2559542 - Антитела против bv8 и их применение

Антитела против bv8 и их применение

Иллюстрации

Показать все

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложены варианты антител против Bv8 человека или макака, каждое из которых характеризуется тем, что содержит 6 CDR. Описана кодирующая нуклеиновая кислота; вектор экспрессии на её основе для получения антитела; клетка-хозяин для экспрессии антитела на основе вектора, а также способ получения антитела с использованием клетки. Раскрыта фармацевтическая композиция, использующая антитело в эффективном количестве, а также применение антитела - для лечения опухоли, рака или нарушения пролиферации клеток. Предложено применение антитела для снижения или ингибирования ангиогенеза у субъекта, а также для ингибирования пролиферации клеток эндотелия. Использование изобретения обеспечивает новые антитела с аффинностью в отношении Bv8 человека или макака (K_D) менее 10^-11 М, как измерено методом BIACORE 3000, которые могут найти применение в терапии различных раковых заболеваний. 10 н. и 15 з.п. ф-лы, 43 ил., 1 табл., 3 пр.

Реферат

РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Эта заявка является непредварительной заявкой, поданной по 37 CFR 1.53(b)(1), согласно 35 USC 119(e), испрашивающей приоритет предварительной заявки № 61/284743, которая подана 23 декабря 2009 года, и предварительной заявки № 61/414052, которая подана 16 ноября 2010 года, содержание которых включено в данный документ путем ссылки.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение в основном относится к области молекулярной биологии. Более конкретно, изобретение относится к антителам против Bv8, и их применению.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем точно установлено, что ангиогенез, который включает образование новых кровеносных сосудов из предварительно существующего эндотелия, вовлечен в патогенез различных нарушений. Они включают солидные опухоли и метастазирование, атеросклероз, ретролентальную фиброплазию, гемангиомы, хроническое воспаление, интраокулярные неоваскулярные синдромы, такие как пролиферативные ретинопатии, например, диабетическая ретинопатия, возрастная дегенерация желтого пятна (AMD), неоваскулярная глаукома, иммунное отторжение трансплантированной ткани роговицы и других тканей, ревматоидный артрит и псориаз. Folkman et al., J. Biol. Chem., 267: 10931-10934 (1992); Klagsbrun et al, Annu. Rev. Physiol, 53:217-239 (1991); и Garner A., «Vascular diseases», In: Pathobiology of Ocular Disease. A Dynamic Approach, Garner A., Klintworth GK, eds., 2nd Edition (Marcel Dekker, NY, 1994), pp 1625-1710.

В случае опухолевого роста, ангиогенез, по-видимому, является ключевым для перехода гиперплазии в неоплазию и для обеспечения питания для роста и метастазирования опухоли. Folkman et al., Nature, 339:58 (1989). Неоваскуляризация позволяет опухолевым клеткам получать преимущество в росте и пролиферативную автономность по сравнению с нормальными клетками. Опухоль обычно начинается в виде одной аберрантной клетки, которая может пролиферировать только до размера в несколько кубических миллиметров ввиду расстояния до доступного капиллярного ложа, и она может оставаться «дремлющей» без дальнейшего роста и диссеминации в течение длительного периода времени. Затем некоторые опухолевые клетки переключаются на ангиогенный фенотип, чтобы активировать клетки эндотелия, которые пролиферируют и созревают в новые капиллярные кровеносные сосуды. Эти вновь образованные кровеносные сосуды не только делают возможным непрерывный рост первичной опухоли, но также диссеминацию и повторную колонизацию метастатических опухолевых клеток. Соответственно, наблюдали корреляцию между плотностью микрососудов в срезах опухолей и выживаемостью пациентов при раке молочной железы, а также при некоторых других опухолях. Weidner et al, N. Engl. J. Med, 324:1-6 (1991); Horak et al, Lancet, 340: 1120-1124 (1992); Macchiarini et al., Lancet, 340: 145-146 (1992). Точные механизмы, которые управляют ангиогенным переключением, не вполне поняты, но полагают, что неоваскуляризация опухолевой массы является результатом суммы множества стимуляторов и ингибиторов ангиогенеза (Folkman, 1995, Nat Med 1(1):27-31).

Процесс развития сосудов подвергается строгой регуляции. На сегодняшний день показано, что значительное число молекул, главным образом, секретируемых факторов, продуцируемых окружающими клетками, регулируют дифференциацию, пролиферацию, миграцию и срастание клеток эндотелия в структуры, похожие на тяжи. Например, фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) идентифицирован в качестве ключевого фактора, вовлеченного в стимуляцию ангиогенеза и в индукцию проницаемости сосудов. Ferrara et al., Endocr. Rev., 18: 4-25 (1997). Обнаружение того, что утрата даже одного аллеля VEGF ведет к эмбриональной смертности, указывает на незаменимую роль, которую играет этот фактор в развитии и дифференциации сосудистой системы. Кроме того, показано, что VEGF является ключевым медиатором неоваскуляризации, ассоциированной с опухолями и интраокулярными нарушениями. Ferrara et al., Endocr. Rev., выше. Большинство исследованных опухолей человека сверхэкспрессируют мРНК VEGF. Berkman et al., J. Clin. Invest., 91: 153-159 (1993); Brown et al., Human Pathol., 26: 86-91 (1995); Brown et al, Cancer Res., 53: 4727-4735 (1993); Mattern et al, Brit. J. Cancer, 73: 931-934 (1996); Dvorak et al, Am. J. Pathol, 146: 1029-1039 (1995).

Показано, что Bv8 индуцирует пролиферацию, выживаемость и миграцию клеток эндотелия сосудов коры надпочечников (LeCouter, J. et al, Proc Natl Acad Sci USA 100, 2685-2690 (2003)). Bv8 и EG-VEGF являются двумя близкородственными секретируемыми белками, также обозначаемыми как прокинетицин-1 и -2, которые структурно принадлежат к более крупному классу белков, определяемых по мотиву из пяти дисульфидных мостиков, называемому укладкой по типу колипазы (DeCouter, J. et al, Nature 420, 860-867 (2002); LeCouter, J. et al, Proc Natl Acad Sci USA 100, 2685-2690 (2003); Li, M. et al, Mol Pharmacol 59, 692-698 (2001)). Изначально Bv8 идентифицировали как секретируемый белок из кожи лягушки Bombina variegate (Mollay, C. et al, Eur J Pharmacol 374, 189-196 (1999)). Клонирование и экспрессия Bv8 описаны в WO 03/020892, опубликованной 13 марта 2003 года. Bv8 и EG-VEGF связывают два близкородственных сопряженных с G-белком рецептора (GPCR), EG-VEGF/PKR-1 (R1) и EG-VEGF/PKR-2 (R2) (Masuda, Y et al, Biochem Biophys Res Commun 293, 496-402 (2002); Lin, D.C. et al, J Biol Chem 277, 19276-19280 (2002)). EG-VEGF и Bv8 охарактеризованы в качестве митогенов, избирательных к конкретным типам клеток эндотелия (LeCouter, J. et al, Nature 412(6850):877-84 (2001) и LeCouter, J. et al, Proc Natl Acad Sci USA 100, 2685-2690 (2003)). Этому семейству приписаны другие активности, включая ноцицепцию (Mollay, C. et al, выше), моторику желудочно-кишечного тракта (Li, M. et al, выше), регуляцию суточного двигательного ритма (Cheng, M.Y., et al., Nature All, 405-410 (2002)) и нейрогенез обонятельной луковицы (Matsumoto, S., et al, Proc Natl Acad Sci USA 103, 4140-4145 (2006)). Кроме того, Bv8 стимулировал получение гранулоцитарных и моноцитарных колоний in vitro (LeCouter, J. et al, (2003), выше; Dorsch, M. et al, J. Leukoc Biol 78(2), 426-34 (2005)). Bv8 охарактеризован в качестве хемоаттрактанта для макрофагов (LeCouter et al, Proc Natl Acad Sci USA 101, 16813-16919 (2004)).

Ввиду определенной роли ангиогенеза во многих заболеваниях и нарушениях, желательно иметь средство для снижения или ингибирования одного или нескольких биологических эффектов, являющихся причиной этих процессов. Все цитируемые в данном документе ссылки, включая патентные заявки и публикации, включены в данный документ в качестве ссылки в полном объеме.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение отчасти основано на различных антителах к Bv8. Bv8 является важной и выигрышной терапевтической мишенью, и изобретение относится к антителам в качестве терапевтических и диагностических средств для применения в направленном воздействии на патологические состояния, ассоциированные с экспрессией и/или активностью Bv8. Соответственно, изобретение относится к способам, композициям, наборам и промышленным изделиям, связанным с Bv8.

В определенных вариантах осуществления обеспечивается антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен, содержащий по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей гипервариабельной области (HVR), выбранные из группы, состоящей из:

(i) HVR-L1, которая содержит KASQSX₁X₂YX₃X₄X₅SYMN, где X₁ представляет собой L или V; X₂ представляет собой D или I; X₃ представляет собой D, F, G, S, W или Y; X₄ представляет собой A, G, H или V; и X₅ представляет собой D, E или Y;

(ii) HVR-L2, которая содержит AASX₁X₂EX₃, где X₁ представляет собой N или Y; X₂ представляет собой L или R; и X₃ представляет собой S или T;

(iii) HVR-L3, которая содержит QQINEDPFT;

(iv) HVR-H1, которая содержит GYX₁X₂X₃X₄YDMH, где X₁ представляет собой S или T; X₂ представляет собой F или L; X₃ представляет собой F, M, P, T или V; X₄ представляет собой D, E, H, I или N;

(v) HVR-H2, которая содержит YIX₁X₂YX₃GX₄TX₅YNQKFKG, где X₁ представляет собой H, S или T; X₂ представляет собой C, S или T; X₃ представляет собой A, L, N, S или T; X₄ представляет собой A, E или S; X₅ представляет собой I, L, S или T, и

(vi) HVR-H3, которая содержит DX₁NYGEAYAMDY, где X₁ представляет собой G или S.

В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 содержит следующие три последовательности HVR:

(ii) HVR-L2, которая содержит AASX₁X₂EX₃, где X₁ представляет собой N или Y; X₂ представляет собой L или R; и X₃ представляет собой S или T; и

(iii) HVR-L3, которая содержит QQINEDPFT; и

консенсусную каркасную последовательность IV подгруппы VL κ человека SEQ ID NO: 240.

В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 содержит следующие три последовательности HVR:

(i) HVR-H1, которая содержит GYX₁X₂X₃X₄YDMH, где X₁ представляет собой S или T; X₂ представляет собой F или L; X₃ представляет собой F, M, P, T или V; X₄ представляет собой D, E, H, I или N;

(ii) HVR-H2, которая содержит YIX₁X₂YX₃GX₄TX₅YNQKFKG, где X₁ представляет собой H, S или T; X₂ представляет собой C, S или T; X₃ представляет собой A, L, N, S или T; X₄ представляет собой A, E или S; X₅ представляет собой I, L, S или T, и

(iii) HVR-H3, которая содержит DX₁NYGEAYAMDY, где X₁ представляет собой G или S, и консенсусную каркасную последовательность I подгруппы VH человека SEQ ID NO: 241.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен, содержащий следующие шесть последовательностей HVR:

(iii) HVR-L3, которая содержит QQINEDPFT;

(vi) HVR-H3, которая содержит DX₁NYGEAYAMDY, где X₁ представляет собой G или S.

В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 дополнительно содержит мутацию по сравнению с мышиным/химерным антителом против Bv8 в одном или обоих положениях VL 28 и 29. В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 дополнительно содержит мутацию по сравнению с мышиным/химерным антителом против Bv8 в положении VH 52a. В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 дополнительно содержит мутацию по сравнению с мышиным/химерным антителом против Bv8 в положении VH 54. В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 дополнительно содержит мутацию по сравнению с мышиным/химерным антителом против Bv8 в одном или обоих положениях VH 95 и 96. В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 дополнительно содержит мутацию по сравнению с мышиным/химерным антителом против Bv8 (1) в одном или обоих положениях VL 28 и 29; и/или (2) в положении VH 52a; и/или (3) в положении VH 54; и/или (4) одном или обоих положениях VH 95 и 96. В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 дополнительно содержит мутацию по сравнению с мышиным/химерным антителом против Bv8 в положениях VH 96 и не содержит мутацию в положении VH 95.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 49, 55, 61, 67, 73, 79, 85, 91, 97, 103, 109, 115, 121, 127, 133, 139, 145 и 151, HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 50, 56, 62, 68, 74, 80, 86, 92, 98, 104, 110, 116, 122, 128, 134, 140, 146 и 152, HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 51, 57, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105, 111, 117, 123, 129, 135, 141, 147 и 153, HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 52, 58, 64, 70, 76, 82, 88, 94, 100, 106, 112, 118, 124, 130, 136, 142, 148 и 154, HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101, 107, 113, 119, 125, 131, 137, 143, 149 и 155, и HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 54, 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126, 132, 138, 144, 150 и 156.

В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 дополнительно содержит консенсусную каркасную последовательность IV подгруппы VL κ человека. В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 дополнительно содержит консенсусную каркасную последовательность I подгруппы VH человека. В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 дополнительно содержит консенсусную каркасную последовательность IV подгруппы VL κ человека и консенсусную каркасную последовательность I подгруппы VH человека. В определенных вариантах осуществления SEQ ID NO: 240 представляет собой консенсусную каркасную последовательность IV подгруппы VL κ человека минус три последовательности HVR легкой цепи. В определенных вариантах осуществления SEQ ID NO: 241 представляет собой консенсусную каркасную последовательность I подгруппы VH минус три последовательности HVR тяжелой цепи.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен, содержащий по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей гипервариабельной области (HVR), выбранные из группы, состоящей из:

(i) HVR-L1, которая содержит KASQSX₁X₂YX₃X₄X₅SYMN, где X₁ представляет собой L или V; X₂ представляет собой D или I; X₃ представляет собой F, G, S, W или Y; X₄ представляет собой A, G, H или V; и X₅ представляет собой D, E или Y;

(iii) HVR-L3, которая содержит QQINEDPFT;

(v) HVR-H2, которая содержит YIX₁X₂YX₃GX₄T X₅YNQKFKG, где X₁ представляет собой H, S или T; X₂ представляет собой S или T; X₃ представляет собой A, L, S или T; X₄ представляет собой A, E или S; X₅ представляет собой I, L, S или T, и

(vi) HVR-H3, которая содержит DSNYGEAYAMDY.

В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 содержит следующие три последовательности HVR:

(iii) HVR-L3, которая содержит QQINEDPFT; и

консенсусную каркасную последовательность IV подгруппы VL κ человека SEQ ID NO: 240.

В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 содержит следующие три последовательности HVR:

(ii) HVR-H2, которая содержит YIX₁X₂YX₃GX₄TX₅YNQKFKG, где X₁ представляет собой H, S или T; X₂ представляет собой S или T; X₃ представляет собой A, L, S или T; X₄ представляет собой A, E или S; X₅ представляет собой I, L, S или T, и

(iii) HVR-H3, которая содержит DSNYGEAYAMDY, и

консенсусную каркасную последовательность I подгруппы VH человека SEQ ID NO: 241.

(iii) HVR-L3, которая содержит QQINEDPFT;

(v) HVR-H2, которая содержит YIX₁X₂YX₃GX₄TX₅YNQKFKG, где X₁ представляет собой H, S или T; X₂ представляет собой S или T; X₃ представляет собой A, L, S или T; X₄ представляет собой A, E или S; X₅ представляет собой I, L, S или T, и

(vi) HVR-H3, которая содержит DSNYGEAYAMDY.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 55, 61, 67, 73, 79, 85, 91, 97, 103, 109, 115, 121, 127, 133, 139, 145 и 151, HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 56, 62, 68, 74, 80, 86, 92, 98, 104, 110, 116, 122, 128, 134, 140, 146 и 152, HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 57, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105, 111, 117, 123, 129, 135, 141, 147 и 153, HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 58, 64, 70, 76, 82, 88, 94, 100, 106, 112, 118, 124, 130, 136, 142, 148 и 154, HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101, 107, 113, 119, 125, 131, 137, 143, 149 и 155, и HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126, 132, 138, 144, 150 и 156.

В другом варианте осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит:

(1) HVR-H1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61;

(2) HVR-H2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62;

(3) HVR-H3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63;

(4) HVR-L1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64;

(5) HVR-L2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65; и

(6) HVR-L3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66.

(1) HVR-H1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85;

(2) HVR-H2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86;

(3) HVR-H3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 87;

(4) HVR-L1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88;

(5) HVR-L2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 89; и

(6) HVR-L3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90.

(1) HVR-H1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 91;

(2) HVR-H2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92;

(3) HVR-H3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 93;

(4) HVR-L1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94;

(5) HVR-L2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 95; и

(6) HVR-L3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96.

(1) HVR-H1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 121;

(2) HVR-H2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 122;

(3) HVR-H3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 123;

(4) HVR-L1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 124;

(5) HVR-L2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 125; и

(6) HVR-L3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 126.

В одном из вариантов осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID NO: 7, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID NO: 8.

В другом варианте осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID NO: 9, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID NO: 10.

В другом варианте осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID NO: 11, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID NO: 12.

В другом варианте осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID NO: 13, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID NO: 14.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9, 11, 13 и 15.

В одном из вариантов осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7.

В другом варианте осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен тяжелой цепи, обладающий по меньшей мере 90% идентичностью последовательностей с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 6, 8, 10, 12, 14 и 16.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 6, 8, 10, 12, 14 и 16.

В одном из вариантов осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8.

В другом варианте осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен легкой цепи, обладающий по меньшей мере 90% идентичностью последовательностей с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9, 11, 13 и 15, и вариабельный домен тяжелой цепи, обладающий по меньшей мере 90% идентичностью последовательностей с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 6, 8, 10, 12, 14 и 16. В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9, 1 1, 13 и 15, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 6, 8, 10, 12, 14 и 16.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело против Bv8 связывается с Bv8 человек со значением K_d менее чем приблизительно 0,02 нМ.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело против Bv8 связывается с Bv8 человека со значением K_d приблизительно 0,01 нМ или менее.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело против Bv8 связывается с Bv8 человека по меньшей мере в два раза сильнее, чем химерное антитело 2G9 против Bv8. В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело против Bv8 связывается с Bv8 человека по меньшей мере в пять раз сильнее, чем химерное антитело 2G9 против Bv8.

В определенных вариантах осуществления значение K_d измеряют с использованием анализа поверхностного плазмонного резонанса. В определенных вариантах осуществления значение Kd измеряют с использованием полноразмерного антитела против Bv8. В определенных вариантах осуществления значение Kd измеряют с использованием Fab версии антитела против Bv8.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей гипервариабельной области (HVR), выбранные из группы, состоящей из:

(i) HVR-L1, которая содержит SASSX₁VFYMH, где X₁ представляет собой P или S;

(ii) HVR-L2, которая содержит DTSX₁LAS, где X₁ представляет собой K или N;

(iii) HVR-L3, которая содержит QQWSX₁X₂PX₃T, где X₁ представляет собой F, S, W или Y; X₂ представляет собой D или E; X₃ представляет собой I, L или M;

(iv) HVR-H1, которая содержит GFX₁X₂STX₃GMGVS, где X₁ представляет собой L или Y; X₂ представляет собой I или L; X₃ представляет собой P или S;

(v) HVR-H2, которая содержит HIYWDDDTRYNP S LKS, и

(vi) HVR-H3, которая содержит RDHGYYWFX₁Y, где X₁ представляет собой D или T.

(i) HVR-L1, которая содержит SASS X₁VFYMH, где X₁ представляет собой P или S;

(ii) HVR-L2, которая содержит DTSX₁LAS, где X₁ представляет собой K или N;

(iii) HVR-L3, которая содержит QQWS X₁X₂PX₃T, где X₁ представляет собой F, S, W или Y; X₂ представляет собой D или E; X₃ представляет собой I, L или M;

(v) HVR-H2, которая содержит HIYWDDDTRYNPSLKS, и

(vi) HVR-H3, которая содержит RDHGYYWFX₁Y, где X₁ представляет собой D или T.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где HVR-L1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 157, 163, 169, 175, 181, 187 и 193, HVR-L2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 158, 164, 170, 176, 182, 188 и 194, HVR-L3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 159, 165, 171, 177, 183, 189 и 195, HVR-H1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 160, 166, 172, 178, 184, 190 и 196, HVR-H2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 161, 167, 173, 179, 185, 191 и 197, и HVR-H3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 162, 168, 174, 180, 186, 192 и 198.

В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 дополнительно содержит консенсусную каркасную последовательность I подгруппы VL κ человека. В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 дополнительно содержит консенсусную каркасную последовательность III подгруппы VH человека. В определенных вариантах осуществления антитело против Bv8 дополнительно содержит консенсусную каркасную последовательность I подгруппы VL κ человека и консенсусную каркасную последовательность III подгруппы VH человека.

(i) HVR-L1, которая содержит SASSX₁VFYMH, где X₁ представляет собой P или S;

(ii) HVR-L2, которая содержит DTSX₁LAS, где X₁ представляет собой K или N;

(v) HVR-H2, которая содержит HIYWDDDTRYNPSLKS, и

(vi) HVR-H3, которая содержит RDHGYYWFDY.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит следующие шесть последовательностей HVR:

(i) HVR-L1, которая содержит SASSX₁VFYMH, где X₁ представляет собой P или S;

(ii) HVR-L2, которая содержит DTSX₁LAS, где X₁ представляет собой K или N;

(v) HVR-H2, которая содержит HIYWDDDTRYNPSLKS, и

(vi) HVR-H3, которая содержит RDHGYYWFDY.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 157, 163, 169, 175, 181, 187 и 193, HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 158, 164, 170, 176, 182, 188 и 194, HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 159, 165, 171, 177, 183, 189 и 195, HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 160, 166, 172, 178, 184, 190 и 196, HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 161, 167, 173, 179, 185, 191 и 197, и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 174, 180, 186, 192 и 198.

В другом варианте осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID NO: 23, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID NO: 24.

(i) HVR-L1, которая содержит EASQSVDYDDDSYMN;

(ii) HVR-L2, которая содержит ATSNLAS;

(iii) HVR-L3, которая содержит QQSNEDPFT;

(iv) HVR-H1, которая содержит GYTFTNSWMN;

(v) HVR-H2, которая содержит RIDPSDSETHYNQKFKD; и

(vi) HVR-H3, которая содержит DSSYDGFYAMDY.

(i) HVR-L1, которая содержит EASQSVDYDDDSYMN;

(ii) HVR-L2, которая содержит ATSNLAS;

(iii) HVR-L3, которая содержит QQSNEDPFT;

(iv) HVR-H1, которая содержит GYTFTNSWMN;

(v) HVR-H2, которая содержит RIDPSDSETHYNQKFKD; и

(vi) HVR-H3, которая содержит DSSYDGFYAMDY.

В определенных вариантах осуществления предусмотрено антитело, которое связывается с Bv8, или его фрагмент, где антитело содержит HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 199 и 205, HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 200 и 206, HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 201 и 207, HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 202 и 208, HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 203 и 209, и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 204 и 210.

Антитела против bv8 и их применение

Патент 2559542