Ингибирование метастазирования опухоли при помощи антагонистов bv8 или g-csf

Ингибирование метастазирования опухоли при помощи антагонистов bv8 или g-csf

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Родственные заявки

Данная заявка, которая не является предварительной заявкой на патент, была подана согласно разделу 37 Свода федеральных правил 1.53(b)(1) и притязает согласно разделу 35 Кодекса законов США на приоритет предварительной заявки на патент № 61/230571, поданной 31 июля 2009 г., и предварительной заявки на патент № 61/350558, поданной 2 июня 2010 г., которые включены в настоящее описание изобретения в качестве ссылки.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение главным образом относится к композициям и способам, которые пригодны для лечения состояний и заболеваний, ассоциированных с развитием кровеносных сосудов и метастазированием опухолей. Настоящее изобретение, в частности, относится к профилактике или лечению метастазирования опухоли при помощи антагонистов G-CSF и/или антагонистов Bv8.

Уровень техники

Хорошо известно, что развитие кровеносных сосудов (ангиогенез) играет важную роль в прогрессировании и метастазировании опухоли, поэтому ингибирование развития кровеносных сосудов является клинически обоснованной стратегией лечения рака (Folkman, Nat. Med. 1, 27-31 (1995); Ferrara and Kerbel, Nature 438, 967-974 (2005); Carmeliet, Nat. Med. 9, 653-660 (2003)).

На протяжении последних нескольких лет объектом всестороннего исследования было воздействие разных типов клеток, выделяемых из костного мозга (ВМ), на развитие кровеносных сосудов опухоли (Coussens and Werb, Nature 420, 860-867 (2002); Rafii et al., Nat. Rev. Cancer 2:826-35 (2002); De Palma et al., Trends Immunol. 28:519-524 (2007); Shojaei et al., Trends Cell Biol. 18:372-378, 2008)). Из всех исследованных типов клеток в опухолях и в периферической крови (РВ) имеющих опухоли животных часто повышено содержание CD11b⁺Grl⁺ клеток, при этом установлено, что указанные клетки стимулируют развитие кровеносных сосудов опухоли (Yang et al., Cancer Cell 6, 409-421 (2004)) и подавляют иммунные функции, попадая, таким образом, под определение супрессорных клеток, выделенных из миелоидных клеток (MDSC) (Bronte et al., Blood 96:3838-3846 (2000)). Однако механизмы, инициирующие периферическую активацию, хоминг опухоли и приобретение CD11b⁺Grl⁺ клетками проангиогенных свойств, требуют дальнейшего исследования.

CD11b⁺Grl⁺ клетки продуцируют несколько ангиогенных факторов, в том числе Bv8, секретируемый белок, который ранее был охарактеризован как митоген для специфичных эндотелиальных клеток, как фактор роста для предшественников гемопоэтических клеток (LeCouter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100, 2685-2690 (2003); LeCouter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101, 16813-16818 (2004)), и как нейромодулятор (Cheng et al., Nature 417, 405-410 (2002); Matsumoto et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103; 4140-4145 (2006)). Исследование нескольких ксенотрансплантатов, а также трансгенной модели рака (RIP-Tag) позволило предположить, что Bv8 стимулирует ангиогенез опухоли вследствие повышенной периферической активации миелоидных клеток и локальной стимуляции развития кровеносных сосудов (Shojaei et al., Nature 450:825-831 (2007); Shojaei et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105:2640-2645 (2008)). В научной литературе было отмечено, что колониестимулирующий фактор гранулоцитов (G-CSF) является сильным индуктором экспрессии Bv8 как in vitro, так и in vivo (Shojaei et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 106(16):6742-7 (2009)). В физиологическом отношении G-CSF играет важную роль в активации гемопоэтических стволовых клеток, клеток-предшественников и зрелых клеток, в частности, нейтрофилов, в кровотоке (Rapoport et al., Blood Rev. 6:43-57 (1992); Lieschke et al., Blood 84:1737-1746 (1994)). G-CSF также необходим для дифференцировки клеток-предшественников в клетки линии гранулоцитов, такие как нейтрофилы, эозинофилы и базофилы. Хотя в нескольких научных отчетах было высказано предположение, что введение G-CSF усиливает развитие кровеносных сосудов и рост опухоли (Natori et al., Biochem Biophys. Res. Commun. 297:1058-1061 (2002); Okazaki, T. et al., Int. Immunol. 18, 1-9 (2006)), все еще нет достоверных свидетельств участия данного фактора в онкогенезе.

Метастазирование представляет собой сложный ряд стадий, на протяжении которых раковые клетки покидают место образования первичной опухоли и мигрируют в другие части тела с кровотоком или по лимфатической системе. Метастазирующие опухоли весьма характерны на поздних стадиях рака. Метастазирование является основной причиной смерти от солидных опухолей. К сожалению, применяемые в настоящее время методы лечения редко позволяют вылечить метастазирующий рак.

Таким образом, необходимо исследовать и установить, каким образом можно эффективно ингибировать, предотвращать и лечить развитие кровеносных сосудов и метастазирование опухоли. Предметом настоящего изобретения являются вышеуказанные и другие цели, которые станут очевидными из приведенного ниже описания изобретения.

Сущность изобретения

В основе настоящего изобретения лежит, по меньшей мере частично, открытие того, что G-CSF и Bv8 участвуют в развитии кровеносных сосудов и метастазировании опухоли.

Одним объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования или уменьшения метастазирования опухоли, которые включают введение субъекту эффективного количества антагониста G-CSF. В определенных вариантах осуществления изобретения указанный способ дополнительно включает введение субъекту эффективного количества антагониста Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения антагонист G-CSF ингибирует или уменьшает распространение первичной опухоли в предметастатический орган субъекта. В определенных вариантах осуществления изобретения уменьшение метастазирования опухоли включает уменьшение размера и числа легочных метастазов. В определенных вариантах осуществления изобретения ингибирование или уменьшение метастазирования опухоли включает снижение уровней экспрессии одной или нескольких следующих молекул: G-CSF, Bv8, PKR1, MMP-9, S100A8 или S100A9. В определенных вариантах осуществления изобретения ингибирование или уменьшение метастазирования опухоли включает снижение уровней экспрессии G-CSF и PKR1. В определенных вариантах осуществления изобретения ингибирование или уменьшение метастазирования опухоли включает снижение уровней экспрессии ММР-9, S100A8 и S100A9. В определенных вариантах осуществления изобретения ингибирование или уменьшение метастазирования опухоли включает снижение уровней экспрессии Bv8, MMP-9, S100A8 и S100A9. В определенных вариантах осуществления изобретения ингибирование или уменьшение метастазирования опухоли включает снижение уровней экспрессии G-CSF, Bv8 и PKR1. В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии являются уровнями экспрессии мРНК. В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии являются уровнями экспрессии белка. В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии одной или нескольких указанных молекул снижают в предметастатическом органе субъекта. В определенных вариантах осуществления изобретения предметастатическим органом является легкое. В опеределенных вариантах осуществления изобретения предметастатическим органом является печень.

В определенных вариантах осуществления изобретения указанные способы дополнительно включают введение субъекту эффективного количества антагониста VEGF. В определенных вариантах осуществления изобретения субъекта предварительно подвергают лечению антагонистом VEGF. В определенных вариантах осуществления изобретения антагонист VEGF является антителом против VEGF или его фрагментом. В определенных вариантах осуществления изобретения антитело против VEGF является бевацизумабом, его фрагментом или вариантом. В определенных вариантах осуществления изобретения указанные способы дополнительно включают введение субъекту эффективного количества химиотерапевтического средства.

Одним объектом настоящего изобретения являются способы снижения уровня экспрессии G-CSF, Bv8, PKR1, MMP-9, S100A8 или S100A9 в предметастатическом органе, которые включают введение субъекту эффективного количества антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8. Другим объектом изобретения являются способы снижения уровня экспрессии одной или нескольких следующих молекул: G-CSF, Bv8, PKR1, MMP-9, S100A8 или S100A9, в предметастатическом органе, которые включают введение субъекту эффективного количества антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии PKR1, MMP-9, S100A8 и/или S100A9 снижают в предметастатическом органе субъекта при введении указанному субъекту антагониста G-CSF. В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии PKR1, MMP-9, S100A8 и/или S100A9 снижают в предметастатическом органе субъекта при введении указанному субъекту антагониста Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии Bv8, MMP-9, S100A8 и/или S100A9 снижают в предметастатическом органе субъекта при введении указанному субъекту антагониста G-CSF. В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии Bv8, MMP-9, S100A8 и/или S100A9 снижают в предметастатическом органе субъекта при введении указанному субъекту антагониста Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии MMP-9, A100A8 и S100A9 снижают в предметастатическом органе субъекта при введении указанному субъекту антагониста G-CSF. В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии MMP-9, S100A8 и S100A9 снижают в предметастатическом органе субъекта при введении указанному субъекту антагониста Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии G-CSF и PKR1 снижают в предметастатическом органе субъекта при введении указанному субъекту антагониста G-CSF. В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии G-CSF, PKR1 и ММР-9 снижают в предметастатическом органе субъекта при введении указанному субъекту антагониста G-CSF.

Одним объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования миграции метастазирующих опухолевых клеток в предметастатический орган, которые включают введение субъекту эффективного количества антагониста G-CSF или антагониста Bv8. Другим объектом изобретения являются способы ингибирования миграции нейтрофилов в предметастатический орган, которые включают введение субъекту эффективного количества антагониста G-CSF или антагониста Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения указанные способы включают введение субъекту эффективного количества антагониста G-CSF и эффективного количества антагониста Bv8.

В определенных вариантах осуществления изобретения предметастатическим органом субъекта является легкое, печень, головной мозг, кость или лимфатический узел. В определенных вариантах осуществления изобретения предметастатическим органом субъекта является легкое или печень. В определенных вариантах осуществления изобретения предметастатическим органом субъекта является легкое.

В определенных вариантах осуществления изобретения антагонист G-CSF является антителом против G-CSF. В определенных вариантах осуществления изобретения антитело против G-CSF является моноклональным антителом. В определенных вариантах осуществления изобретения антитело против G-CSF является гуманизированным антителом. В определенных вариантах осуществления изобретения антитело против G-CSF является человеческим антителом.

В определенных вариантах осуществления изобретения антагонист Bv8 является антителом против Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения антагонист Bv8 является антителом против PKR1. В определенных вариантах осуществления изобретения антитело против Bv8 или антитело против PKR1 является моноклональным антителом. В определенных вариантах осуществления изобретения антитело против Bv8 или антитело против PKR1 является гуманизированным антителом. В определенных вариантах осуществления изобретения антитело против Bv8 или антитело против PKR1 является человеческим антителом.

Одним объектом настоящего изобретения являются способы прогнозирования вероятности эффективного реагирования опухоли субъекта на лечение антагонистом G-CSF и/или антагонистом Bv8, которые включают определение наличия в образце, полученном у субъекта, клетки, экспрессирующей Bv8, PKR1 и/или G-CSF на уровне выше уровня экспрессии в эталонном образце, при этом обнаружение указанной клетки показывает, что субъект имеет опухоль, которая будет эффективно реагировать на лечение указанным антагонистом G-CSF и/или антагонистом Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения обнаружение клетки, экспрессирующей Bv8, PKR1 и G-CSF на уровнях выше уровней экспрессии в эталонном образце, показывает, что субъект имеет опухолевые клетки, которые будут эффективно реагировать на лечение указанным антагонистом G-CSF и/или антагонистом Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения измеряют уровни экспрессии мРНК в Bv8, PKR1 и/или G-CSF. В определенных вариантах осуществления изобретения измеряют уровни экспрессии белка в Bv8, PKR1 и/или G-CSF. В определенных вариантах осуществления изобретения опухоль является метастазирующей опухолью.

Другим объектом настоящего изобретения являются способы прогнозирования вероятности эффективного реагирования опухоли субъекта на лечение антагонистом G-CSF и/или антагонистом Bv8, которые включают определение наличия в образце, полученном у субъекта, функционального человеческого аналога CD11b+Gr1+ клетки, экспрессирующей Bv8 на уровне выше уровня экспрессии в эталонном образце, при этом обнаружение указанного функционального человеческого аналога CD11b+Gr1+ клетки показывает, что субъект имеет опухоль, которая будет эффективно реагировать на лечение указанным антагонистом G-CSF и/или антагонистом Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения измеряют уровень экспрессии мРНК в Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения измеряют уровень экспрессии белка в Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются незрелыми миелоидными клетками человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются супрессорными клетками, выделенными из миелоидных клеток человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются предшественниками нейтрофилов, моноцитов или макрофагов человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются нейтрофилами, моноцитами или макрофагами человека. В определенных вариантах осуществления изобретения опухоль является метастазирующей опухолью.

Еще одним объектом настоящего изобретения являются способы прогнозирования вероятности эффективного реагирования опухоли субъекта на лечение антагонистом G-CSF и/или антагонистом Bv8, которые включают определение наличия в образце, полученном у субъекта, более высокого числа или большей частоты встречаемости функционального человеческого аналога CD11b+Gr1+ клеток по сравнению с эталонным образцом, при этом более высокое число или большая частота встречаемости функционального человеческого аналога CD11b+Gr1+ клеток показывает, что субъект имеет опухоль, которая будет эффективно реагировать на лечение указанным антагонистом G-CSF и/или антагонистом Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются незрелыми миелоидными клетками человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются супрессорными клетками, выделенными из миелоидных клеток человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются предшественниками нейтрофилов, моноцитов или макрофагов человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются нейтрофилами, моноцитами или макрофагами. В определенных вариантах осуществления изобретения опухоль является метастазирующей опухолью.

Одним объектом настоящего изобретения являются способы лечения опухоли у субъекта антагонистом G-CSF и/или антагонистом Bv8, которые включают (а) определение наличия в образце, полученном у субъекта, клетки, экспрессирующей Bv8, PKR1 и/или G-CSF на уровне выше уровня экспрессии в эталонном образце, и (b) введение субъекту эффективного количества указанного антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8, если данный образец включает клетку, экспрессирующую Bv8, PKR1 и/или G-CSF на уровне выше уровня экспрессии в эталонном образце. В определенных вариантах осуществления изобретения указанная клетка является функциональным человеческим аналогом CD11b+Gr1+ клетки. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются незрелыми миелоидными клетками человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются супрессорными клетками, выделенными из миелоидных клеток человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются предшественниками нейрофилов, моноцитов или макрофагов человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются нейтрофилами, моноцитами или макрофагами. В определенных вариантах осуществления изобретения указанная клетка является метастазирующей опухолевой клеткой. В определенных вариантах осуществления изобретения указанные клетки выделяют из предметастатического органа субъекта. В некоторых вариантах осуществления изобретения субъекту вводят эффективное количество указанного антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8, если образец включает клетку, экспрессирующую Bv8, PKR1 и G-CSF на уровнях выше уровней экспрессии в эталонном образце.

В определенных вариантах осуществления изобретения измеряют уровни экспрессии мРНК в Bv8, PKR1 и/или G-CSF. В определенных вариантах осуществления изобретения измеряют уровни экспрессии белка в Bv8, PKR1 и/или G-CSF.

Другим объектом настоящего изобретения являются способы лечения опухоли у субъекта антагонистом G-CSF и/или антагонистом Bv8, которые включают (а) определение наличия в образце, полученном у субъекта, более высокого числа или большей частоты встречаемости функционального человеческого аналога CD11b+Gr1+ клеток по сравнению с эталонным образцом, и (b) введение субъекту эффективного количества указанного антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8, если данный образец характеризуется более высоким числом или большей частотой встречаемости функционального человеческого аналога CD11b+Gr1+ клеток по сравнению с эталонным образцом. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются незрелыми миелоидными клетками человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются супрессорными клетками, выделенными из миелоидных клеток человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются предшественниками нейтрофилов, моноцитов или макрофагов человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются нейтрофилами, моноцитами или макрофагами. В определенных вариантах осуществления изобретения опухоль является метастазирующей опухолью.

Другим объектом настоящего изобретения являются способы лечения опухоли, включающие (а) введение имеющему опухоль субъекту эффективного количества антагониста G-CSF, и (b) контролирование эффективности указанного лечения путем определения числа или частоты встречаемости функционального человеческого аналога CD11b+Gr1+ клеток в образце, полученном у данного субъекта после лечения, по сравнению с числом или частотой встречаемости функционального человеческого аналога CD11b+Gr1+ клеток в образце, полученном у субъекта до лечения, при этом меньшее число или более низкая частота встречаемости функционального человеческого аналога CD11b+Gr1+ клеток в образце, полученном у субъекта после лечения, свидетельствует об эффективности лечения. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются незрелыми миелоидными клетками человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются супрессорными клетками, выделенными из миелоидных клеток человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются предшественниками нейтрофилов, моноцитов или макрофагов человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются нейтрофилами, моноцитами или макрофагами. В определенных вариантах осуществления изобретения опухоль является метастазирующей опухолью.

Другим объектом настоящего изобретения являются способы лечения опухоли, включающие (а) введение имеющему опухоль субъекту эффективного количества антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8, и (b) контролирование эффективности указанного лечения путем определения уровня экспрессии Bv8, MMP-9, S100A8 или S100A9 в образце, полученном у субъекта после лечения, по сравнению с уровнем экспрессии Bv8, MMP-9, S100A8 или S100A9 в образце, полученном у субъекта до лечения, при этом более низкий уровень экспрессии Bv8, MMP-9, S100A8 или S100A9 в образце, полученном у субъекта после лечения, свидетельствует об эффективности лечения.

В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии по меньшей мере двух из четырех следующих молекул: Bv8, MMP-9, S100A8 и S100A9, являются более низкими в образце, полученном у субъекта после лечения, по сравнению с образцом, полученным у данного субъекта до лечения. В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии по меньшей мере трех из четырех следующих молекул: Bv8, MMP-9, S100A8 и S100A9, являются более низкими в образце, полученном у субъекта после лечения, по сравнению с образцом, полученным у данного субъекта до лечения. В определенных вариантах осуществления изобретения измеряют уровни экспрессии мРНК в Bv8, MMP-9, S100A8 и/или S100A9. В определенных вариантах осуществления изобретения измеряют уровни экспрессии белка в Bv8, MMP-9, S100A8 или S100A9. В определенных вариантах осуществления изобретения опухоль является метастазирующей опухолью.

В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии мРНК в Bv8, MMP-9, S100A8 и/или S100A9 повышены в предметастатическом легком и/или метастатическом легком. В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии белка в Bv8, MMP-9, S100A8 и/или S100A9 повышены в предметастатическом легком и/или метастатическом легком. В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии мРНК в Bv8, MMP-9, S100A8 и/или S100A9 повышены в предметастатической ткани или опухолевой ткани. В определенных вариантах осуществления изобретения уровни экспрессии белка в Bv8, MMP-9, S100A8 и/или S100A9 повышены в предметастатической ткани или опухолевой ткани. В определенных вариантах осуществления изобретения лечение антителом против Bv8 является эффективным, если уровень экспрессии мРНК в Bv8 и/или ММР-9 снижается после лечения антителом против Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения лечение антителом Bv8 снижает уровень экспрессии мРНК в Bv8 и/или ММР-9 в предметастатических легких. В определенных вариантах осуществления изобретения лечение антителом против Bv8 является эффективным, если уровень экспрессии белка в Bv8 и/или ММР-9 снижается после лечения антителом против Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения лечение антителом против Bv8 снижает уровень экспрессии белка в Bv8 и/или ММР-9 в предметастатических легких. В определенных вариантах осуществления изобретения лечение антителом против G-CSF является эффективным, если уровень экспрессии мРНК в Bv8 и/или ММР-9 снижается после лечения антителом против G-CSF. В определенных вариантах осуществления изобретения лечение антителом против G-CSF снижает уровень экспрессии мРНК в Bv8 и/или ММР-9 в предметастатических легких и/или метастатических легких. В определенных вариантах осуществления изобретения лечение антителом против G-CSF является эффективным, если уровень экспрессии белка в Bv8 и/или ММР-9 снижается после лечения антителом против G-CSF. В определенных вариантах осуществления изобретения лечение антителом против G-CSF снижает уровень экспрессии белка в Bv8 и/или ММР-9 в предметастатических легких и/или метастатических легких. В определенных вариантах осуществления изобретения лечение антителом против PKR1 является эффективным, если уровень экспрессии мРНК в Bv8 и/или ММР-9 снижается после лечения антителом против PKR1. В определенных вариантах осуществления изобретения лечение антителом против PKR1 снижает уровень экспрессии мРНК в Bv8 и/или ММР-9 в предметастатических легких и/или метастатических легких. В определенных вариантах осуществления изобретения лечение антителом против PKR1 является эффективным, если уровень экспрессии белка в Bv8 и/или ММР-9 снижается после лечения антителом против PKR1. В определенных вариантах осуществления изобретения лечение антителом против PKR1 снижает уровень экспрессии белка в Bv8 и/или ММР-9 в предметастатических легких и/или метастатических легких.

В определенных вариантах осуществления изобретения опухоль является метастазирующей опухолью. В определенных вариантах осуществления изобретения лечение антагонистами G-CSF и/или антагонистами Bv8 предотвращает метастазирование метастазирующей опухоли в предметастатические ткани или предметастатические органы тела. В определенных вариантах осуществления изобретения образец, полученный у субъекта, представляет собой ткань, плазму, сыворотку или любые их комбинации. В определенных вариантах осуществления изобретения образцы, используемые в указанных способах, получают из предметастатического или метастатического органа. В определенных вариантах осуществления изобретения предметастатическим или метастатическим органом является легкое, печень, головной мозг, кость, лимфатический узел или яичник. В определенных вариантах осуществления изобретения образцы получают из предметастатической или метастатической ткани. В определенных вариантах осуществления изобретения предметастатическую или метастатическую ткань получают из легкого, печени, головного мозга, яичника, лимфатического узла, кости или костного мозга субъекта. В определенных вариантах осуществления изобретения указанный образец является образцом ткани, полученным из предметастатического органа. В определенных вариантах осуществления изобретения образец, полученный из предметастатического органа или предметастатической ткани, не содержит опухолевых клеток. В определенных вариантах осуществления изобретения образец представляет собой ткань первичной опухоли.

В определенных вариантах осуществления изобретения уровень экспрессии мРНК гена измеряют методом количественной ПЦР с обратной транскрипцией (qRT-PCR) или количественной ПЦР (qPCR). В определенных вариантах осуществления изобретения уровень экспрессии мРНК измеряют при помощи микроматрицы. В определенных вариантах осуществления изобретения уровень экспрессии мРНК измеряют методом гибридизации in situ (ISH). В определенных вариантах осуществления изобретения уровень экспрессии белка в гене измеряют методом иммуногистохимии (IHC).

Другим объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования мобилизации функционального человеческого аналога CD11b+Gr1+ клеток из костного мозга в предметастатический или метастатический орган, которые включают введение субъекту эффективного количества антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются незрелыми миелоидными клетками человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются супрессорными клетками, выделенными из миелоидных клеток человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются предшественниками нейтрофилов, моноцитов или макрофагов человека. В определенных вариантах осуществления изобретения человеческие клетки-аналоги являются нейтрофилами, моноцитами или макрофагами человека.

Одним объектом настоящего изобретения являются способы лечения у субъекта рецидивирующей опухоли или опухоли, устойчивой к противораковой терапии, которые включают введение субъекту эффективного количества антагониста G-CSF. В определенных вариантах осуществления изобретения противораковая терапия включает использование антагониста VEGF. В определенных вариантах осуществления изобретения антагонист VEGF является антителом против VEGF или его фрагментом. В определенных вариантах осуществления изобретения антитело против VEGF является бевацизумабом, его фрагментом или вариантом.

Одним объектом настоящего изобретения являются способы лечения доброкачественной, предраковой или неметастазирующей опухоли у субъекта, которые включают введение указанному субъекту эффективного количества антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения введение антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8 предотвращает развитие доброкачественной, предраковой или неметастазирующей опухоли в инвазивный или метастазирующий рак. В определенных вариантах осуществления изобретения доброкачественная, предраковая или неметастазирующая опухоль является опухолью в стадии 0, стадии I или стадии II. В определенных вариантах осуществления изобретения введение антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8 предотвращает прогрессирование доброкачественной, предраковой или неметастазирующей опухоли в рак стадии III или стадии IV. В определенных вариантах осуществления изобретения введение антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8 уменьшает объем опухоли.

Другим объектом настоящего изобретения являются способы лечения субъекта с операбельным раком, которые включают введение указанному субъекту эффективного количества антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8 и выполнение хирургической операции, в результате которой удаляют раковую опухоль. В определенных вариантах осуществления изобретения антагонист G-CSF и/или антагонист Bv8 вводят субъекту до выполнения хирургической операции. В определенных вариантах осуществления изобретения указанные способы дополнительно включают стадию введения субъекту эффективного количества антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8 после хирургической операции для предотвращения рецидива рака. В определенных вариантах осуществления изобретения введение антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8 предотвращает пролиферацию микрометастазов.

Другим объектом настоящего изобретения являются способы лечения субъекта с операбельным раком при помощи вспомогательной противораковой химиотерапии, которые включают введение указанному субъекту антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8.

Другим объектом настоящего изобретения являются способы предотвращения рецидива рака у субъекта, которые включают введение указанному субъекту антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8, что позволяет предотвратить рецидив рака у данного субъекта. Другим объектом настоящего изобретения являются способы уменьшения вероятности рецидива рака у субъекта, которые включают введение указанному субъекту антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8, что позволяет уменьшить вероятность рецидива рака у данного субъекта. В определенных вариантах осуществления изобретения введение антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8 предотвращает или уменьшает вероятность рецидива клинически обнаруживаемой опухоли или ее метастазов. В определенных вариантах осуществления изобретения субъект был подвергнут радикальной хирургической операции до введения антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8.

Другим объектом настоящего изобретения являются способы предотвращения повторного роста опухоли у субъекта, которые включают стадии удаления опухоли и последующего введения субъекту антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8. Другим объектом настоящего изобретения являются способы предотвращения рецидива рака у субъекта, имеющего опухоль, которые включают удаление опухоли и последующее введение указанному субъекту антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8. В определенных вариантах осуществления изобретения указанные способы дополнительно включают период времени между удалением опухоли и введением антагониста G-CSF и/или антагониста Bv8, который является достаточным для полного заживления послеоперационного рубца или уменьшения риска расхождения краев раны.

В определенных вариантах осуществления изобретения вводимый антагонист G-CSF является антителом против G-CSF или его фрагментом. В определенных вариантах осуществления изобретения вводимый антагонист Bv8 является антителом против Bv8 или его фрагментом. В определенных вариантах осуществления изобретения вводимый антагонист Bv8 является антителом против PKR1 или его фрагментом.

В определенных вариантах осуществления изобретения антагонисты и антитела по настоящему изобретению вводят последовательно. В определенных вариантах осуществления изобретения антагонисты и антитела по настоящему изобретению вводят одновременно.

Одним объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования метастазирования опухоли в легкое, печень, головной мозг, яичник, лимфатический узел и/или кость, которые включают введение субъекту эффективного количества антитела против G-CSF и/или антитела против Bv8. Другим объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования метастазирования опухоли в легкое, которые включают введение субъекту эффективного количества антитела против G-CSF, которое ингибирует метастазирование опухоли в предметастатическое легкое. Другим объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования метастазирования опухоли в легкое, которые включают введение субъекту эффективного количества антитела против Bv8, которое ингибирует метастазирование опухоли в предметастатическое легкое. Другим объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования метастазирования опухоли в легкое, которые включают введение субъекту эффективного количества антитела против PKR1, которое ингибирует метастазирование опухоли в предметастатическое легкое. Другим объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования метастазирования опухоли в легкое, которые включают введение субъекту эффективного количества антитела против G-CSF и эффективного количества антитела против Bv8. Другим объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования метастазирования опухоли в легкое, которые включают введение субъекту эффективного количества антитела против G-CSF и эффективного количества антитела против PKR1. Другим объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования метастазирования опухоли в легкое, которые включают введение субъекту эффективного количества антитела против Bv8 и эффективного количества антитела против PKR1.

Другим объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования метастазирования опухоли в печень, которые включают введение субъекту эффективного количества антитела против G-CSF, которое ингибирует метастазирование опухоли в предметастатическую печень. Другим объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования метастазирования опухоли в печень, которые включают введение субъекту эффективного количества антитела против Bv8, которое ингибирует метастазирование опухоли в предметастатическую печень. Другим объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования метастазирования опухоли в печень, которые включают введение субъекту эффективного количества антитела против PKR1, которое ингибирует метастазирование опухоли в предметастатическую печень.

В определенных вариантах осуществления изобретения антитела или фрагменты антител могут быть химерными, гуманизированными или человеческими.

В определенных вариантах осуществления изобретения способы по настоящему изобретению дополнительно включают введение субъекту эффективного количества антагониста VEGF. В определенных вариантах осуществления изобретения субъект имеет опухоль, которая ранее была подвергнута лечению антагонистом VEGF. В определенных вариантах осуществления изобретения субъект имеет рецидивирующую опухоль или опухоль, устойчивую к воздействию антагониста VEGF. В определенных вариантах осуществления изобретения антагонист VEGF является антителом против VEGF или его фрагментом. В определенных вариантах осуществления изобретения антитело против VEGF является бевацизумабом, его фрагментом или в