,36%), 1,19 (0,17%) и 1,37 (0,16%)

Пример 5: Гигроскопичность соединения в кристаллических формах А. С и II по сравнению с аморфным соединением

Метод: Гравиметрическая сорбция пара (ГСП)

Изотермы сорбции получают с использованием анализатора поглощения влаги, контролируемого программным обеспечением CFRSorp. Температуру образца поддерживают на уровне 25°С на водяной бане Huber с рециркуляцией. Контролирование влажности осуществляют путем смешения потоков сухого и влажного азота, при общей скорости потока 250 мл/мин. Относительную влажность измеряют градуированным датчиком OB Vaisala (динамический интервал OB 0-95%), расположенным ниже образца. Изменение массы образца как функцию % OB постоянно контролируют при помощи микровесов (точность ±0,001 мг).

Как правило, 10-20 мг образца при температуре окружающей среды помещают в тарированную корзину с ячейками из нержавеющей стали. Образец загружают и выгружают при OB 40% и 25°С (обычные комнатные условия).

Изотермы поглощения влаги получают так, как показано ниже (2 прогона дают 1 полный цикл). Стандартную изотерму снимают при 25°С, OB 10% в интервале ОВ 0-90%.

Параметры	Значения
Адсорбция - 1 прогон	40-90
Десорбция/Адсорбция - 2 прогон	85 - сухой, сухой - 40
Интервалы (% OB)	10
Число прогонов	2
Скорость потока (мл/мин)	250
Температура (°С)	25

Параметры	Значения
Стабильность (°С/мин-1)	0,05
Минимальное время сорбции (часы)	1
Максимальное время сорбции (часы)	6
Режим	AF2
Точность (%)	98

При программной обработке для предварительного определения асимптотического значения используют минимизацию по методу наименьших квадратов наряду с моделью масс-релаксаций. Измеренное значение масс-релаксаций должно находиться в пределах 5% от значения, предварительно определенного программой, перед тем, как будет выбрано следующее значение % ОВ. Минимальное время установления равновесия принимают равным 1 ч, а максимальное 4 ч.

Гигроскопичность твердых форм

Классификация дана в соответствии с European Pharmacopea Technical Guide (издание 1999) (например, слабо гигроскопичное соединение: увеличение массы менее чем на 2% - равна или более 0,2% масс./масс.; гигроскопичное соединение: увеличение массы менее чем на 15% - равна или более 2% масс./масс.). Учитывают изменение массы между OB 40% и OB 80% при первом адсорбционном прогоне.

Аморфное соединение: прирост массы 2,1%: Гигроскопично

Форма А: прирост массы <0,2%: Негигроскопична

Форма С: прирост массы <0,2%: Негигроскопична

Форма II: прирост массы 2%: Слабо гигроскопична

Пример 6: Капсулы, содержащие 10 мг, 20 мг или 40 мг СОЕДИНЕНИЯ в кристаллической форме А или С

Ингредиенты	Количество на капсулу [мг]
Интрагранулярные компоненты
СОЕДИНЕНИЕ в кристаллической форме А или С	10,00 мг	20,00 мг	40 мг
Прежелатинизированный крахмал	168,00 мг	158,00 мг	138,00 мг
Поливипилпирролидон	6,25 мг (2,5% масс./масс.)
Микрокристаллическая целлюлоза	50,00 мг (20% масс./масс.)

Ингредиенты	Количество на капсулу [мг]
Натрия крахмалгликолят	5,00 мг (2% масс./масс.)
Лаурилсульфат натрия	2,50 мг (1% масс./масс.)
Гранулирующая жидкость
Очищенная вода	q.s.
Экстрагранулярные компоненты
Натрия крахмалгликолят	5,00 мг (2% масс./масс.)
Безводный коллоидный диоксид кремния	0,75 мг (0,3% масс./масс.)
Стеарат магния	2,50 (1% масс./масс.)
Итого	250 мг

Интрагранулярные компоненты просеивают в смесителе с большими сдвиговыми усилиями, например Diosna, в котором они смешиваются друг с другом на стадии сухого смешивания. Затем к сухой смеси интрагранулярных компонентов добавляют воду, продолжая перемешивание до образования на стадии мокрого гранулирования подходящих гранул соответствующего размера. После этого гранулы сушат в сушильном аппарате с псевдоожиженным слоем и размалывают с использованием сита подходящей пористости. Все экстрагранулярные компоненты, кроме стеарата магния, пропускают через 1000 мкм сито и смешивают с гранулами. Стеарат магния просеивают с определенным количеством полученной смеси и добавляют к оставшейся части порошкообразной смеси. Полученную смесь еще раз перемешивают. Образовавшейся порошкообразной смесью наполняют матово-белые желатиновые капсулы размера "0".

Пример 7: Таблетки, содержащие соединение в кристаллической форме С

Эксципиенты	Состав (% масс./масс.)
Интрагранулярные компоненты
Соединение в кристаллической форме С	16,0
Лактоза	35,0
Микрокристаллическая целлюлоза	17,5
Поливинилпирролидинон	3,0
Лаурилсульфат натрия	1,0
Кроскармеллоза натрия (Ac-di-sol)	4,0
Гранулирующая жидкость
Лаурилсульфат натрия	1,0
Очищенная вода	q.s.

Эксципиенты	Состав (% масс./масс.)
Экстрагранулярные компоненты
Микрокристаллическая целлюлоза	17,5
Кроскармеллоза натрия (Ac-di-sol)	4,0
Стеарат магния	0,5
Коллоидный диоксид кремния	0,5
Итого	100,0

Интрагранулярные компоненты просеивают в смесителе с большими сдвиговыми усилиями, например Diosna, в котором они смешиваются друг с другом на стадии сухого смешивания. Затем к сухой смеси интрагранулярных компонентов добавляют воду, продолжая перемешивание до тех пор, пока на стадии мокрого гранулирования не образуются подходящие гранулы соответствующего размера. После этого гранулы сушат в сушильном аппарате с псевдоожиженным слоем и размалывают с использованием сита подходящей пористости. Все экстрагранулярные компоненты, кроме стеарата магния, пропус