Варианты иммуноглобулина и их применения

Варианты иммуноглобулина и их применения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Релевантные заявки

Данная заявка является непредварительной заявкой, поданной по 37 CFR 1.53(b)(1), по которой испрашивается приоритет по 35 USC 119(e) предварительной заявки 61/105086, поданной 14 октября 2008 года, предварительной заявки 61/152131, поданной 12 февраля 2009 года, предварительной заявки 61/171768, поданной 22 апреля 2009 года, и предварительной заявки 61/220514, поданной 25 июня 2009 года, содержание которых включено в данный документ посредством ссылки.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение главным образом относится к области молекулярной биологии. Конкретнее, настоящее изобретение относится к вариантам иммуноглобулина IgG с измененными биологическими свойствами и способам их применения.

Уровень техники

С течением времени применение иммуноглобулинов в качестве лекарственных средств существенно возросло. Иммуногобулиновые молекулы (Ig), составляющие важную часть иммунной системы, представляют большой интерес, поскольку (1) они взаимодействуют с различными семействами лигандов; (2) обладают различными эффекторными функциями и (3) имеют большое биологическое значение. В настоящее время применение лекарственных средств на основе антител включает лечение рака, аутоиммунных заболеваний, а также различных системных и инфекционных заболеваний. Кроме того, иммуноглобулины являются пригодными для применения в качестве диагностических средств в условиях in vivo, например, при диагностических визуализирующих процедурах.

IgG представляет собой наиболее распространенный класс иммуноглобулинов у людей и других млекопитающих и применяется в различных типах иммунотерапии и диагностических методов. IgG₁ человека представляет собой наиболее широко применяемое антитело для терапевтических целей. В настоящее время многие антитела, проходящие клинические испытания, направлены на опухолевые антигены. В частности, было показано, что многие нейтрализующие анти-VEGF антитела ингибируют рост различных клеток опухолевых линий человека у безтимусных мышей (Kim et al., Nature, 362:841-844 (1993); Warren et al., J. Clin. Invest., 95:1789-1797 (1995); Borgstrom et al., Cancer Res., 56:4032-4039 (1996) и Melnyk et al., Cancer Res., 56:921-924 (1996)) и также подавляют ангиогенез внутри глаза на моделях ишемических нарушений сетчатки (Adamis et al., Arch. Ophthalmol., 114:66-71 (1996)). Действительно, гуманизированное анти-VEGF антитело, бевацизумаб (авастин®, Genentech, South San Francisco, CA), является первым разрешенным FDA для применения лекарственным средством, предназначенным для ингибирования ангиогенеза.

Несмотря на потенциальные возможности, одной из проблем, связанных с иммунотерапией иммуноглобулинами, является персистенция иммуноглобулинов в кровотоке. Скорость клиренса иммуноглобулинов оказывает непосредственное влияние на количество и кратность дозирования иммуноглобулина. Повышенная дозировка и кратность введения могут вызвать негативные эффекты у пациента, а также привести к увеличению стоимости лечения.

Механизм катаболизма IgG в кровотоке исследовался в опытах, связанных с передачей пассивного иммунитета от матери к плоду/новорожденному через плаценту и желточный мешок, или через молозиво (передача от матери плоду IgG посредством трансцитоза) у грызунов (Brambell, Lancett, ii:1087-1093 (1966); Rodewald, J. Cell Biol., 71:666-670 (1976); Morris et al., In: Antigen Absorption by the Gut, pp. 3-22 (1978), University Park Press; Jones et al., J. Clin. Invest., 51:2916-2927 (1972)). Fc-рецептор новорожденных (FcRn) играет важную роль в трансцитозе и гомеостазе IgG у млекопитающих. В структурном отношении FcRn гомологичен молекулам главного комплекса гистосовместимости класса I (MHC) и состоит из трансмембранной цепи α и β₂-микроглобулина (β2m). В предшествующих исследованиях, проведенных на нокаутных мышах, было показано, что время полужизни IgG в сыворотке крови мышей с дефицитом FcRn или β2m значительно снижено (Roopenian et al., J. Immunol., 170(7), 3528-3533 (2003); Israel et al., Immunology, 89(4), 573-578 (1996)), что свидетельствует о защитной роли FcRn в регуляции уровня циркулирующего IgG. В результате проведения экспериментов с сайт-направленным мутагенезом в Fc-области мышиных IgG идентифицировали некоторые аминокислотные остатки, принимающие участие во взаимодействии IgG и FcRn (Kim et al., Eur. J. Immunol., 24:2429-2434 (1994); Medesan et al., Eur. J. Immunol., 26:2533 (1996); Medesan et al., J. Immunol., 158:2211-2217 (1997)). Кроме того, в различных публикациях описаны способы получения физиологически активных молекул с модифицированным временем полужизни интродукцией или модификацией FcRn-связывающей области IgG (международная заявка WO 97/43316; патент США № 5869046; патент США № 5747035; международная заявка WO 96/32478; международная заявка WO 2006053301; патент США № 7083784; патент США № 7371826).

На молекулярном уровне FcRn связывается с Fc-участком IgG в домене C_H2-C_H3. Взаимодействие Fc-FcRn в большой степени зависит от рН; IgG связывается с FcRn с высокой аффинностью при рН 6, но по мере повышения рН до 7,4 аффинность существенно снижается. Данное зависимое от рН взаимодействие ответственно за защиту IgG от разрушения. В частности, подвергшийся пиноцитозу IgG захватывается FcRn в эндосоме с кислой средой, рециркулирует обратно на клеточную поверхность и затем вновь высвобождается в кровоток при физиологическом значении рН сыворотки, равном 7,4 (Ober et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(30), 11076-11081 (2004); Ober et al., J. Immunol., 172(4), 2021-2029 (2004); Prabhat et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 104(14), 5889-5894 (2007)). IgG, который не связан с FcRn, направляется в лизосому и подвергается деградации. Поскольку FcRn играет важную роль в регуляции гомеостаза IgG, то модуляция взаимодействия между Fc и FcRn посредством конструирования белка представляет способ совершенствования фармакокинетики терапевтических антител (Shields et al., J. Biol. Chem., 276(9), 6591-6604 (2001); Dall'Acqua et al., Nat. Biotechnol., 15(7), 637-640 (1997); Dall'Acqua et al., J. Immunol., 169(9), 5171-5180 (2002); Hinton et al., J. Biol. Chem., 279(8), 6213-6216 (2004); Hinton et al., J. Immunol., 176(1), 346-356 (2006); Datta-Mannan et al., Drug Metab. Dispos., 35(1), 86-94 (2007); Datta-Mannan et al., J. Biol. Chem., 282(3), 1709-1717 (2007)). Результаты исследований на мышах, резус макаках и обезьянах рода Cynomolgus показали, что повышение зависимой от рН 6 аффинности связывания IgG может пролонгировать время полужизни IgG (Dall'Acqua et al., Nat. Biotechnol., 15(7), 637-640 (1997); Dall'Acqua et al., J. Immunol., 169(9), 5171-5180 (2002); Hinton et al., J. Biol. Chem., 279(8), 6213-6216 (2004); Hinton et al., J. Immunol., 176(1), 346-356 (2006)). Кроме того, результаты других исследований показали, что аффинность связывания с FcRn при рН 7,4 представляет собой дополнительную детерминанту для фармакокинетики IgG. В частности, некоторые варианты с повышенной аффинностью связывания при рН 7,4 с мышиным FcRn имеют повышенный клиренс (т.е. уменьшенное время полужизни) у мышей (Dall'Acqua et al., J. Immunol., 169(9), 5171-5180 (2002)). Тем не менее, тесная взаимосвязь между аффинностью FcRn и временем полужизни не выяснена, поскольку все ранее проведенные исследования включали небольшое число вариантов с ограниченным рядом значений аффинности FcRn. Максимальное увеличение времени полужизни, достигаемое конструированием взаимодействия Fc:FcRn, остается неясным.

Несмотря на тот факт, что соблюдение (или следование) пациентами назначенной схемы лечения лекарственными средствами является важным, установлено, что половина из тех пациентов, которым прописаны средства, не принимают их в рекомендованном режиме. Например, результаты недавно проведенного исследования показали, что примерно треть женщин, принимающих средства по поводу рака молочной железы, разработанные в последние 10 лет, не завершают рекомендованный пятилетний курс. Некоторые причины несоблюдения схем лечения включают забывчивость, физические затруднения в соблюдении (например, путешествие или отъезд из места лечения), неудобство, побочные эффекты, сложная схема приема средств или высокая стоимость средств. Слабое соблюдение прописанных схем лечения лекарственными средствами может привести к получению более низких результатов лечения, чем полное выздоровление, которое могут обеспечить средства пациентам. Например, отсутствие завершения рекомендованного курса противоопухолевой терапии может привести к рецидиву заболевания и снижению выживаемости пациента.

Стратегии повышения строгого следования схемам терапии лекарственными средствами включают обеспечение большего удобства для пациентов для завершения рекомендованного курса лечения. Одним способом обеспечения этого для пациентов, проходящих лечение иммунотерапией, является увеличение продолжительности времени, в течение которого иммуноглобулины находятся в кровотоке. Скорость клиренса иммуноглобулина оказывает самое прямое влияние на количество и кратность введения иммуноглобулина. Следовательно, разработав иммуноглобулин с увеличенным временем полужизни в условиях in vivo, можно снизить количество и/или кратность введений, сведя до минимума возможные неудобства, а также любые дополнительные затраты.

Следовательно, будет очень преимущественным иметь модифицированные иммуноглобулины с увеличенным временем полужизни в условиях in vivo для терапевтических целей. Настоящее изобретение относится к данным и другим потребностям, как станет очевидным при знакомстве с последующим описанием.

Сущность изобретения

Изобретение относится к новым вариантам IgG и их применениям. В изобретении предлагается ряд вариантов IgG. Например, настоящее изобретение относится к новым вариантам IgG, включающим Fc-участок человеческого IgG, содержащий две или более аминокислотных замен, по сравнению с Fc-участком человеческого IgG дикого типа, в двух или более аминокислотных остатках 251, 252, 307, 308, 378, 428, 430, 434 и 436 по EU-системе нумерации по Kabat, где вариантные IgG имеют увеличенное время полужизни по сравнению с временем полужизни IgG, имеющего Fc-участок человеческого IgG дикого типа, и где, по меньшей мере, две аминокислотные замены находятся в аминокислотных остатках 251, 252, 307, 308, 378, 428, 430, 434 и 436, и аминокислотная замена в аминокислотном остатке 251 представляет замену на аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 252 представляет замену на тирозин, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 307 представляет замену на глутамин, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 308 представляет замену на пролин, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 378 представляет замену на валин, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 428 представляет замену на лейцин, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 430 представляет замену на аланин или лизин, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 434 представляет замену на аланин, серин или тирозин, и аминокислотная замена в аминокислотном остатке 436 представляет замену на изолейцин.

В некоторых вариантах осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 251, где аминокислотная замена в аминокислоте 251 представляет замену на аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту. В некоторых вариантах осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 307, где аминокислотная замена в аминокислоте 307 представляет замену на глутамин. В некоторых вариантах осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 308, где аминокислотная замена в аминокислоте 308 представляет замену на пролин. В некоторых вариантах осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 378, где аминокислотная замена в аминокислоте 378 представляет замену на валин. В некоторых вариантах осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 436, где аминокислотная замена в аминокислоте 436 представляет замену на изолейцин. В некоторых вариантах осуществления вариантные IgG обладают более высокой аффинностью связывания для FcRn по сравнению с IgG, имеющим Fc-участок человеческого IgG дикого типа.

В одном варианте осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 307 на глутамин и аминокислотную замену в аминокислоте 434 на аланин. В одном варианте осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 307 на глутамин и аминокислотную замену в аминокислоте 434 на серин. В одном варианте осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 308 на пролин и аминокислотную замену в аминокислоте 434 на аланин. В одном варианте осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 252 на тирозин и аминокислотную замену в аминокислоте 434 на аланин. В одном варианте осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 378 на валин и аминокислотную замену в аминокислоте 434 на аланин. В одном варианте осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 428 на лейцин и аминокислотную замену в аминокислоте 434 на аланин. В одном варианте осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 434 на аланин и аминокислотную замену в аминокислоте 436 на изолейцин. В одном варианте осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 308 на пролин и аминокислотную замену в аминокислоте 434 на тирозин. В одном варианте осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 307 на глутамин и аминокислотную замену в аминокислоте 436 на изолейцин.

Настоящее изобретение также относится к новым вариантам IgG, включающим Fc-участок человеческого IgG, содержащий три или более аминокислотных замен, по сравнению с Fc-участком человеческого IgG дикого типа, в трех или более аминокислотных остатках 251, 252, 307, 308, 378, 380, 428, 430, 434 и 436, по EU-системе нумерации по Kabat, где варианты IgG имеют увеличенное время полужизни по сравнению с временем полужизни IgG, имеющего Fc-участок человеческого IgG дикого типа, и где, по меньшей мере, три аминокислотные замены находятся в аминокислотных остатках 251, 252, 307, 308, 378, 380, 428, 430, 434 и 436, и аминокислотная замена в аминокислотном остатке 251 представляет замену на аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 252 представляет замену на тирозин, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 307 представляет замену на глутамин, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 308 представляет замену на пролин, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 378 представляет замену на валин, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 380 представляет замену на аланин, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 428 представляет замену на лейцин, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 430 представляет замену на аланин или лизин, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 434 представляет замену на аланин, серин, тирозин или гистидин, и аминокислотная замена в аминокислотном остатке 436 представляет замену на изолейцин.

В некоторых вариантах осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 251, где аминокислотная замена в аминокислоте 251 представляет замену на аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту. В некоторых вариантах осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 307, где аминокислотная замена в аминокислоте 307 представляет замену на глутамин. В некоторых вариантах осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 308, где аминокислотная замена в аминокислоте 308 представляет замену на пролин. В некоторых вариантах осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 378, где аминокислотная замена в аминокислоте 378 представляет замену на валин. В некоторых вариантах осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 436, где аминокислотная замена в аминокислоте 436 представляет замену на изолейцин. В некоторых вариантах осуществления вариантные IgG обладают более высокой аффинностью связывания для FcRn по сравнению с IgG, имеющим Fc-участок человеческого IgG дикого типа.

В одном варианте осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 307 на глутамин, аминокислотную замену в аминокислоте 380 на аланин и аминокислотную замену в аминокислоте 434 на серин. В одном варианте осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 307 на глутамин, аминокислотную замену в аминокислоте 380 на аланин и аминокислотную замену в аминокислоте 434 на аланин. В одном варианте осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 252 на тирозин, аминокислотную замену в аминокислоте 308 на пролин и аминокислотную замену в аминокислоте 434 на тирозин. В одном варианте осуществления Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотную замену в аминокислоте 251 на аспарагиновую кислоту, аминокислотную замену в аминокислоте 307 на глутамин и аминокислотную замену в аминокислоте 434 на гистидин.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к вариантным IgG или их фрагментам, дополнительно содержащим аминокислотную замену в положении 297 на аланин.

В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG по настоящему изобретению обладает более высокой аффинностью связывания в отношении FcRn по сравнению с IgG, имеющим Fc-участок человеческого IgG дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG обладает более высокой аффинностью связывания в отношении FcRn при рН 6,0, чем при рН 7,4. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG представляет собой человеческий или гуманизированный IgG. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG представляет собой IgG₁, IgG₂, IgG₃ или IgG₄. В некоторых вариантах осуществления IgG Fc-участок вариантного IgG представляет собой Fc-участок IgG₁, IgG₂, IgG₃ или IgG₄. В некоторых вариантах осуществления IgG Fc-участок вариантного IgG представляет собой Fc-участок IgG₁.

В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG представляет собой анти-VEGF антитело. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG представляет собой вариант бевацизумаба. В некоторых вариантах осуществления IgG, имеющий Fc-участок человеческого IgG дикого типа, представляет собой бевацизумаб. В некоторых вариантах осуществления IgG, имеющий Fc-участок человеческого IgG дикого типа, представляет собой Fc-участок бевацизумаба. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG содержит вариабельный домен тяжелой цепи (SEQ ID NO:1) и вариабельный домен легкой цепи (SEQ ID NO:2). В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG содержит вариабельный домен тяжелой цепи (SEQ ID NO:3) и вариабельный домен легкой цепи (SEQ ID NO:4). В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG содержит вариабельный домен тяжелой цепи (SEQ ID NO:7) и вариабельный домен легкой цепи (SEQ ID NO:8).

Настоящее изобретение дополнительно раскрывает фармацевтические композиции, содержащие любой из вариантных IgG, описанных в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель. Также в данном документе раскрывается набор, содержащий любой из вариантных IgG, описанных в данном документе, в контейнере и инструкции по применению.

В некоторых вариантах осуществления время полужизни вариантного IgG увеличивается, по меньшей мере, на 50%, 100%, 150%, 200%, 300% и более по сравнению с IgG, имеющим Fc-участок человеческого IgG дикого типа. В некоторых вариантах осуществления время полужизни вариантного IgG увеличивается, по меньшей мере, в 2 раза по сравнению с IgG, имеющим Fc-участок человеческого IgG дикого типа. В некоторых вариантах осуществления время полужизни вариантного IgG увеличивается, по меньшей мере, в 3 раза по сравнению с IgG, имеющим Fc-участок человеческого IgG дикого типа. В некоторых вариантах осуществления время полужизни вариантного IgG увеличивается, по меньшей мере, в 4 раза по сравнению с IgG, имеющим Fc-участок человеческого IgG дикого типа. В некоторых вариантах осуществления IgG, имеющий Fc-участок человеческого IgG дикого типа, представляет собой бевацизумаб. В некоторых вариантах осуществления время полужизни вариантного IgG является средним временем полужизни бевацизумаба. В некоторых вариантах осуществления среднее время полужизни бевацизумаба составляет примерно 10-12 суток у обезьян рода Cynomolgus или примерно 3 недели у человека.

В некоторых вариантах осуществления представлены вариантные IgG, содержащие Fc-участок человеческого IgG, где Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотные замены по сравнению с Fc-участком человеческого IgG дикого типа в аминокислотных остатках 307 и 434 по EU-системе нумерации по Kabat, где вариантный IgG имеет увеличенное время полужизни по сравнению с временем полужизни IgG, имеющего Fc-участок человеческого IgG дикого типа, и где аминокислотная замена в аминокислотном остатке 307 представляет замену на глутамин, и аминокислотная замена в аминокислотном остатке 434 представляет замену на аланин. В одном варианте осуществления вариантный IgG представляет собой вариантный IgG₁, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи (SEQ ID NO:1) и вариабельный домен легкой цепи (SEQ ID NO:2), и включающий Fc-участок человеческого IgG₁, содержащий аминокислотные замены, по сравнению с Fc-участком человеческого IgG₁ дикого типа, в аминокислотных остатках 307 и 434 по EU-системе нумерации по Kabat, где вариантный IgG₁ имеет увеличенное время полужизни по сравнению с временем полужизни IgG₁, имеющего Fc-участок человеческого IgG₁ дикого типа, и где аминокислотная замена в аминокислотном остатке 307 представляет замену на глутамин, и аминокислотная замена в аминокислотном остатке 434 представляет замену на аланин.

В другом варианте осуществления представлены вариантные IgG, включающие Fc-участок человеческого IgG, где Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотные замены, по сравнению с Fc-участком человеческого IgG дикого типа, в аминокислотных остатках 307 и 434 по EU-системе нумерации по Kabat, где вариантный IgG имеет увеличенное время полужизни по сравнению с временем полужизни IgG, имеющего Fc-участок человеческого IgG дикого типа, и где аминокислотная замена в аминокислотном остатке 307 представляет замену на глутамин, и аминокислотная замена в аминокислотном остатке 434 представляет замену на серин.

В еще одном варианте осуществления представлены вариантные IgG, включающие Fc-участок человеческого IgG, где Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотные замены, по сравнению с Fc-участком человеческого IgG дикого типа, в аминокислотных остатках 308 и 434 по EU-системе нумерации по Kabat, где вариантный IgG₁ имеет увеличенное время полужизни по сравнению с временем полужизни IgG, имеющего Fc-участок человеческого IgG дикого типа, и где аминокислотная замена в аминокислотном остатке 308 представляет замену на пролин, и аминокислотная замена в аминокислотном остатке 434 представляет замену на аланин.

В еще одном варианте осуществления представлены вариантные IgG, включающие Fc-участок человеческого IgG, где Fc-участок человеческого IgG содержит аминокислотные замены, по сравнению с Fc-участком человеческого IgG дикого типа, в аминокислотных остатках 307, 380 и 434 по EU-системе нумерации по Kabat, где вариантный IgG имеет увеличенное время полужизни по сравнению с временем полужизни IgG, имеющего Fc-участок человеческого IgG дикого типа, и где аминокислотная замена в аминокислотном остатке 307 представляет замену на глутамин, аминокислотная замена в аминокислотном остатке 380 представляет замену на аланин, и аминокислотная замена в аминокислотном остатке 434 представляет замену на серин.

В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG, имеющий Fc-участок человеческого IgG, обладает более высокой аффинностью связывания в отношении FcRn по сравнению с IgG, имеющим Fc-участок человеческого IgG дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG имеет более высокую аффинность связывания в отношении FcRn при рН 6,0, чем при рН 7,4. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG представляет собой человеческий или гуманизированный IgG. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG представляет собой IgG₁, IgG₂, IgG₃ или IgG₄. В некоторых вариантах осуществления IgG Fc-участок вариантного IgG представляет собой Fc-участок IgG₁, IgG₂, IgG₃ или IgG₄. В некоторых вариантах осуществления IgG Fc-участок вариантного IgG представляет собой Fc-участок IgG₁. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG представляет собой анти-VEGF антитело. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG представляет собой вариант бевацизумаба. В некоторых вариантах осуществления IgG, имеющий Fc-участок человеческого IgG дикого типа, представляет собой бевацизумаб. В некоторых вариантах осуществления Fc-участок человеческого IgG дикого типа, представляет собой Fc-участок бевацизумаба. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG содержит вариабельный домен тяжелой цепи (SEQ ID NO:1) и вариабельный домен легкой цепи (SEQ ID NO:2). В некоторых вариантах осуществления представлена фармацевтическая композиция, содержащая любой из вариантных IgG, содержащих Fc-участок человеческого IgG, и фармацевтически приемлемый носитель. Также представлен набор, включающий любой из вариантных IgG, содержащих Fc-участок человеческого IgG, в контейнере и инструкции по применению.

В некоторых вариантах осуществления представлены вариантные IgG, включающие Fc-участок человеческого IgG₁, где вариантные IgG содержат вариабельный домен тяжелой цепи (SEQ ID NO:1) и вариабельный домен легкой цепи (SEQ ID NO:2), и где Fc-участок человеческого IgG₁ содержит аминокислотную замену, по сравнению с Fc-участком человеческого IgG₁ дикого типа, в аминокислотном остатке 434 по EU-системе нумерации по Kabat, где вариантный IgG имеет увеличенное время полужизни по сравнению с временем полужизни IgG, имеющего Fc-участок человеческого IgG₁ дикого типа, и где вариантный IgG имеет более высокую аффинность связывания в отношении FcRn по сравнению с IgG, имеющим Fc-участок человеческого IgG₁ дикого типа, и где аминокислотная замена в аминокислотном остатке 434 представляет замену на гистидин. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG представляет собой вариантный IgG₁.

В некоторых вариантах осуществления время полужизни вариантного IgG по настоящему изобретению увеличивается, по меньшей мере, на 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 100% по сравнению с временем полужизни IgG, имеющего Fc-участок человеческого IgG дикого типа. В одном варианте осуществления время полужизни вариантного IgG по настоящему изобретению увеличивается, по меньшей мере, на 50% по сравнению с временем полужизни IgG, имеющего Fc-участок человеческого IgG дикого типа. В еще одном варианте осуществления время полужизни вариантного IgG по настоящему изобретению увеличивается, по меньшей мере, на 75% по сравнению с временем полужизни IgG, имеющего Fc-участок человеческого IgG дикого типа. В еще одном варианте осуществления время полужизни вариантного IgG по настоящему изобретению увеличивается, по меньшей мере, на 100% по сравнению с временем полужизни IgG, имеющего Fc-участок человеческого IgG дикого типа.

В некоторых вариантах осуществления время полужизни вариантного IgG по настоящему изобретению составляет, по меньшей мере, примерно 15, 20, 25, 30, 35 или 40 суток. В одном варианте осуществления время полужизни вариантного IgG по настоящему изобретению составляет, по меньшей мере, примерно 15 суток. В еще одном варианте осуществления время полужизни вариантного IgG по настоящему изобретению составляет, по меньшей мере, примерно 20 суток. В еще одном варианте осуществления время полужизни вариантного IgG по настоящему изобретению составляет, по меньшей мере, примерно 25 суток. В еще одном варианте осуществления время полужизни вариантного IgG по настоящему изобретению составляет, по меньшей мере, примерно 30 суток. В еще одном варианте осуществления время полужизни вариантного IgG по настоящему изобретению составляет, по меньшей мере, примерно 35 суток. В одном варианте осуществления время полужизни вариантного IgG по настоящему изобретению составляет, по меньшей мере, примерно 40 суток. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG представляет собой вариантный IgG₁.

В некоторых вариантах осуществления время полужизни вариантного IgG по настоящему изобретению представляет собой время полужизни, определяемое у людей. В некоторых вариантах осуществления время полужизни вариантного IgG по настоящему изобретению представляет собой время полужизни, определенное у обезьян рода Cynomolgus. В некоторых вариантах осуществления IgG дикого типа или IgG, имеющий Fc-участок человеческого IgG дикого типа, представляет собой бевацизумаб. В некоторых вариантах осуществления время полужизни бевацизумаба составляет примерно 10-12 суток, которое определено у обезьян рода Cynomolgus, и примерно 20 суток, которое определено у людей.

Изобретение относится к ряду способов применения вариантов IgG. Представлены способы лечения опухоли у субъекта. Например, способы включают введение субъекту эффективного количества любых вариантных IgG, описанных выше и в данном документе. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG представляет собой анти-VEGF антитело. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG представляет собой вариант бевацизумаба. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают введение субъекту эффективного количества химиотерапевтического средства.

Изобретение относится к способам ингибирования активности VEGF. Например, способы включают введение указанному субъекту эффективного количества любых вариантных IgG, описанных выше и в данном документе. В некоторых вариантах осуществления активность VEGF представляет ангиогенез.

Изобретение относится к способам модуляции проницаемости сосудов. Например, способы включают введение указанному субъекту эффективного количества любых вариантных IgG, описанных выше и в данном документе.

Изобретение относится к способам лечения ненеопластического заболевания у субъекта. Например, способы включают введение указанному субъекту эффективного количества любых вариантных IgG, описанных выше и в данном документе. В некоторых вариантах осуществления ненеопластическое заболевание представляет собой аутоиммунное заболевание. В некоторых вариантах осуществления ненеопластическое заболевание представляет собой болезнь Альцгеймера. В некоторых вариантах осуществления у субъекта диагностируют возрастную дегенерацию желтого пятна.

Изобретение относится к способам лечения HER-экспрессирующей опухоли у субъекта. Например, способы включают введение указанному субъекту эффективного количества любых вариантных IgG, описанных выше и в данном документе. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG содержит вариабельный домен тяжелой цепи (SEQ ID NO:7) и вариабельный домен легкой цепи (SEQ ID NO:8).

Изобретение относится к способам ингибирования или предупреждения роста злокачественных клеток у субъекта. Например, способы включают введение указанному субъекту эффективного количества любых вариантных IgG, описанных выше и в данном документе.

Изобретение относится к способам введения субъекту эффективного количества вариантного IgG. Данные способы введения можно использовать в комбинации с другими способами (например, способами лечения), описанными в данном документе. В некоторых вариантах осуществления способы включают введение указанному субъекту эффективного количества любых вариантных IgG, описанных выше и в данном документе, и где вариантный IgG вводят субъекту каждые 4 недели или с большими интервалами. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG вводят каждые 5 недель или реже. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG вводят каждые 6 недель или реже. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG вводят каждые 7 недель или реже. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG вводят субъекту каждые 8 недель или реже. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG вводят каждые 9 недель или реже. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG вводят субъекту каждые 10 недель или реже. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG вводят каждые 11 недель или реже. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG вводят субъекту каждые 12 недель или реже. В некоторых вариантах осуществления способы включают введение указанному субъекту эффективного количества любых вариантных IgG, где вариантный IgG вводят реже, чем рекомендовано или прописано вводить IgG, имеющий Fc-участок человеческого IgG дикого типа. В некоторых вариантах осуществления IgG, имеющий Fc-участок человеческого IgG дикого типа, представляет собой бевацизумаб. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG, например вариант бевацизумаба, вводят реже, чем прописано вводить бевацизумаб.

В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG первоначально вводят каждые 2 недели и затем вводят каждые 4 недели или реже. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG первоначально вводят каждые 3 недели и затем вводят каждые 6 недель или реже. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG первоначально вводят каждые 4 недели и затем вводят каждые 8 недель или реже. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG первоначально вводят каждые 5 недель и затем вводят каждые 10 недель или реже. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG первоначально вводят каждые 6 недель и затем вводят каждые 12 недель или реже. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG, например вариант бевацизумаба, первоначально вводят с кратностью, прописанной для бевацизумаба, и затем вводят реже, чем прописано для бевацизумаба.

В некоторых вариантах осуществления способов, описанных в данном документе, вариантный IgG представляет собой анти-VEGF антитело. В некоторых вариантах осуществления анти-VEGF антитело содержит вариабельный домен тяжелой цепи (SEQ ID NO:1) и вариабельный домен легкой цепи (SEQ ID NO:2). В еще одном варианте осуществления анти-VEGF антитело представляет собой вариант бевацизумаба.

В некоторых вариантах осуществления вариантные IgG по изобретению вводят субъекту внутривенно. В некоторых вариантах осуществления вариантные IgG по изобретению вводят субъекту подкожно.

В некоторых вариантах осуществления способов, описанных в данном документе, субъектом является человек. В некоторых вариантах осуществления у субъекта диагностируют злокачественную опухоль. В некоторых вариантах осуществления злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из немелкоклеточного рака легких, рака органов мочевыводящих путей, рака яичника, глиобластомы, рака молочной железы и колоректального рака.

Также представлены способы лечения доброкачественной, предзлокачественной или неметастатической опухоли у субъекта, которые включают введение субъекту эффективного количества вариантного IgG. В некоторых вариантах осуществления введение вариантного IgG предупреждает превращение доброкачественной опухоли, предзлокачественной или неметастатической опухоли в инвазивную или метастатическую злокачественную опухоль. Например, доброкачественная, предзлокачественная или неметастатическая опухоль может быть опухолью на стадии 0, стадии I или стадии II развития, и в некоторых вариантах осуществления вариантный IgG предупреждает переход доброкачественной, предзлокачественной или неметастатической опухоли на следующую стадию(и), например, стадию I, стадию II, стадию III или стадию IV. В некоторых вариантах осуществления вариантный IgG вводят в течение времени и в количестве, достаточных для лечения доброкачественной, предзлокачественной или неметастатической опухоли у субъекта или для предупреждения превращения доброкачественной, предзлокачественной или неметастатической опухоли в инвазивную или метастатическую злокачественную опухоль. В некоторых вариантах осуществления введение вариантного IgG приводит к снижению размера опухоли, опухолевой нагрузки или числа доброкачественных, предзлокачественных или неметастатических опухолей. Также вариантный IgG можно вводить в количестве или в течение времени для снижения плотности сосудов в доброкачественной, предзлокачественной или неметастатической опухоли.

Как описано в данном документе, способы по изобретению можно использовать для лечения, например, злокачественной опухоли на стадии 0 (например, карциномы in situ), стадии I или стадии II. Способы неоадъювантной или адъювантной терапии можно использовать для лечения любого типа опухоли, на