Способ морфометрической оценки прогноза течения апластической анемии после спленэктомии

Способ морфометрической оценки прогноза течения апластической анемии после спленэктомии

Реферат

Изобретение относится к области медицины, а именно к гематологии, и может быть использовано для морфометрической оценки прогноза течения апластической анемии (АА) после спленэктомии путем определения массы селезенки и ее маргинальной зоны в гистологических срезах. Встречаются лишь единичные работы, посвященные описанию структуры селезенки и изменению ее архитектоники при АА. В литературе отсутствуют сведения, касающиеся влияния массы маргинальной зоны селезенки на течение патологического процесса при АА. Применяемые высокотехнологичные методы лечения предъявляют более жесткие требования к поиску новых критериев прогнозирования течения этого тяжелого заболевания системы крови, характеризующегося замещением клеточного костного мозга жировым и, как следствие, панцитопенией в периферической крови.

Целью изобретения является разработка способа морфометрической оценки прогноза течения АА после спленэктомии по массе маргинальной зоны селезенки.

Близким техническим решением к предлагаемому изобретению является известный способ оценки функционального состояния составляющих белой пульпы селезенки с применением антител, экспрессирующихся только на CD20+ и CD3+ лимфоцитах, позволяющий оценить функциональное состояние белой пульпы селезенки при портальной гипертензии (Li Z., Zhang S., Lv G. et al. / Changes in count and function of splenic lymphocytes from patients with portal hypertension // World J. Gastroenterol. - 2008. - Vol.14 (15). - P.2377-2382). Данный метод не позволяет количественно точно оценить состояние белой пульпы селезенки и ее составляющих, трудоемкий, высоко затратный и требует большое количество дорогостоящих расходных материалов.

Способа морфометрической оценки прогноза течения АА после спленэктомии по массе селезенки и ее маргинальной зоны не существует. В процессе проведения патентно-информационного поиска не выявлено источников, порочащих новизну предлагаемого изобретения.

Заявляемое изобретение разработано в лаборатории патоморфологии крови ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России в соответствии с планом НИР.

Способ осуществляется следующим образом.

Исследования выполнены на образцах селезенок от 31 больных АА в возрасте от 18 до 65 лет (12 - с легкой формой заболевания и 19 - с тяжелой). Согласно морфометрическому анализу благоприятное течение заболевания установлено у 11 пациентов (8 - с легкой формой; 3 - тяжелой). У 20 больных определен неблагоприятный прогноз (16 - при тяжелой форме и 4 - легкой). Группу сравнения составили образцы селезенок, взятых от 20 лиц, не имевших в анамнезе заболеваний системы крови.

После спленэктомии определяют массу удаленной селезенки, выполняют гистологическую проводку образцов послеоперационного материала общепринятым способом. На гистологических срезах толщиной 3-5 мкм, приготовленных из парафиновых блоков селезенок, проводят морфометрический анализ на световом микроскопе со встроенной фото- и видеокамерой фирмы «Leica» с помощью программного обеспечения анализа изображения ImageScope Color, версии М с окуляром ×10, при объективе ×20. При изучении белой пульпы селезенки, с применением стандартного метода окрашивания гематоксилином и эозином, маргинальную зону в препаратах различают по цветовой гамме. Для определения средней площади маргинальной зоны с помощью морфометрического анализа проводят измерения в 50 полях зрения для каждого образца, начиная расчеты по направлению от капсулы вглубь лимфоидного органа. Исходя из полученных результатов, вычисляют массу маргинальной зоны селезенки по формуле: M=m×D%/100%,

где M - масса маргинальной зоны (г),

m - общая масса селезенки (г),

D - средняя площадь маргинальной зоны, %.

В ходе обработки данных была рассчитана средняя масса маргинальной зоны селезенки у больных АА. В процессе проведения исследований у больных АА морфометрически в гистологических срезах селезенки при окраске гематоксилином и эозином измеряют среднюю площадь маргинальной зоны и вычисляют ее массу по формуле. Благоприятный прогноз течения АА констатируют при значениях массы маргинальной зоны ≤1,9 г, а при величинах >1,9 г устанавливают неблагоприятное течение заболевания.

Результаты исследований представлены в примерах, подтверждающих возможность заявляемого способа осуществлять морфометрическую оценку прогноза течения АА.

Пример 1

Больной Т., 21 год, поступил в гематологическое отделение ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России 19.07.1999 г. Анализ крови при поступлении: гемоглобин 79 г/л, гранулоциты 0,3×10⁹/_л, тромбоциты 15,0×10⁹/_л. Диагноз: апластическая анемия, тяжелая форма. Больному назначено лечение по отработанному в клинике способу (патент на изобретение №2412708 от 27.11.2008 г.). Выполнена операция (03.08.99 г.): срединная лапаротомия, спленэктомия - без осложнений. Масса селезенки больного (m) составила 100 г. Проведено морфометрическое исследование гистологических образцов селезенки, окрашенных гематоксилином и эозином. Средняя площадь маргинальной зоны (D) составила 2,0%. Определена масса маргинальной зоны селезенки (M) - 2,0 г. Установленная величина получена в ходе следующего расчета: M=100,0 г×2,0%/100%.

Заключение: с помощью полученных данных установлено, что у больного неблагоприятный прогноз течения АА.

Пример 2

Больной Е., 39 лет, поступил в гематологическое отделение ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России 06.04.1995 г. Диагноз: апластическая анемия, тяжелая форма. Анализ крови при поступлении: гемоглобин 36 г/л, гранулоциты 0,37×10⁹/_л, тромбоциты 15,0×10⁹/_л. Выполнена операция (11.05.95 г.): срединная лапаротомия, спленэктомия без осложнений. Масса селезенки составила 170,0 г. Проведена морфометрическая оценка гистологических образцов селезенки, окрашенных гематоксилином и эозином. Средняя площадь маргинальной зоны (D) составила 0,6%. Вычислена масса маргинальной зоны селезенки (M) - 1,02 г по ранее приведенной формуле. Установленная величина получена в ходе следующего расчета: M=170,0 г×0,6%/100%.

Заключение: с помощью полученных гистологических данных установлено, что у больного благоприятный прогноз течения АА.

Заявляемое изобретение обладает новизной, дает при использовании положительный результат, заключающийся в возможности по массе селезенки, морфометрическому анализу площади маргинальной зоны и ее массе прогнозировать характер течения заболевания у больных АА после спленэктомии. Предлагаемый способ прост в реализации и может быть использован в практической гематологии, морфологических и гистологических лабораториях в качестве дополнительного критерия при прогнозировании течения АА, независимо от тяжести заболевания, и позволяет дифференцированно подходить при назначении терапии.

Способ морфометрической оценки прогноза течения апластической анемии после спленэктомии, характеризующийся тем, что после удаления селезенки определяют ее массу, морфометрически измеряют среднюю площадь маргинальной зоны селезенки в гистологических срезах при окраске гематоксилином и эозином, учитывая эти величины, вычисляют массу маргинальной зоны и при ее значениях ≤1,9 г устанавливают благоприятный прогноз течения апластической анемии, а при >1,9 г констатируют неблагоприятное течение заболевания.