Композиции панкреатических ферментов и способы лечения панкреатита и недостаточности поджелудочной железы

Композиции панкреатических ферментов и способы лечения панкреатита и недостаточности поджелудочной железы

Реферат

Перекрестная ссылка на родственные заявки на изобретения

В данной заявке заявлен приоритет предварительной заявки на патент США №61/243,467, поданной 17 сентября 2009 года, содержание которой включено сюда посредством ссылки во всей своей полноте.

Предшествующий уровень техники

В случаях недостаточности поджелудочной железы панкрелипаза и другие продукты на основе ферментов поджелудочной железы (PEP) могут быть введены для того, чтобы по меньшей мере частично возместить недостаточность ферментов, вызванную различными заболеваниями, поражающими поджелудочную железу, такими как панкреатит, панкреатэктомия, муковисцидоз и т.п. Применение ферментов поджелудочной железы в лечении недостаточности поджелудочной железы представляет собой важную часть терапии пациентов, страдающих от муковисцидоза. Без этих добавок пациенты испытывают тяжелое нарушение питания. Это нарушение питания может быть опасным для жизни, если его не лечить, в особенности в случае младенцев.

Дополнительно к нарушению питания (например, малабсорбции жира и т.д.) большая часть пациентов, страдающих от хронического панкреатита, также испытывает тяжелую и часто изнуряющую боль, ассоциированную с состоянием. Причина панкреатической боли не выяснена, но выдвинута гипотеза о том, что она вызвана гиперстимуляцией поджелудочной железы в результате утраты регуляции с обратной связью пептида, высвобождающего ССК (холецистокинин). В норме высвобождение панкреатической протеазы в ответ на прием пищи приводит к деградации пептида, высвобождающего ССК, присутствующего в верхнем отделе ЖК (желудочно-кишечного) тракта, что вызывает уменьшение сокращения поджелудочной железы и секреции фермента, поскольку достаточное количество пищеварительных ферментов уже было продуцировано для пищеварения. У пациентов, страдающих от недостаточности поджелудочной железы, пептид, высвобождающий ССК, деградирует в недостаточной степени, таким образом приводя к длительной (гипер) стимуляции поджелудочной железы. Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, тем не менее, в соответствии с этой гипотезой возникновения боли, прием протеаз (например, в композициях ферментов поджелудочной железы) должен приводить к разрушению пептида, высвобождающего ССК, таким образом уменьшая гиперстимуляцию поджелудочной железы и возникающую в результате панкреатическая боль.

Ферменты поджелудочной железы демонстрируют оптимальную активность в близких к нейтральным и слегка щелочных условиях. В условиях желудка ферменты липазы, которые часто присутствуют в терапевтических ферментных композициях, как ожидают, во все большей степени и необратимо инактивируются при снижении рН и/или увеличении длительности воздействия условий низкого рН, что приводит к утрате биологической активности. Соответственно, экзогенно введенные ферменты, как правило, защищены от инактивации в желудке, например, при помощи энтеросолюбильных оболочек, с тем чтобы они оставались интактными и защищенными от кислот желудочного сока во время их прохождения через желудок и в двенадцатиперстную кишку. Тем не менее, поскольку пептид, высвобождающий ССК, имеет высокий уровень секреции в ЖК тракте, традиционные покрытые энтеросолюбильной оболочкой препараты ферментов поджелудочной железы могут не высвобождать ферменты-протеазы достаточно быстро или в соответствующей части ЖК тракта с тем, чтобы в достаточной степени разрушить пептид, высвобождающий ССК, и таким образом уменьшить или устранить панкреатическую боль.

Непокрытые оболочкой препараты ферментов могут не вызывать проблему медленного или неполного высвобождения в ЖК тракте, но, как можно ожидать, существенно инактивируются в среде желудка с низким значением рН, и таким образом не обеспечивают достаточные уровни активного пищеварительного фермента для лечения нарушения питания, вызванного недостаточностью поджелудочной железы. Один из подходов для лечения панкреатической боли при помощи непокрытых оболочкой ферментных препаратов заключается в совместном введении непокрытого оболочкой фермента с ингибиторами протонного насоса в стремлении уменьшить деградацию фермента в желудке, для того чтобы некоторое количество активного фермента, в частности липазы, могло сохраниться в двенадцатиперстной кишке (Lieb et al., Aliment. Pharmacol. Then 29, 706-719 (2009)). Альтернативно, панкреатическую боль лечат при помощи относительно высоких доз покрытого или непокрытого оболочкой фермента поджелудочной железы для обеспечения того, что достаточное количество активного фермента доставляется в двенадцатиперстную кишку (Winstead et al., Pancreatology 9, 344-350 (2009)). Например, непокрытые оболочкой препараты ферментов в дозе 64000 единиц липазы и обладающие номинальной протеазной активностью 240000 единиц (на прием пищи), предложены для облегчения панкреатической боли (Lieb et al.).

На основе множества небольших клинических исследований, в которых непокрытые оболочкой ферменты, по видимому, функционируют лучше покрытых оболочкой препаратов ферментов, используемых в других исследованиях (Lieb et al.), общепринятая точка зрения состоит в том, что покрытые оболочкой препараты ферментов не рекомендуются для лечения панкреатической боли, тогда как непокрытые оболочкой препараты ферментов могут быть подходящими. Тем не менее, к настоящему времени отсутствует контролируемое клиническое исследование, в котором адекватно была продемонстрирована эффективность ферментов поджелудочной железы, покрытых или непокрытых оболочкой, в лечении боли, ассоциированной с панкреатитом.

Тем не менее, для лечения панкреатической боли (например, непокрытыми оболочкой препаратами ферментов) и нарушения питания (например, покрытыми оболочкой препаратами ферментов) в традиционных способах лечения предполагается, что могут потребоваться очень высокие дозы фермента: т.е. примерно 4 покрытые энтеросолюбильной оболочкой пилюли панкреатина и 4 непокрытые оболочкой пилюли панкреатина на прием пищи. Это основано на среднем показателе рекомендованной средней дозы CREON 24 и рекомендациях специалистов для дозирования непокрытых оболочкой ферментов (Winstead et al.), поскольку в настоящее время не существует одобренного непокрытого оболочкой продукта для лечения боли.

Это налагает весьма существенную нагрузку на пациента и означает, что общая доза ферментов, которые вводят пациенту, может угрожать безопасности (Smyth et al. Fibrosing colonopathy in cystic fibrosis: results of a case-control study. Lancet. 1995; 346: 1247-1251; FitzSimmons et al. High-dose pancreatic-enzyme supplements and fibrosing colonopathy in children with cystic fibrosis. New England Journal of Medicine. 1997; 336: 1283-1289).

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что единая лекарственная форма, содержащая комбинацию относительно меньшего количества покрытого энтеросолюбильной оболочкой пищеварительного фермента с непокрытым оболочкой пищеварительным ферментом обеспечивает эффективное лечение панкреатической боли и эффективный контроль нарушения питания, например нарушение малабсорбции жира. Кроме того, авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что очень низкая доза покрытых энтеросолюбильной оболочкой ферментов эффективна в лечении малабсорбции вследствие недостаточности поджелудочной железы, например у пациентов, страдающих от хронического панкреатита.

Краткое изложение сущности изобретения

В одном из воплощений настоящее изобретение относится к композиции пищеварительных ферментов из множества частиц (multi-particulate), содержащей покрытые энтеросолюбильной оболочкой гранулы, содержащие пищеварительный фермент, и непокрытые оболочкой гранулы, содержащие пищеварительный фермент, где покрытые энтеросолюбильной оболочкой гранулы, содержащие пищеварительный фермент, содержат ядро и энтеросолюбильную оболочку, расположенную на ядре, где ядро содержит терапевтически эффективное количество пищеварительных ферментов, и энтеросолюбильная оболочка содержит энтеросолюбильный полимер; и непокрытые оболочкой гранулы, содержащие пищеварительный фермент, содержат терапевтически эффективное количество пищеварительных ферментов, и по существу не содержат энтеросолюбильную полимерную оболочку.

В еще одном воплощении настоящее изобретение относится к способу лечения боли при панкреатите, включающему введение композиции по настоящему изобретению пациенту, нуждающемуся в таком введении.

В еще одном воплощении настоящее изобретение относится к способу лечения экзокринной недостаточности поджелудочной железы, включающему введение пациенту, нуждающемуся в таком введении, терапевтически эффективной дозы покрытого энтеросолюбильной оболочкой пищеварительного фермента, где указанная доза находится в диапазоне от примерно 100 до примерно 300 USP (Фармакопея США) единиц липазы/кг/прием пищи.

Подробное описание изобретения

Один из аспектов настоящего изобретению относится к стабилизированной композиции пищеварительных ферментов, содержащей комбинацию покрытых энтеросолюбильной оболочкой и непокрытых энтеросолюбильной оболочкой гранул, содержащих пищеварительный фермент. Термин "стабилизированный пищеварительный фермент" обозначает пищеварительный фермент, который сохраняет значительную ферментативную активность после длительного хранения. Термин "пищеварительный фермент" обозначает фермент в пищеварительном тракте, который разрушает компоненты пищи таким образом, что они могут быть потреблены или абсорбированы организмом.

Неограничивающие классы пищеварительных ферментов, подходящих для применения по настоящему изобретению, включают липазы, амилазы и протеазы. Неограничивающие примеры пищеварительных ферментов включают панкрелипазу (также называемую панкреатином), липазу, колипазу, трипсин, химотрипсин, химотрипсин В, панкреатопептидазу, карбоксипептидазу А, карбоксипептидазу В, гидролазу эфира глицерина, фосфолипазу, гидролазу эфира стерина, эластазу, кининогеназу, рибонуклеазу, дезоксирибонуклеазу, α-амилазу, папаин, химопапаин, глютеназу, бромелаин, фицин, β-амилазу, целлюлазу, β-галактозидазу, лактазу, сахаразу, изомальтазу и их смеси.

В одном из воплощений настоящего изобретения стабилизированный пищеварительный фермент представляет собой фермент поджелудочной железы. Термин "фермент поджелудочной железы", как он используется здесь, относится к любому одному из типов ферментов, представленных в секрете поджелудочной железы, таких как амилаза, липаза, протеаза или их смеси, или любому экстракту панкреатического происхождения, обладающему ферментативной активностью, такому как панкреатин. Фермент поджелудочной железы может быть получен путем экстракции из поджелудочной железы, синтезирован искусственно или получен из других источников, отличающихся от поджелудочной железы, таких как микробы, растения или другие ткани животных.

В еще одном воплощении настоящего изобретения стабилизированный пищеварительный фермент представляет собой панкрелипазу. Термины "панкрелипаза" или "панкреатин" обозначают смесь нескольких типов ферментов, включая ферменты амилазу, липазу и протеазу. Панкрелипаза имеется в продаже, например от Nordmark Arzneimittel GmbH или Scientific Protein Laboratories LLC.

В одном из воплощений композиций по настоящему изобретению стабилизированный пищеварительный фермент содержит липазу. Термин "липаза" относится к ферменту, который катализирует гидролиз липидов до глицерина и простых жирных кислот.

Примеры липаз, подходящих для настоящего изобретения, включают липазу животных (например, свиную липазу), бактериальную липазу (например, липазу Pseudomonas и/или липазу Burkholderia), липазу грибов, растительную липазу, рекомбинаниную липазу (например, полученную с помощью технологии рекомбинантной ДНК с использованием подходящей клетки-хозяина, выбранной из любой из клеток бактерий, дрожжей, грибов, растений, насекомых или млекопитающих в культуре, или рекомбинантные липазы, которые включают аминокислотную последовательность, которая гомологична или по существу идентична встречающейся в природе последовательности, липазы, кодируемые нуклеиновой кислотой, которая гомологична или по существу идентична встречающейся в природе кодирующей липазу нуклеиновой кислоте и т.д.), химически модифицированную липазу или их смеси, но не ограничиваются ими.

В еще одном воплощении композиций по настоящему изобретению стабилизированный пищеварительный фермент содержит амилазу. Термин "амилаза" относится к ферментам гликозидгидролазам, которые разрушают крахмал, например α-амилазам, β-амилазам, γ-амилазам, кислым α-глюкозидазам, амилазам слюны, таким как птиалин, и т.д.

Амилазы, подходящие для применения в композициях по настоящему изобретению включают амилазы животных, бактериальные амилазы, амилазы грибов (например, амилаза Aspergillus™ и, предпочтительно, представляет собой амилазу Aspergillus oryzae), растительные амилазы, рекомбинантные амилазы (например, полученные с помощью технологии рекомбинантной ДНК с использованием подходящей клетки-хозяина, выбранной из любой из клеток-хозяев бактерий, дрожжей, грибов, растений, насекомых или млекопитающих в культуре, или рекомбинантные амилазы, которые включают аминокислотную последовательность, гомологичную или по существу идентичную встречающейся в природе последовательности, амилазы, кодируемые нуклеиновой кислотой, которая гомологична или по существу идентична встречающейся в природе кодирующей амилазу нуклеиновой кислоте и т.д.), химически модифицированные амилазы или их смеси, но не ограничиваются ими.

В еще одном воплощении композиций по настоящему изобретению стабилизированный пищеварительный фермент содержит протеазу. Термин "протеаза" обычно относится к ферментам (например, протеиназам, пептидазам или протеолитическим ферментам), которые разрушают пептидные связи между аминокислотами в белках. Протеазы обычно идентифицируют по их каталитическому типу, например пептидазы аспарагиновой кислоты, цистеиновые (тиол) пептидазы, металлопептидазы, сериновые пептидазы, треониновые пептидазы, щелочные или полущелочные протеазы, нейтральные и пептидазы с неизвестным каталитическим механизмом.

Неограничивающие примеры протеаз, подходящих для применения в композициях или лекарственных формах для перорального введения по настоящему изобретению, включают сериновые протеазы, треониновые протеазы, цистеиновые протеазы, протеазы аспарагиновой кислоты (например, плазмепсин) металлопротеазы, протеазы глутаминовой кислоты и т.д. Кроме того, протеазы, подходящие для применения в композициях или лекарственных формах для перорального введения по настоящему изобретению включают протеазы животных, бактериальные протеазы, протеазы грибов (например, протеазу Aspergillus melleus), растительные протеазы, рекомбинантные протеазы (например, полученные с помощью технологии рекомбинантной ДНК с использованием подходящей клетки-хозяина, выбранной из любой из клеток-хозяев бактерий, дрожжей, грибов, растений, насекомых или млекопитающих в культуре, или рекомбинантные протеазы, которые включают аминокислотную последовательность, гомологичную или по существу идентичную встречающейся в природе последовательности, протеазы, кодируемые нуклеиновой кислотой, которая гомологична или по существу идентична встречающейся в природе кодирующей протеазу нуклеиновой кислоте и т.д.), химически модифицированные протеазы или их смеси, но не ограничиваются ими.

Композиции или лекарственные формы для перорального введения по настоящему изобретению могут содержать одну или более чем одну липазу (т.е. одну липазу, или две липазы, или более чем две липазы), одну или более чем одну амилазу (т.е. одну амилазу, или две амилазы, или более чем две амилазы), одну или более чем одну протеазу (т.е. одну протеазу, или две протеазы, или более чем две протеазы), смеси одной или более чем одной липазы с одной или более чем одной амилазой, смеси одной или более чем одной липазы с одной или более чем одной протеазой, смеси одной или более чем одной амилазы с одной или более чем одной протеазой, или смеси одной или более чем одной липазы с одной или более чем одной амилазой и одной или более чем одной протеазой.

В одном из воплощений пищеварительный фермент представляет собой панкреатический экстракт свиньи, содержащий различные липазы (например, липазу, колипазу, фосфолипазу А2, холестеролэстеразу), протеазы (например, трипсин, химотрипсин, карбоксипептидазу А и В, эластазу, кининогеназу, трипсиновый ингибитор), амилазы и возможно нуклеазы (рибонуклеазу, дезоксирибонуклеазу). В еще одном воплощении пищеварительный фермент в значительной степени близок панкреатической жидкости человека. В еще одном воплощении пищеварительный фермент представляет собой панкрелипазу USP. В еще одном воплощении пищеварительный фермент представляет собой панкрелипазу USP, обладающую липазной активностью 69-120 Е USP/мг, амилазной активностью больше чем или равной 216 Е USP/мг, протеазной активностью больше чем или равной 264 Е USP/мг и общей протеазной активностью больше чем или равной 264 Е USP/мг.

В одном из воплощений композиции по настоящему изобретению обладают общими липазной, протеазной и амилазной активностями, как описано в Таблице 1 ниже (где "общая" активность относится к комбинированным активностям покрытых энтеросолюбильной оболочкой и непокрытых энтеросолюбильной оболочкой гранул, содержащих фермент):

Таблица 1
Композиция	1	2	3	4
Активность (ME)	мин	макс	мин	макс	мин	макс	мин	макс
Липаза	4500	5500	9000	11000	13500	16500	18000	22000
Амилаза	8100	45000	17100	90000	26100	135000	35100	180000
Протеаза	8100	34000	17100	67000	26100	100000	35100	134000
Отношение	мин	макс	мин	макс	мин	макс	мин	макс
Амилаза/Липаза	1,8	8,2	1,9	8,2	1,9	8,2	2,0	8,2
Протеаза/Липаза	1,8	6,2	1,9	6,1	1,9	6,1	2,0	6,1

В конкретном воплощении композиции по настоящему изобретению содержат в общем примерно 25000 USP единиц липазы и примерно 85000 USP единиц протеазы. В еще одном воплощении композиции по настоящему изобретению содержат в общем примерно 20000 USP единиц липазы и 68000 USP единиц протеазы. В еще одном воплощении композиции по настоящему изобретению содержат в общем примерно 15000 USP единиц липазы и 51000 USP единиц протеазы. В еще одном воплощении композиции по настоящему изобретению содержат в общем примерно 10000 USP единиц липазы и 34000 USP единиц протеазы. В еще одном воплощении композиции по настоящему изобретению содержат в общем примерно 5000 USP единиц липазы и 17000 USP единиц протеазы. Отношение липазы или протеазы, содержащихся в покрытых энтеросолюбильной оболочкой гранулах, к липазе или протеазе, содержащихся в непокрытых оболочкой гранулах, находится в диапазоне от примерно 5/95 до примерно 50/50 (включая примерно 5/90, примерно 10/90, примерно 15/85, примерно 20/80, примерно 25/75, примерно 30/70, примерно 35/65, примерно 40/60, примерно 45/55 или примерно 50/50), на основании активности фермента. Например, приблизительные активности для липазы и протеазы в композиции по настоящему изобретению представлены в Таблице 2 ниже.

Таблица 2
Номер композиции		Приблизит. активность покрытых энтеросолюбильной оболочкой гранул (USP единиц)	Приблизит. активность непокрытых оболочкой гранул (USP единиц)	СоотношениеПокрытые/непокрытые оболочкой гранулы
1	Липаза	1000	19000	5/95
Протеаза	3400	64600
2	Липаза	2000	18000	10/90
Протеаза	6800	61200
3	Липаза	3000	17000	15/85
Протеаза	10200	57800
4	Липаза	4000	16000	20/80
Протеаза	13600	54400
5	Липаза	5000	15000	25/75
Протеаза	17000	51000
6	Липаза	6000	14000	30/70
Протеаза	20400	47600
7	Липаза	7000	13000	35/65
Протеаза	23800	44200
8	Липаза	8000	12000	40/60
Протеаза	27200	40800
9	Липаза	9000	11000	45/55
Протеаза	30600	37400
10	Липаза	10000	10000	50/50
Протеаза	34000	34000

Композиции по настоящему изобретению, содержащие подходящие соотношения липазы и/или протеазы из покрытых энтеросолюбильной оболочкой и непокрытых оболочкой гранул, могут быть предоставлены в индивидуальной лекарственной форме, например капсуле, содержащей смесь покрытых энтеросолюбильной оболочкой и непокрытых энтеросолюбильной оболочкой гранул, содержащих пищеварительный фермент, или могут быть предоставлены отдельными лекарственными формами, соответственно содержащими покрытые энтеросолюбильной оболочкой гранулы, содержащие пищеварительный фермент, и непокрытые оболочкой гранулы, содержащие пищеварительный фермент. Альтернативно, индивидуальные лекарственные формы, содержащие различные соотношения покрытых энтеросолюбильной оболочкой и непокрытых энтеросолюбильной оболочкой гранул, содержащих пищеварительный фермент, можно комбинировать для достижения желаемого соотношения покрытых энтеросолюбильной оболочкой и непокрытых энтеросолюбильной оболочкой гранул, содержащих пищеварительный фермент.

В других воплощениях соотношения липаза:протеаза:амилаза в композициях или лекарственных формах для перорального введения по настоящему изобретению могут находиться в диапазоне от примерно 1:10:10 до примерно 10:1:1, или примерно 1,0:1,0:0,15 (на основании ферментативных активностей). Соотношение амилаза/липаза в композициях или лекарственных формах для перорального введения по настоящему изобретению может находиться в диапазоне примерно 1,8-8,2, например примерно 1,9-8,2 и примерно 2,0-8,2.

Соотношение протеаза/липаза в композициях или лекарственных формах для перорального введения по настоящему изобретению может находиться в диапазоне примерно 1,8-6,2, например примерно 1,9-6,1 и примерно 2,0-6,1.

Общее количество пищеварительных ферментов (по массе) в композициях или лекарственных формах для перорального введения по настоящему изобретению может составлять примерно 20-100%, 20-90%, 20-80%, 20-70%, 20-60%, 20-50%, 20-40%, 20-30% или примерно 20%, примерно 30%, примерно 40%, примерно 50%, примерно 60%, примерно 70%, примерно 80%, примерно 90% или примерно 100%. В одном из воплощений общее количество пищеварительных ферментов составляет 60-90%. В еще одном воплощении общее количество пищеварительных ферментов (например, панкрелипазы) составляет примерно 68-72%.

В одном из воплощений композиции или лекарственные формы для перорального введения по настоящему изобретению, содержащие по меньшей мере один пищеварительный фермент, имеют содержание влаги примерно 3% или меньше, примерно 2,5% или меньше, примерно 2% или меньше, примерно 1,5% или меньше или примерно 1% или меньше, включая все диапазоны и поддиапазоны между ними (т.е любой из примерно от 2,5% до 3%, от 2% до 3%, от 1,5% до 3%, от 1% до 3%, от 2% до 2,5%, от 1,5% до 2,5%, от 1% до 2,5%, от 1,5% до 2%, от 1% до 2%, от 1% до 1,5% и т.д.). Обнаружено, что композиции или лекарственные формы для перорального введения по настоящему изобретению, сохраняемые при низком содержании влаги, значительно более стабильны по сравнению с традиционными композициями, сохраняемыми при более высоком содержании влаги, например более примерно 3% или выше.

Термин "содержание влаги", также называемый "содержание воды", обозначает количество воды, которое содержит композиция. Для композиций, которые не изменяют объем при изменении содержания влаги, содержание влаги может быть выражено волюмометрически (т.е. по объему) как отношение массы влаги к сухому объему вещества. Для композиций, которые изменяют объем при изменении содержания влаги содержание влаги может быть выражено гравиметрически (т.е. по массе) как масса воды, удаленной при высыхании на единицу сухой массы образца. Определение содержания влаги может быть осуществлено при помощи любого из традиционных способов, известных в области техники. Например, содержание влаги может быть определено при помощи химического титрования, такого как титрование по Карлу Фишеру, при котором образец растворяют в электрохимической ячейке для титрования. Вода из образца потребляется в электрохимической реакции, конечную точку которой измеряют потенциометрически, таким образом обеспечивая прямое измерение количества воды в образце. Альтернативно, могут быть использованы относительно простые термогравиметрические способы, такие как "Потеря при высушивании" (LoD), при котором массу образца измеряют до контролируемой сушки и после нее. Потеря массы после высушивания относится к потере влаги. Имеющиеся в продаже анализаторы влажности (например, доступные от Mettler Toledo, Sartorius AG и т.д.) также могут быть использованы для определения содержания влаги. Содержание влаги композиций или лекарственных форм для перорального введения по настоящему изобретению может быть измерено при помощи любого подходящего способа, известного в области техники, например LoD.

В еще одном воплощении композиции или лекарственные формы для перорального введения по настоящему изобретению, содержащие по меньшей мере один пищеварительный фермент, имеют активность воды примерно 0,6 или меньше, примерно 0,5 или меньше, примерно 0,4 или меньше, примерно 0,3 или меньше, примерно 0,2 или меньше, или примерно 0,1 или меньше, включая все диапазоны и поддиапазоны между ними (т.е. любой из от примерно 0,5 до 0,6, от 0,4 до 0,6, от 0,3 до 0,6, от 0,2 до 0,6, от 0,1 до 0,6, от 0,4 до 0,5, от 0,3 до 0,5, от 0,2 до 0,5, от 0,1 до 0,5, от 0,3 до 0,4, от 0,2 до 0,4, от 0,1 до 0,4, от 0,2 до 0,3, от 0,1 до 0,3, от 0,1 до 0,2 и т.д.). Обнаружено, что композиции или лекарственные формы для перорального введения по настоящему изобретению, сохраняемые при низкой активности воды, значительно более стабильны по сравнению с традиционными композициями пищеварительных ферментов, сохраняемыми при более высоких уровнях активности воды.

Активность воды, также называемая "aw", представляет собой относительную доступность воды в веществе. Термин "активность воды", как он используется здесь, определен как давление паров воды в образце, деленное на давление паров чистой воды при той же самой температуре. Чистая дистиллированная вода имеет активность воды равную единице. Активность воды зависит от температуры. То есть активность воды изменяется с изменением температуры. В настоящем изобретении активность воды измеряют при температуре, находящейся в диапазоне от примерно 0°С до примерно 50°С, предпочтительно от примерно 10°С до примерно 40°С.

Активность воды в продукте может быть определена путем измерения относительной влажности воздуха, окружающего образец, в состоянии равновесия. Соответственно, измерение активности воды в образце, как правило, осуществляют в закрытом (обычно изолированном) пространстве, где может быть достигнуто такое равновесие. В состоянии равновесия активность воды в образце и относительная влажность воздуха равны и, таким образом, измерение равновесной относительной влажности (ERH) воздуха в камере позволяет измерять активность воды в образце. В продаже имеется по меньшей мере два отличающихся типа приборов для измерения активности воды. В одном типе приборов для измерения активности воды используется технология, основанная на температуре конденсации на охлажденном зеркале (Chilled-mirror dew point technology) (например, приборы для измерения активности воды AquaLab™, доступные от Decagon Devices, Inc.), тогда как другие измеряют относительную влажность при помощи датчиков, которые изменяют электрическое сопротивление или емкость (например, приборы для измерения активности воды, доступные от Rotronic). Активность воды в композициях или лекарственных формах для перорального введения по настоящему изобретению может быть измерена при помощи любого подходящего способа, известного в области техники.

В еще одном воплощении композиции или лекарственные формы для перорального введения по настоящему изобретению, содержащие по меньшей мере один стабилизированный пищеварительный фермент, демонстрируют снижение ферментативной активности на не более чем примерно 25%, не более чем примерно 20%, не более чем примерно 15%, не более чем примерно 12%, не более чем примерно 10%, не более чем примерно 8%, или не более чем примерно 5% после шести месяцев ускоренного тестирования стабильности.

Термин "ускоренное тестирование стабильности" или "ускоренное тестирование хранения" относится к способам тестирования, используемым для имитации эффектов условий относительно длительного хранения на ферментативную активность, которые могут быть осуществлены в относительно короткий период времени. Ускоренные способы тестирования стабильности известны в области техники как надежная альтернатива тестированию стабильности в режиме реального времени, и могут точно предсказать срок годности при хранении биологических продуктов. Такие условия "ускоренного тестирования стабильности" известны в области техники и находятся в соответствии с документом Международной конференции по гармонизации технических требований к регистрации фармацевтических продуктов, предназначенных для применения человеком: тестирование стабильности новых лекарственных средств и продуктов Q1A (International Conference for Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use: Stability Testing of New Drug Substances and Products Q1A), включенным сюда посредством ссылки во всей своей полноте.

Один из способов ускоренного тестирования стабильности включает хранение образцов композиции пищеварительных ферментов в герметичном резервуаре Nialene (нейлон, алюминий, многослойный полиэтилен (polyethylene laminate); GOGLIO SpA, Milan) при 40°С/относительной влажности 75% в течение 6 месяцев.

После хранения (или периодически во время хранения) ферментативную активность в образцах можно тестировать с использованием традиционных способов измерения активности пищеварительных ферментов (например, United States Pharmacopoeia, Pancrelipase: Assay for lipase activity; включенная сюда посредством ссылки во всей своей полноте).

Композиции или лекарственные формы для перорального введения по настоящему изобретению могут также дополнительно содержать один или более чем один стабилизатор, который усиливает или улучшает стабильность композиций или лекарственных форм для перорального введения по настоящему изобретению. Неограничивающие примеры подходящих стабилизаторов включают пролин, трегалозу, декстран, мальтозу, сахарозу, маннит, полиолы, силикагель, аминогуанидин, пиридоксамин, безводные соли металлов, такие как гидрокарбонат натрия оксид магния, оксид кальция, оксид алюминия и их смеси. Один или более чем один стабилизатор может иметь содержание влаги примерно 3% или меньше и/или активность воды 0,6 или меньше.

Неограничивающие примеры подходящих форм трегалозы, которые могут быть использованы в композициях или лекарственных формах для перорального введения по настоящему изобретению, включают дигидрат трегалозы (TD), аморфную трегалозу (AT), безводную трегалозу (например, безводную аморфную трегалозу (ААТ), безводную кристаллическую трегалозу (ACT)). Порошкообразная безводная трегалоза может содержать любые ААТ и/или ACT. Термин "трегалоза", как он используется здесь, относится к любой физической форме трегалозы, включая безводную, частичного гидратированную, полностью гидратированную и их смеси и растворы. Термин "безводная трегалоза" относится к любой физической форме трегалозы, содержащей меньше чем 2% воды. Безводные формы трегалозы могут содержать 0-2% воды. Аморфная трегалоза содержит примерно 2-9% воды и дигидрат трегалозы содержит примерно 9-10% воды. Безводная трегалоза может быть получена как описано в PCT/GB97/00367, включенном здесь посредством ссылки во всей своей полноте. В одном из воплощений композиции или лекарственные формы для перорального введения по настоящему изобретению содержат один или более чем один стабилизированный пищеварительный фермент и безводную трегалозу.

Количество безводной трегалозы (ААТ или ACT) в композиции по настоящему изобретению может находиться в диапазоне примерно 5-50%, 5-40%, 5-30%, 5-20%, 5-15%, 5-10%, 7-15% или примерно 5%, примерно 7%, примерно 10%, примерно 15% или примерно 20%.

Безводная трегалоза может быть включена в композиции или лекарственные формы для перорального введения по настоящему изобретению в виде порошка. Размер частиц порошка безводной трегалозы может находиться в диапазоне примерно 2-2000 мкм.

Композиции или лекарственные формы для перорального введения по настоящему изобретению, содержащие один или более чем один стабилизированный пищеварительный фермент и безводную трегалозу, обеспечивают улучшенную стабильность фермента. Полагают, что безводная трегалоза стабилизирует композиции или лекарственные формы для перорального введения по настоящему изобретению путем абсорбирования или связывания влаги из окружающей среды, или оставшейся при изготовлении влаги, или остаточной влаги в самой композиции.

В зависимости от предполагаемого применения и требуемых композиций массовое отношение стабилизированного пищеварительного фермента к стабилизатору находится в диапазоне от примерно 99:1 до 80:20. Стабилизатор может быть включен в композиции или лекарственные формы для перорального введения по настоящему изобретению путем влажного или сухого смешивания по меньшей мере одного стабилизированного пищеварительного фермента с по меньшей мере одним стабилизатором. В одном воплощении один или более чем один стабилизированный пищеварительный фермент подергают сухому смешиванию с одним или более чем одним стабилизатором. В еще одном воплощении один или более чем один стабилизированный пищеварительный фермент подвергают влажному смешиванию с одним или более чем одним стабилизатором.

Дополнительно к стабилизированному пищеварительному ферменту и/или стабилизатору(ам) композиции или лекарственные формы для перорального введения по настоящему изобретению могут дополнительно содержать один или более чем один фармацевтически приемлемый эксципиент. Термин "эксципиенты" включает другие фармацевтически приемлемые ингредиенты, добавленные к активному(ым) компоненту(ам) композиции (например, стабилизированным пищеварительным ферментам) с целью усовершенствования технологического процесса, стабильности, вкусовых качеств и т.д. Неограничивающие примеры подходящих эксципиентов включают фармацевтически приемлемые связующие вещества, стабилизаторы, разрыхлители (disintegrants), смазывающие вещества, скользящие вещества (glidants), разбавители и их смеси и т.д. Специалисту в области фармацевтических композиций будет понятно, что конкретный эксципиент может осуществлять множественные функции в композиции. Таким образом, например, связующее вещество может также действовать в качестве разбавителя и т.д. Эксципиенты могут иметь содержание влаги примерно 3% или меньше и/или активность воды примерно 0,6 или меньше.

Неограничивающие примеры подходящих связующих веществ включают крахмалы, сахара (например, лактозу), сахарные спирты (например, ксилит, сорбит, мальтит), целлюлозу (например, микрокристаллическую целлюлозу), модифицированные целлюлозы (например, гидроксипропилцеллюлозу, натриевую карбоксиметилцеллюлозу), альгиновую кислоту, поливинилпирролидон (повидон) и их смеси. Неограничивающие примеры подходящих разрыхлителей включают двухосновный фосфат кальция, дигидрат двухосновного фосфата кальция, трехосновный фосфат кальция, альгиновую кислоту, гидроксипропилцеллюлозу, кальциевую карбоксиметилцеллюлозу, натриевую карбоксиметилцеллюлозу, поперечно сшитую натриевую карбоксиметилцеллюлозу, набухающие ионообменные смолы, альгинаты, формальдегид-казеин, целлюлозу, натриевую кроскармеллозу, кросповидон (например, поперечно сшитый поливинилпирролидон), микрокристаллическую целлюлозу, натрия карбоксиметилкрахмал, натрий крахмал гликолят, крахмалы (кукурузный крахмал, рисов