Композиции и способы для лечения воспалительных нарушений

Иллюстрации

Показать все

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено антитело против фракталкина (ФКН, CX3CL1) и его фракталкин-связывающий фрагмент, охарактеризованные последовательностями вариабельных доменов. Рассмотрено применение данного антитела и фрагмента для лечения воспалительного нарушения и для получения лекарственного средства, фармацевтическая композиция и способ лечения воспалительного нарушения, где указанное нарушение представляет собой язвенный колит, болезнь Крона или ревматоидный артрит. Кроме того, рассмотрены: кодирующая нуклеиновая кислота, вектор, клетка-хозяин и способ получения антитела по изобретению или его фрагмента. Антитело по настоящему изобретению и его фрагмент нейтрализуют связывание ФКН с CX3CR1, как показано в анализе хемотаксиса. Данное изобретение может найти дальнейшее применение в терапии воспалительных заболеваний, опосредованных связыванием ФКН с рецептором CX3CR1. 9 н. и 19 з.п. ф-лы, 14 ил., 1 табл., 14 пр.

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к композициям и способам, относящимся к антителам, которые связывают фракталкин.

Уровень техники

Фракталкин (ФКН) представляет собой трансмембранный хемокин, который экспрессируется на поверхности активированных эндотелиальных клеток и связывается с рецептором CX3CR1. Связывание ФКН, связанного с мембраной, с CX3CR1, связанным с мембраной, опосредует сильную адгезию клетка-клетка без участия селектинов или интегринов. Секретированный ФКН, который отделяется от связанного с мембраной ФКН, также связывается с CX3CR1 и индуцирует активацию интегрина и клеточного хемотаксиса.

Экспрессия ФКН индуцируется на поверхности эндотелиальных клеток провоспалительными цитокинами. Усиленная экспрессия ФКН и накопление цитостатических эффекторных лимфоцитов CX3CR1+ и макрофагов отмечались у субъектов с многочисленными нарушениями, включая воспалительные и аутоиммунные нарушения, в том числе язвенный колит (ЯК), болезнь Крона (БК), ревматоидный артрит (РА), аутоиммунный гепатит (АИГ), рассеянный склероз (РС) и сахарный диабет. Umehara et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24:34-40 (2004) описывает роль ФКН при атеросклерозе и поражении сосудов. Nishimura et al., Ann. NY Acad. Sci. 1173:350-356 (2009) рассматривает ФКН в качестве потенциальной терапевтической мишени при воспалительных заболеваниях кишечника, таких как ЯК и БК.

Антитела и ФКН-связывающие фрагменты антител являются желательными терапевтическими агентами в силу своей специфичности. Антитела и ФКН-связывающие фрагменты можно использовать для направленного воздействия на специфические клетки или ткани, минимизируя таким образом потенциальные побочные эффекты в случае неспецифического направленного воздействия. Существует потребность в идентификации и характеристике терапевтических антител, которые можно использовать для лечения воспалительных нарушений, включая описаные здесь нарушения.

Краткое описание изобретения

В первом аспекте изобретение относится к анти-ФКН антителу или его ФКН-связывающему фрагменту, где указанное антитело или его фрагмент содержит шесть CDR, выбранных из:

(a) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:28;

(b) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:29;

(c) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:30;

(d) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:31;

(е) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:32; и

(f) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:33.

Антитело может представлять собой интактное антитело. В одном из примеров антитело представляет собой гуманизированное антитело. Вариабельный домен тяжелой цепи гуманизированного антитела может включать аминокислотную последовательность SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:42 или SEQ ID NO:43, а вариабельный домен легкой цепи гуманизированного антитела может включать аминокислотную последовательность SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:44 или SEQ ID NO:45.

В одном из примеров антитело представляет собой антитело против фракталкина или его ФКН-связывающего фрагмента, где указанное антитело или его фрагмент содержит тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:37 и легкую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:44.

Антитело также может представлять собой химерное антитело. В одном из примеров вариабельный домен тяжелой цепи химерного антитела содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:26, а вариабельный домен легкой цепи химерного антитела содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:27.

Также рассматриваются ФКН-связывающие фрагменты антитела. ФКН-связывающий фрагмент может представлять собой Fab, Fab', F(ab')2 или Fv фрагмент, который сохраняет специфичность связывания с ФКН.

В некоторых примерах, когда указанное антитело или его ФКН-связывающий фрагмент содержат человеческий константный участок, такой константный участок является IgG изотипом (например, IgG2 изотипом). В других примерах указанное антитело или его ФКН-связывающий фрагмент содержит мутированный Fc участок, такой, что указанное антитело обладает пониженной способностью к активации ADCC и/или комплемента по сравнению с Fc участком, у которого такая мутация отсутствует. Например, Fc участок может быть мутирован по одному или более кислотным остаткам из следующих: V234, G237, С131 или C219.

Желательно, чтобы антитело или ФКН-связывающий фрагмент существенно уменьшал или ингибировал связывание ФКН со своим рецептором, CX3CR1, по меньшей мере на 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или более, или существенно ингибировал нейтрализованный hФКН при оценке хемотаксиса, как раскрыто в настоящем описании.

Изобретение также относится к фармацевтической композиции, которая содержит антитело или его ФКН-связывающий фрагмент по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит один или несколько описанных ниже дополнительных терапевтических агентов.

Также рассматривается нуклеиновая кислота, кодирующая описанное выше антитело или ФКН-связывающий фрагмент. В одном из вариантов осуществления нуклеиновая кислота кодирует всю или часть тяжелой цепи антитела или его ФКН-связывающий фрагмент. В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота кодирует всю или часть легкой цепи антитела или его ФКН-связывающий фрагмент. Нуклеиновая кислота может находиться в векторе (например, векторе экспрессии).

Изобретение также относится к клетке хозяину, которая содержит один или несколько векторов по изобретению. В одном из примеров клетка хозяин содержит два вектора, из которых первый вектор содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую тяжелую цепь, а второй вектор содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую легкую цепь описанного здесь антитела или его ФКН-связывающего фрагмента. Экспрессия тяжелой цепи и легкой цепи в клетке хозяине продуцирует антитело или ФКН-связывающий фрагмент. В одном из вариантов осуществления клетка хозяин является прокариотической. В другом варианте осуществления клетка хозяин является эукариотической. Иллюстративные клетки млекопитающих, которые можно использовать для продуцирования антител и ФКН-связывающих фрагментов, представляют собой клетки CHO и клетки NS0.

Изобретение также относится к способу получения анти-ФКН антитела или его ФКН-связывающего фрагмента. Способ включает: (a) экспрессию вектора по изобретению в подходящей клетке хозяине и (b) выделение антитела. Антитело или ФКН-связывающий фрагмент может секретироваться клеткой хозяином в культуральную среду. В одном из примеров антитело или его ФКН-связывающий фрагмент очищают до по меньшей мере 95% или более чистоты от веществ, не относящихся к антителу.

Также рассматриваются способы лечения воспалительных нарушений путем введения эффективного количества анти-ФКН антитела или ФКН-связывающего фрагмента по изобретению. Иллюстративные воспалительные нарушения представляют собой воспалительное заболевание кишечника, болезнь Крона и язвенный колит. В случае этих нарушений способ также может включать введение одного или нескольких дополнительных терапевтических агентов. Иллюстративные терапевтические агенты представляют собой опиаты, 5-аминосалициловую кислоту, 6-меркаптопурин, азатиоприн, глюкокортикоиды, метотрексат, циклоспорин и метронидазол. Другие подходящие терапевтические агенты описаны ниже.

Воспалительные нарушения, которые могут быть излечены введением эффективного количества анти-ФКН антитела или ФКН-связывающего фрагмента по изобретению, также включают аутоиммунные болезни печени и желчных путей (например, аутоиммунный гепатит, первичный желчный цирроз печени или первичный склерозирующий холангит). В случае этих нарушений способ может также включать введение 6-меркаптопурина, урсодезоксихолевую кислоту, азатиоприн, глюкокортикоид, тиазидный диуретик, антиальдостероновый диуретик, циклоспорин, альбумин или спиронолактон.

Ревматоидный артрит (РА) также можно лечить путем введения эффективного количества анти-ФКН антитела или ФКН-связывающего фрагмента по изобретению. При лечении РА способ может также включать введение нестероидного противовоспалительного лекарственного средства (НПВС), метотрексата, лефлуномида, буцилламина, 5-аминосалициловой кислоты, глюкокортикоида, гидрохлорохина, витамина D, кальция или алендроната.

Системную красную волчанку (например, волчанку с поражением центральной нервной системы или волчаночный нефрит) также можно лечить введением эффективного количества анти-ФКН антитела или ФКН-связывающего фрагмента, отдельно или в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими агентами. Иллюстративные дополнительные терапевтические агенты представляют собой глюкокортикоиды, циклофосфамид, метотрексат, циклоспорин и такролимус.

Рассеянный склероз и нейромиелит зрительного нерва также можно лечить введением эффективного количества анти-ФКН антитела или ФКН-связывающего фрагмента. Лечение также может включать введение одного или более дополнительных терапевтических агентов, таких как глюкокортикоид, интерферон-P или Копаксон®.

Демиелинизирующую полирадикулопатию (например, синдром Гийена-Барре или хроническую воспалительную демиелинизирующую полирадикулопатию) также можно лечить введением эффективного количества анти-ФКН антитела или ФКН-связывающего фрагмента. И в этом случае, также рассматривается комбинированная терапия, и лечение также может включать введение одного или более дополнительных терапевтических агентов, таких как глюкокортикоид или внутривенный иммуноглобулин.

Введение эффективного количества анти-ФКН антитела или ФКН-связывающего фрагмента, отдельно или в комбинации с дополнительным терапевтическим агентом, также может быть полезным при лечении нейропатической боли. Иллюстративные дополнительные агенты для лечения нейропатической боли представляют собой ламотригин, топирамат, окскарбазепин, леветирацетам, фентанил, трамадол, капсаицин, кларитин, НПВС, амитриптилин, прегабалин, лидокаин, дулоксетин и карбамазепин.

Болезнь Альцгеймера также можно лечить введением эффективного количества анти-ФКН антитела или ФКН-связывающего фрагмента. Способ также может включать введение одного или более дополнительных терапевтических агентов, таких как такрин гидрохлорид, донепезила гидрохлорид, ривастигмина тартрат, галантамина гидробромид, мемантина гидрохлорид, пароксетин, рисперидон, кветиапин или пероспирон.

Ассоциированную с раком висцеральную боль также можно лечить введением эффективного количества анти-ФКН антитела или ФКН-связывающего фрагмента, отдельно или в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими агентами, такими как морфий, НПВС, фентанил, лидокаин, пентазоцин или клонидин.

Атеросклероз также можно лечить введением эффективного количества анти-ФКН антитела или ФКН-связывающего фрагмента. Способ также может включать введение одного или нескольких дополнительных терапевтических агентов, таких как простациклин, аспирин, клопидогрель, тиклопидин, лимапрост, простагландин Е1, ингибитор HMG CoA редуктазы, безафибрат, лидокаин, мексилетин, диуретик, дигиталис, допамин, агонист β-адренергический рецептор, изосорбида динитрат, нитроглицерин, натрийуретический пептид, варфарин, гепарин, активатор плазминогена тканевого типа, урокиназа или прокаинамид.

Васкулопатию (например, возрастную мышечную дегенерацию, болезнь Бехчета, болезнь Гарада и саркаидозный увеит) также можно лечить введением эффективного количества анти-ФКН антитела или ФКН-связывающего фрагмента по изобретению. Способ также может включать введение одного или нескольких дополнительных терапевтических агентов, выбранных из глюкокортикоидов, циклофосфамида, пегаптаниба, ранибизумаба, НПВС, колхицина, хлорамбуцила, талидомида и вертепорфина.

Нефропатии (например, волчаночный нефрит, гломерулонефрит или диабетическую нефропатию) также можно лечить введением эффективного количества анти-ФКН антитела или ФКН-связывающего фрагмента по изобретению. Способы лечения также могут включать глюкокортикоиды, сульфонилмочевину, циклофосфамид, глиниды, циклоспорин, такролимус, микофенолата мофетил, мизорибин, диуретики, инсулин, бигуанид, ингибиторы α-глюкозидазы, блокаторы рецепторов ангиотензина, тиазолидиндион, ингибиторы ангиотензин-преобразующего фермента (АПФ), блокаторы кальциевых каналов или ингибиторы β-адренергических рецепторов; способы лечения также могут включать и ингибиторы адренергических рецепторов.

Изобретение также относится к применению анти-ФКН антитела или ФКН-связывающего фрагмента по изобретению при лечении любого из описанных здесь воспалительных нарушений.

Изобретение также относится к использованию анти-ФКН антитела или ФКН-связывающего фрагмента по изобретению для получения лекарственного препарата для лечения любого из описанных здесь воспалительных нарушений.

Изобретение также раскрывает способ ингибирования рекрутинга лейкоцитов в участке воспаления у субъекта путем введения эффективного количества анти-ФКН антитела или ФКН-связывающего фрагмента нуждающемуся в таком лечении субъекту, ингибируя таким образом рекрутинг лейкоцитов на участке воспаления.

С целью терапевтических применений также могут использоваться стратегии ex vivo. Стратегии ex vivo включают трансфекцию или трансдукцию полученных от субъекта клеток полинуклеотидом, кодирующим антитело или фрагмент антитела. Трансфицированные или трансдуцированные клетки затем возвращают субъекту. Клетки могут быть любыми из широкого диапазона типов клеток, включая, без ограничения, гемопоэтические клетки (например, клетки костного мозга, макрофаги, моноциты, дендритные клетки, T-клетки или В-клетки), фибробласты, эпителиальные клетки, эндотелиальные клетки, кератиноциты или мышечные клетки.

В контексте настоящего изобретения используются сокращения и термины, определения которых приводятся ниже.

Термин “антитело” (используемый здесь взаимозаменяемо с термином “иммуноглобулин”) включает интактные моноклональные и поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела) и фрагменты антитела, которые демонстрируют необходимую биологическую активность (например, способность связать ФКН и модулировать взаимодействие между ФКН и CX3CR1). “Интактные антитела” представляют собой гетеротетрамерные гликопротеины примерно 150000 дальтон, состоящие из двух идентичных легких (L) цепей и двух идентичных тяжелых (H) цепей. Каждая легкая цепь связана с тяжелой цепью одной ковалентной дисульфидной связью, при этом количество дисульфидных связей в тяжелых цепях разных изотипов иммуноглобулинов различается. Каждая тяжелая и легкая цепь также имеет дисульфидные мостики, расположенные через регулярные интервалы. Каждая тяжелая цепь имеет на одном конце вариабельный домен (VH), за которым следует несколько константных доменов. Каждая легкая цепь имеет вариабельный домен на одном конце (VL) и константный домен на другом конце. Константный домен легкой цепи выровнен относительно первого константного домена тяжелой цепи, а вариабельный домен легкой цепи выровнен относительно вариабельного домена тяжелой цепи. Предполагается, что конкретные аминокислотные остатки формируют область контакта между вариабельными доменами легкой цепи и тяжелой цепи.

Существует пять основных классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из них можно дополнительно подразделить на подклассы (изотипы), например, IgG1 IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Антитело может быть частью большой слитой молекулы, образованной при помощи ковалентной или нековалентной связи антитела с одним или несколькими другими белками или пептидами. Антитело также может быть частью иммуноконъюгата, в котором антитело конъюгировано со второй молекулой (например, токсином, радиоизотопом или меткой).

Используемый здесь термин “моноклональное антитело” относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, т.е., отдельные антитела идентичны друг другу за исключением возможных мутаций, которые могут присутствовать в незначительном количестве.

“Гуманизированные” формы нечеловеческих антител представляют собой антитела или их фрагменты, которые содержат каркасный участок (FR), имеющий по существу аминокислотную последовательность человеческого иммуноглобулина, и гипервариабельный участок (CDR), имеющий по существу аминокислотную последовательность нечеловеческого иммуноглобулина (т.е., “импортированную” последовательность). В некоторых случаях, остатки каркасного участка человеческого иммуноглобулина заменены соответствующими остатками, не характерными для человека. Для очистки антитела могут быть выполнены дополнительные модификации гуманизированного антитела.

“Гипервариабельный участок” или “CDR” означает одну из трех гипервариабельных последовательностей в вариабельных участках внутри каждой легкой и тяжелой цепей иммуноглобулина.

“Каркасный участок” или “FR” означает последовательности аминокислот, расположенные с каждой из сторон трех CDR легкой и тяжелой цепей иммуноглобулина. FR и CDR гуманизированного антитела не должны точно соответствовать родительским последовательностям, например, импортированный CDR или консенсусный FR может быть мутирован путем замены, вставки или делеции по меньшей мере одного остатка таким образом, чтобы остаток CDR или FR на этом участке не соответствовал ни консенсусной, ни импортированной последовательности. Однако такие мутации, как правило, не бывают обширными. Обычно, по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 99% остатков гуманизированного антитела соответствуют остаткам родительских последовательностей.

Используемый здесь термин “примерно”, в случае измеряемой величины, такой как количество, временная продолжительность и т.п., охватывает вариации значений указанной величины до ±20%, предпочтительно ±10%, более предпочтительно ±5%, еще более предпочтительно ±2%, поскольку такие вариации являются адекватными для реализации раскрытых способов. Если не указано иное, все числа, выражающие количество компонентов, свойства, такие как молекулярная масса, условия проведения реакции и т.д., используемые в описании и формуле изобретения, следует понимать как изменяемые во всех случаях в рамках термина “примерно”. Соответственно, если не указано иное, числовые параметры, приведенные в следующем ниже описании и прилагаемой формуле изобретения, являются приближениями, которые могут изменяться в зависимости от требуемых свойств, подбираемых для получения настоящего изобретения. В самом крайнем случае, но не ограничивая возможности применения доктрины эквивалентов к объему формулы изобретения, каждый числовой параметр следует рассматривать по меньшей мере с точки зрения числа, выраженного значащими цифрами, с применением обычных способов округления.

Под “достаточным количеством” или “эффективным количеством” подразумевается количество терапевтического антитела или его фармацевтической композиции, требуемое для лечения или облегчения нарушения, такого как воспалительное нарушение, клинически релевантным способом. Достаточное количество терапевтического анти-ФКН антитела, его ФКН-связывающего фрагмента или фармацевтической композиции, используемое при реализации настоящего изобретения на практике для терапевтического лечения, например, воспалительного нарушения, изменяется в зависимости от способа введения, возраста и общего состояния здоровья пациента.

“Сродство связывания”, как правило, относится к силе общего суммарного количества нековалентных взаимодействий между единичным сайтом связывания молекулы (например, антитела) и его партнером связывания (например, антигеном). Сродство связывания может быть представлено константой диссоциации (Kd). Сродство может быть измерено способами, известными в данной области техники, включая радиоиммунологический анализ ФКН-связывания (РИА) или анализ методом поверхностного плазмонного резонанса (например, BIACORE®).

“Химерные” или “химеризованные” антитела (т.е., иммуноглобулины) относятся к антителам, у которых часть тяжелой и/или легкой цепи является идентичной или гомологичной соответствующим последовательностям в антителах, полученных от конкретных видов или принадлежащих конкретному классу или подклассу антител, в то время как остальная часть цепи(ей) является идентичной или гомологичной соответствующим последовательностям в антителах, полученных от другой разновидности или принадлежащих другому классу или подклассу антител, а также фрагментам таких антител, при условии, что они проявляют необходимую биологическую активность (Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81:6851-6855, 1984).

“Эпитоп” или “антигенная детерминанта” означает аминокислотную последовательность, которая либо в силу линейной структуры, либо в силу трехмерной конформации, формирует участок, связывающий антитело. Конформационный эпитоп, который может включать прерывающиеся участки аминокислотной последовательности антигена, взаимодействует с антителом благодаря третичной структуре эпитопа. Линейный эпитоп, напротив, представляет собой эпитоп, который распознается антителами по его первичной структуре. В одном из вариантов осуществления эпитоп фракталкина, который формирует минимальную область контакта с Fab, включает, например, E66-Q69, W81-Q87, H70-F73 и H88-D90.

Термины “экспрессировать” и “продуцировать” в данном описании используются синонимично и относятся к биосинтезу генного продукта. Эти термины охватывают транскрипцию гена в РНК. Эти термины также охватывают трансляцию РНК в один или более полипептидов, а также охватывают все пост-транскрипционные и пост-трансляционные модификации естественного происхождения. Экспрессия/продуцирование антитела может происходить в цитоплазме клетки и/или во внеклеточной среде, такой как среда роста для клеточной культуры.

Под термином “фракталкин”, “ФКН”, “ФК” или “нейротактин” подразумевается полипептид, который является гомологичным полипептиду, определенному последовательностью SEQ ID NO:1 (фиг.1) и который обладает биологической активностью ФКН (например, связывается с рецептором CX3CR1; вызывает хемотаксис T-клеток и моноцитов; или способствует адгезии лейкоцитов к активированным эндотелиальным клеткам). Биологическую активность полипептида ФКН можно оценивать при помощи любого стандартного способа. Согласно используемому здесь определению, ФКН также включает любой член или изоморф семейства ФКН. См., например, патент США 7390490, WO 2006/046739, и публикацию заявки на патент США 2006/0233710, которые включены в настоящее описание в виде ссылки.

“ФКН-связывающий фрагмент” включает часть интактного антитела, содержащего его ФКН-связывающий участок и способный связывать ФКН. ФКН-связывающие фрагменты могут представлять собой Fab, Fab', F(ab')2 или Fv фрагменты; диатела; триатела; тетратела; мини-антитела; молекулы аффитела; минитела; линейные антитела; молекулы одноцепочечных антител; или полиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител.

“Гомологичный” означает любой ген или последовательность белка, которая по меньшей мере на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или более гомологична последовательности известного гена или белка по длине последовательности сравнения. “Гомологичный” белок также может обладать по меньшей мере одной биологической активностью белка сравнения. Для полипептидов длина последовательностей сравнения, как правило, составляет по меньшей мере 15, 20, 25, 35 или более аминокислот. Для нуклеиновых кислот длина последовательностей сравнения, как правило, составляет по меньшей мере 50, 60, 75, 100, 125 или более нуклеотидов. “Гомология” также может относиться к значительному сходству между эпитопом, используемым для генерации антител, и белком или его фрагментом, на который направлены антитела. В этом случае, гомология относится к сходству, достаточному для продуцирования антител, которые могут специфически узнавать представляющий интерес белок.

“Человеческое антитело” означает, что антитело имеет либо исключительно человеческое происхождение, либо является любым антителом, в котором последовательности вариабельных и константных доменов представляют собой человеческие последовательности или последовательности человеческих антител. Этот термин охватывает антитела с последовательностями, полученными из (т.е., которые используют) человеческих генов, но которые были изменены, например, для уменьшения возможной иммуногенности, увеличения аффинности, удаления цистеинов, которые могут быть причиной нежелательной конформации, и т.д. Этот термин охватывает такие антитела, продуцированные рекомбинантно в нечеловеских клетках, которые могут вызывать гликозилирование, нетипичное для человеческих клеток.

“Гибридома” относится к продукту слияния клеток между неопластическим лимфоцитом культурального происхождения и примированным B- или T-лимфоцитом, который экспрессирует специфический иммунный потенциал родительской клетки.

Используемый здесь термин “воспалительное нарушение” относится к любому заболеванию, нарушению или состоянию, при котором иммунная система активирована аномально. Воспалительное нарушение может представлять собой, например, язвенный колит, болезнь Крона, воспалительную болезнь кишечника, ревматоидный артрит, миозит, рассеянный склероз, нейромиелит зрительного нерва, атеросклероз, псориаз, системную красную волчанку (например, волчанку с поражением центральной нервной системы или волчаночный нефрит), нефрит, гломерулонефрит, аутоиммунную болезнь печени и желчных путей (например, аутоиммунный гепатит, первичный желчный цирроз печени или первичный склерозирующий холангит), реакцию трансплантат против хозяина, атопический дерматит, астму, нейродегенеративную болезнь (например, Болезнь Альцгеймера), демиелинизирующую полирадикулонейропатию (например, синдром Гийена-Барре или хроническую воспалительную демиелинизирующую полирадикулонейропатию), нейропатическую боль, висцеральную боль при раке, атеросклероз, возрастную дегенерацию мышц, диабетическую нефропатию, саркоидозный увеит или сахарный диабет.

Альтернативно, заболевание, нарушение или состояние представляет собой заболевание верхних или нижних дыхательных путей, например, лимфоматозный трахеобронхит; аллергическую гиперчувствительность или состояние гиперсекреции, такое как хронический бронхит и кистозный фиброз; легочный фиброз различной этиологии (например, идиопатический легочный фиброз); хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ); саркоидоз; аллергический и неаллергический ринит; аллергическую или неаллергическую крапивницу; связанное с кожей заболевание, характеризующееся нерегулируемым воспалением, перестройку ткани, ангиогенез и неоплазию; заболевание желудочно-кишечного трактата, такое как болезнь Гиршспрунга, диарею, состояние малабсорбции и воспалительные состояния; нарушение центральной и периферической нервной системы, такое как депрессия, состояние тревоги, болезнь Паркинсона, мигрень и другие формы черепной боли, инсульт и рвоту; заболевание иммунной системы, такое как в тканях селезенки и лимфатических узлов, аутоиммунное заболевание или другое заболевание, связанное с иммунной системой; заболевание сердечно-сосудистой системы, такое как отек легких, гипертензию, преэклампсию, тип 2 сложного регионального синдрома боли и инсульт; хроническое воспалительное заболевание, такое как артрит; заболевание, связанное с костями; хроническую боль, такую как фибромиалгия; и другие нарушения, в патогенез, патологию, и этиологию которых вовлечено действие нейролекинов, тахикининов или других родственных веществ (например, хемокининов).

Дополнительные примеры воспалительных нарушений представляют собой обыкновенные прыщи; синдром острой дыхательной недостаточности; болезнь Аддисона; аллергические внутриглазные воспалительные заболевания; ANCA-ассоциированный гранулематозный ангиит; анкилозный спондилит; аутоиммунную гемолитическую анемию; болезнь Бехчета; паралич Белла; буллезный пемфигоид; церебральную ишемию; цирроз печени; синдром Когана; контактный дерматит; синдром Кушинга; дерматомиозит; атрофическую эритему; эозинофильный фасциит; узловатую эритему; эксфолиативный дерматит; очаговый гломерулосклероз; очаговый и сегментный гломерулосклероз; сегментный гломерулосклероз; гигантских клеток артериит; подагру; подагрический артрит; ручную экзему; пурпуру Шенлейна-Геноха; герпес беременных; гирсутизм; идиопатический цератосклерит; идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру; иммунную тромбоцитопеническую пурпуру, воспалительные нарушения кишечника или желудочно-кишечного тракта; воспалительный дерматоз; красный плоский лишай; лимфоматозный трахеобронхит; отек желтого пятна; миастению гравис; неспецифическое фиброзирующее заболевание легких; остеоартрит; панкреатит; пемфигоид беременных; обыкновенную пузырчатку; периодонтит; узелковый полиартериит; ревматическую полимиалгию; мошоночный зуд; зуд/воспаление; псориатический артрит; легочный гистоплазмоз; рецидивирующий полихондрит; розацеа; саркоидоз; склеродерму; синдром септического шока; плечевой тендинит или бурсит; синдром Шегрена; болезнь Стилла; болезнь Свита; системный склероз; синдром Такаясу; временный артериит; токсический эпидермальный некролиз; отторжение трансплантата и синдромы, связанные с отторжением трансплантата; туберкулез; диабет типа 1; васкулит; синдром Фогта-Коянаги-Харада (ФКХ); и грануломатоз Вегенера.

Термин “изолированный” или “очищенный” означают измененный “с участием человека” по отношению к естественному состоянию. Если молекула или композиция встречается в природе, ее “изолируют” или “очищают”, когда ее изменяют или выделяют из ее естественной окружающей среды, или и то и другое. Например, полинуклеотид или полипептид, естественно присутствующий в живом растении или животном, не является “изолированным” или “очищенным”, но тот же самый полинуклеотид или полипептид, отделенный от материалов, существующих совместно с ним в его естественном состоянии, является “изолированым” или “очищенным”, согласно используемому в настоящем описании термину.

Термин “функционально связанный” или “функционально введенный” означает, что регуляторные последовательности, необходимые для экспрессии кодирующей последовательности, помещены в молекулу нуклеиновой кислоты в соответствующих положениях относительно кодирующей последовательности, обеспечивая таким образом возможность экспрессии кодирующей последовательности. В качестве примера, промотор функционально связан с кодирующей последовательностью, если промотор способен управлять транскрипцией или экспрессией такой кодирующей последовательности. Кодирующие последовательности могут быть функционально связаны с промотором или регуляторными последовательностями в смысловом или антисмысловом направлении. Термин “функционально связанный” иногда применяется к расположению других элементов контроля транскрипции (например, энхансеров) в векторе экспрессии.

“Полинуклеотид”, синонимично называемый “молекулой нуклеиновой кислоты”, означает любой полирибонуклеотид или полидезоксирибонуклеотид, который может представлять собой немодифицированную РНК или ДНК или модифицированную РНК или ДНК. “Полинуклеотиды” включают, без ограничения, однонитевую и двухнитевую ДНК, ДНК, которая представляет собой смесь однонитевых и двухнитевых участков, однонитевую и двухнитевую РНК и РНК, которая представляет собой смесь однонитевых и двухнитевых участков, гибридные молекулы, содержащие ДНК и РНК, которые могут быть однонитевыми, или чаще двухнитевыми или смесью однонитевых и двухнитевых участков. Кроме того, “полинуклеотид” относится к трехнитевым участкам, содержащим РНК или ДНК, или как РНК, так и ДНК. Термин полинуклеотид также включает ДНК или РНК, содержащие одно или несколько модифицированных оснований, и ДНК или РНК с основной цепью, модифицированной с целью получения стабильности или с другой целью. “Модифицированные” основания включают, например, тритилированные основания и необычные основания, такие как инозин. ДНК и РНК могут содержать множество различных модификаций; таким образом, термин “полинуклеотид” охватывает химически, ферментативно или метаболически модифицированные формы полинуклеотидов, обычно встречающиеся в природе, а также химические формы ДНК и РНК, характерные для вирусов и клеток. “Полинуклеотид” также охватывает относительно короткие цепи нуклеиновых кислот, часто называемые олигонуклеотидами.

“Полипептид” относится как к коротким цепям, обычно называемым пептидами, олигопептидами или олигомерами, так и к более длинным цепям, как правило, называемым белками. Полипептиды могут содержать другие аминокислоты помимо 20 аминокислот, кодируемых геном. “Полипептиды” включают аминокислотные последовательности, модифицированные либо естественными процессами, такими как пост-трансляционный процессинг, либо методами химической модификации, которые известны в данной области техники. Такие модификации хорошо описаны в учебниках и более специализированных монографиях, а также в многочисленной научной литературе. Модификации могут возникать в любом месте полипептида, включая основную пептидную цепь, боковые цепи аминокислот и карбоксильные или аминные концы. Следует отметить, что заданный полипептид может иметь один и тот же тип модификаций, в той или иной степени, на нескольких участках. Кроме того, заданный полипептид может иметь много типов модификаций. Полипептиды могут ветвиться в результате убиквинтилирования и могут быть циклическими с боковыми цепями или без них. Циклические, разветвленные и разветвленные циклические полипептиды могут быть результатом естественных посттрансляционных процессов или могут быть получены синтетическими способами. Модификации включают, например, ацетилирование, ацилирование, АДФ-рибозилирование, амидирование, ковалентное присоединение флавина, ковалентное присоединение гем фрагмента, ковалентное присоединение нуклеотида или производного нуклеотида, ковалентное присоединение липида или производного липида, ковалентное присоединение фосфатидилинозитола, поперечную сшивку, циклизацию, образование дисульфидных связей, деметилирование, формирования ковалентных поперечных связей, формирования цистина, формирование пироглутамата, формилирование, гамма-карбоксилирование, гликозилирование, формирование GPI якоря, гидроксилирование, иодинирование, метилирование, миристоилирование, окисление, протеолитическую обработку, фосфорилирование, пренилирование, рацемизацию, селеноилирование, сульфатацию, опосредуемое транспортной РНК добавление к белкам аминокислот, такое как аргинилирование, и убиквитинилирование (см., например, PROTEINS - STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES, 2nd Ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman and Company, New York, 1993; Wold, F., Post-translational Protein Modifications: Perspectives and Prospects, 1-12, в POST-TRANSLATIONAL COVALENT MODIFICATION OF PROTEINS, B.C. Johnson, Ed., Academic Press, New York, 1983; Seifter et al., Meth Enzymol, 182, 626-646; and Rattan, et al, Protein Synthesis: Posttranslational Modifications and Aging, Ann. NY Acad. Sci, (1992) 663: 48-62).

“Специфически связывает” означает, что антитело или его фрагмент узнает и связывает антиген (например, ФКН или его фрагмент) и при этом по существу не узнает и не связывает другие молекулы в образце (например, биологическом образце). “Специфически” означает отличать слабую неспецифическую агглютинирующую способность, которая иногда может происходить между случайными белками, например, с обнаженными гидрофильньными доменами. Это не подразумевает, что антитело не будет связывать ни с каким другим белком кроме антигена по изобретению. Антитела могут вступать в кросс-реакцию (и “специфически связываться”) с любым белком, который содержит соответствующий эпитоп.

“Субъектом” называется любое животное, наприме