2553996 - Замещенные (2r,3r,5r)-3-гидрокси-(5-пиримидин-1-ил)тетрагидрофуран-2-илметил арил фосфорамидаты

Замещенные (2r,3r,5r)-3-гидрокси-(5-пиримидин-1-ил)тетрагидрофуран-2-илметил арил фосфорамидаты

Иллюстрации

Показать все

Данное изобретение относится к новому (2R,3R,5R)-3-гидрокси-(5-пиримидин-1-ил)тетрагидрофуран-2-илметил арил фосфорамидату общей формулы 1 или его стереоизомеру, или фармацевтически приемлемой соли, которые обладают свойствами нуклеозидных ингибиторов РНК-полимеразы NS5B вируса гепатита С. Соединения могут найти применение для профилактики и лечения вирусных инфекций, включая гепатит С. Изобретение также относится к способу получения соединений, фармацевтическим композициям и лекарственному средству на основе указанных соединений. В общей формуле 1

R¹ представляет собой водород, (СН₃)₂[(СН₃)₃С]Si, C₂-C₆ацил, необязательно замещенный бензилоксигруппой, NR⁵R⁶ группой, в которой R⁵ и R⁶ представляют собой независимо водород или C₁-C₄алкил; 1-пиррол-2-илкарбонил, пиперидин-3-илкарбонил или пиперидин-4-илкарбонил; R² и R³ представляют собой F или R² представляет собой F или ОН и R³ представляет собой СН₃; R⁴ представляет собой водород или метил; Ar представляет собой фенил, пиридил или нафтил, где фенил, пиридил или нафтил являются необязательно замещенными, по крайней мере, одним из C_1-3алкил, С_2-4алкенил, С_2-4алкинил, C_1-3алкокси, F, Cl, Br, I, нитро, циано, -N(C_1-3алкил)₂; Pm представляет собой 2,4-диоксо-3,4-дигидро-2Н-пиримидин-1-ил или 4-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил), в которых аминогруппа является необязательно замещенной 1-пиррол-2-илкарбонилом, пиперидин-3-илкарбонилом, пиперидин-4-илкарбонилом или радикалом C(O)R⁸, где R⁸ представляет собой C₁-C₄алкил, необязательно замещенный NR⁶R⁷ группой, где R⁶ и R⁷ представляют собой независимо водород или С₁-С₄ алкил; С_1-3алкокси, необязательно замещенную фенилом; X представляет собой О или N-R⁹, где R⁹ представляет собой С₁-С₄алкил, необязательно замещенный ОН или ОСН₃; n=1,2 или 3. 7 н. и 5 з.п. ф-лы, 1 табл., 11 пр.

Реферат

Настоящее изобретение относится к новым замещенным эфирам фосфорамидной кислоты и их использованию в качестве средства для лечения вирусных заболеваний. Эти соединения являются ингибиторами репликации РНК-зависимой вирусной РНК и являются полезными в качестве ингибиторов полимеразы NS5B вируса гепатита C и для лечения гепатита С. Вирус гепатита С, наряду с другими важными патогенами человека, такими как вирус желтой лихорадки, вирус West Nile, вирус Денги (Dengue) и вирус гепатита GBV-C, относится к Флавивирусам (genus Flaviviridae).

Известно, что NS5B представляет собой белок вируса гепатита [Vincent Soriano et al., Hepatitis C therapy with HCV NS5B polymerase inhibitors, Expert Opinion on Pharmacotherapy, June 2013, Vol.14, No.9, Pages 1161-1170]. Разработка антивирусных лекарственных средств для вируса гепатита C (ВГС) идет все более быстрым темпом. Среди ингибиторов полимеразы ВГС, софосбувир позиционируется как уникальный компаньон для рибавирина в качестве терапии для большинства генотипов ВГС 2 или 3.

Современное лечение хронического гепатита C, основанное на комбинации пегилированного интерферона и рибавирина, является эффективеным только у 50% больных. Специальная таргетная противовирусная терапия представляет собой перспективный подход к искоренению инфекции. Обзор [Legrand-Abravanel F, Nicot F, Izopet J. New NS5B polymerase inhibitors for hepatitis C. Expert Opin Investig Drugs. 2010 Aug; 19(8):963-75] уделяет основное внимание прогрессу в отношении развития ингибиторов полимеразы вируса гепатита C, которые прошли клинические исследования в последние годы. Нуклеоз(т)идные аналоги нацелены на активный центр полимеразы ВГС и действует как агенты, обрывающие цепь. Они обладают высокой активностью в отношении всех генотипов. Ненуклеозидные ингибиторы достигают ингибирования полимеразы за счет связывания с одним из, по меньшей мере, четырех аллостерических энзимных сайтов. Большинство из них имеют генотип-специфическую активность и они могут быстро выбирать резистентные штаммы если репликации ВГС не полностью подавлена. Тем не менее, они предоставляют дополнительные возможности для лечения инфицированных пациентов. Ингибиторы NS5B полимеразы будут являться неотъемлемой частью более эффективной анти-ВГС терапии в комбинации с интерфероном или с другими противовирусными агентами прямого действия.

В последнее десятилетие, интенсивные усилия были сосредоточены на открытии обоих: нуклеоз(т)идных и ненуклеозидных ингибиторов полимеразы NS5B ВГС. Эти усилия привели к некоторым перспективным агентам, проходящим стадию клинического исследования. Обзор [Watkins WJ, Ray AS, Chong LS. HCV NS5B polymerase inhibitors. Curr Opin Drug Discov Devel. 2010 Jul; 13(4):441-65] прослеживает историю оптимизации химических серий, которые привели к развитию клинических кандидатов, и обобщает последние исследования в этой области с акцентом на клинической эффективности и влиянии на будущие комбинированные исследования.

Примерами лекарственных кандидатов могут служить нуклеозидные ингибиторы полимеразы NS5B ВГС: PSI-7977 фирмы Фармасет (США) и NM283 (Valopicitabine) фирмы Айденикс (США) и др. [М.J. Sofia, D. Bao, W. Chang, J. Du, D. Nagarathnam, S. Rachakonda, P.G. Reddy, B.S. Ross, P. Wang, H.-R. Zhang, S. Bansal, C. Espiritu, М. Keilman, A.М. Lam, H.М.М. Steuer, Congrong Niu, М.J. Otto, P.A. Furman. Discovery of a β-D-20-Deoxy-20-r-fluoro-20-β-C-methyluridine Nucleotide Prodrug (PSI-7977) for the Treatment of Hepatitis С Virus. J. Med. Chem. 2010, 53, 7202-7218; Pat. US 7964580 B2; Pat US 8334270 B2.].

До настоящего времени гепатит C является серьезной проблемой здравоохранения. Он приводит к хроническому заболеванию печени, переходящему к циррозу печени и гепатоцеллюлярной карциноме.

В этой связи поиск новых высокоэффективных противофлавивирусных лекарственных препаратов в настоящее время по-прежнему является одним из основных направлений создания новых фармакологических средств для лечения широкого и разнообразного круга вирусных инфекций, в том числе ВГС. Поэтому до настоящего времени является актуальным синтез новых соединений и использование их в качестве противовирусных активных компонентов для фармацевтических композиций и лекарственных средств, в том числе ВГС.

Ниже приведены определения терминов, которые использованы в описании этого изобретения:

«Алкил» означает алифатическую углеводородную линейную или разветвленную группу с 1-12 атомами углерода в цепи. Разветвленная означает, что алкильная цепь имеет один или несколько «низших алкильных» заместителей. Алкил может иметь один или несколько одинаковых или различных заместителей («алкильных заместителей») включая галоген, алкенилокси, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, ароил, циано, гидрокси, алкокси, карбокси, алкинилокси, аралкокси, арилокси, арилоксикарбонил, алкилтио, гетероарилтио, аралкилтио, арилсульфонил, алкилсульфонилгетероаралкилокси, аннелированный гетероарилциклоалкенил, аннелированный гетероарилциклоалкил, аннелированный гетероарилгетероцикленил, аннелированный гетероарил гетероциклил, аннелированный арилциклоалкенил, аннелированный арилциклоалкил, аннелированный арилгетероцикленил, аннелированный арилгетероциклил, алкоксикарбонил, аралкоксикарбонил, гетероаралкилоксикарбонил или R_k ^aR_k+1 ^aN-, R_k ^aR_k+1 ^aNC(=O)-, R_k ^aR_k+1 ^aNC(=S)-, R_k ^aR_k+1 ^aNSO₂-, где R_k ^a и R_k+1 ^a независимо друг от друга представляют собой «заместители амино группы», значение которых определено в данном разделе, например, атом водорода, алкил, арил, аралкил, гетероаралкил, гетероциклил или гетероарил, или R_k ^a и R_k+1 ^a вместе с атомом N, с которым они связаны, образуют через R_k ^a и R_k+1 ^a 4-7 членный гетероциклил или гетеоцикленил. Предпочтительными алкильными группами являются метил, трифторметил, циклопропилметил, циклопентилметил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил, трет-бутил, н-пентил, 3-пентил, метоксиэтил, карбоксиметил, метоксикарбонилметил, этоксикарбонилметил, бензилоксикарбонилметил и пиридилметилоксикарбонилметил. Предпочтительными «алкильными заместителями» являются циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, гидрокси, алкокси, алкоксикарбонил, аралкокси, арилокси, алкилтио, гетероарилтио, аралкилтио, алкилсульфонил, арилсульфонил, алкоксикарбонил, аралкоксикарбонил, гетероаралкилоксикарбонил или R_k ^aR_k+1 ^aN-, R_k ^aR_k+1 ^aNC(=O)-, аннелированный арилгетероцикленил, аннелированный арилгетероциклил.

«Алкилокси (алкокси)» означает C_nH_2n+1O- группу, в которой алкил определен в данном разделе. Предпочтительным алкилокси группами являются метокси, этокси, н-пропокси, изо-пропокси и н-бутокси.

«Арил» означает ароматическую моноциклическую или полициклическую систему, включающую от 6 до 14 атомов углерода, преимуществено от 6 до 10 атомов углерода. Арил может содержать один или более «заместителей циклической системы», которые могут быть одинаковыми или разными. Представителями арильных групп являются фенил, замещенный фенил, нафтил, и замещенный нафтил. Арил может быть анелирован с неароматической циклической системой или гетероциклом.

«Арилокси» означает арил-O- группу, в которой значение арил определено в данном разделе.

Представителями арилокси групп являются фенокси и 2-нафтилокси.

«Гидрат» означает стехиометрические или нестехиометрические композиции соединений или их солей с водой.

«Заместитель» означает химический радикал, который присоединяется к скэффолду (фрагменту), например, «заместитель алкильный», «заместитель аминогруппы», «заместитель карбамоильный», «заместитель циклической системы».

«Активный компонент» (лекарственное вещество, лекарственная субстанция, drug-substance) означает физиологически активное вещество синтетического или иного (биотехнологического, растительного, животного, микробного и прочего) происхождения, обладающее фармакологической активностью и являющееся активным началом фармацевтической композиции, используемой для производства и изготовления лекарственного препарата (средства).

«Лекарственное средство (препарат)» - вещество (или смесь веществ в виде фармацевтической композиции) в виде таблеток, капсул, инъекций, мазей и других готовых форм, предназначенное для восстановления, исправления или изменения физиологических функций у человека и животных, а также для лечения и профилактики болезней, диагностики, анестезии, контрацепции, косметологии и прочего.

«Низший алкил» означает линейный или разветвленный алкил с 1-4 атомами углерода.

«Терапевтический коктейль» представляет одновременно администрируемую комбинацию двух и более лекарственных препаратов, обладающих различным механизмом фармакологического действия и направленных на различные биомишени, участвующие в патогенезе заболевания.

«Фармацевтическая композиция» обозначает композицию, включающую в себя соединение формулы 1 или 2 и, по крайней мере, один из компонентов, выбранных из группы, состоящей из фармацевтически приемлемых и фармакологически совместимых наполнителей, растворителей, разбавителей, носителей, вспомогательных, распределяющих и воспринимающих средств, средств доставки, таких как консерванты, стабилизаторы, наполнители, измельчители, увлажнители, эмульгаторы, суспендирующие агенты, загустители, подсластители, отдушки, ароматизаторы, антибактериальные агенты, фунгициды, лубриканты, регуляторы пролонгированной доставки, выбор и соотношение которых зависит от природы и способа назначения и дозировки. Примерами суспендирующих агентов являются этоксилированный изостеариловый спирт, полиоксиэтилен, сорбитол и сорбитовый эфир, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант, а также смеси этих веществ. Защита от действия микроорганизмов может быть обеспечена с помощью разнообразных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, таких как, парабены, хлорбутанол, сорбиновая кислота и подобные им соединения. Композиция может включать также изотонические агенты, например, сахара, хлористый натрий и им подобные. Пролонгированное действие композиции может быть обеспечено с помощью агентов, замедляющих абсорбцию активного начала, например, моностеарат алюминия и желатин. Примерами подходящих носителей, растворителей, разбавителей и средств доставки являются вода, этанол, полиспирты, а также их смеси, растительные масла (такие, как оливковое масло) и инъекционные органические сложные эфиры (такие, как этилолеат). Примерами наполнителей являются лактоза, молочный сахар, цитрат натрия, карбонат кальция, фосфат кальция и им подобные. Примерами измельчителей и распределяющих средств являются крахмал, алгиновая кислота и ее соли, силикаты. Примерами лубрикантов являются стеарат магния, лаурилсульфат натрия, тальк, а также полиэтиленгликоль с высоким молекулярным весом. Фармацевтическая композиция для перорального, сублингвального, трансдермального, внутримышечного, внутривенного, подкожного, местного или ректального введения активного начала, одного или в комбинации с другим активным началом, может быть введена животным и людям в стандартной форме введения, или в виде смеси с традиционными фармацевтическими носителями. Пригодные стандартные формы введения включают пероральные формы, такие как таблетки, желатиновые капсулы, пилюли, порошки, гранулы, жевательные резинки и пероральные растворы или суспензии, сублингвальные и трансбуккальные формы введения, аэрозоли, имплантаты, местные, трансдермальные, подкожные, внутримышечные, внутривенные, интраназальные или внутриглазные формы введения и ректальные формы введения.

«Фармацевтически приемлемая соль» означает относительно нетоксичные органические и неорганические соли кислот и оснований, заявленных в настоящем изобретении. Эти соли могут быть получены in situ в процессе синтеза, выделения или очистки соединений или приготовлены специально. В частности, соли оснований могут быть получены специально, исходя из очищенного свободного основания заявленного соединения и подходящей органической или неорганической кислоты. Примерами полученных таким образом солей являются гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, бисульфаты, фосфаты, нитраты, ацетаты, оксалаты, валериаты, олеаты, пальмитаты, стеараты, лаураты, бораты, бензоаты, лактаты, тозилаты, цитраты, малеаты, фумараты, сукцинаты, тартраты, мезилаты, малонаты, салицилаты, пропионаты, этансульфонаты, бензолсульфонаты, сульфаматы и им подобные (Подробное описание свойств таких солей дано в Berge S.M., et al., "Pharmaceutical Salts" J. Pharm. Sci. 1977, 66: 1-19). Соли заявленных кислот также могут быть специально получены реакцией очищенной кислоты с подходящим основанием, при этом могут быть синтезированы соли металлов и аминов. К металлическим относятся соли натрия, калия, кальция, бария, цинка, магния, лития и алюминия, наиболее желательными из которых являются соли натрия и калия. Подходящими неорганическими основаниями, из которых могут быть получены соли металлов, являются гидроксид, карбонат, бикарбонат и гидрид натрия, гидроксид, карбонат и бикарбонат калия, гидроксид лития, гидроксид кальция, гидроксид магния, гидроксид цинка. В качестве органических оснований, из которых могут быть получены соли заявленных кислот, выбраны амины и аминокислоты, обладающие достаточной основностью, чтобы образовать устойчивую соль, и пригодные для использования в медицинских целях (в частности, они должны обладать низкой токсичностью). К таким аминам относятся аммиак, метиламин, диметиламин, триметиламин, этиламин, диэтиламин, триэтиламин, бензиламин, дибензиламин, дициклогексиламин, пиперазин, этилпиперидин, трис(гидроксиметил)аминометан и подобные им. Кроме того, для солеобразования могут быть использованы гидроокиси тетраалкиламмония, например, такие как, холин, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний и им подобные. В качестве аминокислот могут быть использованы основные аминокислоты -лизин, орнитин и аргинин.

Предметом настоящего изобретения являются соединения, представляющие собой новые замещенные эфиры амидофосфорной кислоты - (2R,3R,5R)-3-гидрокси-(5-пиримидин-1-1-ил)тетрагидрофуран-2-илметил арил фосфорамидат общей формулы 1, или их стереоизомеры, или фармацевтически приемлемые соли,

где:

R₂ и R³ представляют собой F или R² представляет собой F или ОН и R³ представляет собой СН₃;

R⁴ представляет собой водород или метил;

Ar представляет собой фенил, пиридил или нафтил, где фенил, пиридил или нафтил являются необязательно замещенными по крайней мере одним из: С_1-3алкил, С_2-4алкенил, С_2-4алкинил, С_1-3алкокси, F, Сl, Br, I, нитро, циано, -N(C_1-3алкил)₂;

Pm представляет собой 2,4-диоксо-3,4-дигидро-2Н-пиримидин-1-ил или 4-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил), в которых амино группа является необязательно замещенной 1-пиррол-2-илкарбонилом, пиперидин-3-илкарбонилом, пиперидин-4-илкарбонилом или радикалом C(O)R⁸, где R⁸ представляет собой C₁-C₄алкил, необязательно замещенный NR⁶R⁷ группой, где R⁶ и R⁷ представляют собой независимо водород или С₁-С₄алкил; C_1-3алкокси, необязательно замещенную фенилом;

X представляет собой О или N-R⁹, где R⁹ представляет собой C₁-C₄алкил, необязательно замещенный ОН или ОСН₃;

n=1,2 или 3.

Предпочтительными новыми замещенными эфирами амидофосфорной кислоты являются соединения общей формулы 1.1 или общей формулы 2.1, или их стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль,

где R¹, R², R³ и Х имеют вышеуказанное значение.

Предпочтительными новыми замещенными эфирами амидофосфорной кислоты являются соединения общей формулы 1.2 или общей формулы 2.2, или их стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль,

где R¹, R², R³ и X имеют вышеуказанное значение.

Более предпочтительными новыми замещенными эфирами амидофосфорной кислоты являются соединения общей формулы 1, выбранные из группы, включающей: ((2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил п-толил (S)-2-оксо-тетрагидрофуран-3-ил-фосфорамидат 1(1),

((2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил 4-хлорфенил (S)-2-оксо-тетрагидрофуран-3-ил-фосфорамидат 1(2),

((2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил 2,4-дихлорфенил (S)-2-оксо-тетрагидрофуран-3-ил-фосфорамидат 1(3),

(2R,3R,5R)-5-(4-ацетамидо-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-2-(((S)-(S)-2-оксотетрагидрофуран-3-иламино)(фенокси)фосфорилокси)метил)тетрагидрофуран-3-ил ацетат 1(4),

бензил 1-(2R,4R,5R)-4-(бензилоксикарбонилокси)-3,3-дифтор-5-(((S)-((S)-(2-оксотетрагидрофуран-3-иламино)(фенокси)фосфорилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-2-оксо-1,2-дигидропиримидин-4-илкарбамат 1(5),

бензил 1-((2R,4R,5R)-4-(бензилоксикарбонилокси)-3,3-дифтор-5-(((1-метил-2-оксопирролидин-3-иламино)(фенокси)фосфорилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-2-оксо-1,2-дигидропиримидин-4-илкарбамат 1(6),

бензил 1-((2R,4R,5R)-4-(бензилоксикарбонилокси)-3,3-дифтор-5-(((1-метил-2-оксопиперидин-3-иламино)(фенокси)фосфорилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-2-оксо-1,2-дигидропиримидин-4-илкарбамат 1(7),

((2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил фенил 1-метил-2-оксопиперидин-3-илфосфорамидат 1(8),

((2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил фенил 2-оксооксепан-3-ил-фосфорамидат 1(9),

бензил 1-((2R,4R,5R)-4-(бензилоксикарбонилокси)-5-(((5,5-диметил-2-оксотетрагидрофуран-3-иламино)(фенокси)фосфорилокси)метил)-3,3-дифтортетрагидрофуран-2-ил)-2-оксо-1,2-дигидропиримидин-4-илкарбамат 1(10),

((2R,3R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил фенил 5,5-диметил-2-оксотетрагидрофуран-3-илфосфорамидат 1(11),

(R)-((2R,3R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил фенил ((S)-2-оксотетрагидрофуран-3-ил)фосфорамидат 1(12),

((2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил фенил 1-метил-2-оксопирролидин-3-илфосфорамидат 1(13),

((2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил фенил 5,5-диметил-2-оксотетрагидрофуран-3-илфосфорамидат 1(14),

(R)-((2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил фенил 1-метил-2-оксопирролидин-3-илфосфорамидат 1(15),

((2R,3R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил фенил 2-оксотетрагидрофуран-3-илфосфорамидат 1(16),

((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил фенил (S)-2-оксотетрагидрофуран-3-илфосфорамидат 1(17)

((2R,3R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил фенил 1-метил-2-оксопирролидин-3-илфосфорамидат 1(18),

((2R,3R,5R)-3-(трет-бутилдиметилсилилокси)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтортетрагидрофуран-2-ил)метил фенил 1-метил-2-оксопирролидин-3-илфосфорамидат 1(19),

((2R,3R,5R)-3-(трет-бутилдиметилсилилокси)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтортетрагидрофуран-2-ил)метил фенил 1-метил-2-оксопиперидин-3-илфосфорамидат 1(20),

((2R,3R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил фенил (R)-2-оксотетрагидрофуран-3-илфосфорамидат 1(21)

((2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил фенил (S)-2-оксотетрагидрофуран-3-илфосфорамидат 1(22),

(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-2-((((S)-2-оксотетрагидрофуран-3-иламино)(фенокси)фосфорилокси)метил)тетрагидрофуран-3-ил ацетат 1(23),

((2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-3-(трет-бутилдиметилсилилокси)-4,4-дифтортетрагидрофуран-2-ил)метил фенил (S)-2-оксотетрагидрофуран-3-илфосфорамидат 1(24),

((2R,3R,4R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил фенил (S)-2-оксотетрагидрофуран-3-илфосфорамидат 1(25),

((2R,3R,4R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил фенил 5,5-диметил-2-оксотетрагидрофуран-3-илфосфорамидат 1(26),

((2R,3R,4R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил фенил 1-метил-2-оксопирролидин-3-илфосфорамидат 1(27),

(S)-((2R,3R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)- 4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил фенил ((R)-2-оксотетрагидрофуран-3-ил)фосфорамидат 1(28),

(S)-((2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил фенил 1-метил-2-оксопирролидин-3-илфосфорамидат

, ,

, и

Предметом настоящего изобретения является способ получения соединения формулы 1 или его стереоизомера взаимодействием соединения формулы 6 с соединением формулы 4 и последующим смешиванием с амином формулы 8,

где Ar, n, R¹, R², R³, R⁴, R⁹, и Pm имеют вышеуказанное значение.

Предметом настоящего изобретения является способ получения соединения формулы 1 или его стереоизомера, где R¹ представляет собой ацил, ацилированием соединения формулы 1, где R¹ представляет собой водород.

Предметом настоящего изобретения является способ получения соединения общей формулы 1 или его стереоизомера, где R¹ представляет собой диметил-трет-бутилдиметилсилил, смешиванием диметил-трет-бутилдиметилсилил хлорида с соединением формулы 1, где R¹ представляет собой водород.

Предметом настоящего изобретения является способ получения соединения общей формулы 1 или его стереоизомера, взаимодействием амина формулы 3 с соединением общей формулы 4 и последующим смешиванием с соединением формулы 6,

где Ar, n, R¹, R², R³, R⁴, и Pm имеют вышеуказанное значение.

Разделение рацемических смесей соединения общей формулы 1 на стереоизомеры проводится либо кристаллизацией и/или LC, или выполняется путем кристаллизации и/или HPLC.

Исходные соединения, которые использовались в приведенном выше процессе получения нового замещенного эфира амидофосфорной кислоты, представленного общей формулой 1, его стереоизомера, фармацевтически приемлемой соли, являются коммерчески доступными соединениями или они могут быть легко получены известными из литературы методами. Качество соединений контролируют при помощи LCMS и ЯМР спектров.

Для определения противовирусной активности замещенных эфиров амидофосфорной кислоты общей формулы 1 (тест соединений) используют ВГС репликонный анализ. В качестве тестовой клеточной линии, используемой в ВГС репликонном анализе, берут линию клеток гепатомы человека Huh7, содержащую репликон ВГС (генотип 1b, штамм Con1). Клетки высеивают в 96-луночные планшеты плотностью 7.5×10³ клеток на лунку в 50 мкл питательной среды. Основные растворы тестируемых соединений готовят непосредственно перед использованием в питательной среде ДМЕМ (DMEM IX, Cellgro; кат. # 10-013-CV) в виде двухкратных 2Х стоков. Всего готовят 11 серий 3-кратных разведений тестовых соединений из двухкратных 2Х стоков в питательной среде с диапазоном конечной концентрации 20 нМ - 0.2 пМ. По крайней мере, через 4 часа после того, как клетки были посеяны, инициируют обработку соединениями путем добавления к каждой плашке по 50 мкл определенного разведения соединения. Конечная концентрация тестируемых соединений составляет от 10 нМ до 0.1 пМ после разбавления 1:1 имеющейся питательной средой. Конечная концентрация ДМСО составляет 0.5%. Клетки и ингибиторы инкубируют в течение трех дней при 37°C/5% CO₂. Среду удаляют из плашек посредством аккуратного постукивания. Клетки фиксируют добавлением 100 мкл смеси ацетон/метанол (1:1) на 1 минуту, потом трижды промывают буфферным раствором PBS, и после этого блокируют добавлением 150 мкл/лунка 10% фетальной телячьей сыворотки (FBS) в растворе PBS на 1 час при комнатной температуре. Клетки трижды промывают буфферным раствором PBS, и инкубируют с антителами к кор-антигену гепатита С mAb 100 мкл/лунка (Affinity BioReagents; кат. # МА1-080, 1 мг/мл сток был разведен 1:4000 в 10% FBS-PBS) в течение 2 часов при 37°C. Клетки промывают 3 раза раствором PBS и инкубируют с антителами козы к иммуноглобулинам мыши (HRP-Goat Anti-Mouse antibody) в количестве 100 мкл/лунка (разведение 1:3,500 в 10% FBS-PBS) в течение 1 часа при 37°C. Клетки промывают 3 раза раствором PBS и выдерживают с ОПД раствором - 100 мкл/лунка (1 ОПД таблетка + 12 мл цитрат/фосфатный буфер + 5 мкл 30% H₂O₂ на планшет) в течение 30 минут в темноте при комнатной температуре. Реакцию останавливают добавлением 2 н. H₂SO₄ в количестве 100 мкл/лунка, и измеряют оптическую плотность при А₄₉₀ Х на многоканальной спектрофотометре Victor³ V 1420 (Perkin Elmer). Значения EC₅₀ для каждого тестируемого соединения рассчитывают на основании уравнений наилучшего соответствия при помощи программы XLFit.

Цитотоксичность тестируемых соединений исследуют в опытах на культуре линии клеток гепатомы человека Huh7. Количество живых клеток определяют при помощи набора ATPLite (Perkin-Elmer, Boston, USA), в соответствии с инструкциями производителя. Клетки высеивают в 96-луночные черные микроплаты с прозрачным дном плотностью 7.5×10³ клеток на лунку в 50 мкл среды. Через 18 часов была инициирована обработка соединениями путем добавления к каждой плашке по 50 мкл определенного разведения соединения. Каждое разведение соединения тестируют в трех параллельных экспериментах. Клетки и ингибиторы инкубируют в течение 96 часов при 37°C/5% CO₂. Планшеты промывают дважды фосфатно-солевым буфером PBS (0.2 мл/лунка), и затем лизируют клетки добавлением 0.05 мл/лунка клеточного буфера (все указанные реактивы входят в комплект набора ATPLite). После инкубирования в течение 5 минут на вращающейся платформе добавляют 0.05 мл/лунка буфер субстрата. После инкубирования в течение еще 5 минут выдерживают планшет в темноте в течение 10 минут и измеряют люминесценцию на приборе TopCount NXT (Packard, Perkin Elmer). Величину EC₅₀ для всех тестируемых соединений определяют при помощи программы XLfit 4.1.

Результаты этих исследований показывают, что новые замещенные эфиры амидофосфорной кислоты общей формулы 1 являются мощными ингибиторами ВГС in vitro с низкой цитотоксичностью.

Ингибирующая активность (EC₅₀) в условиях ВГС репликонного анализа некоторых новых замещенных эфиров амидофосфорной кислоты общей формулы 1 представлена в таблице 1. Как видно из таблицы 1 новые NS5B ингибиторы общей формулы 1 обладают микромолярной цитотоксичностью (CC₅₀) и наномолярной активностью (EC₅₀), которая, как правило, заметно выше активности известного ингибитора PSI-7851 [EC₅₀=75 нМ. Е. Murakami, Т. Tolstykh, H. Вао, С. Niu, H.M. Micolochick Steuer, D. Bao, W. Chang, C. Espiritu, S. Bansal, A.M. Lam, M.J. Otto, M.J. Sofia, P.A. Furman. Mechanism of Activation of PSI-7851 and Its Diastereoisomer PSI-7977. J. Biol. Chem., 285(45), 34337-34347 (2010)].

Таблица 1
Активность NS5B ингибиторов общей формулы 1 к ВГС генотип 1b (10% FBS)
No. ингибитора	Формула	EC₅₀, нМ
1(4)		42.1
1(7)		552.3

1(8)		873.3
1(8)*HCl		905.7
1(10)		28.3
1(12)		162.2

1(16)		458.9
1(17)		273.6
1(19)		40.54
1(22)		19.8

1(23)		27.0
1(24)		285.4
1(30)		219.3
PSI-7851		59.4*
* - экспериментальные данные авторов изобретения.

Предметом настоящего изобретения является использование замещенного эфира амидофосфорной кислоты общей формулы 1, или его стереоизомера, или его фармацевтически приемлемой соли, в качестве активного компонента, который обладает свойствами нуклеозидных ингибиторов РНК-полимеразы NS5B вируса гепатита C,

где:

R¹ представляет собой водород, (СН₃)₂[(СН₃)₃С]Si, С₂-С₆ацил, необязательно замещенный бензилоксигруппой, NR⁵R⁶ группой, в которой R⁵ и R⁶ представляют собой независимо водород или C₁-C₄алкил; 1-пиррол-2-илкарбонил, пиперидин-3-илкарбонил или пиперидин-4-илкарбонил;

R² и R³ представляют собой F или R² представляет собой F или ОН и R³ представляет собой СН₃;

R⁴ представляет собой водород или метил;

Ar представляет собой фенил, пиридил или нафтил, где фенил, пиридил или нафтил являются необязательно замещенными по крайней мере одним из: С_1-3алкил, С_2-4алкенил, С_2-4алкинил, C_1-3алкокси, F, Cl, Br, I, нитро, циано, -N(C_1-3алкил)₂;

Pm представляет собой 2,4-диоксо-3,4-дигидро-2Н-пиримидин-1-ил или 4-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил), в которых амино группа является необязательно замещенной 1-пиррол-2-илкарбонилом, пиперидин-3-илкарбонилом, пиперидин-4-илкарбонилом или радикалом C(O)R⁸, где R⁸ представляет собой С₁-С₄алкил, необязательно замещенный NR⁶R⁷ группой, где R⁶ и R⁷ представляют собой независимо водород или С₁-С₄алкил; С_1-3алкокси, необязательно замещенную фенилом;

X представляет собой О или N-R⁹, где R⁹ представляет собой С₁-С₄алкил, необязательно замещенный ОН или ОСН₃;

n=1, 2 или 3.

Согласно данному изобретению более предпочтительным является использование соединения, представленного общей формулой 1, или его стереоизомера, или его фармацевтически приемлемой соли, выбранного из:

((2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил п-толил (S)-2-оксо-тетрагидрофуран-3-ил-фосфорамидат 1(1),

(R)-((2R,3R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)- 4,4-дифтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил фенил ((S)-2-оксотетрагидрофуран-3-ил)фосфорамидат 1(12),

((2R,3R,4R,5R)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил фенил (S)-2-оксотетрагидроф

Замещенные (2r,3r,5r)-3-гидрокси-(5-пиримидин-1-ил)тетрагидрофуран-2-илметил арил фосфорамидаты

Патент 2553996