2528736 - Антитела против альфа5-бета 1 и их применение

Антитела против альфа5-бета 1 и их применение

Иллюстрации

Показать все

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено выделенное моноклональное антитело к интегрину α5β1 человека. Антитело характеризуется тем, что содержит 6 CDR, 3 CDR из легкой цепи и 3 CDR из тяжелой цепи. Описана нуклеиновая кислота (НК), кодирующая антитело по изобретению, экспрессирующий вектор, содержащий молекулу НК; клетка-хозяин, содержащая вектор; и способ получения антитела на основе клетки. Раскрыты: композиция и способ для ингибирования роста опухолевых клеток, экспрессирующих интегрин α5β1 человека, на основе антитела. Описан вариант способа ингибирования роста опухолевых клеток, экспрессирующих интегрин α5β1 человека, использующий композицию. Изобретение обеспечивает новые антитела с высоким (порядка нм, как измерено FACS) сродством связывания с интегрином α5β1 человека, что может найти применение в медицине в терапии опухолей, опосредованных экспрессией интегрина α5β1. 7 н. и 6 з.п. ф-лы, 36 ил., 3 табл., 11 пр.

Реферат

По данной заявке испрашивается приоритет предварительной заявки США № 61/026027, поданной 5 февраля 2008, и предварительной заявки США № 61/095429, поданной 9 сентября 2008, обе они приводятся в данный документ в качестве ссылки в полном объеме.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее описание относится к антителам и их антигенсвязывающим участкам, которые связываются с α5β1. Описание также относится к молекулам нуклеиновых кислот, кодирующим такие антитела и антигенсвязывающие участки, способам создания антител и антигенсвязывающих участков против α5β1, композициям, содержащим данные антитела и антигенсвязывающие участки, и способам применения антител, антигенсвязывающих участков и композиций.

Уровень техники

Интегрин α5β1 представляет собой гетеродимерный белок клеточной поверхности, который связывается с фибронектином и вовлечен в прикрепление клетки и ангиогенез. Этот гетеродимер составлен из субъединицы α5 и субъединицы β1. Интегрин α5β1 обозначают как «классический рецептор фибронектина», который имеет ключевое значение в адгезии к матриксу, миграции, пролиферации, дифференциации и выживаемости. Несмотря на то, что с фибронектином (FN) связывается несколько интегринов, избирательным в отношении FN является интегрин α5β1, поскольку для распознавания лиганда и оптимального взаимодействия ему требуются обе пептидных последовательности на девятом (PHSRN) и десятом (RGDS) повторах типа III фибронектина FN (Danen et al. J. Biol. Chem. 270(37):21612-21618 (1995); Redisk et al. J. Cell Biol. 149(2):521-527 (2000); Takagi et al. EMBO J. 22:4607-4615 (2003)). Интегрин-опосредованная адгезия клетки к FN может запускать приток кальция, активировать тирозин- и серин/треонин протеинкиназы и инозитол-липидный метаболизм и регулировать активность семейства небольших GTP-аз Rho, которое контролирует актиновый цитоскелет и клеточный цикл.

Экспрессия α5β1 наблюдается в большинстве эмбриональных тканей, но после рождения уровень падает в соответствии с терминальной дифференциацией клетки (Muschler & Horwitz Development 113(1):327-337 (1991)). У взрослых мышей дикого типа экспрессия происходит главным образом в сосудистой и соединительной ткани, хотя низкие уровни рецептора широко распространены. Экспрессия как α5β1, так и FN существенно и согласованно повышается на кровеносных сосудах опухолей человека и в тканях, стимулированных факторами роста и цитокинами.

Ангиогенные цитокины, такие как bFGF, VEGF, IL-8, TGF-бета и TNF-α, повышают экспрессию α5β1 на эндотелиальных клетках in-vitro и in-vivo, в то время как в нормальных сосудах и тканях человека эти молекулы экспрессируются в минимальном количестве (Kim et al. Am. J. Path. 156(4):1345-62 (2000); Enaida et al. Fukushima J. Med. Sci. 44(1):43-52 (1998); Klein et al. Mol. Biol. Cell 4(10):973-982 (1993)).

Высокие уровни экспрессии α5β1 не ограничиваются сосудистой системой, поскольку также часто обнаруживают, что экспрессируют α5β1 опухолевые клетки при многих типах рака. Гипоксия опухоли ассоциировалась с повышенной экспрессией α5β1 опухолью (Mousa et al. J. Cell. Biochem. 74:135-143 (1999)). Полагают, что интегрины важны для интравазации опухоли во вновь образованные капилляры и экстравазации в удаленные участки, приводя к распространению опухоли и метастазированию. В целом, паттерн экспрессии α5β1 согласуется с большим числом значений в прогрессировании рака через опосредование активностей как стромальных, так и опухолевых клеток. В большом числе клинических исследований повышение α5β1 на клетках опухоли ассоциировалось с прогрессированием меланомы, оральной плоскоклеточной карциномы и В-клеточных лейкозов человека (Jin & Varner, Br. J. Cancer 90:561-565 (2004); Danen et al. Histopathology 24(3):249-256 (1994); Shinohara et al., Am. J. Clin. Pathol. 111(1):75-88 (1999)).

Сущность изобретения

Настоящее описание относится к выделенным моноклональным антителам, в частности моноклональным антителам человека, у которых наблюдается высокое сродство связывания с интегрином α5β1 человека. Антитела, описанные в настоящем описании, как правило, представляют собой антитела человека, хотя в альтернативных случаях антитела могут представлять собой антитела мыши, химерные антитела или гуманизированные антитела.

В одном из аспектов описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, где антитело: (а) связывается с интегрином α5β1 человека с K_D 1×10^-7 M или меньше; и (b) способно индуцировать антителозависимую клеточную цитотоксичность. Например, в одном случае антитело принадлежит подклассу, который способен индуцировать ADCC, такому как IgG1 или IgG3. В другом случае ADCC-активность является результатом введения в Fc-область углеводных модификаций, таких как измененные паттерны гликозилирования, по сравнению с нативным углеводным паттерном.

В некоторых случаях антитело связывается с интегрином α5β1 человека с K_D 5×10^-8 M или меньше, 2×10^-8 M или меньше, 1×10^-8 M или меньше, 5×10^-9 M или меньше, 4×10^-9 M или меньше, 3×10^-9 M или меньше, или 2,7×10^-9 M или меньше.

В дополнительном аспекте настоящее описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, где антитело: (а) связывается с интегрином α5β1 человека с K_D 1×10^-7 M или меньше; и (b) у него наблюдается повышенная ADCC-активность относительно антитела сравнения. Например, в одном из случаев антитело с повышенной ADCC-активностью содержит, по меньшей мере, одну мутацию в Fc-области по сравнению с Fc-областью дикого типа, и повышенной ADCC-активность является по отношению к тому же антителу, но содержащему Fc-область дикого типа. В некоторых примерах антитело связывается с интегрином α5β1 человека с K_D 5×10^-8 M или меньше, 2×10^-8 M или меньше, 1×10^-8 M или меньше, 5×10^-9 M или меньше, 4×10^-9 M или меньше, 3×10^-9 M или меньше, или 2,7×10^-9 M или меньше. В дополнительных примерах у антитела наблюдается повышенная ADCC-активность относительно антитела сравнения, которая повышена, по меньшей мере, в 1,1 раз, по меньшей мере, в 1,2 раз, по меньшей мере, в 1,3 раз, по меньшей мере, в 1,5 раз, по меньшей мере, в 2 раза, по меньшей мере, в 3 раза, по меньшей мере, в 5 раз, по меньшей мере, в 10 раз, по меньшей мере, в 20 раз, по меньшей мере, в 30 раз, по меньшей мере, в 40 раз, по меньшей мере, в 50 раз, по меньшей мере, в 100 раз, по меньшей мере, в 200 раз, по меньшей мере, в 500 раз, или, по меньшей мере, в 1000 раз по отношению к антителу сравнения, где антитело сравнения представляет собой то же антитело, но с Fc-областью дикого типа.

В дополнительном аспекте настоящее описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, где антитело перекрестно конкурирует или конкурирует за связывание с интегрином α5β1 человека с антителом, которое содержит: (а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7, или ее консервативные модификации; и (b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, или ее консервативные модификации.

Дополнительный аспект настоящего описания представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащие вариабельную область тяжелой цепи, которая представляет собой продукт или производное гена человека V_H 4-39, где антитело специфически связывается с интегрином α5β1 человека.

Дополнительный аспект настоящего описания представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащий вариабельную область легкой цепи, которая представляет собой продукт или производное гена человека V_K L6, где антитело специфически связывается с интегрином α5β1 человека.

В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи CDR1, содержащую последовательность SEQ ID NO:1, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи CDR2, содержащую SEQ ID NO:2, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи CDR3, содержащую SEQ ID NO:3, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область легкой цепи CDR1, содержащую SEQ ID NO:4, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область легкой цепи CDR2, содержащую SEQ ID NO:5, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область легкой цепи CDR3, содержащую SEQ ID NO:6, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему:

(а) вариабельную область тяжелой цепи CDR1, содержащую SEQ ID NO:1, или ее консервативные модификации;

(b) вариабельную область тяжелой цепи CDR2, содержащую SEQ ID NO:2, или ее консервативные модификации;

(d) вариабельную область легкой цепи CDR1, содержащую SEQ ID NO:4, или ее консервативные модификации;

(e) вариабельную область легкой цепи CDR2, содержащую SEQ ID NO:5, или ее консервативные модификации; и

(f) вариабельную область легкой цепи CDR3, содержащую SEQ ID NO:6, или ее консервативные модификации.

В дополнительном аспекте настоящее описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7, или ее консервативные модификации. Например, описание относится к антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, которая, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере, на 85%, по меньшей мере, на 90%, по меньшей мере, на 95%, по меньшей мере, на 97%, по меньшей мере, на 98%, или, по меньшей мере, на 99% идентична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:7. В дополнительном аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, или ее консервативные модификации. Например, описание относится к антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область легкой цепи, которая, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере, на 85%, по меньшей мере, на 90%, по меньшей мере, на 95%, по меньшей мере, на 97%, по меньшей мере, на 98%, или, по меньшей мере, на 99% идентична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:8. В дополнительном аспекте настоящее описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7, или ее консервативные модификации, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, или ее консервативные модификации. Например, описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, которая, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере, на 85%, по меньшей мере, на 90%, по меньшей мере, на 95%, по меньшей мере, на 97%, по меньшей мере, на 98%, или, по меньшей мере, на 99% идентична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:7, и вариабельную область легкой цепи, которая, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере, на 85%, по меньшей мере, на 90%, по меньшей мере, на 95%, по меньшей мере, на 97%, по меньшей мере, на 98%, или, по меньшей мере, на 99% идентична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:8.

В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи CDR1, содержащую последовательность SEQ ID NO:13, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи CDR2, содержащую последовательность SEQ ID NO:14, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи CDR3, содержащую последовательность SEQ ID NO:15, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область легкой цепи CDR1, содержащую последовательность SEQ ID NO:16, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область легкой цепи CDR2, содержащую последовательность SEQ ID NO:17, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область легкой цепи CDR3, содержащую последовательность SEQ ID NO:18, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему:

(а) вариабельную область тяжелой цепи CDR1, содержащую SEQ ID NO:13, или ее консервативные модификации;

(b) вариабельную область тяжелой цепи CDR2, содержащую SEQ ID NO:14, или ее консервативные модификации;

(d) вариабельную область легкой цепи CDR1, содержащую SEQ ID NO:16, или ее консервативные модификации;

(e) вариабельную область легкой цепи CDR2, содержащую SEQ ID NO:17, или ее консервативные модификации; и

(f) вариабельную область легкой цепи CDR3, содержащую SEQ ID NO:18, или ее консервативные модификации.

В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи CDR1, содержащую SEQ ID NO:23, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи CDR2, содержащую SEQ ID NO:24, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи CDR3, содержащую SEQ ID NO:25, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область легкой цепи CDR1, содержащую SEQ ID NO:26, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область легкой цепи CDR2, содержащую SEQ ID NO:27, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область легкой цепи CDR3, содержащую SEQ ID NO:28, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему:

(а) вариабельную область тяжелой цепи CDR1, содержащую SEQ ID NO:23, или ее консервативные модификации;

(b) вариабельную область тяжелой цепи CDR2, содержащую SEQ ID NO:24, или ее консервативные модификации;

(d) вариабельную область легкой цепи CDR1, содержащую SEQ ID NO:26, или ее консервативные модификации;

(e) вариабельную область легкой цепи CDR2, содержащую SEQ ID NO:27, или ее консервативные модификации; и

(f) вариабельную область легкой цепи CDR3, содержащую SEQ ID NO:28, или ее консервативные модификации.

В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи CDR1, содержащую SEQ ID NO:33, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи CDR2, содержащую SEQ ID NO:34, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжелой цепи CDR3, содержащую SEQ ID NO:35, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область легкой цепи CDR1, содержащую SEQ ID NO:36, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область легкой цепи CDR2, содержащую SEQ ID NO:37, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область легкой цепи CDR3, содержащую SEQ ID NO:38, или ее консервативные модификации. В другом аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему: (а) вариабельную область тяжелой цепи CDR1, содержащую SEQ ID NO:33, или ее консервативные модификации; (b) вариабельную область тяжелой цепи CDR2, содержащую SEQ ID NO:34, или ее консервативные модификации; (c) вариабельную область тяжелой цепи CDR3, содержащую SEQ ID NO:35, или ее консервативные модификации; (d) вариабельную область легкой цепи CDR1, содержащую SEQ ID NO:36, или ее консервативные модификации; (e) вариабельную область легкой цепи CDR2, содержащую SEQ ID NO:37, или ее консервативные модификации; и (f) вариабельную область легкой цепи CDR3, содержащую SEQ ID NO:38, или ее консервативные модификации.

В дополнительном аспекте предлагается выделенное антитело или его антигенсвязывающий участок, которые связываются с тем же эпитопом на интегрине α5β1 человека, что и любое антитело, описанное в данном документе, и/или конкурируют за связывание с интегрином α5β1 человека с таким антителом.

В одном из вариантов осуществления описание относится к материалу, депонированному в АТСС под номером доступа РТА-9377. В другом варианте осуществления описание относится к материалу, депонированному в АТСС под номером доступа РТА-9378. В другом варианте осуществления описание относится к выделенному антителу, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, депонированную в АТСС под номером доступа РТА-9377. В другом варианте осуществления описание относится к выделенному антителу, которое содержит вариабельную область легкой цепи, депонированную в АТСС под номером доступа РТА-9378. В другом варианте осуществления описание относится к выделенному антителу, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, депонированную в АТСС под номером доступа РТА-9377, но у которого в VH-области получены мутации зародышевой линии I30S и N33S. В дополнительном варианте осуществления описание относится к выделенному антителу, которое содержит вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи, депонированные в АТСС под номерами доступа РТА-9377 и РТА-9378, соответственно, или указанному антителу, у которого в VH-области созданы мутации зародышевой линии I30S и N33S. В дополнительном варианте осуществления описание относится к выделенному антителу, которое содержит области CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи вариабельной области тяжелой цепи, депонированной в АТСС под номером доступа РТА-9377, или содержит указанные области CDR1, CDR2 и CDR3, если указанная вариабельная область тяжелой цепи содержит мутации зародышевой линии I30S и N33S. В дополнительном варианте осуществления описание относится к выделенному антителу, которое содержит области CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи вариабельной области легкой цепи, депонированной в АТСС под номером доступа РТА-9378. В дополнительном варианте осуществления описание относится к выделенному антителу, которое содержит области CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи и области CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи вариабельных областей тяжелой и легкой цепей, депонированных в АТСС под номерами доступа РТА-9378 и РТА-9378, соответственно, или содержит указанные области CDR1, CDR2 и CDR3, если указанная вариабельная область тяжелой цепи содержит мутации зародышевой линии I30S и N33S.

Антитела по изобретению могут представлять собой, например, полноразмерные антитела, например, подкласса IgG1 или IgG4. Альтернативно, антитела могут представлять собой фрагменты антител, такие как Fab- или Fab'2-фрагменты, или одноцепочечные антитела. В одном из случаев настоящее описание относится к любому антителу, описанному выше, которое представляет собой полноразмерное антитело человека подкласса IgG1, в котором, по меньшей мере, одна аминокислота в Fc-области подкласса IgG1 мутирована. В дополнительном случае, по меньшей мере, одна мутация наблюдается в позиции серин 247, аланин 338 или изолейцин 340. В дополнительном случае, по меньшей мере, одну мутацию выбирают из группы, состоящей из S247D, A338L и I340E. В еще одном дополнительном случае антитело содержит мутации S247D, A338L и I340E.

В дополнительном аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу, содержащему тяжелую цепь, представленную в SEQ ID NO:9, или ее консервативные модификации. Например, антитело содержит тяжелую цепь, которая, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере, на 85%, по меньшей мере, на 90%, по меньшей мере, на 95%, по меньшей мере, на 97%, по меньшей мере, на 98%, или, по меньшей мере, на 99% идентична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:9. В дополнительном аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу, содержащему легкую цепь, представленную в SEQ ID NO:10, или ее консервативные модификации. Например, антитело содержит легкую цепь, которая, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере, на 85%, по меньшей мере, на 90%, по меньшей мере, на 95%, по меньшей мере, на 97%, по меньшей мере, на 98%, или, по меньшей мере, на 99% идентична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:10. В дополнительном аспекте описание относится к выделенному моноклональному антителу, содержащему тяжелую цепь, представленную в SEQ ID NO:9, или ее консервативные модификации и легкую цепь, представленную в SEQ ID NO:10, или ее консервативные модификации. Например, антитело содержит тяжелую цепь, которая, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере, на 85%, по меньшей мере, на 90%, по меньшей мере, на 95%, по меньшей мере, на 97%, по меньшей мере, на 98%, или, по меньшей мере, на 99% идентична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:9, и легкую цепь, которая, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере, на 85%, по меньшей мере, на 90%, по меньшей мере, на 95%, по меньшей мере, на 97%, по меньшей мере, на 98%, или, по меньшей мере, на 99% идентична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:10.

В некоторых вариантах осуществления С-концевой лизин тяжелой цепи какого-либо описанного антитела против α5β1 по изобретению расщепляют и, таким образом, он не представлен. Например, в некоторых вариантах осуществления антитела по настоящему изобретению содержат константную область тяжелой цепи, представленную в SEQ ID NO:43, но где С-концевой лизин не представлен. В большом числе случаев тяжелая и легкая цепи антител против α5β1 необязательно могут включать сигнальную последовательность.

В дополнительном аспекте описание относится к композиции, содержащей любое из антител или их антигенсвязывающих участков, описанных в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель.

В дополнительном аспекте описание относится к иммуноконъюгату, содержащему любое из антител или их антигенсвязывающих участков, описанных в данном документе, связанное с терапевтическим агентом. В одном из случаев терапевтический агент представляет собой цитотоксин или радиоактивный изотоп. В дополнительном аспекте описание относится к композиции, содержащей любой иммуноконъюгат, описанный в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель. Описание также относится к биспецифической молекуле, содержащей антитело или его антигенсвязывающий участок, связанные со вторым функциональным фрагментом, обладающим специфичностью связывания, отличной от специфичности связывания указанного антитела или его антигенсвязывающего участка.

Также предлагаются композиции, содержащие антитело или его антигенсвязывающий участок или иммуноконъюгат, или биспецифическую молекулу по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.

Также изобретением охватываются молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие антитела или их антигенсвязывающие участки, а также экспрессирующие векторы, содержащие такие нуклеиновые кислоты, и клетки-хозяева, содержащие такие экспрессирующие векторы. Один из аспектов, например, представляет собой выделенную молекулу нуклеиновой кислоты или экспрессирующий вектор, содержащие последовательность, представленную в SEQ ID NO:11, или ее консервативные модификации. Дополнительный аспект представляет собой выделенную молекулу нуклеиновой кислоты или экспрессирующий вектор, содержащие последовательность, представленную в SEQ ID NO:12, или ее консервативные модификации. Дополнительный аспект представляет собой выделенную молекулу нуклеиновой кислоты или экспрессирующий вектор, содержащие последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:21, 22, 31, 32, 41 и 42, или ее консервативные модификации. Описание также относится к трансгенной мыши, содержащей трансгены тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина человека, где мышь экспрессирует антитело по изобретению, а также гибридомам, полученным из такой мыши, где гибридома продуцирует антитело по изобретению.

Описание дополнительно относится к клетке-хозяину, содержащей любой из экспрессирующих векторов, описанных в данном документе.

В дополнительном аспекте описание относится к способу получения антитела против интегрина α5β1, который включает экспрессию антитела в любой клетке-хозяине, описанной в данном документе, и выделение антитела из клетки-хозяина.

В дополнительном аспекте описание относится к способу ингибирования роста опухолевых клеток, экспрессирующих интегрин α5β1, включающему приведение клеток в контакт с антителом или его антигенсвязывающим участком, которые связываются с интегрином α5β1 человека с K_D 1×10^-7 M или меньше и способны индуцировать антителозависимую клеточную цитотоксичность. В одном из случаев антитело представляет собой полностью антитело человека. В дополнительном случае антитело или его антигенсвязывающий участок создают так, чтобы усилить его способность индуцировать антителозависимую клеточную цитотоксичность. В еще одном дополнительном случае усиление достигается за счет мутации, по меньшей мере, одного аминокислотного остатка в Fc-области.

В дополнительном аспекте изобретение относится к способу ингибирования роста опухолевых клеток, экспрессирующих интегрин α5β1, включающему приведение клеток в контакт с любым из антител или их антигенсвязывающих участков, описанных в данном документе, в количестве, эффективном для ингибирования роста опухолевых клеток.

В дополнительном аспекте изобретение относится к применению любого из антител или их антигенсвязывающих участков, описанных в данном документе, для производства лекарственного препарата для лечения аномального клеточного роста. В еще одном дополнительном аспекте изобретение относится к любому из антител или их антигенсвязывающих участков, описанных в данном документе, для применения в лечении и/или диагностике аномального роста клеток. В одном из вариантов осуществления данного способа аномальный рост клеток представляет собой рак, включая, но ими не ограничиваясь, мезотелиому, рак гепатобилиарной системы (печени и желчевыводящих путей), первичную или вторичную опухоль ЦНС, первичную или вторичную опухоль мозга, рак легких (NSCLC и SCLC), рак костей, рак поджелудочной железы, рак кожи, рак головы или шеи, меланому кожи или внутриглазную меланому, рак яичников, рак толстого кишечника, рак прямой кишки, анальный рак, рак желудка, рак органов желудочно-кишечного тракта (желудка, колоректальный и 12 перстной кишки), рак молочных желез, рак матки, карциному фаллопиевых труб, карциному эндометрия, карциному цервикального канала, карциному вагины, карциному вульвы, болезнь Ходжкина, рак пищевода, рак тонкого кишечника, рак эндокринной системы, рак щитовидной железы, рак паращитовидной железы, рак надпочечников, саркому мягких тканей, рак мочеиспускательного канала, рак пениса, рак простаты, рак яичка, хронический или острый лейкоз, хронический миелоидный лейкоз, лимфоцитарные лимфомы, рак мочевого пузыря, рак почки или мочеточника, почечно-клеточную карциному, карциному почечной лоханки, новообразования центральной нервной системы (ЦНС), первичную лимфому ЦНС, неходжкинскую лимфому, опухоли спинного мозга, глиому ствола мозга, аденому гипофиза, адренокортикальный рак, рак желчного пузыря, множественную миелому, холангиокарциному, фибросаркому, нейробластому, ретинобластому или сочетание одной или нескольких вышеуказанных злокачественных опухолей.

Описание также относится к способам создания «второго поколения» антител против α5β1 на основании последовательностей антител против α5β1, предложенных в данном документе. Например, описание относится к способу получения антитела против α5β1, содержащему: (а) получение: (i) последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела, содержащей последовательность CDR1, представленную в SEQ ID NO:1, 13, 23 или 33, последовательность CDR2, представленную в SEQ ID NO:2, 14, 24 или 34, и/или последовательность CDR3, представленную в SEQ ID NO:3, 15, 25 или 35; и/или (ii) последовательности вариабельной области легкой цепи антитела, содержащей последовательность CDR1, представленную в SEQ ID NO:4, 16, 26 или 36, последовательность CDR2, представленную в SEQ ID NO:5, 17, 27 или 37, и/или последовательность CDR3, представленную в SEQ ID NO:6, 18, 28 или 38; (b) изменение, по меньшей мере, одного аминокислотного остатка в последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела и/или последовательности вариабельной области легкой цепи антитела для создания, по меньшей мере, одной измененной последовательности антитела; и (с) экспрессию измененной последовательности антитела в виде белка.

Другие особенности и преимущества настоящего описания будут понятны из следующего подробного описания и примеров, которые не должны быть истолкованы как ограничивающие. Содержание всех ссылок, данных Генбанка, патентов и опубликованных патентных заявок, процитированных в данном описании изобретения, прямо приводится в данный документ в качестве ссылок.

Краткое описание чертежей

На фиг.1А представлена последовательность ДНК вариабельной области тяжелой цепи антитела 22В5 (SEQ ID NO:11); на фиг.1В представлена аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела 22В5 (SEQ ID NO:7) - CDR-области подчеркнуты; на фиг.1С представлена последовательность ДНК вариабельной области легкой цепи антитела 22В5 (SEQ ID NO:12); на фиг.1D представлена аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи антитела 22В5 (SEQ ID NO:8) - CDR-области подчеркнуты; на фиг.1Е представлена последовательность ДНК вариабельной области тяжелой цепи антитела 24С7 (SEQ ID NO:21); на фиг.1F представлена аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела 24С7 (SEQ ID NO:19) - CDR-области подчеркнуты; на фиг.1G представлена последовательность ДНК вариабельной области легкой цепи антитела 24С7 (SEQ ID NO:22); на фиг.1Н представлена аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи антитела 24С7 (SEQ ID NO:20) - CDR-области подчеркнуты; на фиг.1I представлена последовательность ДНК вариабельной области тяжелой цепи антитела 1D9 (SEQ ID NO:31); на фиг.1J представлена аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела 1D9 (SEQ ID NO:29) - CDR-области подчеркнуты. На фиг.1K представлена последовательность ДНК вариабельной области легкой цепи антитела 1D9 (SEQ ID NO:32); на фиг.1L представлена аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи антитела 1D9 (SEQ ID NO:30) - CDR-области подчеркнуты; на фиг.1М п

Антитела против альфа5-бета 1 и их применение

Патент 2528736