Смесь для питания младенцев и маленьких детей, содержащая пробиотики для младенцев и маленьких детей

Смесь для питания младенцев и маленьких детей, содержащая пробиотики для младенцев и маленьких детей

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящее изобретение относится к области питания младенцев и маленьких детей. Более конкретно, настоящее изобретение относится к смесям для питания младенцев и маленьких детей, содержащим пробиотические микроорганизмы, предназначенные для введения младенцам и маленьким детям старше 6 месяцев. Эти пробиотические микроорганизмы могут быть нереплицирующимися пробиотическими микроорганизмами, такими как, например, биоактивные пробиотические микроорганизмы, подвергнутые тепловой обработке.

Грудное молоко представляет собой идеальный пищевой продукт для здорового роста и развития младенцев. В 2001 г. Всемирная организация здравоохранения (WHO) изменила свои рекомендации по продолжительности исключительного грудного вскармливания с периода от 4 до 6 месяцев, поэтому грудное вскармливание должно соответствующим образом поощряться и поддерживаться.

Начиная с 6-го месяца и далее, поведение младенцев меняется. Они впервые садятся или хватают игрушку только одной рукой. Пищевые потребности младенца по мере его развития также изменяются. Все более важное значение начинают приобретать такие питательные вещества, как железо и кальций.

Для сопровождения такого быстрого развития подходящим питанием были разработаны смеси для вскармливания младенцев, способные обеспечивать оптимальное питание во время переходной фазы от грудного вскармливания к потреблению твердой пищи.

Такие смеси для питания младенцев и маленьких детей являются, например, смесями для прикорма. Смесь для прикорма подразумевает пищевой продукт, предназначенный для применения в виде жидкой части диеты отлучаемых от грудного вскармливания младенцев с 6-го месяца жизни и маленьких детей.

Типичные смеси для питания младенцев и маленьких детей являются питательно полноценными, содержат нативный белок и базируются на коровьем молоке. Они предназначаются в качестве дополнения к изменяющейся диете подрастающих младенцев.

Одна важная функция раннего питания младенцев состоит в создании полезной для здоровья кишечной флоры и развитии сильной иммунной системы.

Полезная для здоровья кишечная флора способствует функционированию желудочно-кишечного тракта (ЖК-тракта), что, в свою очередь, помогает должным образом усваивать принимаемую внутрь пищу и ослабляет боли в желудке у младенцев и маленьких детей.

Младенцы и маленькие дети обычно переносят приблизительно по 10 случаев простудных заболеваний в год. Так как младенцы при кормлении из бутылочки дышат через нос, простуда может вызвать проблемы.

Поэтому было бы желательным дополнительно улучшить укрепляющее иммунную систему действие смеси для питания младенцев и маленьких детей.

Также было бы желательно улучшить, помимо этого, противовоспалительное действие смеси для питания младенцев и маленьких детей.

Следовательно, в данной области имеется потребность в смеси для питания младенцев и маленьких детей, способной предоставлять младенцам питание, настолько близкое к материнскому молоку, насколько это возможно. Такая смесь для вскармливания младенцев должна иметь улучшенную способность к укреплению иммунной системы, противовоспалительное действие и/или должна облегчать переваривание. Было бы предпочтительным достичь этого посредством применения натуральных ингредиентов, которые являются безопасными для употребления, не имея побочных эффектов, и которые легко вводятся в смеси для вскармливания младенцев, с использованием промышленных технологий существующего уровня техники.

Настоящее изобретение обращается именно к этой потребности. То есть задача настоящего изобретения состояла в улучшении существующего уровня техники и обеспечении смеси для питания младенцев и маленьких детей, которая отвечала бы обозначенной выше потребности.

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что они могут достигнуть этого с помощью объектов независимых пунктов формулы изобретения. Основную идею настоящего изобретения развивают дополнительные пункты формулы изобретения.

Соответственно, авторы настоящего изобретения предлагают смесь для питания младенцев и маленьких детей, содержащую пробиотики.

Предписания FDA (Federal Drag Administration, Комиссия по контролю за лекарствами и питательными веществами) определяют младенцев как людей не старше 12 месяцев (раздел 21 Свода федеральных установлений 21 CFR 105.3 (е)).

Было обнаружено, что пробиотики способны проявлять свои полезные для здоровья свойства в рамках смесей для питания младенцев и маленьких детей. Более того, например, бифидобактерии присутствуют в грудном молоке и являются частью того, что придает грудному молоку его естественные защитные свойства.

Следовательно, добавление пробиотических микроорганизмов к смесям для питания младенцев и маленьких детей позволило бы им стать более сходными с грудным молоком.

Однако поскольку, в частности, предназначенные для восстановления водой порошкообразные питательные смеси обычно имеют продолжительность хранения, которая превышает продолжительность хранения, например, содержащих пробиотики йогуртных напитков, пробиотики к таким питательным смесям, как правило, не добавляются из-за отсутствия, например, уверенности в возможности обеспечения жизнеспособности пробиотиков в течение такого увеличенного срока хранения.

Авторы настоящего изобретения смогли показать, что нереплицирующиеся пробиотики также могут приносить здоровью ту пользу, которую обеспечивают пробиотики, и, возможно, даже в еще большей степени.

Поэтому одним воплощением настоящего изобретения является питательная смесь для младенцев или маленьких детей, предназначенная для введения младенцам или маленьким детям, начиная с возраста в 6 месяцев, обеспечивающая младенцу или ребенку полноценное питание и содержащая пробиотические микроорганизмы.

Питательная смесь настоящего изобретения может предназначаться для введения младенцам или маленьким детям в возрасте 6-36 месяцев, например 6-18 месяцев.

Термин «младенец» обозначает человека в возрасте не более 12 месяцев.

Термин «маленькие дети» обозначает людей в возрасте старше 12 месяцев и вплоть до 36 месяцев.

Питательная смесь может обеспечиваться в виде жидкой, готовой для введения композиции, или как сухая композиция, предназначенная для восстановления водой перед применением.

В случае предоставления в виде сухой композиции предпочтительно, чтобы композиция имела активность воды ниже 0,2, предпочтительно ниже 0,15, с тем, чтобы дополнительно повысить ее стабильность при хранении. Большинство бактерий, например, не способны к росту при активности воды ниже 0,91, а большинство плесневых грибков прекращают рост при активности воды ниже 0,80.

Активность воды (а_w) является показателем энергетического статуса воды в системе. Она определяется как величина давления паров воды, деленная на давление паров над чистой водой. Соответственно, дистиллированная вода имеет давление воды, равное 1.

Обычные смеси для прикорма обеспечивают не менее 60 ккал (или 250 кДж) и не более 85 ккал (или 355 кДж) в 100 мл. Смеси для прикорма также содержат не менее 3 г и не более 6 г жира на 100 калорий.

Питательная смесь в соответствии с настоящим изобретением может иметь калорийность в диапазоне 62-68 ккал/100 мл и может содержать источник белка в количестве 1,9-3,5 г/100 ккал, источник углеводов в количестве 12-13 г/100 ккал и источник липидов в количестве 4-5 г/100 ккал.

Источник белка может состоять из сывороточных белков и казеина. Например, может применяться соотношение сыворотки к казеину в диапазоне от около 35:65 до 55:45. В случае увеличенных потребностей в белке содержание казеинового компонента увеличивается. Например, для 2 г белка/100 ккал может использоваться массовое соотношение сыворотка/казеин 1:1. Для 2,5 г белка/100 ккал может использоваться массовое соотношение сыворотка/казеин 2:3.

Источник углеводов может состоять, по существу, из лактозы. При этом также могут использоваться соотношения лактозы и мальтодекстрина в диапазоне, например, от 3:1 до 1:1.

Питательная смесь настоящего изобретения может содержать 0,2-0,3 г LC-PUFA/100 г (длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты). LC-PUFA могут быть выбраны из ARA (арахидоновая кислота), DHA (докозагексаеновая кислота) или их комбинаций. Например, LC-PUFA могут содержать комбинацию ARA и DHA. Показано, что смеси, содержащие DHA и ARA, обеспечивают развитие зрительных и умственных способностей подобно достигаемым у младенцев, получающих грудное вскармливание.

Питательная смесь настоящего изобретения может также содержать 1,5-2,5 мг нуклеотидов в 100 мл смеси. Нуклеотиды и их основания не считаются «незаменимыми», поскольку они могут синтезироваться организмом младенца из более простых соединений. В некоторые периоды времени, однако, процессы синтеза могут оказаться не в состоянии удовлетворить потребности в них, например в периоды высоких темпов обновления клеточной популяции, как, например, при нормальном росте или при кишечном заболевании. В такие периоды времени организм в большей степени полагается на нуклеотиды из пищевых источников.

Питательная смесь может содержать частично или только нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы.

Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что, например, в отношении укрепления иммунной системы и/или с точки зрения противовоспалительного действия нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы могут быть даже более эффективными, чем реплицирующиеся пробиотические микроорганизмы.

Это является удивительным, так как пробиотики часто определяются как «живые микроорганизмы, которые при введении в надлежащих количествах приносят пользу здоровью организма» (Руководящие принципы FAO/WHO). Огромное большинство литературных публикаций касается живых пробиотиков. При этом в нескольких исследованиях изучалась полезность для здоровья снабжения нереплицирующимися бактериями, и большинство из них показало, что инактивация пробиотиков, например, тепловой обработкой приводит к потере их подразумеваемой пользы для здоровья (Rachmilewitz, D. и др., 2004, Gastroenterology 126:520-528; Castagliuolo и др., 2005, FEMS Immunol.Med.Microbiol. 43:197-204; Gill, H.S. и К.J. Rutherfurd, 2001, Br.J.Nutr. 86:285-289; Kaila, M. и др., 1995, Arcli.Dis.Cmld 72:51-53.). Некоторые исследования показали, что мертвые пробиотики могут сохранять некоторую способность действовать на состояние здоровья (Rachmilewitz, D., и др., 2004, Gastroenterology 126:520-528; Gill, H.S. и К.J. Rutherrurd, 2001, Br.J.Nutr. 86:285-289), но, очевидно, живые пробиотики с этой точки зрения были оценены как намного более эффективные.

Питательная смесь согласно настоящему изобретению может содержать пробиотические микроорганизмы в любом эффективном количестве, например в количестве, соответствующем на сухую массу около 10⁶-10¹² КОЕ/г.

Пробиотические микроорганизмы могут быть нереплицирующимися пробиотическими микроорганизмами.

«Нереплицирующиеся» пробиотические микроорганизмы включают пробиотические бактерии, подвергнутые тепловой обработке. Они включают микроорганизмы, которые являются инактивированными, мертвыми, нежизнеспособными и/или присутствующими в виде фрагментов, таких как ДНК, метаболиты, цитоплазматические соединения или материалы клеточной оболочки.

«Нереплицирующиеся» означает, что никаких жизнеспособных клеток и/или колониеобразующих единиц классическими методами культивирования обнаружено быть не может. Такие классические методы культивирования сведены вместе в книге по микробиологии James Monroe Jay, Martin J.Loessner, David A.Golden. 2005. Modem food microbiology («Современная микробиология пищевых продуктов»). 7 издание, Springer Science, Нью-Йорк, N.Y. 790 стр. Как правило, отсутствие жизнеспособных клеток может быть показано следующим образом: отсутствие каких-либо видимых колоний на чашках с агаровой средой или отсутствие увеличивающегося помутнения в жидкой среде для выращивания после засева бактериальными препаратами в различных концентрациях («нереплицирующиеся» образцы) и выдерживания в подходящих условиях (аэробная и/или анаэробная атмосфера на протяжении по меньшей мере 24 час).

Пробиотики для целей настоящего изобретения определяются как «препараты микробиологических клеток или компоненты микробиологических клеток, обладающие благотворным воздействием на состояние здоровья или самочувствие организма» (С. Salminen, Ouwehand A., Benno Y. и др. “Probiotics: how should they be defined” («Пробиотики: каких следует определять») Trends Food Sci. Technol. 1999:10 107-10).

Возможность применения нереплицирующихся пробиотических микроорганизмов предлагает несколько преимуществ. У младенцев с серьезными иммунными нарушениями применение живых пробиотиков может быть ограничено исключительными случаями вследствие наличия потенциального риска развития бактериемии. Нереплицирующиеся пробиотики могут применяться безо всяких проблем.

Помимо этого, снабжение нереплицирующимися пробиотическими микроорганизмами делает возможным восстановление в горячей воде при сохранении полезных для здоровья качеств.

Питательные смеси настоящего изобретения содержат пробиотические микроорганизмы и/или нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы в количестве, достаточном для по меньшей мере частичного обеспечения благотворного воздействия на здоровье. Подходящее для обеспечения такого действия количество определяется как «терапевтически эффективная доза». Эффективные для этих целей количества зависят от многих известных специалистам в данной области факторов, таких как масса тела и общее состояние здоровья младенца, а также от эффекта, оказываемого матрицей пищевого продукта.

При профилактических применениях питательные смеси согласно изобретению назначаются восприимчивым или иным образом подверженным риску развития определенного заболевания потребителям в количестве, которое является достаточным для по меньшей мере частичного снижения риска развития такого заболевания. Такое количество определяется как представляющее собой «профилактически эффективную дозу». Аналогично, точные количества зависят от ряда таких факторов, как состояние здоровья и масса младенца, а также от эффекта, оказываемого матрицей пищевого продукта.

Специалисты в данной области смогут отрегулировать терапевтически эффективную дозу и/или, соответственно, профилактически эффективную дозу.

В целом питательная смесь настоящего изобретения содержит пробиотические микроорганизмы и/или нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы в терапевтически эффективной дозе и/или в профилактически эффективной дозе.

Как правило, терапевтически эффективная доза и/или профилактически эффективная доза находится в диапазоне около 0,005-1000 мг пробиотических микроорганизмов и/или нереплицирующихся пробиотических микроорганизмов в сутки.

В выражении численных количеств подвергнутые «кратковременной высокотемпературной» обработке нереплицирующиеся микроорганизмы могут присутствовать в питательной смеси в количествах, эквивалентно соответствующих 10⁴-10¹² КОЕ/г сухой композиции. Очевидно, что нереплицирующиеся микроорганизмы не образуют колоний, поэтому этот термин следует понимать как количество нереплицирующихся микроорганизмов, которое получается из от 10⁴ до 10¹² КОЕ/г реплицирующихся бактерий. Они включают микроорганизмы, которые являются инактивированными, мертвыми, нежизнеспособными и/или присутствуют в виде фрагментов, таких как ДНК или цитоплазматические соединения. Другими словами, количество микроорганизмов, которое содержит данная питательная смесь, вне зависимости от того, являются ли они на самом деле живыми, инактивированными, мертвыми или фрагментированными, или же представляют собой смесь любых из этих состояний, выражается в терминах способности данного количества микроорганизмов образовывать колонии (КОЕ), как если бы все эти микроорганизмы являлись бы живыми.

Предпочтительно нереплицирующиеся микроорганизмы присутствует в количестве, эквивалентном величине 10⁴-10⁹ КОЕ/г сухой питательной смеси, еще более предпочтительно в количестве, эквивалентном величине 10⁵-10⁹ КОЕ/г сухой питательной смеси.

Пробиотики могут быть приведены в нереплицирующееся состояние любым известным в данной области способом.

Имеющиеся в настоящее время технологии, пригодные для приведения пробиотика в нереплицирующееся состояние, обычно представлены тепловой обработкой, γ-облучением, ультрафиолетовым светом или применением химических реагентов (формалин, параформальдегид).

Предпочтительной для приведения пробиотика в нереплицирующееся состояние была бы технология, которая является относительно простой в применении в производственных условиях пищевой промышленности.

Большинство представленных в настоящее время на рынке продуктов содержат пробиотики, подвергнутые тепловой обработке в процессе их изготовления. Поэтому было бы удобным иметь возможность обрабатывать пробиотики нагреванием либо вместе с вырабатываемым продуктом, либо по меньшей мере подобным способом, при том, чтобы пробиотики сохраняли или улучшали свои полезные качества или даже приобретали бы новые полезные для потребителя свойства.

Однако инактивация пробиотических микроорганизмов тепловой обработкой по литературным данным, как правило, связана с по меньшей мере частичной потерей активности пробиотика.

Авторы настоящего изобретения в настоящее время неожиданно обнаружили, что перевод пробиотических микроорганизмов в нереплицирующееся состояние, например, тепловой обработкой не приводит к потере полезных для здоровья качеств пробиотика, но, наоборот, может усилить имеющийся благотворный эффект и даже привести к созданию новых благоприятствующих здоровью свойств.

В этой связи одним воплощением настоящего изобретения является питательная смесь, в которой нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы приводятся в нереплицирующееся состояние тепловой обработкой.

Такая тепловая обработка может выполняться при по меньшей мере 71,5°С в течение по меньшей мере 1 секунды.

Может применяться как длительная тепловая обработка, так и кратковременная тепловая обработка.

В промышленных масштабах в настоящее время предпочтительными обычно являются способы краткосрочной тепловой обработки, такие как подобные UHT (ультравысокотемпературная) тепловой обработке. Этот вид тепловой обработки снижает бактериальную нагрузку и сокращает продолжительность обработки, тем самым снижая ухудшение качества питательных веществ.

Авторы настоящего изобретения впервые продемонстрировали, что пробиотические микроорганизмы, подвергнутые тепловой обработке при высоких температурах в течение непродолжительного времени, показывают противовоспалительные иммунные профили независимо от своих исходных свойств. В частности, либо вырабатывается новый противовоспалительный профиль, либо существующий противовоспалительный профиль в результате такой тепловой обработки усиливается.

Поэтому теперь оказывается возможным вырабатывать нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы с противовоспалительными иммунными профилями, применяя специальные параметры тепловой обработки, которые соответствуют типичным применимым при тепловой обработке в промышленности, даже если их живые аналоги не являются штаммами, обладающими противовоспалительной активностью.

Поэтому тепловая обработка может представлять собой, например, высокотемпературную обработку при около 71,5-150°С в течение около 1-120 секунд. Высокотемпературная обработка может являться высокотемпературной/кратковременной (HTST) обработкой или ультравысокотемпературной (UHT) обработкой.

Пробиотические микроорганизмы могут быть подвергнуты высокотемпературной обработке при около 71,5-150°С в течение короткого времени около 1-120 секунд.

Более предпочтительно микроорганизмы могут быть подвергнуты высокотемпературной обработке при около 90-140°С, например при 90-120°С, в течение короткого времени около 1-30 секунд.

Эта высокотемпературная обработка переводит микроорганизмы, по меньшей мере частично, в нереплицирующееся состояние.

Высокотемпературная обработка может проводиться при нормальном атмосферном давлении, но также может быть выполнена под повышенным давлением. Типичные диапазоны давлений составляют от 1 до 50 бар, предпочтительно от 1 до 10 бар, еще более предпочтительно от 2 до 5 бар. Очевидно, что предпочтительным будет, если пробиотики подвергаются тепловой обработке в питательной среде, которая при приложении теплоты является жидкостью или твердым веществом. Поэтому идеальная величина прикладываемого давления будет зависеть от природы композиции, которая обеспечивается микроорганизмами, и от используемой температуры.

Высокотемпературная обработка может выполняться в интервале температур около 71,5-150°С, предпочтительно около 90-120°С, еще более предпочтительно около 120-140°С.

Высокотемпературная обработка может выполняться в течение короткого времени около 1-120 секунд, предпочтительно около 1-30 секунд, еще более предпочтительно около 5-15 секунд.

Данный временной интервал относится ко времени, в течение которого пробиотические микроорганизмы подвергаются воздействию данной температуры. Следует заметить, что в зависимости от природы и количества обеспечиваемой микроорганизмами композиции, а также в зависимости от конструкции применяемого нагревательного устройства, используемая продолжительность нагревания может изменяться.

Однако, как правило, питательная смесь настоящего изобретения и/или микроорганизмы подвергаются высокотемпературной кратковременной (HTST) обработке, мгновенной пастеризации или ультравысокотемпературной обработке.

Обработка является ультравысокотемпературной обработкой или ультратепловой обработкой (обе сокращаются аббревиатурой UHT), включающей по меньшей мере частичную стерилизацию композиции при нагревании ее в течение короткого времени, приблизительно 1-10 секунд, при температуре, превышающей 135°С (275°F), которая является температурой, необходимой для уничтожения в молоке спор бактерий. Например, такая обработка молока с помощью температур, превышающих 135°С, делает возможным снижение величины бактериальной нагрузки при таком обязательном времени пребывания (до 2-5 с), которое позволяет использовать режим непрерывного потока.

Есть два основных типа UHT-систем: прямые и непрямые системы. В прямой системе продукты обрабатываются впрыскиванием пара или нагнетанием пара, тогда как в непрямой системе продукты подвергаются тепловой обработке с помощью пластинчатого теплообменника, трубчатого теплообменника или скребкового теплообменника. В процессе обработки продукта комбинации UHT-систем могут применяться на любом этапе или на нескольких этапах.

Обработка HTST определяется следующим образом (высокая температура/короткое время): способ пастеризации, предназначенный для пятикратного по логарифмической шкале снижения количества жизнеспособных микроорганизмов в молоке с уничтожением 99,9999% их общего содержания. Это считается подходящим для истребления почти всех дрожжей, плесневых грибков и обычных вызывающих порчу бактерий, а также для обеспечения надлежащего уничтожения обычных патогенных теплоустойчивых организмов. При способе HTST молоко на 15-20 секунд нагревается до 71,7°С (161°F).

Мгновенная пастеризация является способом тепловой пастеризации скоропортящихся напитков, таких как фруктовые и овощные соки, пиво и молочные продукты. Это выполняется перед расфасовкой в контейнеры для уничтожения вызывающих порчу микроорганизмов, придания продуктам большей безопасности и увеличения продолжительности их хранения. Жидкость двигается в контролируемом непрерывном потоке и при этом в течение около 15-30 секунд подвергается воздействию температур от 71,5°С (160°F) до 74°С (165°F).

Для целей настоящего изобретения термин «кратковременная высокотемпературная обработка» включает, например, кратковременную обработку при высокой температуре (HTST), UНТ-обработку и мгновенную пастеризацию.

Так как такая тепловая обработка придает нереплицирующимся пробиотикам улучшенный противовоспалительный профиль, питательная смесь настоящего изобретения может быть применена в профилактике или лечении воспалительных нарушений.

Воспалительные нарушения, которые могут быть вылечены или предупреждены с помощью питательной смеси настоящего изобретения, специальным образом не ограничиваются. Например, они могут быть выбраны из группы, состоящей из острых воспалений, таких как сепсис; ожогов; хронических воспалений, таких как воспалительные заболевания кишечника, например, болезнь Крона, неспецифический язвенный колит, паучит; некротизирующего энтероколита; кожных воспалений, таких как УФ- или химически индуцированное воспаление кожи, экзема, реактивная кожа; синдрома раздраженного кишечника; воспалений глаз; аллергии, астмы и их комбинаций.

Если для приведения пробиотических микроорганизмов в нереплицирующееся состояние применяется длительная тепловая обработка, такая тепловая обработка может осуществляться в интервале температур около 70-150°С в течение около 3 минут - 2 часов, предпочтительно в диапазоне 80-140°С от 5 минут до 40 минут.

В то время как существующий уровень техники в основном указывает, что бактерии, приведенные в нереплицирующееся состояние с помощью длительной тепловой обработки, обычно менее эффективны, чем живые клетки в отношении проявления их пробиотических качеств, авторы настоящего изобретения смогли продемонстрировать, что подвергнутые тепловой обработке пробиотики превосходят свои живые аналоги в способности стимулировать иммунную систему.

Настоящее изобретение также относится к питательной смеси, содержащей пробиотические микроорганизмы, приведенные в нереплицирующееся состояние тепловой обработкой в течение по меньшей мере около 3 минут при по меньшей мере около 70°С.

Усиливающее иммунную систему действие нереплицирующихся пробиотиков было подтверждено in vitro иммунным профилем. В применяемой in vitro модели используется цитокиновый профиль человеческих мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) и хорошо принимается в данной области в качестве стандартной модели для исследования иммуномодулирующих соединений (Schultz и др., 2003, Journal of Dairy Research 70, 165-173; Taylor и др., 2006, Clinical and Experimental Allergy, 36, 1227-1235; Kekkonen и др., 2008, World Journal of Gastroenterology, 14, 1192-1203).

Испытания РВМС in vitro применялись несколькими авторами/исследовательскими группами, например, для классификации пробиотиков согласно их иммунным профилям, то есть по их анти- или провоспалительным показателям (Kekkonen и др., 2008, World Journal of Gastroenterology, 14, 1192-1203). Было показано, например, что такие испытания позволяют прогнозировать противовоспалительное действие исследуемых пробиотиков в отношении кишечного колита в моделях на мышах (Foligne В. и др., 2007, World J.Gastroenterol. 13:236-243). Более того, это испытание регулярно применяется в качестве показательного в клинических исследованиях и была продемонстрирована его способность представлять результаты, согласующиеся с клиническими данными (Schultz и др., 2003, Journal of Dairy Research 70, 165-173; Taylor и др., 2006, Clinical and Experimental Allergy, 36, 1227-1235).

За последние десятилетия непрерывно увеличивается распространенность аллергических заболеваний и в настоящее время они рассматриваются WHO в качестве эпидемических. В общих чертах, аллергия, как полагают, является следствием дисбаланса между иммунными ответами Тh1 и Th2, приводящего к сильному сдвигу в сторону продуцирования медиаторов Th2. Поэтому аллергия может быть смягчена, подавлена или предотвращена посредством восстановления надлежащего соответствия между Th1 и Th2 компонентами иммунной системы. Это подразумевает необходимость в снижении Th2-ответов или усилении, по меньшей мере временном, ответа Th1. Последнее было бы показателем укрепления иммунной системы, часто сопровождаемого высокими уровнями, например, IFN-γ, TNF-α и IL-12 (World Journal of Gastroenterology, 14, 1192-1203; Viljanen M. и др., 2005, Allergy, 60, 494-500).

Питательная смесь настоящего изобретения позволяет поэтому вылечивать или предупреждать нарушения, связанные с повреждениями иммунной защиты.

Соответственно, нарушения, связанные с повреждениями иммунной защиты, которые могут быть вылечены или предупреждены с помощью питательной смеси настоящего изобретения, специальным образом не ограничиваются.

Например, они могут выбираться из группы, состоящей из инфекций, в частности бактериальных, вирусных, грибковых и/или паразитарных инфекций; фагоцитарного дефицита; угнетения иммунитета слабой или тяжелой степени, вызванного стрессом или действием иммунодепрессивных лекарственных препаратов, химиотерапии или лучевой терапии; натуральных состояний сниженной иммунокомпетентности иммунной системы, например, у новорожденных; аллергий и их комбинаций.

Описанная в настоящем изобретении питательная смесь позволяет также усиливать реакцию младенца на вакцины, в частности на пероральные вакцины.

Эффективными могут быть любые количества нереплицирующихся микроорганизмов. Однако предпочтительно, чтобы в целом по меньшей мере 90%, предпочтительно по меньшей мере 95%, более предпочтительно по меньшей мере 98%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 99%, идеально по меньшей мере 99,9%, наиболее идеально все пробиотики являлись бы нереплицирующимися.

В одном воплощении настоящего изобретения все микроорганизмы являются нереплицирующимися.

Соответственно, в питательной смеси настоящего изобретения по меньшей мере 90%, предпочтительно по меньшей мере 95%, более предпочтительно по меньшей мере 98%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 99%, идеально по меньшей мере 99,9%, наиболее идеально все пробиотики могут быть нереплицирующимися.

Для целей настоящего изобретения могут применяться любые пробиотические микроорганизмы.

Например, пробиотические микроорганизмы могут выбираться из группы, состоящей из бифидобактерий, молочнокислых бактерий, пропионовокислых бактерий или их комбинаций, например, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium adolescentis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactococcus lactis, Streptococcus thermophilus, Lactococcus lactis, Lactococcus diacetylactis, Lactococcus cremoris, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus delbrueckii, Escherichia coli и/или их смесей.

Питательная смесь в соответствии с настоящим изобретением может, например, содержать пробиотические микроорганизмы, выбранные из группы, состоящей из Bifidobacterium longum NCC 3001, Bifidobacterium longum NCC 2705, Bifidobacterium breve NCC 2950, Bifidobacterium lactis NCC 2818, Lactobacillus johnsonii La1, Lactobacillus paracasei NCC 2461, Lactobacillus rhamnosus NCC 4007, Lactobacillus reuteri DSM17938, Lactobacillus reuteri ATCC55730, Streptococcus thermophilus NCC 2019, Streptococcus thermophilus NCC 2059, Lactobacillus casei NCC 4006, Lactobacillus acidophilus NCC 3009, Lactobacillus casei ACA-DC 6002 (NCC 1825), Escherichia coli Nissle, Lactobacillus bulgaricus NCC 15, Lactococcus lactis NCC 2287 или их комбинаций.

Все эти штаммы были или депонированы согласно Будапештскому договору, и/или являются предлагаемыми в продаже.

Депонированными согласно Будапештскому договору являются следующие штаммы:

Bifidobacterium longum NCC 3001:	АТСС ВАА-999
Bifidobacterium longum NCC 2705:	CNCM 1-2618
Bifidobacterium breve NCC 2950	CNCM 1-3865
Bifidobacterium lactis NCC 2818:	CNCM 1-3446
Lactobacillus paracasei NCC 2461:	CNCM 1-2116
Lactobacillus rhamnosus NCC 4007:	CGMCC 1.3724
Streptococcus themophilus NCC 2019:	CNCM 1-1422
Streptococcus themophilus NCC 2059:	CNCM 1-4153
Lactococcus lactis NCC 2287:	CNCM 1-4154
Lactobacillus casei NCC 4006:	CNCM 1-1518
Lactobacillus casei NCC 1825:	ACA-DC 6002
Lactobacillus acidophilus NCC 3009:	АТСС 700396
Lactobacillus bulgaricus NCC 15:	CNCM 1-1198
Lactobacillus johnsonii La1	CNCM 1-1225
Lactobacillus reuteri DSM17938	DSM17938
Lactobacillus reuteri ATCC55730	ATCC55730
Escherichia coli Nissle 1917:	DSM 6601.

Специалистам в данной области ясно, что они могут свободно объединять все описанные здесь признаки настоящего изобретения без отступления от его раскрываемого здесь объема.

Дальнейшие признаки и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из следующих далее Фигур и Примеров.

Фигуры 1А и В показывают усиление противовоспалительных иммунных профилей пробиотиков, подвергнутых «кратковременной высокотемпературной обработке».

Фигура 2 показывает штаммы пробиотика, не обладающего противовоспалительными качествами, которые становились противовоспалительными, то есть демонстрирующего выраженный противовоспалительный профиль in vitro после кратковременной обработки высокими температурами.

Фигуры 3А и 3В показывают штаммы пробиотиков, применяемых в коммерчески доступных продуктах, которые демонстрируют усиленные или новоприобретенные противовоспалительные иммунные профили in vitro после кратковременной обработки высокими температурами.

Фигуры 4А и 4В показывают штаммы молочной закваски (то есть заквасочные штаммы Lc1), которые демонстрируют усиленные или новоприобретенные противовоспалительные иммунные профили in vitro после кратковременной обработки высокими температурами.

Фигура 5 показывает штамм пробиотика, не обладающего противовоспалительными качествами, который демонстрирует противовоспалительный иммунный профиль in vitro после HTST-обработки.

Фигура 6. Метод главных компонент на данных РВМС (IL-12p40, IFN-γ, TNF-α, IL-10), обеспечиваемых пробиотическими и молочными заквасочными штаммами в их живом и подвергнутом тепловой обработке (140°С в течение 15 секунд) состоянии. Каждая точка представляет один штамм, живой либо подвергнутый тепловой обработке и идентифицированный его NCC-номером или названием.

Фигура 7 показывает отношения IL-12p40/IL-10 живых и подвергнутых тепловой обработке (85°С, 20 мин) штаммов. В целом тепловая обработка в течение 20 минут при 85°С приводит к увеличению величин отношения IL-12p40/IL-10 по сравнению с кратковременной высокотемпературной обработкой настоящего изобретения (Фигуры 1, 2, 3, 4 и 5).

Фигура 8 показывает повышение in vitro секреции цитокина из человеческих РВМС, стимулируемой подвергнутыми тепловой обработке бактериями.

Фигура 9 показывает процентную интенсивность диареи, наблюдаемой у OVA-сенсибилизированных мышей, подвергнутых провокации солевым раствором (отрицательный контроль), OVA-сенсибилизированных мышей, подвергнутых провокации OVA (положительный контроль) и OVA-сенсибилизированных мышей, подвергнутых провокации OVA и терапии подвергнутыми тепловой обработке или живыми Bifidobacterium breve NCC2950. Результаты отображены в виде процента от интенсивности диареи (среднее ±SEM, рассчитанное по 4 независимым экспериментам) со 100% интенсивностью диареи, соответствующей симптомам, развившимся в группе с положительным контролем (сенсибилизация и провокация аллергеном).

Пример 1

Методика

Бактериальные препараты.

Польза, обеспечиваемая живыми пробиотиками иммунной системе организма, как правило, рассматривается как штаммспецифичная. Было показано, что пробиотики, приводящие к высоким уровням IL-10 и/или вызывающие снижение уровней провоспалительных цитокинов in vitro (испытание РВМС) являются действенными противовоспалительными штаммами in vivo (Foligne В. и др., 2007, World J.Gastroenterol. 13:236-243).

Для исследования противовоспалительных свойств подвергнутых тепловой обработке пробиотиков было применено несколько пробиотических штаммов. Это были Bifidobacterium longum NCC 3001, Bifidobacterium longum NCC 2705, Bifidobacterium breve NCC 2950, Bifidobacterium lactis NCC 2818, Lactobacillus paracasei NCC 2461, Lactobacillus rhamnosus NCC 4007, Lactobacillus casei NCC 4006, Lactobacillus acidophilus NCC 3009, Lactobacillus casei ACA-DC 6002 (NCC 1825) и Escherichia coli Nissle. Были также исследованы несколько штаммов заквасочных культур, включая некоторые штаммы, применяемые промышленно для получения ферментированных Lc1 продуктов Nestlé: Streptococcus thermophilus NCC 2019, Streptococcus thermophilus NCC 2059, Lactobacillus bulgaricus NCC 15 и Lactococcus lactis NCC 2287.

Бактериальные клетки культивировались в условиях, оптимизированных для каждого штамма, в 5-15-л биореакторах. Пригодными являются любые стандартные среды для выращивания бактериальных культур. Такие среды известны специалистам в данной области. После доведения рН до 5,5 в непрерывном режиме был добавлен 30% основной раствор (либо NaOH, либо Ca(OH)₂). Когда это было необходимо, создавались анаэробные условия заполнением свободного пространства газообразным СО₂. Е.coli выращивалась при стандар