Средство для лечения миелофиброза

Средство для лечения миелофиброза

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к носителю, доставляющему вещество целенаправленно к продуцирующим внеклеточный матрикс клеткам костного мозга, а также к средству для лечения миелофиброза и способу лечения миелофиброза с применением лекарственного средства, контролирующего активность и рост продуцирующей внеклеточный матрикс клетки костного мозга.

Уровень техники

Миелофиброз - это общий термин, относящийся к заболеваниям, которые вызывают обширный диффузный фиброз в костном мозге, и включает первичный миелофиброз, чья этиология неизвестна, и вторичный миелофиброз с основной болезнью.

Первичный миелофиброз относится к хроническому миелопролиферативному расстройству, которое характеризуется вовлечением в патологический процесс фиброза костного мозга всего организма и экстрамедуллярным гемопоэзом в печени и селезенке, так же как проявлением лейкоэритробластоза, при котором незрелые гранулоциты и эритробласты появляются в периферической крови. Основной чертой первичного миелофиброза считается моноклональная пролиферация кроветворных клеток благодаря генетической аномалии, включающей мутацию гена Jak2, произошедшую на уровне стволовых кроветворных клеток. Различные цитокины, продуцированные пролиферированными кроветворными клетками (в основном мегакариоцитами), действуют на клетки стромы костного мозга, вызывая пролиферацию реактивных поликлональных клеток стромы костного мозга, что приводит к фиброзу костного мозга, остеосклерозу и ангиогенезу. Это приводит к типичным клиническим симптомам, таким как неэффективный гемопоэз, появление дакриоцитов в периферической крови, лейкоэритробластоз и экстрамедуллярный гемопоэз, вызывающий спленомегалию.

Около 40% первичных миелофиброзов имеют генную мутацию в Jak2, тирозинкиназе, необходимой для сигнальной трансдукции цитокинов, приводящую к конститутивной активации Jak2 даже в отсутствие стимуляции цитокинами. Кроме Jak2, есть несколько случаев генной мутации в c-mp1 (рецептор тромбопоэтина).

В настоящее время считают, что первичный миелофиброз трудно вылечить медикаментозной терапией, и что единственная эффективная терапия - это аллогенная трансплантация кроветворных стволовых клеток. Однако уровень смертности, связанный с трансплантацией, составляет от 25% до 48%, ограничивая общий уровень выживаемости до около 50%. Недавно было широко освещено применение неразрушающей трансплантации стволовых клеток костного мозга (мини-трансплантация) с меньшей, связанной с лечением, токсичностью, до сих пор было изучено только ограниченное число случаев, и связанные с ними долгосрочные прогнозы еще предстоит узнать.

В качестве лекарственной терапии, хотя и паллиативной, была показана эффективность анаболических гормонов, таких как даназол и примоболан, ингибиторов ангиогенеза, таких как талидомид и леналидомид, противоопухолевых лекарственных средств, таких как гидроксикарбамид, анагрелид, иматиниб, 2-хлордеоксиаденозин, мелфалан, бусульфан и этопозид, и других лекарственных средств, таких как эритропоэтин для анемии, тромбоцитопении и спленомегалии (смотрите непатентную литературу 1 и 2).

С другой стороны, вторичный миелофиброз возникает на фоне таких болезней, как острый миелолейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, хронический миелолейкоз, истинная полицитемия, первичная тромбоцитопения, миелодиспластический синдром, множественная миелома, злокачественная лимфома, карцинома, системная красная волчанка и прогрессирующий системный склероз, или лучевая болезнь, и демонстрирует сходную с первичным миелофиброзом картину костного мозга. Лечение вторичного миелофиброза сосредоточено на улучшении основного заболевания. Однако многие из этих основных заболеваний трудно излечить радикально. Таким образом, есть острая необходимость в уменьшении неблагоприятного действия самого миелофиброза.

В связи с этим было проведено много исследований для разработки лекарственных средств против миелофиброза. В результате сообщили, что были получены результаты, успешные до определенной степени, при исследовании животных моделей или при проведении клинических испытаний, например, с применением ингибиторов тирозинкиназы JAK2V617F, ингибиторов TGF-β, таких как растворимый TGF-β рецептор, ингибиторов NFκB, таких как бортезомиб, ингибиторов ДНК метилтрансферазы, таких как децитабин, ингибиторов гистондеацетилазы, таких каким трихостатин А, ингибиторов VEGF, таких как PTK787/ZK222584 и бевасизумаб (см. Непатентную литературу 1), и некоторых видов антител к лимфоцитам человека (см. Патентную литературу 1). Однако ни одно из этих лекарственных средств не является удовлетворительным и была желательна разработка других средств для лечения миелофиброза.

[Патентная литература 1] JP А №8-002799

[Патентная литература 2] WO 2006/068232

[Непатентная литература 1] Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2007; 2007:346-54

[Непатентная литература 2] The Journal of the Japanese Society of Internal Medicine, Vol.96, No. 7, July 10, 2007, pp.1398-1404

Целью настоящего изобретения является обеспечение нового средства лечения миелофиброза и способа лечения миелофиброза.

В процессе изучения нового терапевтического средства для лечения миелофиброза исследователи обнаружили, что миелофиброз можно эффективно лечить с помощью введения композиции, в которой ингибитор продукции внеклеточного матрикса доставляется носителем, содержащим ретиноид.

Хотя было известно, что носитель, содержащий витамин А, может доставить лекарственное средство в звездчатые клетки, которые накапливают витамин А (см. Патентную литературу 2), его связь с миелофиброзом была совершенно неизвестна до настоящего времени. Также не было никаких сообщений, что миелофиброз мог быть вылечен композицией, содержащей в качестве активного ингредиента ингибитор продукции внеклеточного матрикса. Поэтому данные результаты исследования достаточно удивительны.

А именно, данное изобретение касается следующего:

(1) Доставляющий вещество носитель для доставки вещества к клетке костного мозга, продуцирующей внеклеточный матрикс, содержащий ретиноид в качестве направляющего агента.

(2) Носитель по пункту (1), где ретиноид содержит ретинол.

(3) Носитель по пункту (1) или (2), где содержание ретиноида составляет 0,2-20 мас.% от общей массы носителя.

(4) Носитель по любому из пунктов (1)-(3), где носитель имеет форму липосомы, и молярное соотношение ретиноида к липидам, содержащимся в липосоме, составляет 8:1 - 1:4.

(5) Композиция для лечения миелофиброза, содержащая лекарственное средство, которое контролирует активность или рост клетки костного мозга, продуцирующей внеклеточный матрикс.

(6) Композиция по пункту (5), дополнительно содержащая носитель по любому из пунктов (1)-(4).

(7) Композиция по пункту (5) или (6), где лекарственное средство, которое контролирует активность или рост клетки костного мозга, продуцирующей внеклеточный матрикс, выбрано из группы, состоящей из средства для ингибирования активности или продуцирования биоактивного вещества, выбранного из группы, состоящей из желатиназы А, желатиназы В и ангиотензиногена, ингибитора клеточной активности, ингибитора роста, апоптоз-индуцирующего средства, а также миРНК (siRNA), рибозима, антисмысловой нуклеиновой кислоты, и ДНК/РНК химерного полинуклеотида, который нацелен на, по меньшей мере, одну из молекул, образующих внеклеточный матрикс, или молекул, вовлеченных в продукцию или секрецию указанных молекул, образующих внеклеточный матрикс, и вектора, который экспрессирует указанные миРНК, рибозим, антисмысловую нуклеиновую кислоту и ДНК/РНК химерный полинуклеотид.

(8) Композиция по пункту (7), где молекулой, вовлеченной в продукцию или секрецию образующих внеклеточный матрикс молекул, является HSP47.

(9) Композиция по любому из пунктов (5)-(8), где лекарственное средство и носитель смешивают на месте медикаментозного лечения или поблизости.

(10) Набор для приготовления композиции по любому из пунктов (6)-(9), содержащий один или более контейнеров, которые содержат либо отдельно, либо в комбинации лекарственное средство, которое контролирует активность или рост клетки костного мозга, продуцирующей внеклеточный матрикс, ретиноид и, если необходимо, вещество, являющееся составляющей частью носителя, отличное от ретиноида.

(11) миРНК, нацеленная на часть нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:13, где часть выбирается из участков от позиции 1130 до позиции 1145, от позиции 1485 до позиции 1500, от позиции 1501 до позиции 1516, от позиции 1654 до позиции 1678 и от позиции 1951 до позиции 1978 нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:13.

(12) миРНК по пункту 11, состоящая из любой из следующих комбинаций от А до Е смысловой цепи и антисмысловой цепи:

А: комбинация 5'-UGGAUGGGAAAGAUGCAGAAGAAGGAG-3' (смысловая цепь, SEQ ID NO:1) и 3'-UAACCUACCCUUUCUACGUCUUCUUCC-5' (антисмысловая цепь, SEQ ID NO:2),

В: комбинация 5'-UGUCUGAGUGGGUAUUUUUAGACAGAG-3' (смысловая цепь, SEQ ID NO:3) и 3'-UAACAGACUCACCCAUAAAAAUCUGUC-5' (антисмысловая цепь, SEQ ID NO:4),

С: комбинация 5'-GAUGCGAGAUGAGUUGUAGAGUCCAAG-3' (смысловая цепь, SEQ ID NO:5) и 3'-UACUACGCUCUACUCAACAUCUCAGGU-5' (антисмысловая цепь, SEQ ID NO:6),

D: комбинация 5'-CAGAACUGCCCAUCCUUAAAAUGAUAG-3' (смысловая цепь, SEQ ID NO:7) и 3'-UAGUCUUGACGGGUAGGAAUUUUACUA-5' (антисмысловая цепь, SEQ ID NO:8),

Е: комбинация 5'-GAGACAAGAUGCGAGAUGAGUUGUAAG-3' (смысловая цепь, SEQ ID NO:9) и 3'-UACUCUGUUCUACGCUCUACUCAACAU-5' (антисмысловая цепь, SEQ ID NO:10).

Несмотря на то что точный механизм действия композиции для лечения миелофиброза по настоящему изобретению еще не совсем выяснен, механизм рассматривается следующим образом: ретионоид в композиции действует как направляющий агент к продуцирующим внеклеточный матрикс клеткам костного мозга, таким как фибробласты костного мозга, и доставляет к таким клеткам активные ингредиенты, такие как фармацевтические агенты, которые контролируют активность или рост продуцирующих внеклеточный матрикс клеток костного мозга, тем самым показывая эффект против миелофиброза.

Так как активные ингредиенты могут быть эффективно доставлены к месту действия и далее к клеткам-мишеням, с помощью применения носителя по настоящему изобретению, стало возможным лечение, подавление прогрессирования и предотвращение развития миелофиброза, в частности первичного миелофиброза, лечение которого до настоящего момента было затруднительно; таким образом, носитель по настоящему изобретению вносит существенный вклад в медицину и ветеринарию.

Кроме того, так как композиция по настоящему изобретению содержит в качестве активного агента лекарственное средство, которое контролирует активность или рост продуцирующих внеклеточный матрикс клеток костного мозга, чья эффективность по отношению к миелофиброзу не была известна, лечение миелофиброза может происходить по механизму, отличному от известных на данный момент. Поэтому ожидают улучшение патологических состояний, которые не могут быть вылечены лекарственными средствами обычного механизма действия, и увеличение терапевтического эффекта при совместном применении с обычными лекарственными средствами.

Более того, носитель по настоящему изобретению может быть объединен с любыми фармацевтическими лекарственными средствами (например, с существующими терапевтическими средставами против миелофиброза) для увеличения эффективности их действия; поэтому широкий спектр его применения также полезен с точки зрения технологии производства лекарственных средств, облегчая производство эффективных терапевтических агентов.

Краткое описание чертежей

На Фиг.1 показаны фотографии, демонстрирующие изображения костного мозга пациентов с идиопатическим миелофиброзом. Пациент 1 и Пациент 2 демонстрируют трабекулярное утолщение при окрашивании ГЭ (левая колонка), гиперплазию ретикулярного волокна при окрашивании по Гиттеру (Gitter staining) (центральная колонка) и отложение коллагена при окрашивании по Азану (Azan staining) (правая колонка).

На Фиг.2 приведена диаграмма, демонстрирующая патогенез миелофиброза на мышиной модели.

На Фиг.3 показаны фотографии, демонстрирующие изображения костного мозга ТРО трансгенных мышей, возраст 4 и 7 месяцев. В левой колонке показано окрашивание ГЭ, в центральной колонке показано окрашивание по Гиттеру, и в правой колонке показано окрашивание по Азану.

На Фиг.4 показаны фотографии, демонстрирующие изображения костного мозга ТРО трансгенных мышей, возраст 9 и 12 месяцев. В левой колонке показано окрашивание ГЭ, в центральной колонке показано окрашивание по Гиттеру, и в правой колонке показано окрашивание по Азану.

На Фиг.5 показаны фотографии, демонстрирующие переход к трабекулярному утолщению в ТРО трансгенных мышах. Верхняя левая панель - это окрашивание ГЭ костного мозга 4-х месячной мыши (4М), верхняя правая панель - возраст 7 месяцев (7М), нижняя левая панель - возраст 9 месяцев (9М), и нижняя правая панель - возраст 12 месяцев (12М).

На Фиг.6 показана фотография, демонстрирующая морфологию первично культивированных фибробластов костного мозга ТРО мышей, полученная под инвертированным микроскопом (увеличение x400).

На Фиг.7 показаны диаграммы, демонстрирующие результаты анализа экспрессии Виментина и α-SMA с помощью проточной цитометрии в первично культивированных фибробластах костного мозга ТРО мышей. Вертикальная ось показывает количество клеток.

На Фиг.8 показаны изображения вестерн-блота, демонстрирующие эффект различных миРНК HSP47 на экспрессию HSP47 в NIH3T3 (А) и первичных культурах фибробластов костного мозга ТРО мышей (Первичные фибробласты В и С).

На Фиг.9 показаны диаграммы, демонстрирующие эффект витамина А (VA) на введение заключенной в липосомы миРНК HSP47 (Lip-siRNA) в первично культивированные фибробласты костного мозга ТРО мышей. (А) и (В) показывают результаты анализов с помощью проточной цитометрии и изображения под флуоресцентным микроскопом соответственно.

На Фиг.10 показана диаграмма, демонстрирующая воздействие миРНК HSP47 на секрецию коллагена в первично культивированных фибробластах костного мозга ТРО мышей.

На Фиг.11 показаны изображения образцов под микроскопом, окрашенных по Гиттеру, которые демонстрируют воздействие миРНК HSP47 на фибриллизацию костного мозга ТРО мышей in vivo.

На Фиг.12 приведен график, показывающий количественную оценку уровня улучшения гиперплазии ретикулярного волокна у ТРО мышей с помощью миРНК HSP47 по анализу изображений. Вертикальная ось показывает соотношение точек ретикулярного волокна и всех точек в каждом поле.

На Фиг.13 показаны изображения под микроскопом образцов, окрашенных по Азану, которые демонстрируют воздействие миРНК HSP47 на фибриллизацию костного мозга ТРО мышей in vivo.

На Фиг.14 показаны изображения под микроскопом образцов при окрашивании ГЭ, которые демонстрируют воздействие миРНК HSP47 на фибриллизацию костного мозга ТРО мышей in vivo.

Описание вариантов выполнения настоящего изобретения

Настоящее изобретение относится к доставляющему вещество носителю для доставки вещества к продуцирующей внеклеточный матрикс клетке костного мозга, содержащему ретиноид в качестве направляющего агента.

В настоящем изобретении, продуцирующая внеклеточный матрикс клетка костного мозга специально ограничена только упоминанием, что эта клетка присутствует в костном мозге и способна производить внеклеточный матрикс, и обычно является фибробластом костного мозга. Для фибробласта костного мозга характерна экспрессия α-SMA (альфа-актин гладкой мышцы). В настоящем изобретении фибробласт костного мозга представляет собой один из идентифицированных, например, иммуноокрашиванием с использованием меченных анти-α-SMA антител.

В настоящем изобретении, ретиноид не ограничен специальным образом, за исключением упоминания, что он содействует доставке вещества к продуцирующей внеклеточный матрикс клетке костного мозга, и его примеры включают производные ретиноида, такие как ретинол (витамин А), этретинат, третиноин, изотретиноин, адапален, ацитретин, тазаротен, и ретинол пальмитат, так же как и аналоги витамина А, такие как фенретинид (4-HPR, 4-гидроксифенилретинамид) и бексаротен.

Ретиноид согласно настоящему изобретению является одним из тех веществ, которые содействуют специфической доставке вещества к продуцирующей внеклеточный матрикс клетке костного мозга. Механизм содействия ретиноида при доставке вещества еще не полностью ясен; тем не менее, например, считается, что ретиноид, специфически связанный с ретинол-связывающим белком (RBP), захватывается внутрь клетки костного мозга, продуцирующей внеклеточный матрикс, через определенный рецептор, представленный на поверхности этой клетки.

Ретиноид является членом класса соединений, имеющих скелет, в котором четыре единицы изопреноида связаны способом "голова-к-хвосту" (см. G. P. Moss, "Biochemical Nomenclature and Related Documents", 2nd Ed. Portland Press, pp.247-251 (1992)). Витамин А является типичным дескриптором ретиноида, который качественно демонстрирует биологическую активность ретинола. Ретиноид, который может применяться в настоящем изобретении, специально не ограничен, и примеры его включают производные ретиноида, такие как ретинол, ретинал, ретиноевая кислота, сложный эфир ретинола и жирной кислоты, сложный эфир алифатического спирта и ретиноевой кислоты, этретинат, третиноин, изотретиноин, адапален, ацитретин, тазаротен и ретинол пальмитат, и аналоги витамина А, такие как фенретинид (4-HPR) и бексаротен.

Средин них ретинол, ретинал, ретиноевая кислота, сложный эфир ретинола и жирной кислоты (такие, как ретинил ацетат, ретинил пальмитат, ретинил стеарат и ретинил лаурат) и сложный эфир алифатического спирта и ретиноевой кислоты (такой, как этилретиноат) являются предпочтительными с точки зрения эффективности специфической доставки вещества к клеткам костного мозга, продуцирующим внеклеточный матрикс.

Все изомеры ретинола, включая цис-транс изомеры, входят в объем данного изобретения. Ретиноид может быть заменен одним или более заменителей. Ретиноид согласно настоящему изобретению включает ретиноид в выделенной форме, так же как в форме раствора или смеси со средой, которая может растворять или удерживать ретиноид.

Носитель по настоящему изобретению может быть образован из самого ретиноида или может быть получен путем связывания ретиноида с образующим носитель компонентом, отличным от ретиноида, или путем включения ретиноида в компонент, являющийся составляющей частью носителя, отличный от ретиноида. Поэтому носитель по настоящему изобретению может содержать компонент, являющийся составляющей частью носителя, отличный от ретиноида. Такой компонент специальным образом не ограничен, и может применяться любой известный компонент в области медицины или фармацевтики, но предпочтительны те, которые могут окружать ретиноид или связываться с ретиноидом.

Примеры таких компонентов включают липиды, например фосфолипид, такой как глицеролфосфолипид, сфинголипид, такой как сфингомиелин, стерол, такой как холестерол, растительное масло, такое как соевой масло или маковое масло, минеральное масло и лецитин, такой как лецитин яичного желтка, но примеры этим не ограничены. Среди них являются предпочтительными те, которые могут образовывать липосомы, например природный фосфолипид, такой как лецитин, полусинтетический фосфолипид, такой как димиристоилфосфатидилхолин (DMPC), дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC) или дистеароилфосфатидилхолин (DSPC), и диолеилфосфатидилэтаноламин (DOPE), дилауроилфосфатидилхолин (DLPC) и холестерол.

Особенно предпочтительным компонентом является компонент, который может избежать захвата ретикулоэндотелиальной системой, и его примеры включают катионные липиды, такие как N-(α-триметиламмоний ацетил)-дидодецил-D-глутамат хлорид (TMAG), N,N',N",N"'-тетраметил-N,N',N",N"'-тетрапальмитилспермин (TMTPS), 2,3-диолеилокси-N-[2(сперминкарбоксамидо)этил]-N,N-диметил-1-пропанаминия трифторацетат (DOSPA), N-[1-(2,3-диолеилокси)пропил]-N,N,N-триметиламмония хлорид (DOTMA), диоктадецилдиметиламмония хлорид (DODAC), дидодециламмония бромид (DDAB), 1,2-диолеилокси-3-триметиламмоний пропан (DOTAP), 3β-[N-(N',N'-диметиламиноэтан)карбамоил]холестерол (DC-Chol), 1,2-димиристоилоксипропил-3-диметилгидроксиэтиламмоний (DMRIE), и 0,0'-дитетрадеканоил-N-(α-триметиламмоний ацетил)диэтаноламин хлорид (DC-6-14).

Связывание ретиноида с носителем по настоящему изобретению или заключение ретиноида в него также возможно путем связывания ретиноида с или заключения его в компонент носителя, отличный от ретиноида, с помощью химического и/или физического способа. Альтернативно, ретиноид может быть связан с или заключен в носитель по настоящему изобретению, путем смешивания ретиноида и компонентов носителя, отличных от ретиноида, в процессе подготовки носителя. Количество ретиноида, связанного с или заключенного в носитель по настоящему изобретению, может составлять по отношению к массе компонентов, являющихся составляющей частью носителя, от 0,01% до 100%, предпочтительно от 0,2% до 20% и более предпочтительно от 1% до 5%. Ретиноид может быть связан с или заключен в носитель до добавления лекарственного средства к носителю; или носитель, ретиноид и лекарственное средство могут быть смешаны одновременно; или ретиноид может быть подмешан к уже несущему лекарственное средство носителю, и так далее. Поэтому настоящее изобретение также относится к способу получения композиции, специфичной к продуцирующей внеклеточный матрикс клетке костного мозга, где способ содержит стадию связывания ретиноида с любым существующим связывающим лекарственное средство носителем или капсулирующим лекарственное средство носителем, например липосомальная композиция, такая как DaunoXome®, Doxil, Caelyx® или Myocet®.

Носитель по настоящему изобретению может быть в любой форме, позволяющей переносить требуемое вещество или объект к заданной клетке костного мозга, продуцирующей внеклеточный матрикс, и примеры вышеуказанного, но без ограничения к этому, включают макромолекулярную мицеллу, липосому, эмульсию, микросферы и наносферы. В данном изобретении, среди этих форм липосомальная форма является предпочтительной с точки зрения высокой эффективности доставки, широкого выбора доставляемого вещества и удобства получения, и так далее, и особенно предпочтительна катионная липосома, включая катионный липид. В случае, когда носитель в форме липосомы является предпочтительным, молярное отношение ретиноида к другим компонентам липосомы от 8:1 до 1:4, более предпочтительно от 4:1 до 1:2, еще более предпочтительно от 3:1 до 1:1 и особенно предпочтительно 2:1, принимая во внимание эффективность связывания ретиноида с или заключения в носитель.

Носитель по настоящему изобретению может содержать транспортируемое вещество внутри себя, может быть прикреплен к внешней части транспортируемого вещества или может быть смешан с транспортируемым веществом, пока он содержит ретиноид в такой форме, что ретиноид способен действовать как направляющий агент. Фраза "действовать как направляющий агент" в настоящем документе означает, что содержащий ретиноид носитель достигает и/или захватывается клеткой-мишенью, то есть клеткой костного мозга, продуцирующей внеклеточный матрикс, более быстро и/или в большем количестве, чем несодержащий ретиноид носитель, и это может быть легко подтверждено с помощью, например, добавления меченого носителя или носителя, содержащего метку, к культуре клеток-мишеней и анализа распределения метки после определенного периода времени. Конструктивно это требование может быть удовлетворено, например, если ретиноид, по меньшей мере частично, оказывается на внешней части композиции, содержащего носитель, не позднее того момента, когда достигает клетки-мишени. Выставлен или нет ретиноид на внешней части композиции может быть оценено путем взаимодействия композиции с веществом, которое специфически связывает ретиноид, таким как ретинолсвязывающий белок (RBP), и оценки его связывания с композицией.

Вещество или объект, доставляемое данным носителем, специальным образом не ограничено и предпочтительно имеет такой размер, что может физически передвигаться в организме от места введения к месту поражения, где присутствует клетка-мишень. Поэтому носитель по настоящему изобретению может транспортировать не только такое вещество, как атом, молекула, соединение, белок, или нуклеиновая кислота, но также такой объект, как вектор, вирусная частица, клетка, высвобождающая лекарственное средство система, состоящая из одного или более элементов, или микромашина. Вещество или объект предпочтительно имеют свойство оказывать некоторое влияние на клетку-мишень, например метить клетку-мишень или контролировать (например, усиливать или подавлять) активность роста клетки-мишени.

Таким образом, в одном варианте выполнения настоящего изобретения, то, что доставляется носителем, представляет собой "лекарственное средство, контролирующее активность или рост клеток костного мозга, продуцирующих внеклеточный матрикс". Активность клеток костного мозга, продуцирующих внеклеточный матрикс, согласно настоящему изобретению относится к разным активностям, таким как секреция, поглощение или миграция, проявляемым клеткой костного мозга, продуцирующей внеклеточный матрикс, и по настоящему изобретению активность предпочтительно представляет собой активность, вовлеченную в начало, прогрессирование, и/или рецидив миелофиброза. Примеры таких активностей включают, но без ограничения к этому, производство/секрецию биологически активного вещества, такого как желатиназа А и желатиназа В (ММР2 и ММР9 соответственно) и ангиотензиногена, и компонента внеклеточного матрикса, такого как коллаген, протеогликан, тенасцин, фибронектин, тромбоспондин, остеопонтин, остеонектин и эластин.

Таким образом, лекарственное средство, контролирующее активность и рост клетки костного мозга, продуцирующей внеклеточный матрикс, может быть любым лекарственным средством, которое непосредственно или опосредованно подавляет физическое, химическое и/или физиологическое действие указанной клетки, связанное с началом, прогрессированием и/или рецидивом миелофиброза, и включает, но без ограничения к этому: лекарственное средство, подавляющее активность или производство указанных выше биологически активных веществ, ингибитор ММР, такой как батимастат, и антитела и фрагменты антител, нейтрализующие указанные выше биологически активные вещества, и вещество, подавляющее экспрессию указанных выше биологически активных веществ, такое как миРНК (siRNA), рибозим, антисмысловая нуклеиновая кислота (включая РНК, ДНК, ПНК (пептидо-нуклеиновая кислота) или их смесь), или вещество, имеющее доминантный негативный эффект, такое как доминантный негативный мутант, или вектор их экспрессирующий, или лекарственное средство, ингибирующее производство или секрецию указанного выше компонента внеклеточного матрикса, например вещество, подавляющее экспрессию компонента внеклеточного матрикса, такое как миРНК (siRNA), рибозим, антисмысловая нуклеиновая кислота (включая РНК, ДНК, ПНК или их смесь), или вещество, имеющее доминантный негативный эффект, такое как доминантный негативный мутант, или вектор их экспрессирующий, ингибитор клеточной активности, такой как блокатор натриевых каналов, ингибиторы клеточного роста, такие как алкилирующий агент (такой, как ифосфамид, нимустин, цикпофосфамид, дакарбазин, мелфалан и ранимустин), противоопухолевый антибиотик (такой, как идарубицин, эпирубицин, даунорубицин, доксорубицин, пирарубицин, блеомицин, пепломицин, митоксантрон и митомицин С), антиметаболит (такой, как гемцитабин, эноцитабин, цитарабин, тегафур/урацил, тегафур/гимерацил/отерацил калия, доксифлуридин, гидроксикарбамид, фторурацил, метотрексат и меркаптопурин), алкалоид, такой как этопозид, иринотекан гидрохлорид, винорелбин дитартрат, доцетаксел гидрат, паклитаксел, винкристин сульфат, виндезин сульфат и винбластин сульфат, и комплексы платины, такие как карбоплатин, цисплатин и недаплатин, а так же как индукторы аппоптоза, такие как соединение 861, глиотоксин, ловастатин и Берактант. Более того, "лекарственное средство, контролирующее активность и рост клетки костного мозга, продуцирующей внеклеточный матрикс" по настоящему изобретению может быть любым лекарственным средством, непосредственно или опосредованно содействующим физическим, химическим и/или физиологическим действиям клетки костного мозга, продуцирующей внеклеточный матрикс, непосредственно или опосредованно связанным с подавлением начала, прогрессирования и/или рецидива миелофиброза.

Среди "лекарственных средств, контролирующих активность и рост клетки костного мозга, продуцирующей внеклеточный матрикс" по настоящему изобретению предпочтение отдается лекарственным средствам, ингибирующим производство/секрецию компонента внеклеточного матрикса, например коллагена, протеогликана, тенасцина, фибронектина, тромбоспондина, остеопонтина, остеонектина и эластина, и особенно предпочтительно ингибиторы Белка теплового шока 47 (HSP47), в том числе миРНК (siRNA) против HSP47.

Доставляемое носителем вещество по изобретению включает, без ограничения к этому, лекарственные средства, которые подавляют начало, прогрессирование и/или рецидив миелофиброза, и лекарственные средства, которые не были отмечены ранее, и примеры включают, без ограничения, анаболические гормоны, такие какданазол и Примоболан, ингибиторы ангиогенеза, такие как талидомид и леналидомид, противоопухолевые лекарственные средства, такие как гидроксикарбамид, анагрелид, иматиниб, 2-хлородеоксиаденозин, мелфалан, бусульфан и этопозид, эритропоэтин, ингибиторы тирозинкиназы JAK2V617F, ингибиторы TGF-β, такие как растворимый рецептор TGF-β, ингибиторы NFκB, такие как бортезомиб, ингибиторы ДНК метилтрансферазы, такие как децитабин, ингибиторы гистондеацетилазы, такие как трихостатин А, ингибиторы VEGF, такие как PTK787/ZK222584 и бевасизумаб, и противоопухолевые лимфоцитарные антитела, описанные в Патентной литературе 1, приведенной выше.

Доставляемое носителем вещество или объект по изобретению может быть меченым и немеченым. Мечение делает возможным мониторинг успеха или неуспеха транспортировки, или увеличения и уменьшения в клетках-мишенях, и так далее, и особенно полезно на уровне тестирования/исследования. Метка может быть выбрана из любых меток, известных специалистам в данной области техники, таких как, например, любой радиоизотоп, магнитный материал, вещество, которое связывается с меченым веществом (например, антитело), флуоресцентное вещество, флуорофор, хемилюминесцентное вещество и фермент, и так далее.

В настоящем изобретении фраза "к продуцирующей внеклеточный матрикс клетке костного мозга" или "для доставки к продуцирующей внеклеточный матрикс клетке костного мозга" означает, что это подходит для применения по отношению к продуцирующим внеклеточный матрикс клеткам костного мозга как клетке-мишени, и это включает, например, возможность доставки вещества к этой клетке более быстро, эффективно и/или в большем количестве, чем к другим клеткам, например нормальным клеткам. Например, носитель по настоящему изобретению может доставлять вещество к продуцирующей внеклеточный матрикс клетке костного мозга со скоростью и/или эффективностью в 1,1 раза выше или более, 1,2 раза выше или более, 1,3 раза выше или более, 1,5 раза выше или более, 2 раза выше или более, и даже 3 раза выше или более, по сравнению с другими клетками.

Настоящее изобретение также относится к композиции для контроля активности или роста продуцирующей внеклеточный матрикс клетки костного мозга, или для лечения миелофиброза, композиции, содержащей лекарственное средство, которое контролирует активность или рост продуцирующей внеклеточный матрикс клетки костного мозга, и настоящее изобретение также относится к применению при получении указанных композиций лекарственного средства, которое контролирует активность или рост продуцирующей внеклеточный матрикс клетки костного мозга. Лекарственное средство может содержаться в композиции само по себе или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. Композиция по настоящему изобретению может быть нацелена на продуцирующую внеклеточный матрикс клетку костного мозга, которая будет мишенью, с целью эффективной доставки к указанной клетке. Способ наведения на цель специальным образом не ограничен, за исключением того, что он должен содействовать доставке композиции по настоящему изобретению к продуцирующей внеклеточный матрикс клетке костного мозга, например фибробласту костного мозга, и примеры включают добавление ретиноида. Соответственно, предпочтительное воплощение данного изобретения включает ретиноид как направляющий агент, и более предпочтительно включает носитель, содержащий выше упомянутый ретиноид, в качестве направляющего агента.

По настоящему изобретению миелофиброз включает первичный миелофиброз, так же как и вторичный миелофиброз. Вторичный миелофиброз включает, без ограничения к этому, миелофиброз, который является вторичным по отношению к болезни, такой как острый миелолейкоз, острая лимфоидная лейкемия, хронический миелолейкоз, истинная полицитемия, первичная тромбоцитопения, миелодиспластический синдром, множественная миелома, злокачественная лимфома, карцинома, системная красная волчанка и прогрессирующий системный склероз или лучевая болезнь.

Миелофиброз по настоящему изобретению может быть диагностирован любыми способами, известными специалистам в данной области техники. Наиболее характерной патологией миелофиброза является фибриллизация костного мозга, и это может быть определено до некоторой степени неудачей в сборе аспирата костного мозга при аспирации костного мозга ("сухая пункция"). Окончательный диагноз может быть поставлен путем подтверждения фибриллизации костного мозга и/или увеличения трабекул с помощью биопсии костного мозга (см. Фиг.1). Дополнительно первичный миелофиброз может проявляться анемией, гепатоспленомегалией, появлением лейкоэритробластоза, пойкилоцитоз, таких как дакриоциты, бластных клеток, макротромбоцитов и мегакариоцитов в периферической крови, увеличением сывороточной ЛДГ (LDH), увеличением печеночно-селезеночного поглощения при сцинтиграфии костного мозга, тенденцией случайных кровотечений, вздутием живота, лихорадкой, общим недомоганием, потерей веса и т.д. При вторичном миелофиброзе симптомы основной болезни часто выходят на первый план. Симптомы, специфичные для основной болезни, хорошо известны специалистам в данной области.

В композиции по настоящему изобретению, если содержащийся в носителе ретиноид присутствует в такой форме, что действует как направляющий агент, носитель может содержать доставляемое вещество внутри себя, может быть прикреплен к внешней части транспортируемого вещества, или может быть смешан с транспортируемым веществом. Поэтому в зависимости от способа введения и способа высвобождения лекарственного вещества, и так далее, композиция может быть покрыта подходящим материалом, таким как, например, кишечнорастворимая оболочка или материал с регулируемым временем распада, или может быть включена в подходящую систему высвобождения лекарственного вещества.

Композиция по настоящему изобретению может быть введена различными путями, включая как пероральный, так и парентеральный пути, и примеры этого включают, но без ограничения к этому, пероральный, внутривенный, внутримышечный, подкожный, местный, внутрилегочный, внутри дыхательных путей, интратрахеальный, интрабронхиальный, назальный, ректальный, внутриартериальный, интрапортальный, интравентрикулярный, интрамедуллярный, внутрь лимфатического узла, внутрилимфатический, внутримозговой, интратекальный, интрацеребровентрикулярный, трансмукозальный, чрескожный, интраназальный, внутрибрюшинный и внутриматочный пути, и может быть выполнена в виде лекарственной формы, пригодной для каждого пути введения. Такая лекарственная форма и способ получения могут быть выбраны в качестве подходящих из любых известных лекарственных форм и способов (см., например, Hyojun Yakuzaigaku (Standard Pharmaceutics), Ed. by Yoshiteru Watanabe et al., Nankodo, 2003).

Примеры лекарственных форм, пригодных для перорального способа введения, включают, но без ограничения к этому, порошок, гранулы, таблетка, капсула, жидкость, суспензию, эмульсию, гель и сир