Композиции и способы воздействия на насыщение, липидный метаболизм и потребление жира

Композиции и способы воздействия на насыщение, липидный метаболизм и потребление жира

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится, в основном, к генам, которые дифференцированно экспрессируются у животных, и особенно к генам, которые дифференцированно экспрессируются у животных, получающих на регулярной долговременной основе амиды жирных кислот, которые воздействуют на один или более параметр из поглощения пищи, насыщения, липидного метаболизма и потребления жира, и к применению дифференцированно экспрессируемых генов для идентификации новых соединений, которые воздействуют на один или более из этих параметров и для модуляции связанного с ними фенотипа животного.

Уровень техники

Избыток жира и ожирение признаны мировой проблемой здоровья среди людей. По оценке Всемирной организации здравоохранения имеется более одного миллиарда взрослых с избыточным весом, причем до одной трети из них классифицируются как страдающие ожирением. Дополнительно, ожирение также признано возрастающей проблемой среди животных, особенно среди домашних животных, таких как собаки и кошки. Согласно данным Центра по контролю за болезнями (CDC), ожирение тесно связано по меньшей мере с риском других проблем здоровья, включая гипертензию, дислипидемию, диабет типа II, заболевания сердца, инсульт, синдром апноэ и некоторые вида рака, например, рак груди, эндометрия и рак ободочной кишки. Индивидуальные факторы риска возникновения ожирения включают генетические, эмоциональные/стрессовые факторы, переедание и сидячий образ жизни.

Борьба с ожирением началась по меньшей мере два десятилетия назад вместе с увеличением публичного распространения информации относительно риска, связанного с избыточным весом. Были введены и заново введены рекомендации относительно питания, которые широко распространялись и даже включались в школьную программу. Тем не менее, количество тучных и людей с избыточным весом по-прежнему возрастает. В дополнение к здоровой диете и более частым физическим упражнениям теперь часто прописывают лекарства для потери веса. Эти лекарства действуют на разных уровнях, включая имитацию заполнения желудка, снижение аппетита или ограничение поглощения жиров. Однако такие лекарства оказываются неудовлетворительными при долговременном употреблении частично из-за снижающейся со временем эффективности, а также из-за нежелательных побочных эффектов. По меньшей мере по этим причинам одобрение пациентом лекарств против ожирения может быть менее чем удовлетворительным. Ясно, что в данной области техники имеется потребность в обнаружении и создании новых лекарственных средств или пищевых добавок для борьбы с ожирением.

Амиды жирных кислот (РАЕ) или N-ацилэтаноламиды структурно родственны липидам, содержащим звено жирной кислоты, связанное с этаноламином. РАЕ представляют собой семейство природных липидов, которые обнаруживаются в тканях растений и животных, и оказывают действие на здоровье, например, при регуляции энергетического баланса, в контроле поглощения пищи и также обладают противовоспалительными свойствами. РАЕ также часто образуются in vivo из N-ацетилированных производных фосфатидилэтаноламина. Наиболее распространенными РАЕ, обнаруженными в биологических тканях, таких как мозг и нейроны, являются анандамин (N-арахидоноилэтаноламин) и N-олеоилэтаноламид (ОЕА). ОЕА также обнаруживается в небольших количествах в пище и, в основном, получается в результате эндогенного синтеза (Di Marzo V, 1999, Life Sci. 65:645-55).

Описано, что у грызунов внутрибрюшинное введение ОЕА индуцирует чувство насыщения и периферическую утилизацию липидного субстрата, приводя таким образом к уменьшению накопления жира в организме (Thabuis С, et al, 2007, Lipid Technology 19:225-7). Исследования in vitro и в модели на животных с нокаутом выявили некоторые механизмы действия, такие как передача сигнала PPAR-α (Fu J, et al, 2003, Nature 425:90-3), РАТ/СD36-зависимое поглощение липидов в проксимальном отделе кишечника (Yang Y, et al, 2007, Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 292:R235-41), избирательная активация нейронов (Ahem GP, 2003, J Biol Chem. 278:30429-34) и передача сигнала грелина (Cani PD, et al, 2004, Br J Nutr. 92:757-61). Проксимальный отдел кишечника представляется органом-мишенью для контроля насыщения (Thabuis С, et al, supra). Показано, что ОЕА регулирует поглощение пищи у мышей дикого типа, но не у мышей PPAR α (-/-). Недавно показано, что ОЕА может также связываться с каннабиноидным рецептором GPR119, сопряженным с G-белком (Overtoil НА, et al, 2006, Cell Metab. 3:167-75). При внутрибрюшном введении ОЕА уменьшает поглощение пищи путем воздействия на несколько параметров: уменьшение объема принимаемой пищи, задержку первого приема пищи и увеличение интервалов между приемами пищи (Oveisi F, et al, 2004, Pharmacol Res. 49:461-6). Воздействия орального введения ОЕА также исследовались через 24 часа после введения путем принудительного кормления и показано, что оно значительно снижает поглощение пищи в течение первых 12 часов (Id.), Однако вышеописанные исследования проводились только в течение коротких периодов времени (от 6 часов до 11 дней в случае внутрибрюшного введения, в течение 24 часов в случае орального введения) и продолжительные воздействия на насыщение или другие параметры, относящиеся к накоплению жира в организме, таким образом не были показаны.

В связи с данными задачами имеющихся на настоящий момент способов борьбы с ожирением, есть постоянная потребность в новых способах и композициях, полезных для скрининга веществ с целью определения возможности их применения для развития фенотипа без признаков ожирения у животного, и применения таких веществ для модуляции количества жировой ткани у животного.

Раскрытие изобретения

Таким образом, объектом настоящего изобретения является предоставление одного или более гена или сегмента генов, которые дифференцированно экспрессируются у животных, проявляющих фенотип, включающий уменьшение жира в организме и триглицеридов в плазме и увеличение насыщения, измеряемое по уменьшению поглощения пищи (фенотип RBF/IS), в результате продолжительного регулярного приема вещества, которое воздействует на один или более параметр из поглощения пищи, насыщения, липидного метаболизма и утилизации жира.

Другим объектом изобретения является предоставление комбинации, включающей множество полинуклеотидов, которые дифференцирование экспрессируются у животных с фенотипом, включающим фенотип RBF/IS, возникшим в результате продолжительного регулярного приема вещества, которое воздействует на один или более параметр из поглощения пищи, насыщения, липидного метаболизма и утилизации жира.

Дополнительным объектом изобретения является предоставление композиций из одной или более полинуклеотидной или полипептидной пробы, подходящих для детектирования экспрессии генов, которые дифференцированно экспрессируются у животных с фенотипом RBF/IS, возникшим в результате продолжительного регулярного приема вещества, которое воздействует на один или более параметр из поглощения пищи, насыщения, липидного метаболизма и утилизации жира, и приспособления, например, матрицы на подложке, содержащей пробы.

Дополнительным объектом изобретения является предоставление способов детектирования дифференцированной экспрессии одного или более гена, который дифференцирование экспрессируется у животных с фенотипом RBF/IS, возникшим в результате продолжительного регулярного приема вещества, которое воздействует на один или более параметр из поглощения пищи, насыщения, липидного метаболизма и утилизации жира, по сравнению с нормальными животными или животными, не подвергавшимися вмешательству.

Другим объектом изобретения является предоставление способа измерения эффекта тестируемого вещества на профиль экспрессии одного или более гена, дифференцированно экспрессируемого у животных с фенотипом RBF/IS, возникшим в результате продолжительного регулярного приема вещества, которое воздействует на один или более параметр из поглощения пищи, насыщения, липидного метаболизма и утилизации жира, по сравнению с нормальными животными или животными, не подвергавшимися вмешательству.

Дополнительным объектом изобретения является предоставление способа, способствующего развитию фенотипа RBF/IS у животных.

Один или более из этих объектов осуществляется с применением новой комбинации полинуклеотидов или полипептидов, представляющих гены и сегменты генов, которые дифференцированно экспрессируются у животных с фенотипов RBF/IS, возникшим в результате регулярного приема вещества, которое воздействует на один или более параметр из поглощения пищи, насыщения, липидного метаболизма и утилизации жира. Полинуклеотиды применяются для получения композиций, проб, приспособлений, основанных на пробах, и способов определения статуса полинуклеотидов, дифференцированно экспрессируемых у животных с фенотипом RBF/IS, по сравнению с нормальными животными или животными, не подвергавшимися вмешательству, которые применимы для выполнения вышеуказанных задач, например, прогнозирования и диагностики состояний, связанных с этим фенотипом, и для скрининга веществ с целью определения, пригодны ли они для развития этого фенотипа. Такие вещества после их идентификации могут применяться для развития этого фенотипа. Различные наборы, включающие комбинации проб, приспособлений, применяющих пробы, и веществ, также предоставлены, как и различные компьютерные программы для обработки информации и средства распространения информации относительно дифференцированно экспрессируемых генов и способов их применения.

Другие и дополнительные объекты, свойства и преимущества изобретения будут легко понятны специалисту в данной области техники.

Осуществление изобретения

Определения

Все процентные величины, приведенные здесь, представляют собой весовые проценты на основе сухого веса композиции, если не указано другое. Специалист в данной области техники поймет, что термин «на базе сухого веса» означает, что концентрации ингредиентов в композиции измеряются после удаления всякой свободной влаги из композиции.

Интервалы величин применяются здесь для краткости во избежание перечисления и описания всех и каждого значения внутри интервала. Каждое соответствующее значение внутри интервала может быть выбрано при необходимости, такое как высшее значение, низшее значение или конец интервала.

Дозы, представленные здесь, выражены в миллиграммах или граммах на килограмм веса тела (мг/кг или г/кг), если не указано другое.

Как применяется здесь, форма единственного числа слов включает множественное число и наоборот, если из контекста с очевидностью не проистекает обратное. Например, ссылки на «животное», «способ» или «вещество» включают формы множественного числа, такие как «животные», «способы» и «вещества». Сходным образом, слова «включают», «включает» и «включающий» следует понимать включительно, а не исключительно.

Термин «животное» означает человека или других животных, включая птиц, коров, собак, лошадей, кошек, hircine, мышей и крыс, овец и свиней, у которых есть жировая ткань. Когда термин применяют в контексте сравнения тестируемых субъектов, животные, которых сравнивают, являются животными одного вида и возможно, одной и той же расы или породы. «Домашнее животное» представляет собой любое одомашненное животное и включает, не ограничиваясь этим, кошек, собак, кроликов, морских свинок, хорьков, хомяков, мышей, песчанок, лошадей, коров, коз, овец, ослов, свиней и т.п. Предпочтительно, животное представляет собой человека или домашнее животное-компаньона, такого как собака или кошка.

Термин «антитело» означает любой иммуноглобулин, который связывается со специфическим антигеном, включая антитела IgG, IgM, IgA, IgD и IgE. Термин включает поликлональные, моноклональные, моновалентные, гуманизированные антитела, гетероконъюгаты, композиции антител с полиэпитопной специфичностью, химерные, биспецифичные антитела, диатела, одноцепочечные антитела и фрагменты антител, например, Fab, Fab', F(ab')2 и Fv или другие антиген-связывающие фрагменты.

Термин «матрица» означает упорядоченное расположение по меньшей мере двух проб на подложке. По меньшей мере одна из проб представляет собой контроль или стандарт и по меньшей мере одна из проб представляет собой диагностическую пробу. Расположение от примерно двух до примерно 40000 проб на подложке обеспечивает индивидуальное распознавание размера и интенсивности сигнала каждого меченого комплекса, образованного между пробой и полинуклеотидом или полипептидом образца.

Термин «связанный комплекс» относится к комплексу, образованному в результате специфичного связывания полипептида образца (как определено здесь) с партнером по связыванию, таким как антитело или его функциональный фрагмент.

Как применяется здесь, «пищевая добавка» представляет собой продукт, предназначенный для приема в дополнение к нормальной диете животного. Пищевые добавки могут быть в любой форме, например в твердой, в пакетике, в виде геля, таблеток, капсул, порошков и т.п. Предпочтительно, их предоставляют в соответствующих лекарственных формах. В отдельных осуществлениях их предоставляют в больших потребительских упаковках, таких как упаковки порошка или жидкости. В других осуществлениях добавки предоставлены в больших (неупакованных) количествах для включения в другие пищевые продукты, такие как закуски, угощения, палочки, напитки и т.п.

Термин «дифференцированная экспрессия» или «дифференцированно экспрессируемый» означает повышенную или нерегулируемую экспрессию генов или означает пониженную или регулируемую на понижение экспрессию генов, что детектируется по отсутствию, присутствию или по меньшей мере двухкратному изменению количества полученной при транскрипции мРНК или полученного при трансляции белка в образце.

Термин «эффективное количество» означает количество соединения, материала, композиции, лекарства или другого материала, которое является эффективным для достижения конкретного биологического результата, такого как способствование развитию фенотипа RBF/IS, описанного здесь.

Термин «пища» или «пищевая композиция» означает композицию, предназначенную для приема животным, включая человека, и предоставляющую питание. Как применяется здесь, «пищевой продукт, составленный для потребления человеком» представляет собой любую композицию, конкретно предназначенную для приема человеческим существом. «Пища для домашних животных» представляет собой композиции для поедания домашними животными, предпочтительно, домашними животными, компаньонами человека. «Полная и сбалансированная по питательным веществам пища для домашних животных» представляет собой такую пищу, которая содержит все известные необходимые питательные вещества для соответствующего реципиента или потребителя пищи в соответствующих количествах и пропорциях, на основе, например, рекомендаций признанных авторитетов в области питания домашних животных. Поэтому такая пища способна служить единственным источником питания для поддержания жизни или способствования производительности без дополнительных питательных ресурсов. Сбалансированные по питательным веществам пищевые композиции для домашних животных широко известны и широко применяются в данной области техники.

Термин «фрагмент» означает (1) олигонуклеотидную или полинуклеотидную последовательность, которая представляет собой часть полной последовательности и которая обладает такой же или сходной активностью для конкретного применения, как и полная полинуклеотидная последовательность, или (2) пептидную или полипептидная последовательность, которая представляет собой часть полной последовательности и которая обладает такой же или сходной активностью для конкретного применения, как и полная полипептидная последовательность. Такие фрагменты могут включать любое число нуклеотидов или аминокислот, соответствующее конкретному применению. В основном, олигонуклеотидный или полинуклеотидный фрагменты содержат по меньшей мере примерно 10, 50, 100 или 1000 нуклеотидов и полипептидные фрагменты содержат по меньшей мере примерно 4, 10, 20 или 50 последовательных аминокислотных остатков из полной последовательности. Термин охватывает варианты полинуклеотидных и полипептидных фрагментов.

Термин «ген» или «гены» означает полный или частичный сегмент ДНК, участвующий в продукции полипептида, включая районы, предшествующие кодирующему району и следующие за ним (лидерная и трейлерная последовательности), и прерывающие последовательности (интроны) между отдельными кодирующими сегментами (экзонами). Термин охватывает любую последовательность ДНК, которая гибридизуется с последовательностями, комплементарными кодирующей последовательности гена.

Термин «продукт гена» означает продукт транскрипции гена, такой как мРНК ли его производные (например, кДНК), или продукт трансляции транскрипта гена. Термин «продукт гена» обычно относится к продукту трансляции, такому как белок. Термин «продукт гена» может здесь применяться взаимозаменяемо с термином «белок».

Термин «гомолог» означает (1) полинуклеотид, включающий полинуклеотиды из того же или другого вида животного, имеющие более 30%, 50%, 70% или 90% сходства последовательности с полинуклеотидом сравнения и обладающие такими же или по существу такими же свойствами и выполняющие такие же или по существу такие же функции, как и полинуклеотид сравнения, или обладающие способностью к специфичной гибридизации с полинуклеотидом сравнения в жестких условиях, или (2) полипептид, включающий полипептиды из того же или другого вида животного, проявляющие более 30%, 50%, 70% или 90% сходства последовательности с полипептидом сравнения и обладающие такими же или по существу такими же свойствами и выполняющие такие же или по существу такие же функции, как и полипептид сравнения, или обладающие способностью к специфичному связыванию с полипептидом сравнения. В случае фрагментов полноцепочечных кодирующих последовательностей, функцией этих фрагментов просто может кодирование избранных частей полипептида определенной последовательности, или представление соответствующей сходной последовательности для гибридизации с другим полинуклеотидным фрагментом, кодирующим полипептид. В случае фрагментов полипептидов, функцией этих фрагментов просто может быть формирование эпитопа, подходящего для генерации антител. Сходство последовательностей двух полипептидов или двух полинуклеотидов определяется с помощью подходов, известных специалисту в данной области техники, например алгоритма Карлина и Алтшуля (Karlin and Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268 (1990)). Этот алгоритм включен в программы NBLAST и XBLAST (Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)). Для сравнения последовательностей с пропусками можно применять Gapped Blast, как описано в (Altschul et al. Nucl. Acids Res. 25:3389-3402 (1997)). При применении программ BLAST и Gapped BLAST можно применять заданные по умолчанию параметры соответствующих программ (e.g., XBLAST и NBLAST). См. http://ww.ncbi.nlm.nih.gov.

Термин «гибридизованный комплекс» означает комплекс, образованный между полинуклеотидами образца, когда пурины одного полинуклеотида образуют водородные связи с пиримидинами комплементарного полинуклеотида, например, 5'-A-G-T-C-3' образует пары оснований с 3'-T-C-A-G-5'. Степень комплементарности и применение аналогов нуклеотида влияет на эффективность и жесткость реакции гибридизации.

Термин «совместно» означает, что лекарство, пища или другое вещество вводят животному (1) вместе в составе композиции, конкретно, пищевой композиции или (2) отдельно с той же или с другой частотой с применением того же или другого пути введения примерно в то же самое время или так же периодически. «Периодически» означает, что вещество вводят по схеме дозировок, соответствующей конкретному веществу. «Примерно в то же время» обычно означает, что вещество (пищу или лекарство) вводят в одно и то же время или в пределах интервала примерно 72 часов между введениями. «Совместно» конкретно включает схемы введения, при которых вещества, такие как лекарства, вводят в течение предписанного периода и композиции согласно изобретению вводят неопределенно (долго).

Термин «индивидуальный» в отношении животного означает индивидуальное животное любого вида или сорта.

«Продолжительное» введение, как применяется здесь, обычно означает периоды больше одного месяца. Периоды продолжительнее двух, трех или четырех месяцев также охвачены. Термин также включает более продолжительные периоды, включающие, например, более 5, 6, 7, 8, 9 или 10 месяцев. Периоды, превосходящие 11 месяцев или 1 год, также включены. Более длительные периоды, превышающие 1, 2, 3 года или более, также включены. В случае отдельных животных можно предвидеть, что животному будут регулярно вводить вещество, идентифицированные с помощью настоящих способов. «Регулярно», как применяется здесь, означает по меньшей мере еженедельное введение. Более частое введение, например, дважды или трижды в неделю, также охвачено. Включены также схемы введения, включающие по меньшей мере однократное, двукратное, трехкратное или более ежедневное введение. Любая частота дозировки независимо от того, указана ли она здесь, считается применимой. Специалист в данной области техники поймет, что частота дозировки является функцией вещества, предназначенного для введения и отдельные композиции могут нуждаться в более или менее частом введении для поддержания желательного биохимического, физиологического действия или действия на экспрессию генов, а именно эффектов, включающих один или более параметр из поглощения пищи, насыщения, липидного метаболизма и утилизации жира и профиля экспрессии генов, связанный с ними. Термин «на продолжительной регулярной основе» относится к продолжительному введению вещества регулярным образом.

«Нормальный» или «нормальные субъекты», или «нормальные животные», как применяется в связи с субъектами, проявляющими фенотип RBF/IS, означает отсутствие молекулярных, биохимических, физиологических, клеточных, системных и физических эффектов, происходящих в результате дифференцированной экспрессии генов, связанных с фенотипом RBF/IS.

Термин «оральное (пероральное) введение» означает, что животное заглатывает или человеку предписано кормить или он кормит животное одним или более веществом, описанным здесь. Термин «прием» применяется здесь взаимозаменяемо с термином «оральное введение». Когда человеку предписано вводить орально или скармливать вещество, такое предписание может инструктировать и/или информировать человека о том, что применение вещества может предоставить и/или предоставит соответствующие преимущества. Такая инструкция может быть устной инструкцией (например, устной инструкцией, например, лечащего врача/терапевта, ветеринара или другого специалиста в области здравоохранения, или полученной по радио или телевизору (например, реклама), или письменной инструкцией (например, написанной терапевтом, ветеринаром или другим специалистом в области здравоохранения (например, рецепт), специалистом по продаже или организацией (например, в торговых брошюрах, листках или других инструктивных печатных материалах), представленной письменно в средствах массовой информации (например, в Интернете, электронной почте и других связанные с компьютерами средствах) и/или на упаковке, связанной с веществом.

Термин «полинуклеотид» или «олигонуклеотид» означает полимер, состоящий из нуклеотидов. Термин включает молекулы ДНК и РНК (включая кДНК и мРНК), как одно-так и двухцепочечные, и в случае одноцепочечных их комплементарные последовательности в линейной или кольцевой форме. Термин также включает фрагменты, варианты, гомологи и аллели с соответствующими последовательностями, обладающие такими же или по существу такими же свойствами и выполняющие такую же или по существу такую же функцию, как оригинальные последовательности. Конкретно, термин охватывает гомологи из различных видов, например, мыши и собаки или кошки. Последовательности могут быть целиком комплементарными (никаких несоответствий) при сравнении или могут включать примерно до 30% несоответствий последовательности. Предпочтительно, для полинуклеотидов цепочка содержит примерно от 50 до 10000 нуклеотидов, более предпочтительно, примерно от 150 до 3500 нуклеотидов. Предпочтительно, в случае олигонуклеотидов цепочка содержит примерно от 2 до 100 нуклеотидов, более предпочтительно, примерно от 6 до 30 нуклеотидов. Точный размер полинуклеотида или олигонуклеотида зависит от различных факторов и от конкретного приложения и применения полинуклеотида или олигонуклеотида. Термин включает нуклеотидные полимеры, которые синтезированы и те, которые выделены и очищены из природных источников. Термин «полинуклеотид» включает «олигонуклеотид».

Термин «полипептид», «пептид» или «белок» означает полимер, состоящий из аминокислот. Термин включает встречающиеся в природе и неприродные (синтетические) полимеры и полимеры, в которых искусственные химические миметики замещают одну или более аминокислоту. Термин также включает фрагменты, варианты и гомологи, обладающие такими же или по существу такими же свойствами и выполняющие такую же или по существу такую же функцию, как оригинальные последовательности. Термин включает полимеры любой длины, содержащие примерно от 2 до 1000 аминокислот, более предпочтительно, примерно от 5 до 500 аминокислотных остатков. Термин включает полимеры из аминокислотных остатков, которые синтезированы и те, которые выделены и очищены из природных источников.

Термин «проба» (зонд) означает (1) олигонуклеотид или полинуклеотид, ДНК или РНК, как природные в очищенном продукте переваривания ферментами рестрикции, так и полученные синтетическим путем, способные к аннилингу (прилеганию) или к специфичной гибридизации с полинуклеотидом, последовательность которого комплементарна последовательности пробы, или (2) соединение или вещество, включая пептид или полипептид, способное специфично связываться с конкретным белком или белковым фрагментом по существу за исключением других белков или белковых фрагментов. Олигонуклеотидная или полинуклеотидная проба может быть одноцепочечной или двухцепочечной. Точная длина пробы зависит от многих фактов, включая температуру, источник и применение. Например, для диагностического применения в зависимости от сложности последовательности мишени олигонуклеотидная проба обычно содержит примерно от 10 до 100, от 15 до 50 или от 15 до 25 нуклеотидов. Для определенных диагностических применений полинуклеотидная проба содержит примерно 100-1000, 300-600 нуклеотидов, предпочтительно примерно 300 нуклеотидов. Пробы здесь отобраны, так чтобы быть по существу комплементарными различным цепочкам конкретной последовательности мишени. Это означает, что пробы должны быть достаточно комплементарными, чтобы специфично гибридизоваться (или прилегать) с соответствующими последовательностями-мишенями в заданных условиях. Поэтому не требуется, чтобы последовательность пробы отражала точную комплементарную последовательность последовательности мишени. Например, некомплементарный нуклеотидный фрагмент может быть присоединен к 5' или 3'-концу пробы, тогда как остаток последовательности пробы комплементарен последовательности мишени. Альтернативно, некомплементарные основания или более длинные последовательности могут быть включены в пробу, так чтобы последовательность пробы оставалась достаточно комплементарной последовательности полинуклеотида мишени для осуществления специфичной гибридизации с полинуклеотидом мишени. Пептидная или полипептидная проба может быть любой молекулой, с которой специфично связывается белок или пептид, включая ДНК (для белков, связывающих ДНК), антитела, клеточные мембранные рецепторы, пептиды, кофакторы, лектины, сахара, полисахариды, клетки, клеточные мембраны и мембраны органелл.

Термин «образец» означает любую животную ткань или жидкость, содержащую, например, полинуклеотиды, полипептиды, антитела, метаболиты и т.п., включая клетки и другие ткани, содержащие ДНК и РНК. Примеры включают жировую ткань, кровь, хрящ, соединительную ткань, эпителий, лимфу, мышцы, нервы, слюну/мокроту и т.п. Образец может быть твердым или жидким и может представлять собой ДНК, РНК, кДНК, жидкости организма, например, кровь или мочу, клетки, клеточные препараты или растворимые фракции, или аликвоты среды, хромосомы, органеллы и т.п.

Термин «единая упаковка» означает, что компоненты набора физически собраны в один или более одного контейнер и считаются одной единицей при изготовлении, распределении, продаже или применении. Контейнеры включают, не ограничиваясь этим, мешки, коробки, бутыли, пленочные упаковки, скрепленные или по-другому связанные компоненты или их комбинации. Единая упаковка может представлять собой контейнеры с индивидуальными пищевыми композициями, физически соединенные так, что они считаются одной единицей для производства, распределения, продажи или применения.

Термин «специфичное связывание» означает специфичное и точное взаимодействие между двумя молекулами, которое зависит от их структуры, конкретно от их молекулярных боковых групп. Например, интеркаляция регуляторного белка в большую бороздку молекулы ДНК, образование водородных связей вдоль скелета между двумя одноцепочечными нуклеиновыми кислотами или связывание эпитопа на белке с агонистом, антагонистом или антителом.

Термин «специфичная гибридизация» означает ассоциацию двух одноцепочечных полинуклеотидов с достаточно комплементарными последовательностями, позволяющими такую гибридизацию при заданных условиях, обычно применяемых в данной области техники (иногда называемыми «практически/по существу комплементарными»). Например, термин может относиться к гибридизации полинуклеотидной пробы с по существу комплементарной последовательностью, содержащейся в одноцепочечной молекуле ДНК или РНК, согласно аспекту изобретения, практически при исключении гибридизации полинуклеотидной пробы с одноцепочечным полинуклеотидом с некомплементарной последовательностью.

Термин «стандарт» означает (1) контрольный образец, содержащий ткань субъекта, которому введено контрольное или стандартное вещество, или никакого вещества, по сравнению с образцом, содержащим ткань субъекта, которому введено тестируемое вещество, например, для определения того, вызывает ли тестируемое вещество дифференцированную экспрессию генов, в соответствии с контекстом его применения.

Термин «жесткие условия» означает (1) гибридизацию в среде, содержащей 50% (объем/объем) формамид, 0,1% бычий сывороточный альбумин, 0,1% фикол, 0,1% поливинилпирролидон, 50 мМ фосфат натрия с рН 6,5, 750 мМ NaCl, 75 мМ цитрат натрия при 42°С, (2) гибридизацию в среде, содержащей 50% формамид, 5х SSC (0,75 М NaCl, 0,075 М цитрат натрия), 50 мМ фосфат натрия (рН 6,8), 0,1% пирофосфат натрия, 5х раствор Денхарда (Denhardt's solution), обработанную ультразвуком ДНК спермы лосося (50 мкг/мл), 0,1% ДСН и 10% декстрансульфат при 42°С; с промывкой при 42°С в 0,2х SSC и 0,1% ДСН или с промывкой раствором 0,015 М NaCl, 0,0015 М цитрата натрия, 0,1% Na₂SO₄ при 50°С, или сходные процедуры, включающие сходные агенты для промывки с низкой ионной силой и при высокой температуре и сходные денатурирующие агенты.

Термин «вариант» означает (1) полинуклеотидную последовательность, содержащую любую замену, вариацию, модификацию, замещение, делецию или вставку одного или более нуклеотида полинуклеотидной последовательности таким образом, чтобы она имела такие же или по существу такие же свойства и выполняла такую же или по существу такую же функцию, как оригинальная последовательность, и (2) полипептидную последовательность, содержащую любое замещение, вариацию, модификацию, замену, делецию или вставку одного или более аминокислотного остатка полипептидной последовательности таким образом, чтобы она имела такие же или по существу такие же свойства и выполняла такую же или по существу такую же функцию, как оригинальная последовательность. Поэтому термин включает полиморфизм одного нуклеотида (SNPs) и варианты аллелей, и включает консервативные и неконсервативные аминокислотные замены в полипептидах. Термин также включает химические производные полинуклеотидов или полипептидов и замену нуклеотидов или аминокислотных остатков нуклеотидами или аминокислотными остатками, не встречающимися в природе, при необходимости.

Термин «виртуальная упаковка» означает, что компоненты набора связаны с помощью инструкций на одном или более физическом или виртуальном компоненте набора, инструктирующими пользователя, как получить другие компоненты, например, в мешке, содержащем один компонент и инструкции, инструктирующие пользователя зайти на веб-участок, найти записанное там послание, посмотреть визуальное послание или связаться с консультантом или инструктором для получения инструкций по применению набора.

Способы и композиции и другие преимущества, раскрытые здесь, не ограничены конкретной методологией, протоколами и реагентами, описанными здесь, поскольку, как понятно специалисту в данной области техники, они могут варьировать. Дополнительно, терминология, применяется здесь только с целью описания конкретных осуществлений, а не для ограничения области притязаний, раскрытой здесь или приведенной в формуле изобретения.

Если не указано другое, все технические и научные термины, термины данной области техники и акронимы, применяемые здесь, имеют общепринятое значение, понятное ординарному специалисту в данной области техники в области (областях), к которой относится изобретение, или в области (областях), где этот термин применяется. Хотя любые композиции, способы, предметы производства или другие подходы или материалы, сходные или эквиваленты описанным здесь, можно применять на практике изобретения, предпочтительные композиции, способы, предметы производства или другие подходы или материалы описаны здесь.

Все патенты, патентные заявки, публикации и другие ссылки, цитированные или на которые ссылаются здесь, включены сюда путем ссылки в той степени, которая соответствует установленному законодательству. Обсуждение таковых ссылок предназначено для суммирования сделанных в них утверждений. Не делается допущений, что какой-либо из таких патентов, патентных заявок, публикаций или ссылок, или любая их часть является релевантной, материалом или прототипом. Право испытывать точность и уместность любых утверждений таких патентов, патентных заявок, публикаций или ссылок в качестве релевантных, материалов или прототипов конкретно сохраняется.

Изобретение

Изобретение частично основано на ясной демонстрации того, что амиды жирных кислот, которые, как известно, при внутрибрюшинном введении влияют на поглощение пищи, насыщение, липидный метаболизм и/или утилизацию жира, вызывают уменьшение жира в организме и уровня триглицеридов в плазме, увеличение насыщения, измеряемое по уменьшению поглощения пищи, и одновременное изменение экспрессии ряда генов, связанных с массой жира в организме и поглощением пищи, при оральном введении на регулярной продолжительной основе. Конкретно, как проиллюстрировано здесь, добавка ОЕА в двух разных концентрациях значительно понижает поглощение пищи, уменьшает массу жировой ткани и снижает уровень триглицеридов в плазме за период четырехнедельного теста на животной модели. Экспрессию 44 генов, связанных с массой жира в организме и поглощением пищи, измеряют с помощью ПЦР в реальном времени в периферических тканях субъектов, получавших ОЕА или его устойчивые к гидролизу производные, за период многонедельного теста. Продукты дифференцирование экспрессируемых генов приведены в таблице 1 и таблице 2. Многовариантный статистический анализ показывает значительный сдвиг в общем характере экспрессии генов в результате таких воздействий. Конкретно, гены жирового лептина и FAAH (гидролазы амидов жирных кислот), кишечного FAT/CD36 и ОЕА-рецептора GPR119 находятся среди генов, ответственных за этот сдвиг. Статистический корреляционный анализ показывает, что эти гены ассоциированы с уменьшением жировых прослоек, тогда как показано, что FAAH жировой ткани, в основном, связан