Композиции и способы для диагностики и лечения опухоли

Композиции и способы для диагностики и лечения опухоли

Иллюстрации

Показать все

Реферат

РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Настоящая заявка является непредварительной заявкой, поданной в соответствии с 37 C.F.R. § 1.53(b)(1), и по ней испрашивается приоритет в соответствии с 35 U.S.C. § 119(e) предварительной заявки США № 61/265262, поданной 30 ноября 2009 г., и предварительной заявки США № 61/384467, поданной 20 сентября 2010 г., содержание которых приведено в настоящем описании в качестве ссылки в полном объеме.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к композициям, которые могут использоваться для диагностики и лечения опухоли у млекопитающих, и к способам применения этих композиций для тех же целей.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Злокачественные опухоли (раковые заболевания) являются второй ведущей причиной смерти в Соединенных Штатах, после заболеваний сердца (Boring et al., CA Cancel J. Clin. 43:7 (1993)). Рак характеризуется увеличением количества патологических или неопластических клеток, являющихся производными нормальной ткани, которые пролиферируют с образованием опухолевой массы, инвазией близлежащих тканей этими неопластическими опухолевыми клетками, и продукцией злокачественных клеток, которые постепенно распространяются через кровь или лимфатическую систему к региональным лимфатическим узлам и к удаленным участкам посредством процесса, именуемого метастазированием. При раковом состоянии, клетка пролиферирует в условиях, при которых нормальные клетки не смогли бы расти. Рак существует в широком разнообразии форм, отличающихся различными степенями инвазивности и агрессивности.

В попытках обнаружить эффективные клеточные мишени для диагностики и терапии рака, исследователи изыскивают пути для идентификации трансмембранных или других связанных с мембраной полипептидов, которые специфично экспрессируются на поверхности одного или более конкретных типов раковых клеток по сравнению с одной или более нормальных нераковых клеток. Часто, такие мембранно-связанные полипептиды более широко экспрессируются на поверхности раковых клеток по сравнению с поверхностью нераковых клеток. Идентификация таких опухоле-связанных антигенных полипептидов клеточной поверхности обеспечивает способность специфически метить раковые клетки для разрушения посредством терапий, основанных на антителах. В этом отношении, отмечается, что терапия на основе антител оказалась очень эффективной при лечении некоторых видов раков. Например, HERCEPTIN® и RITUXAN® (оба от Genentech Inc., South San Francisco, California) представляют собой антитела, которые успешно использовались для лечения рака молочной железы неХоджкинской лимфомы, соответственно. Более конкретно, HERCEPTIN® представляет собой рекомбинантные ДНК-производные гуманизированные моноклональные антитела, которые селективно связываются с внеклеточным доменом прото-онкогена рецептора 2 фактора роста эпидермиса (HER2) человека. Сверхэкспрессия белка HER2 наблюдается у 25-30% из первичных раков молочной железы. RITUXAN® представляет собой генно-инженерные химерные моноклональные антитела мыши/человека, направленные против антигена CD20, обнаруженного на поверхности нормальных и малигнизированных B лимфоцитов. Оба вида этих антител рекомбинантно продуцируются в клетках CHO.

Несмотря на указанные выше достижения в терапии рака молочной железы, существует огромная потребность в дополнительных диагностических и терапевтических средствах, способных к обнаружению присутствия опухоли у млекопитающего и к эффективному ингибированию роста неопластических клеток, соответственно. Соответственно, целью настоящего изобретения является идентификация клеточных мембранно-связанных полипептидов, которые более распространенно экспрессируются у одного или более типов раковых клеток по сравнению с нормальными клетками или у других отличных раковых клеток и применение этих полипептидов, и кодирующих их нуклеиновых кислот, для получения композиций веществ, применимых в терапевтическом лечении и диагностическом обнаружении рака у млекопитающих.

КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем описании заявители впервые описывают идентификацию клеточных полипептидов (и кодирующих их нуклеиновых кислот или их фрагментов), которые экспрессируются в большей степени на поверхности одного или более типов раковых клеток по сравнению с поверхностью одного или более типов нормальных нераковых клеток. Эти полипептиды в настоящем описании называются опухоле-связанными антигенными полипептидами-мишенями (полипептидами "TAT") и, предполагается, что они могут служить в качестве эффективных мишеней для лечения и диагностики рака млекопитающих.

Соответственно, в одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность, которая кодирует опухоле-связанный антигенный полипептид-мишень или его фрагмент (полипептид "TAT").

В некоторых аспектах, выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична последовательности нуклеиновой кислоты, альтернативно по меньшей мере приблизительно на 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности нуклеиновой кислоты, по отношению к (a) молекуле ДНК, кодирующей непроцессированный полипептид ТАТ, имеющий аминокислотную последовательность, как описано в настоящей заявке, аминокислотную последовательность полипептида ТАТ без сигнального пептида, как описано в настоящей заявке, внеклеточный домен трансмембранного полипептида ТАТ, с сигнальным пептидом или без него, как описано в настоящей заявке, или любой другой конкретно определенный фрагмент аминокислотной последовательности непроцессированного полипептида ТАТ, как описано в настоящей заявке, или (b) комплемент молекулы ДНК (a).

В других аспектах, выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична последовательности нуклеиновой кислоты, альтернативно по меньшей мере приблизительно на 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности нуклеиновой кислоты по отношению к (a) молекуле ДНК, содержащей кодирующую последовательность кДНК непроцессированного полипептида ТАТ, как описано в настоящей заявке, кодирующую последовательность полипептида ТАТ без сигнального пептида, как описано в настоящей заявке, кодирующую последовательность внеклеточного домена трансмембранного полипептида ТАТ, с сигнальным пептидом или без него, как описано в настоящей заявке, или кодирующую последовательность любого другого конкретно определенного фрагмента аминокислотной последовательности непроцессированного полипептида ТАТ, как описано в настоящей заявке, или (b) комплемент молекулы ДНК (a).

В еще одном из аспектов изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид ТАТ, который имеет либо делецию трансмембранного домена, либо инактивацию трансмембранного домена, или является комплементарной такой кодирующей нуклеотидной последовательности, где трансмембранные домен(ы) таких полипептидов описаны в настоящей заявке. Следовательно, рассматриваются растворимые внеклеточные домены описанных в настоящей заявке полипептидов ТАТ.

В других аспектах настоящее изобретение относится к выделенным молекулам нуклеиновых кислот, которые гибридизируются с (a) нуклеотидной последовательностью, кодирующей полипептид ТАТ, имеющий непроцессированную аминокислотную последовательность, как описано в настоящей заявке, аминокислотную последовательность полипептида ТАТ без сигнального пептида, как описано в настоящей заявке, внеклеточный домен трансмембранного полипептида ТАТ, с сигнальным пептидом или без него, как описано в настоящей заявке, или любой другой конкретно определенный фрагмент аминокислотной последовательности непроцессированного полипептида ТАТ, как описано в настоящей заявке, или (b) комплемент нуклеотидной последовательности (a). В этом отношении в одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к последовательности, кодирующей фрагменты непроцессированного полипептида ТАТ, или его комплемента, как описано в настоящей заявке, что может найти применение в качестве, например, зондов гибридизации, используемых в качестве, например, диагностических зондов, праймеров ПЦР, антисмысловых олигонуклеотидных зондов, или для кодирования фрагментов непроцессированного полипептида ТАТ, которые могут необязательно кодировать полипептид, содержащий участок связывания для антитела против полипептида ТАТ. Такие фрагменты нуклеиновой кислоты имеют обычно по меньшей мере приблизительно 5 нуклеотидов по длине, альтернативно по меньшей мере приблизительно 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990 или 1000 нуклеотидов по длине, где в данном контексте термин "приблизительно" означает указываемую длину нуклеотидной последовательности плюс или минус 10% от этой указанной длины. Кроме того, такие фрагменты нуклеиновой кислоты обычно состоят из последовательных нуклеотидов, производных от последовательности, кодирующей непроцессированный полипептид ТАТ или его комплемент. Отмечают, что новые фрагменты нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид ТАТ или его комплемент, могут быть определены рутинным образом посредством выравнивания нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид ТАТ с другими известными нуклеотидными последовательностями с использованием любой из ряда хорошо известных программ выравнивания последовательностей и определения того, какие фрагмент(ы) нуклеотидной последовательности, кодирующие полипептид ТАТ, или его комплемент, являются новыми. Все из таких фрагментов нуклеотидных последовательностей, кодирующих полипептид ТАТ, или их комплемент, рассматриваются в настоящем документе. Также рассматриваются фрагменты полипептида ТАТ, кодируемые этими нуклеотидными фрагментами молекулы, предпочтительно, такие фрагменты полипептида ТАТ, которые содержат участок связывания для антитела против ТАТ.

В еще одном варианте осуществления изобретение относится к выделенным полипептидам ТАТ, кодируемым любыми из последовательностей выделенной нуклеиновой кислоты, идентифицированнных в настоящей заявке выше.

В определенном аспекте изобретение относится к выделенному полипептиду ТАТ, содержащему аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична аминокислотной последовательности, альтернативно по меньшей мере приблизительно 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности, по отношению к полипептиду ТАТ, имеющему непроцессированную аминокислотную последовательность, как описано в настоящей заявке, аминокислотной последовательности полипептида ТАТ без сигнального пептида, как описано в настоящей заявке, внеклеточному домену трансмембранного полипептидного ТАТ белка, с сигнальным пептидом или без него, как описано в настоящей заявке, аминокислотной последовательности, кодируемой любой из последовательностей нуклеиновой кислоты, описанной в настоящей заявке, или любого другого конкретно определенного фрагмента аминокислотной последовательности непроцессированного полипептида ТАТ, как описано в настоящей заявке.

В другом дополнительном аспекте, изобретение относится к выделенному полипептиду ТАТ, содержащему аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая гибридизируется с комплементом молекулы ДНК, кодирующим (a) полипептид ТАТ, имеющий непроцессированную аминокислотную последовательность, как описано в настоящей заявке, (b) аминокислотную последовательность полипептида ТАТ без сигнального пептида, как описано в настоящей заявке, (c) внеклеточный домен трансмембранного полипептидного ТАТ белка, с сигнальным пептидом или без него, как описано в настоящей заявке, (d) аминокислотную последовательность, кодируемую любой из последовательностей нуклеиновой кислоты, раскрытых в настоящей заявке, или (e) любой другой конкретно определенный фрагмент аминокислотной последовательности непроцессированного полипептида ТАТ, как описано в настоящей заявке.

В конкретном аспекте изобретение относится к выделенному полипептиду ТАТ без N-концевой сигнальной последовательности и/или без инициирующего метионина, и который кодируется нуклеотидной последовательностью, которая кодирует такую аминокислотную последовательность, как описано в настоящей заявке выше. Способы для их получения также описаны в настоящей заявке, где способы включают культивирование клетки-хозяина, содержащей вектор, который содержит соответствующую кодирующую молекулу нуклеиновой кислоты при условиях, подходящих для экспрессии полипептида ТАТ и выделения полипептида ТАТ из клеточной культуры.

В другом аспекте изобретение относится к выделенному полипептиду ТАТ, который имеет любо делецию трансмембранного домена, либо инактивацию трансмембранного домена. Способы для их получения также описаны в настоящей заявке, где эти способы включают культивирование клетки-хозяина, содержащей вектор, который содержит соответствующую кодирующую молекулу нуклеиновой кислоты при условиях, подходящих для экспрессии полипептида ТАТ и выделения полипептида ТАТ из клеточной культуры.

В других вариантах осуществления настоящего изобретения изобретение относится к векторам, содержащим ДНК, кодирующим любые из описанных в настоящей заявке полипептидов. Также изобретение относится к клеткам-хозяевам, содержащим любой такой вектор. Посредством примера, клетки-хозяева могут представлять собой CHO клетки, E. coli клетки или дрожжевые клетки. Дополнительно предоставлен способ получения любых описанных в настоящей заявке полипептидов, который включает культивирование клеток-хозяев при условиях, подходящих для экспрессии желательного полипептида и выделения желательного полипептида из клеточной культуры.

В других вариантах осуществления изобретение относится к выделенным химерным полипептидам, содержащим любой из описанных полипептидов ТАТ, рекомбинированных с гетерологичным (не-TAT) полипептидом. Примеры таких химерных молекул содержат любые из описанных в настоящей заявке полипептидов ТАТ, рекомбинированных с гетерологичным полипептидом, таким как, например, последовательность эпитопной метки или Fc-область иммуноглобулина.

В еще одном варианте осуществления изобретение относится к антителу, которое связывается, предпочтительно, конкретно, с любым из указанных выше или описанных ниже полипептидов. Необязательно, антитело представляет собой моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело, антитело с единственной цепью или антитело, которое конкурентно ингибирует связывание антитела против полипептида ТАТ с его соответствующим антигенным эпитопом. Антитела по настоящему изобретению могут необязательно быть конъюгированы с агентом, ингибирующим рост, или цитотоксическим агентом, таким как токсин, включающим, например, майтансиноид или калихеамицин, антибиотик, радиоактивный изотоп, нуклеолитический фермент или т.п. Антитела по настоящему изобретению могут необязательно продуцироваться в CHO клетках или бактериальных клетках и, предпочтительно, ингибируют рост или пролиферацию или индуцируют смерть клетки, с которой они связываются. Для диагностических целей, антитела по настоящему изобретению могут быть помечены для обнаружения, присоединены к твердому носителю, или т.п.

В других вариантах осуществления настоящего изобретения изобретение относится к векторам, содержащим ДНК, кодирующим любые из описанных в настоящей заявке антител. Также изобретение относится к клеткам-хозяевам, содержащим любой такой вектор. В качестве примера, клетки-хозяева могут представлять собой CHO клетки, клетки E. coli или дрожжевые клетки. Дополнительно, изобретение относится к способу получения любого из описанных в настоящей заявке антител, который включает культивирование клеток-хозяев при условиях, подходящих для экспрессии желательного антитела и выделения желательного антитела из клеточной культуры.

В другом дополнительном варианте осуществления изобретение относится к композиции, содержащей полипептид ТАТ, как описано в настоящей заявке, химерный полипептид ТАТ, как описано в настоящей заявке, или антитело против ТАТ, как описано в настоящей заявке, в комбинации с носителем. Необязательно, носитель представляет собой фармацевтически приемлемый носитель.

В еще одном другом варианте осуществления изобретение относится к изделию, содержащему контейнер и композицию веществ, содержащуюся внутри контейнера, где композиция веществ может содержать полипептид ТАТ, как описано в настоящей заявке, химерный полипептид ТАТ, как описано в настоящей заявке, или антитело против ТАТ, как описано в настоящей заявке. Изделие может дополнительно необязательно содержать этикетку, прикрепленную к контейнеру, или листок-вкладыш, включенный в контейнер, который относится к применению композиции веществ для терапевтического лечения или диагностического обнаружения опухоли.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению полипептида ТАТ, как описано в настоящей заявке, химерного полипептида ТАТ, как описано в настоящей заявке, или антитела против полипептида ТАТ, как описано в настоящей заявке, для получения лекарственного средства, используемого для лечения состояния, которое является восприимчивым к полипептиду ТАТ, химерному полипептиду ТАТ, или антителу против полипептида ТАТ.

Другие варианты осуществления настоящего изобретения относятся к любому выделенному антителу, содержащему одну или более из последовательностей CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 или CDR-H3, раскрытых в настоящей заявке, или любое антитело, которое связывается с тем же самым эпитопом как любое такое антитело.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу ингибирования роста клетки, которая экспрессирует полипептид ТАТ, где способ предусматривает приведение в контакт клетки с антителом, которое связывается с полипептидом ТАТ, и, где связывание антитела с полипептидом ТАТ вызывает ингибирование роста клетки, экспрессирующей полипептид ТАТ. В предпочтительных вариантах осуществления клетка представляет собой раковую клетку, и связывание антитела с полипептидом ТАТ вызывает смерть клетки, экспрессирующей полипептид ТАТ. Необязательно, антитело представляет собой моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело или антитело с единственной цепью. Антитела, используемые в способах настоящего изобретения, могут необязательно быть конъюгированы с агентом, ингибирующим рост, или цитотоксическим агентом, таким как токсин, включающим, например, майтансиноид или калихеамицин, антибиотик, радиоактивный изотоп, нуклеолитический фермент, или т.п. Антитела, используемые в способах настоящего изобретения, могут необязательно продуцироваться в CHO клетках или бактериальных клетках.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу терапевтического лечения млекопитающего, имеющего раковую опухоль, содержащую клетки, которые экспрессируют полипептид ТАТ, где способ включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества антитела, которое связывается с полипептидом ТАТ, посредством чего приводя в результате к эффективному терапевтическому лечению опухоли. Необязательно, антитело представляет собой моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело или антитело с единственной цепью. Антитела, используемые в способах настоящего изобретения, могут необязательно быть конъюгированы с агентом, ингибирующим рост, или цитотоксическим агентом, таким как токсин, включающим, например, майтансиноид или калихеамицин, антибиотик, радиоактивный изотоп, нуклеолитический фермент, или т.п. Антитела, используемые в способах настоящего изобретения, могут необязательно продуцироваться в CHO клетках или бактериальных клетках.

Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу определения присутствия полипептида ТАТ в образце, подозреваемом на содержание полипептида ТАТ, где способ включает воздействие образца на антитело, которое связывается с полипептидом ТАТ, и определение связывания антитела с полипептидом ТАТ в образце, где присутствие такого связывания указывает на присутствие полипептида ТАТ в образце. Необязательно, образец может содержать клетки (которые могут являться раковыми клетками), в которых предполагают экспрессию полипептида ТАТ. Антитело, используемое в способе, может необязательно быть меченным для обнаружения, присоединено к твердому носителю, или т.п.

Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу диагностики присутствия опухоли у млекопитающего, где способ включает обнаружение уровня экспрессии гена, кодирующего полипептид ТАТ (a) в тестируемом образце клеток ткани, полученных от указанного млекопитающего, и (b) в контрольном образце известных нормальных нераковых клеток такого же тканевого происхождения или типа, где более высокий уровень экспрессии полипептида ТАТ в тестируемом образце, по сравнению с контрольным образцом, указывает на присутствие опухоли у млекопитающего, от которого был получен тестируемый образец.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу диагностики присутствия опухоли у млекопитающего, где способ предусматривает (a) приведение в контакт тестируемого образца, содержащего тканевые клетки, полученные от млекопитающего, с антителом, которое связывается с полипептидом ТАТ, и (b) обнаружение образования комплекса между антителом и полипептидом ТАТ в тестируемом образце, где образование комплекса указывает на присутствие опухоли у млекопитающего. Необязательно, используемое антитело является меченым для обнаружения, присоединено к твердому носителю, или т.п., и/или тестируемый образец клеток ткани получают от индивидуума, подозреваемого как имеющего раковую опухоль.

В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики клеточного пролиферативного нарушения, связанного с измененной, предпочтительно, увеличенной, экспрессией или активностью полипептида ТАТ, способ, включающий введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества антагониста полипептида ТАТ. Предпочтительно, клеточное пролиферативное нарушение является раком, а антагонист полипептида ТАТ представляет собой антитело против ТАТ полипептида или антисмысловой олигонуклеотид. Эффективное лечение или профилактика клеточного пролиферативного нарушения может являться результатом непосредственного уничтожения или ингибирования роста клеток, которые экспрессируют полипептид ТАТ или посредством антагонизации клеточного роста, потенцирующего активность полипептида ТАТ.

В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу связывания антитела с клеткой, которая экспрессирует полипептид ТАТ, где способ предусматривает приведение в контакт клетки, которая экспрессирует полипептид ТАТ с указанным антителом при условиях, которые являются подходящими для связывания антитела с указанным полипептидом ТАТ и обеспечение связывания между ними. В предпочтительных вариантах осуществления, антитело метят молекулой или соединением, которые используются для качественного и/или количественного определения расположения и/или количества связывания антитела с клеткой.

Другие варианты осуществления настоящего изобретения относятся к применению полипептида ТАТ, нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид ТАТ, или вектора или клетки-хозяина, содержащей эту нуклеиновую кислоту, или антитела против полипептида ТАТ при получении лекарственного средства, применимого для (i) терапевтического лечения или диагностического обнаружения рака или опухоли, или (ii) терапевтического лечения или профилактики клеточного пролиферативного нарушения.

В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу ингибирования роста раковой клетки, где рост указанной раковой клетки является по меньшей мере отчасти зависимым от потенцирующих рост эффекта(ов) полипептида ТАТ (где полипептид ТАТ может экспрессироваться либо самой раковой клеткой, либо клеткой, которая продуцирует полипептид(ы), которые обладают потенцирующим рост эффектом на раковые клетки), где способ включает приведение в контакт полипептида ТАТ с антителом, которое связывается с полипептидом ТАТ, посредством чего антагонизируя рост-потенцирующую активность полипептида ТАТ и, в свою очередь, ингибируя рост раковой клетки. Предпочтительно, рост раковой клетки рака полностью ингибируется. Даже более предпочтительно, связывание антитела с полипептидом ТАТ индуцирует смерть раковой клетки. Необязательно, антитело представляет собой моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело или антитело с единственной цепью. Антитела, используемые в способах настоящего изобретения, могут необязательно быть конъюгированы с агентом, ингибирующим рост, или цитотоксическим агентом, таким как токсин, включающий, например, майтансиноид или калихеамицин, антибиотик, радиоактивный изотоп, нуклеолитический фермент, или т.п. Антитела, используемые в способах настоящего изобретения, могут необязательно продуцироваться в CHO клетках или бактериальных клетках.

В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу терапевтического лечения опухоли у млекопитающего, где рост указанной опухоли является по меньшей мере частично зависимым от рост-потенцирующих эффекта(ов) полипептида ТАТ, где способ включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества антитела, которое связывается с полипептидом ТАТ, посредством чего антагонизируя рост-потенцирующую активность указанного полипептида ТАТ и приводя в результате к эффективному терапевтическому лечению опухоли. Необязательно, антитело представляет собой моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело или антитело с единственной цепью. Антитела, используемые в способах настоящего изобретения, могут необязательно быть конъюгированы с агентом, ингибирующим рост, или цитотоксическим агентом, таким как токсин, включающий, например, майтансиноид или калихеамицин, антибиотик, радиоактивный изотоп, нуклеолитический фермент, или т.п. Антитела, используемые в способах настоящего изобретения, могут необязательно продуцироваться в CHO клетках или бактериальных клетках.

В еще дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к следующему набору потенциальных пунктов формулы изобретения для данной или будущей заявок:

1. Выделенная нуклеиновая кислота, имеющая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности нуклеиновой кислоты по отношению к (a) молекуле ДНК, кодирующей аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO:2, (b) молекуле ДНК, кодирующей аминокислотную последовательность, показанной как SEQ ID NO:2, в которой отсутствует его связанный сигнальный пептид, (c) молекуле ДНК, кодирующей внеклеточный домен полипептида, показанной как SEQ ID NO:2, с его связанным сигнальным пептидом, (d) молекуле ДНК, кодирующей внеклеточный домен полипептида, показанной как SEQ ID NO:2, в которой отсутствует его связанный сигнальный пептид, (e) нуклеотидной последовательности, показанной как SEQ ID NO:1, (f) непроцессированной кодирующей последовательности нуклеотидной последовательности, показанной как SEQ ID NO:1, или (g) комплементу (a), (b), (c), (d), (e) или (f).

2. Выделенная нуклеиновая кислота, имеющая (a) нуклеотидную последовательность, которая кодирует аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO:2, (b) нуклеотидную последовательность, которая кодирует аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO:2, в которой отсутствует его связанный сигнальный пептид, (c) нуклеотидную последовательность, которая кодирует внеклеточный домен полипептида, показанный как SEQ ID NO:2, с его связанным сигнальным пептидом, (d) нуклеотидную последовательность, которая кодирует внеклеточный домен полипептида, показанный как SEQ ID NO:2, в котором отсутствует его связанный сигнальный пептид, (e) нуклеотидную последовательность, показанную как SEQ ID NO:1, (f) непроцессированную кодирующую область нуклеотидной последовательности, показанную как SEQ ID NO:1, или (g) комплемент (a), (b), (c), (d), (e) или (f).

3. Выделенная нуклеиновая кислота, которая гибридизируется с (a) нуклеиновой кислотой, которая кодирует аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO:2, (b) нуклеиновой кислотой, которая кодирует аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO:2, без его связанного сигнального пептида, (c) нуклеиновой кислотой, которая кодирует внеклеточный домен полипептида, показанный как SEQ ID NO:2, с его связанным сигнальным пептидом, (d) нуклеиновой кислотой, которая кодирует внеклеточный домен полипептида, показанный как SEQ ID NO:2, без его связанного сигнального пептида, (e) нуклеотидной последовательностью, показанной как SEQ ID NO:1, (f) непроцессированной кодирующей областью нуклеотидной последовательности, показанной как SEQ ID NO:1, или (g) комплементом (a), (b), (c), (d), (e) или (f).

4. Нуклеиновая кислота по п.3, где гибридизация происходит при строгих условиях.

5. Нуклеиновая кислота по п.3, которая содержит по меньшей мере приблизительно 5 нуклеотидов по длине.

6. Экспрессионный вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.1, 2 или 3.

7. Экспрессионный вектор по п.6, где указанная нуклеиновая кислота является функционально связанной с контрольными последовательностями, распознаваемыми клеткой-хозяином, трансформированной вектором.

8. Клетка-хозяин, содержащая экспрессионный вектор по п.7.

9. Клетка-хозяин по п.8, которая представляет собой CHO клетку, клетку E. coli или дрожжевую клетку.

10. Способ продуцирования полипептида, включающий культивирование клетки-хозяина по п.8 при условиях, подходящих для экспрессии указанного полипептида и выделения указанного полипептида из клеточной культуры.

11. Выделенный полипептид, который по меньшей мере на 80% идентичен аминокислотной последовательности по отношению к (a) полипептиду, показанному как SEQ ID NO:2, (b) полипептиду, показанному как SEQ ID NO:2, в котором отсутствует его связанный сигнальный пептид, (c) внеклеточному домену полипептида, показанному как SEQ ID NO:2, с его связанным сигнальным пептидом, (d) внеклеточному домену полипептида, показанному как SEQ ID NO:2, в котором отсутствует его связанный сигнальный пептид, (e) полипептиду, кодируемому нуклеотидной последовательностью, показанной как SEQ ID NO:1, или (f) полипептиду, кодируемому кодирующей областью непроцессированной нуклеотидной последовательности, показанной как SEQ ID NO:1.

12. Выделенный полипептид, имеющий (a) аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO:2, (b) аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO:2, без последовательности его связанного сигнального пептида, (c) аминокислотную последовательность внеклеточного домена полипептида, показанную как SEQ ID NO:2, с последовательностью его связанного сигнального пептида, (d) аминокислотную последовательность внеклеточного домена полипептида, показанную как SEQ ID NO:2, без последовательности его связанного сигнального пептида, (e) аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью, показанной как SEQ ID NO:1, или (f) аминокислотную последовательность, кодируемую кодирующей областью непроцессированной нуклеотидной последовательности, показанной как SEQ ID NO:1.

13. Химерный полипептид, содержащий полипептид по п.11 или 12, рекомбинированный с гетерологичным полипептидом.

14. Химерный полипептид по п.13, где указанный гетерологичный полипептид представляет собой последовательность эпитопной метки или Fc-область иммуноглобулина.

15. Выделенное антитело, которое связывается с полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична аминокислотной последовательности по отношению к (a) полипептиду, показанному как SEQ ID NO:2, (b) полипептиду, показанному как SEQ ID NO:2, без его связанного сигнального пептида, (c) внеклеточному домену полипептида, показанному как SEQ ID NO:2, с его связанным сигнальным пептидом, (d) внеклеточному домену полипептида, показанному как SEQ ID NO:2, без его связанного сигнального пептида, (e) полипептиду, кодируемому нуклеотидной последовательностью, показанной как SEQ ID NO:1, или (f) полипептиду, кодируемому кодирующей областью непроцессированной нуклеотидной последовательности, показанной как SEQ ID NO:1.

16. Выделенное антитело, которое связывается с полипептидом, имеющим (a) аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO:2, (b) аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO:2, без последовательности его связанного сигнального пептида, (c) аминокислотную последовательность внеклеточного домена полипептида, показанную как SEQ ID NO:2, с последовательностью его связанного сигнального пептида, (d) аминокислотную последовательность внеклеточного домена полипептида, показанную как SEQ ID NO:2, без последовательности его связанного сигнального пептида, (e) аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью, показанной как SEQ ID NO:1, или (f) аминокислотную последовательность, кодируемую кодирующей областью непроцессированной нуклеотидной последовательности, показанной как SEQ ID NO:1.

17. Антитело по п.15 или 16, которое представляет собой моноклональное антитело.

18. Антитело по п.15 или 16, которое представляет собой фрагмент антитела.

19. Антитело по п.15 или 16, которое представляет собой химерное или гуманизированное антитело.

20. Антитело по п.15 или 16, которое является конъюгированным с агентом, ингибирующим рост.

21. Антитело по п.15 или 16, которое является конъюгированным с цитотоксическим агентом.

22. Антитело по п.21, где цитотоксический агент выбирают из группы, состоящей из токсинов, антибиотиков, радиоактивных изотопов и нуклеолитических ферментов.

23. Антитело по п.21, где цитотоксический агент представляет собой токсин.

24. Антитело по п.23, где токсин выбирают из группы, состоящей из майтансиноида и калихеамицин.

25. Антитело по п.23, где токсин представляет собой майтансиноид.

26. Антитело по п.15 или 16, которое продуцируется в бактериях.

27. Антитело по п.15 или 16, которое продуцируется в CHO клетках.

28. Антитело по п.15 или 16, которое индуцирует смерть клетки, с которой оно связывается.

29. Антитело по п.15 или 16, которое метят для обнаружения.

30. Выделенная нуклеиновая кислота, имеющая нуклеотидную последовательность, которая кодирует антитело по п.15 или 16.

31. Экспрессионный вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.30, функционально связанную с контрольными последовательностями распознаваемыми клетками-хозяевами, трансформированными вектором.

32. Клетка-хозяин, содержащая экспрессионный вектор по п.31.

33. Клетка-хозяин по п.32, которая представляет собой СНО клетку, клетку E. coli или дрожжевую клетку.

34. Способ продуцирования антитела, включающий культивирование клетки-хозяина по п.32 при условиях, подходящих для экспрессии указанного антитела и выделения указанного антитела из клеточной культуры.

35. Композиция веществ, содержащая (a) полипептид по п.11, (b) полипептид по п.12, (c) химерный полипептид по п.13, (d) а