Композиция для поддержания функции тромбоцитов

Композиция для поддержания функции тромбоцитов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

[Область техники]

Настоящее изобретение относится к композиции для поддержания функции тромбоцитов, способу получения тромбоцитов, препарату крови, содержащему тромбоциты, и к способу поддержания функции тромбоцитов в препарате крови, где используют производное N-гидроксиформамида.

[Предшествующий уровень техники]

Для лечения связанных с кровью заболеваний, примером которых является лейкоз, крайне важным является стабилизация размножения и поддержания клеток крови в количестве, необходимом для такого лечения. Таким образом, к настоящему времени многие исследователи пытались эффективно размножать гемопоэтические стволовые клетки или гемопоэтические клетки-предшественники.

Среди клеток крови мегакариоциты представляют собой клетки-предшественники тромбоцитов, т.е., клетки, продуцирующие тромбоциты, и известно, что они для продукции тромбоцитов формируют структуру протромбоцитов (цитоплазматическое образование) и играют важную роль в терапевтических приложениях. Тромбоциты необходимы для свертывания кровь (гемостаза). Таким образом, потребность в тромбоцитах при лейкозе, трансплантации костного мозга, противоопухолевой терапии и т.д. является крайне высокой.

Кроме способа сбора крови у доноров, используемого до настоящего времени, тромбоциты пробовали получать посредством введения тромбопоэтина (TPO) и посредством дифференцировки клеток пуповинной крови или костного мозга клетки в мегакариоциты. Также недавно был опробован способ, в котором ex vivo размножают гемопоэтические клетки-предшественники с получением из таких клеток-предшественников тромбоцитов. Например, авторы настоящего изобретения опубликовали способ эффективного получения тромбоцитов в относительно большом количестве из капсулообразной структуры, включающей гемопоэтические клетки-предшественники после получения капсулообразной структуры из эмбриональных стволовых клеток (ES клетки) человека (PTL 1); способ эффективного получения зрелых мегакариоцитов и тромбоцитов из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPS клетки) в культуральной системе in vitro (PTL 2) и т.д.

Как описано выше, достигнут прогресс в исследованиях способов получения тромбоцитов по существу экзогенно. Однако функционирование получаемых тромбоцитов является недостаточно стабильным. По этой причине необходимо разработать способ, позволяющий получать большое количество функциональных тромбоцитов, поддающихся хранению в течение длительного периода времени.

Связывание тромбоцитов и внеклеточного матрикса является важным процессом для индукции свертывания крови (гемостаз, формирование тромба и т.п.). Полагают, что этот процесс инициируется, когда рецептор тромбоцита GPIb связывается с фактором фон Виллебранда (VWF) посредством α-субъединицы (GPIbα). Однако опубликовано, что в условиях при температуре приблизительно 37°C, металлопротеиназа ADAM17 (дезинтегриновый и металлопептидазный домен 17) отщепляет внеклеточную область GPIbα (высвобождение посредством расщепления), таким образом, ингибируя ассоциацию между GPIbα и VWF, и тромбоциты теряют способность к коагуляции крови (NPL 1 и 2).

Таким образом, полагают, что для поддержания функции тромбоцитов, получаемых in vitro, необходимо подавлять по меньшей мере активность ADAM17. Фактически, авторы настоящего изобретения сообщили, что функцию тромбоцитов, получаемых in vitro, можно поддерживать, добавляя ингибитор (такой как GM6001), непосредственно ингибирующий металлопротеиназную активность, или ингибитор MAP-киназы p38, опосредованно ингибирующий стимуляцию активности металлопротеиназы, такой как ADAM17 (PTL 3), при соответствующем расписании.

Однако ингибиторы, такие как GM6001, ингибируют активность не только ADAM17, но также и других металлопротеиназ (в частности, MMP9 и MMP14, важных для гемопоэтической функции). Таким образом, когда такие ингибиторы используют для получения тромбоцитов in vitro, ингибиторы следует добавлять в определенный период, когда наблюдают наиболее обильную продукцию тромбоцитов. Поскольку решение такой сложной задачи, как выбор правильного расписания, требуется при культивировании клеток с плохой однородностью и репродуктивностью, способ получения тромбоцитов с применением этих ингибиторов пока еще является неудовлетворительным для получения большого количества функциональных тромбоцитов и, в частности, для организации предприятия для системы получения тромбоцитов.

Кроме того, неселективные ингибиторы металлопротеиназ ингибируют активность всех металлопротеиназ, таких как металлопротеиназы мембранного типа, секретируемые металлопротеиназы и ADAM. Таким образом, полагают, что применение in vivo приводит к риску различных побочных эффектов (вредные воздействия, вызываемые ингибированием важных MMP или ADAM, действующих на другие органы). Фактически, так как неселективные ингибиторы металлопротеиназ вызывают тяжелый побочный эффект, называемый скелетно-мышечным синдромом, множество разработок этих ингибиторов остановлено (NPL 3). Кроме того, полагают, что ингибитор со структурой гидроксамовой кислоты, такой как GM6001, должен обладать мутагенностью (NPL 4). Таким образом, тромбоциты, получаемые способом с применением указанного выше ингибитора, неудовлетворительны даже с точки зрения безопасности.

При этом в настоящее время не существует эффективного способа хранения тромбоцитов, получаемых у живых доноров, отличного от способа, где тромбоциты хранят с перемешиванием при температуре от 20°C до 24°C. Таким образом, для поддержания функции тромбоцитов эффективным полагают получение тромбоцитов в условиях комнатной температуры (от 20°C до 24°C), даже когда используют способ с подавлением металлопротеиназной активности ADAM17. Однако в условиях комнатной температуры до настоящего времени вообще не производилось проверки возможности или невозможности получения клеток пуповинной крови или костного мозга, дифференцированных в мегакариоциты, возможности или невозможности получения тромбоцитов из гемопоэтических клеток-предшественников, получаемых из ES клеток, или т.п.

Как описано выше, соединение практически пригодное к применению в качестве активного ингредиента композиции для поддержания функции тромбоцитов все еще не открыто. Таким образом, способ получения функционально стабильных тромбоцитов in vitro и, в частности, способ, подходящий для массового получения высокобезопасных тромбоцитов до настоящего времени не разработан.

[Список цитируемых ссылок]

[Патентная литература]

[PTL 1] Международная публикация № WO2008/041370

[PTL 2] Международная публикация № WO2009/122747

[PTL 3] Международная публикация № WO2009/119105

[Непатентная литература]

[NPL 1] Bergmeier et al., Circulation Research, 2004, vol. 95, pp. 677-683

[NPL 2] Bergmeier et al., Blood, 2003, vol. 102, pp. 4229 to 4235

[NPL 3] Peterson et al., Cardiovasc. Res., 2006, vol. 69, pp. 677 to 687

[NPL 4] Skipper et al., Cancer Res., 1980, vol. 40, pp. 4704 to 4708

[Сущность изобретения]

[Техническая задача]

Настоящее изобретение осуществлено с учетом описанных выше проблем традиционных способов. Задачей настоящего изобретения является идентификация соединения, способного поддерживать функцию тромбоцитов посредством специфического ингибирования металлопротеиназной активности ADAM17 с супрессией отщепления GPIbα. Другими задачами настоящего изобретения является предоставление композиции для поддержания функции тромбоцитов, для эффективного получения тромбоцитов и для улучшения качества хранения препарата крови, которые все достигаются использованием идентифицированного соединения.

[Решение задачи]

Для решения указанных выше задач авторы настоящего изобретения провели серьезные исследования. В результате авторы изобретения выявили, что культивирование в условиях комнатной температуры 25° не приводит к дифференцировке гемопоэтических клеток-предшественников, получаемых из ES клеток, iPS клеток или т.п., в мегакариоциты или к получению тромбоцитов из мегакариоцитов, а предпочтительны условия культивирования при температуре приблизительно 37°C. Таким образом, далее авторы настоящего изобретения проводили поиск соединения, способного к специфическому ингибированию опосредованного ADAM17 отщепления GPIbα при культивировании при температуре приблизительно 37°C. В результате, найдено следующее. Производные N-гидроксиформамида с конкретной структурой обладают ингибирующим действием, специфичным для ADAM17. Когда к культуральной системе для получения тромбоцитов или к получаемым из периферической крови человека тромбоцитам добавляли производные N-гидроксиформамида, отщепление GPIbα было подавлено, и функция тромбоцитов в температурных условиях при приблизительно 37°C также сохранялась. Авторы настоящего изобретения выявили, что вследствие такого действия идентифицированных производных N-гидроксиформамида, эти производные очень подходят для эффективного получения тромбоцитов, улучшения качества хранения препарата крови, содержащего тромбоциты, и т.д. Эти открытия привели к осуществлению настоящего изобретения.

Настоящее изобретение более конкретно относится к указанным ниже открытиям.

(1) Композиция для поддержания функции тромбоцитов, где композиция в качестве активного ингредиента содержит соединение, представленное приведенной ниже общей формулой (I), или его соль, или его сольват:

где

X представляет собой фениленовую группу;

Y представляет собой любой из атома водорода и -(CH₂)_mR¹;

где

m представляет собой любое целое число от 0 до 4; и

R¹ представляет собой любой из

где R² представляет собой любую алкильную группу от C1 до C6, которая может быть замещенной, арильную группу, которая может быть замещенной, и алкоксигруппу от C1 до C6;

каждый из R³ и R⁴ независимо представляет собой любой из атома водорода и алкильной группы от C1 до C6, или R³ и R⁴ вместе с соседним атомом азота могут формировать азотсодержащий гетероцикл; и

R⁵ представляет собой любой из атома водорода, алкильной группы от C1 до C6 и алкилсульфонильной группы от C1 до C6; и

Z представляет собой любой из атома водорода и алкильной группы от C1 до C6.

(2) Композиция по (1), где соединение, представленное общей формулой (I), представляет собой любое из

N-[2-(4-бут-2-инилоксибензолсульфонил)-1-(4-диэтиламинометилфенил)этил]-N-гидроксиформамида и

N-{4-[2-(4-бут-2-инилоксибензолсульфонил)-1-(формилгидроксиамино)этил]бензил}метансульфонамида.

(3) Композиция по любому из (1) и (2) в форме любого из реагента для поддержания функции тромбоцитов и добавки к препарату крови, содержащему тромбоциты.

(4) Способ получения тромбоцитов, где способ включает добавление к культуральной системе для дифференцировки мегакариоцитов из клеток, способных к дифференцировке в мегакариоциты, и получения тромбоцитов из мегакариоцитов, соединения, представленного приведенной ниже общей формулой (I), или его соли, или его сольвата:

где

X представляет собой фениленовую группу;

Y представляет собой любой из атома водорода и -(CH₂)_mR¹;

где

m представляет собой любое целое число от 0 до 4; и

R¹ представляет собой любой из

где R² представляет собой любую алкильную группу от C1 до C6, которая может быть замещенной, арильную группу, которая может быть замещенной, и алкоксигруппу от C1 до C6;

каждый из R³ и R⁴ независимо представляет собой любой из атома водорода и алкильной группы от C1 до C6, или R³ и R⁴ вместе с соседним атомом азота могут формировать азотсодержащий гетероцикл; и

R⁵ представляет собой любой из атома водорода, алкильной группы от C1 до C6 и алкилсульфонильной группы от C1 до C6; и

Z представляет собой любой из атома водорода и алкильной группы от C1 до C6.

(5) Способ по (4), где соединение, представленное общей формулой (I), представляет собой любое из

N-[2-(4-бут-2-инилоксибензолсульфонил)-1-(4-диэтиламинометилфенил)этил]-N-гидроксиформамида и

N-{4-[2-(4-бут-2-инилоксибензолсульфонил)-1-(формилгидроксиамино)этил]бензил}метансульфонамида.

(6) Способ по любому из (4) и (5), где температура культивирования в культуральной системе составляет от 35 до 38°C.

(7) Культура, которая представляет собой культуральную систему для дифференцировки мегакариоцитов из клеток, способных к дифференцировке в мегакариоциты, и для получения тромбоцитов из мегакариоцитов, и которую добавляют к системе с соединением, представленным приведенной ниже общей формулой (I), или с его солью, или с его сольватом:

где

X представляет собой фениленовую группу;

Y представляет собой любой из атома водорода и -(CH₂)_mR¹;

где

m представляет собой любое целое число от 0 до 4; и

R¹ представляет собой любой из

где R² представляет собой любую алкильную группу от C1 до C6, которая может быть замещенной, арильную группу, которая может быть замещенной, и алкоксигруппу от C1 до C6;

каждый из R³ и R⁴ независимо представляет собой любой из атома водорода и алкильной группы от C1 до C6, или R³ и R⁴ вместе с соседним атомом азота могут формировать азотсодержащий гетероцикл; и

R⁵ представляет собой любой из атома водорода, алкильной группы от C1 до C6 и алкилсульфонильной группы от C1 до C6; и

Z представляет собой любой из атома водорода и алкильной группы от C1 до C6.

(8) Культура по (7), где соединение, представленное общей формулой (I), представляет собой любое из

N-[2-(4-бут-2-инилоксибензолсульфонил)-1-(4-диэтиламинометилфенил)этил]-N-гидроксиформамида и

N-{4-[2-(4-бут-2-инилоксибензолсульфонил)-1-(формилгидроксиамино)этил]бензил}метансульфонамида.

(9) Препарат крови, содержащий тромбоциты и соединение, представленное приведенной ниже общей формулой (I), или его соль, или его сольват:

где

X представляет собой фениленовую группу;

Y представляет собой любой из атома водорода и -(CH₂)_mR¹;

где

m представляет собой любое целое число от 0 до 4; и

R¹ представляет собой любой из

где R² представляет собой любую алкильную группу от C1 до C6, которая может быть замещенной, арильную группу, которая может быть замещенной, и алкоксигруппу от C1 до C6;

каждый из R³ и R⁴ независимо представляет собой любой из атома водорода и алкильной группы от C1 до C6, или R³ и R⁴ вместе с соседним атомом азота могут формировать азотсодержащий гетероцикл; и

R⁵ представляет собой любой из атома водорода, алкильной группы от C1 до C6 и алкилсульфонильной группы от C1 до C6; и

Z представляет собой любой из атома водорода и алкильной группы от C1 до C6.

(10) Препарат крови по (9), где соединение, представленное общей формулой (I), представляет собой любое из

N-[2-(4-бут-2-инилоксибензолсульфонил)-1-(4-диэтиламинометилфенил)этил]-N-гидроксиформамида и

N-{4-[2-(4-бут-2-инилоксибензолсульфонил)-1-(формилгидроксиамино)этил]бензил}метансульфонамида.

(11) Способ поддержания функции тромбоцитов в препарате крови, где способ включает добавление в препарат крови, содержащий тромбоциты, соединения, представленного приведенной ниже общей формулой (I), или его соли, или его сольвата:

где

X представляет собой фениленовую группу;

Y представляет собой любой из атома водорода и -(CH₂)_mR¹;

где

m представляет собой любое целое число от 0 до 4; и

R¹ представляет собой любой из

где R² представляет собой любую алкильную группу от C1 до C6, которая может быть замещенной, арильную группу, которая может быть замещенной, и алкоксигруппу от C1 до C6;

каждый из R³ и R⁴ независимо представляет собой любой из атома водорода и алкильной группы от C1 до C6, или R³ и R⁴ вместе с соседним атомом азота могут формировать азотсодержащий гетероцикл; и

R⁵ представляет собой любой из атома водорода, алкильной группы от C1 до C6 и алкилсульфонильной группы от C1 до C6; и

Z представляет собой любой из атома водорода и алкильной группы от C1 до C6.

(12) Способ по (11), где соединение, представленное общей формулой (I), представляет собой любое из

N-[2-(4-бут-2-инилоксибензолсульфонил)-1-(4-диэтиламинометилфенил)этил]-N-гидроксиформамида и

N-{4-[2-(4-бут-2-инилоксибензолсульфонил)-1-(формилгидроксиамино)этил]бензил}метансульфонамида.

[Полезные эффекты изобретения]

Производные N-гидроксиформамида, раскрываемые в настоящем изобретении, способны к поддержанию функции тромбоцитов даже в температурных условиях приблизительно при 37°C посредством специфического ингибирования металлопротеиназной активности ADAM17 с супрессией отщепления GPIbα. Таким образом, производные делают возможным получение большого количества функционально стабильных тромбоцитов in vitro, и поддержание качества препарата крови, содержащего тромбоциты.

[Краткое описание чертежей]

[Фиг.1] Фиг.1 представляет собой схематическое изображение для иллюстрации способа индукции мегакариоцитов/тромбоцитов из гемопоэтических клеток-предшественников, получаемых из ES клеток или т.п., в условиях комнатной температуры.

[Фиг.2] Фиг.2 представляет собой диаграмму, демонстрирующую количество мегакариоцитов, продуцируемых из получаемых из ES клеток гемопоэтических клеток-предшественников посредством культивирования в условиях комнатной температуры. Единицы по вертикальной оси представляют собой количество клеток/лунку.

[Фиг.3] Фиг.3 представляет собой диаграмму, демонстрирующую общее количество тромбоцитов, продуцируемых из получаемых из ES клеток гемопоэтических клеток-предшественников посредством культивирования в условиях комнатной температуры. Единицы по вертикальной оси представляют собой количество клеток/лунку.

[Фиг.4] Фиг.4 представляет собой диаграмму, демонстрирующую количество мегакариоцитов, продуцируемых из получаемых из пуповинной крови CD34(+) клеток посредством культивирования в условиях комнатной температуры. Единицы по вертикальной оси представляют собой количество клеток/лунку.

[Фиг.5] Фиг.5 представляет собой диаграмму, демонстрирующую общее количество тромбоцитов, продуцируем из получаемых из пуповинной крови CD34(+) клеток посредством культивирования в условиях комнатной температуры. Единицы по вертикальной оси представляют собой количество клеток/лунку.

[Фиг.6] <Протокол 1> иллюстрирует применение расписания введения соединения (S-45282 или S-45457) по настоящему изобретению в процессе индукции дифференцировки из получаемых из ES клеток- или iPS клеток гемопоэтических клеток-предшественников в мегакариоциты/тромбоциты. <Протокол 2> иллюстрирует, что отмытые тромбоциты получали из периферической крови человека и к ним добавляли соединение (S-45282 или S-45457) по настоящему изобретению.

[Фиг.7] Фиг.7 представляет собой диаграмму для иллюстрации результатов подтверждения поддерживающего функцию действия GM6001 и S-45282 на получаемые из ES клеток тромбоциты, когда каждое из соединений добавляли к культуральной система в течение 2 суток (2 суток). Вертикальная ось представляет собой проценты (%) CD42b (GPIbα)(+) и CD42b (GPIbα)(-), где общее количество тромбоцитов (CD41(+)) принимают за 100.

[Фиг.8] Фиг.8 представляет собой диаграмму, демонстрирующую общее количество получаемых из ES клеток тромбоцитов, получаемых при добавлении к культуральной системе GM6001 или S-45282 в течение 2 суток (2 суток). Единицы по вертикальной оси представляют собой количество клеток/лунку.

[Фиг.9] Фиг.9 представляет собой диаграмму для иллюстрации результата подтверждения эффектов поддержания GM6001 и S-45282 функции получаемых из ES клеток тромбоцитов, когда каждое из соединений добавляли к культуральной системе в течение 8 суток (8 суток). Вертикальная ось представляет собой проценты (%) CD42b (GPIbα)(+) и CD42b (GPIbα)(-), где общее количество тромбоцитов (CD41(+)) принимают за 100.

[Фиг.10] Фиг.10 представляет собой диаграмму, демонстрирующую общее количество получаемых из ES клеток тромбоцитов, получаемых, когда к культуральной системе добавляли GM6001 или S-45282 в течение 8 суток (8 суток). Единицы по вертикальной оси представляют собой количество клеток/лунку.

[Фиг.11] Фиг.11 представляет собой диаграмму, демонстрирующую количество получаемых из ES клеток тромбоцитов (количество CD41(+)CD42b(+) и CD41(+)CD42b(-)), получаемых, когда к культуральной системе добавляли GM6001, S-45282 или S-45457 в течение 8 суток. Единицы по вертикальной оси представляют собой количество клеток/лунку.

[Фиг.12] Фиг.12 представляет собой диаграмму для иллюстрации результата подтверждения поддерживающего функцию действия GM6001, S-45282 и S-45457 на получаемые из ES клеток тромбоциты, когда каждое из соединений добавляли к культуральной системе в течение 8 суток. Вертикальная ось представляет собой процент (%) CD42b (GPIbα)(+), где общее количество тромбоцитов (CD41(+)) принимают за 100.

[Фиг.13] Фиг.13 представляет собой диаграмму, демонстрирующую общее количество получаемых из ES клеток тромбоцитов, получаемых, когда к культуральной системе добавляли GM6001 или S-45457 в течение 8 суток. Единицы по вертикальной оси представляют собой количество клеток/лунку. Значение представляет собой среднее + стандартная ошибка (n=4).

[Фиг.14] Фиг.14 представляет собой диаграмму для иллюстрации зависимости поддерживающего функцию действия S-45457 на получаемые из ES клеток тромбоциты от концентрации. Вертикальная ось представляет собой процент (%) CD42b (GPIbα)(+), где общее количество тромбоцитов принимают за 100%. Значение представляет собой среднее + стандартная ошибка (n=4). # (знак решетки) означает p<0,1.

[Фиг.15] Фиг.15 представляет собой диаграмму, демонстрирующую общее количество получаемых из iPS клеток тромбоцитов, получаемых, когда к культуральной системе добавляли GM6001 или S-45457 в течение 8 суток. Единицы по вертикальной оси представляют собой количество клеток/лунку. Значение представляет собой среднее + стандартная ошибка (n=4).

[Фиг.16] Фиг.16 представляет собой диаграмму для иллюстрации зависимости поддерживающего функцию действия S-45457 на получаемые из iPS клеток тромбоциты от концентрации. Вертикальная ось представляет собой процент (%) CD42b (GPIbα)(+), где общее количество тромбоцитов принимают за 100. * (звездочка) и ** (две звездочки) означают p<0,05 и p<0,01, соответственно.

[Фиг.17] Фиг.17 представляет собой диаграмму для иллюстрации зависимости поддерживающего функцию действия S-45457 на получаемые из периферической крови тромбоциты от концентрации. Вертикальная ось представляет собой процент CD41(+)CD42b (GPIbα)(+), где общее количество тромбоцитов принимают за 1,00. Значение представляет собой среднее значение + стандартная ошибка (n=4). ** (две звездочки) означают p<0,01.

[Фиг.18] На фиг.18 представлены точечные диаграммы для иллюстрации поддерживающего функцию действия S-45457 и ингибиторов p38 на получаемые из периферической крови тромбоциты.

[Фиг.19] Фиг.19 представляет собой диаграмму для иллюстрации поддерживающего функцию действия GM6001, S-45457 и ингибиторов p38 на получаемые из периферической крови тромбоциты. Вертикальная ось представляет собой процент CD41(+)CD42b(GPIbα)(+) относительно общего количества тромбоцитов, которое принимают за 1,00. Значение представляет собой среднее значение + стандартная ошибка (n=4).

[Фиг.20] Фиг.20 представляет собой диаграмму, демонстрирующую общее количество получаемых из ES клеток тромбоцитов, получаемых, когда к культуральной системе добавляли GM6001, S-45457 или ингибиторы p38 в течение 8 суток. Единицы по вертикальной оси представляют собой количество клеток/лунку.

[Фиг.21] Фиг.21 представляет собой диаграмму для иллюстрации результата подтверждения поддерживающего функцию действия GM6001, S-45457 и ингибиторов p38 на получаемые из ES клеток тромбоциты, когда каждое из соединений добавляли к культуральной системе в течение 8 суток. Вертикальная ось представляет собой процент (%) CD42b (GPIbα)(+), где общее количество тромбоцитов принимают за 100.

[Фиг.22] Фиг.22 представляет собой диаграмму для иллюстрации результата подтверждения поддерживающего функцию действия GM6001, S-45457 и S-45282 на получаемые из периферической крови тромбоциты. Вертикальная ось представляет собой процент (%) CD42b (GPIbα)(+), где общее количество тромбоцитов принимают за 100.

[Фиг.23] На фиг.23 представлены диаграммы для иллюстрации результата подтверждения поддерживающего функцию действия GM6001, S-45457, S-45282 и ингибиторов p38 в получаемой из периферической крови PRP. Вертикальная ось представляет собой проценты (%) CD41(+)CD42b(+) и CD41(+)CD42b(-), где общее количество тромбоцитов (CD41(+)) принимают за 100%.

[Фиг.24] На фиг.24 представлены точечные диаграммы для иллюстрации поддерживающего функцию действия GM6001, S-45457, S-45282 и ингибитора p38 на получаемые из периферической крови тромбоциты.

[Фиг.25] На фиг.25 представлены точечные диаграммы для иллюстрации зависимости поддерживающего функцию действия S-45457 на получаемые из периферической крови тромбоциты от концентрации.

[Фиг.26] Фиг.26 представляет собой диаграмму для иллюстрации результата хронологической оценки адгезионной способности тромбоцитов, получаемых в присутствии S-45457.

[Фиг.27] Фиг.27 представляет собой диаграмму для иллюстрации результата оценки адгезионной способности тромбоцитов, получаемых в присутствии S-45457.

[Фиг.28] На фиг.28 представлены микрофотографии во время лазерного облучения (0 секунд) и через 20 секунд, демонстрирующие формирование тромба у мышей, которым инъецировали тромбоциты, получаемые в присутствии S-45457.

[Фиг.29] Фиг.29 представляет собой диаграмму для иллюстрации вклада тромбоцитов, получаемых в присутствии S-45457 в формирование тромба. Вертикальная ось представляет собой процент (%) количества тромбоцитов человека относительно общего количества тромбоцитов (мышь + человек), вовлеченных в формирование тромба, которое получали, исследуя обтурирующие тромбы, индуцируемые в капилляры брыжейки мышей, которым проводили переливание каждого из образцов. Значение представляет собой среднее процентов + стандартная ошибка, получаемые при исследовании 20 кровеносных сосудов.

[Описание вариантов осуществления]

Композиция по настоящему изобретению представляет собой композицию для поддержания функции тромбоцитов, где композиция в качестве активного ингредиента содержит соединение, представленное приведенной ниже общей формулой (I), или его соль, или его сольват:

где

X представляет собой фениленовую группу;

Y представляет собой любой из атома водорода и -(CH₂)_mR¹;

где

m представляет собой любое целое число от 0 до 4; и

R¹ представляет собой любой из

где R² представляет собой любую алкильную группу от C1 до C6, которая может быть замещенной, арильную группу, которая может быть замещенной, и алкоксигруппу от C1 до C6;

каждый из R³ и R⁴ независимо представляет собой любой из атома водорода и алкильной группы от C1 до C6, или R³ и R⁴ вместе с соседним атомом азота могут формировать азотсодержащий гетероцикл; и

R⁵ представляет собой любой из атома водорода, алкильной группы от C1 до C6 и алкилсульфонильной группы от C1 до C6; и

Z представляет собой любой из атома водорода и алкильной группы от C1 до C6.

В соединении, представленном указанной выше общей формулой (I), каждое из "от C1 до C6" и "от C6 до C14" означает, что количество атомов углерода находится в диапазоне от 1 до 6 и от 6 до 14, соответственно.

"Алкильная группа от C1 до C6" из "алкильной группы от C1 до C6, которая может быть замещенной" в R², R³, R⁴, R⁵ и Z, означает неразветвленную или разветвленную алкильную группу от C1 до C6, и ее конкретные примеры включают метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, н-бутильную группу, изобутильную группу, трет-бутильную группу, втор-бутильную группу, н-пентильную группу, трет-амильную группу, 3-метилбутильную группу, неопентильную группу, н-гексильную группу и т.д.

Заместитель в указанной выше "алкильной группе от C1 до C6, которая может быть замещенной" включает гидроксильную группу, атом галогена, цианогруппу, нитрогруппу, алкоксигруппу от C1 до C6, карбоксильную группу, алкоксикарбонильную группу от C1 до C6 и т.д. По меньшей мере одна или несколько из них могут быть замещенными по любому и каждому замещаемому положениям. В случае, когда соединение содержит несколько заместителей, заместители могут быть одинаковыми или различными и замещать на одном и том же атоме углерода или на различных атомах углерода.

"Атом галогена" означает атом фтора, атом хлора, атом брома, атом йода.

"Алкоксигруппа от C1 до C6" означает алкоксигруппу, в которой алкильная группа имеет то же значение, как указанная выше "алкильная группа от C1 до C6", для которой, например, существует указываемая неразветвленная или разветвленная алкоксигруппа, такую как метоксигруппа, этоксигруппа, н-пропоксигруппа, изопропоксигруппа, н-бутоксигруппа, изобутоксигруппа, трет-бутоксигруппа, втор-бутоксигруппа, н-пентилоксигруппа, трет-амилоксигруппа, 3-метилбутоксигруппа, неопентилоксигруппа, н-гексилоксигруппа и т.д.

"Алкоксикарбонильная группа от C1 до C6" означает группу, в которой алкильная группа, исключая ее оксикарбонильную группу, представляет собой неразветвленную или разветвленную алкильную группа от C1 до C6, включая, например, метоксикарбонильную группу, этоксикарбонильную группу, н-пропоксикарбонильную группу, изопропоксикарбонильную группу, н-бутоксикарбонильную группу, изобутоксикарбонильную группу, трет-бутоксикарбонильную группу, втор-бутоксикарбонильную группу, н-пентилоксикарбонильную группу, трет-амилоксикарбонильную группу, 3-метилбутоксикарбонильную группу, неопентилоксикарбонильную группу, н-гексилоксикарбонильную группу и т.д.

"Азотсодержащий гетероцикл", который формируют R³ и R⁴ вместе с соседним атомом азота, включает, например, азотсодержащий гетероцикл с количеством членов от 5 до 7, содержащий в дополнение к атомам углерода по меньшей мере один атом азота в качестве составляющего цикл атома, и может дополнительно содержать один или два гетероатома, выбранных из атома кислорода, атома серы и атома азота. Предпочтительные примеры азотсодержащего гетероцикла включают пиперидиновый цикл, пиперазиновый цикл, морфолиновый цикл, тиоморфолиновый цикл, пирролидиновый цикл, имидазолидиновый цикл и т.д.

"Арильная группа" из "арильной группы, которая может быть замещенной" в R² означает ароматический углеродный цикл, предпочтительно ароматический углеродный цикл от C6 до C14, и включает, например, фенильную группу, нафтильную группу и т.д.

Заместитель на ароматическом цикле в указанной выше "арильной группе, которая может быть замещенной" включает гидроксильную группу, атом галогена, цианогруппу, нитрогруппу, трифторметильную группу, алкильную группу от C1 до C6, которая может быть замещенной, алкоксигруппу от C1 до C6, карбоксильную группу, алкоксикарбонильную группу от C1 до C6 и т.д. По меньшей мере одна или несколько из них могут быть замещенными по любому или каждому из замещаемых положений. В случае, когда соединение содержит несколько заместителей, заместители могут быть одинаковыми или различными, и могут замещать на одном и том же атоме углерода или на различных атомах углерода. В них "атом галогена", "алкильная группа от C1 до C6, которая может быть замещенной", "алкоксигруппа от C1 до C6" и "алкоксикарбонильная группа от C1 до C6" имеют те же значения, как указано выше.

"Алкилсульфонильная группа от C1 до C6" в R⁵ означает алкилсульфонильную группу, в которой алкильная группа имеет то же значение, как значение указанной выше "алкильной группы от C1 до C6", включая, например, метансульфонильную группу, этансульфонильную группу и т.д.

В случае, когда соединение, представленное общей формулой (I), содержит ассиметричный атом углерода, в изобретение включены все его рацематы и диастереомеры, а также индивидуальные оптически активные формы соединения. В случае, когда соединение включает геометрический изомер, в изобретение включены все из его (E) формы и (Z) формы, а также их смеси.

Конкретно не определяя, соль соединения, представленного общей формулой (I), может представлять собой его любую фармацевтически приемлемую соль, включая, например, соли с неорганическим основанием, соли с органическим основанием, соли с органической кислотой, соли c неорганической кислотой, соли с аминокислотой и т.д. Примеры солей с неорганическим основанием включают соли щелочных металлов и соли щелочноземельных металлов, такие как литиевые соли, натриевые соли, калиевые соли, кальциевые соли, магниевые соли и т.д. Примеры солей с органическим основанием включают триэтиламиновые соли, пиридиновые соли, этаноламиновые соли, циклогексиламиновые соли, дициклогексиламиновые соли, дибензилэтаноламиновые соли и т.д. Примеры солей c органической кислотой включают формиаты, ацетаты, тартраты, малеаты, сукцинаты, лактаты, малаты, аскорбаты, оксалаты, гликолаты, фенилацетаты, метансульфонаты и т.д. Примеры солей с неорганической кислотой включают гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты, сульфаматы, нитраты и т.д. Примеры солей с аминокислотой включают соли с глицином, соли с аланином, соли с аргинином, глутаминаты, аспартаты и т.д.

Соединение, представленное общей формулой (I), может иметь форму пролекарственного средства. Примеры пролекарственного средства включают сложный метиловый эфир, сложный этиловый эфир и аминоалкиловые сложноэфирные производные карбоксильной группы соединения общей формулы (I), ацетатные, формиатные и бензоатные производные гидроксильной группы и функциональной аминогруппы соединения общей формулы (I) и т.д., однако которыми изобретение не ограничено.

Соединение, представленное указанной выше общей формулой (I), можно получать различными способами, но его эффективно можно получать способом, указанным ниже. Следует отметить, что конкретные примеры "защитной группы" для применения в способе получения, указанном ниже, включают трет-бутильную группу, бензильную группу, o-метилбензильную группу, п-нитробензильную группу, п-метоксибензильную группу, o-хлорбензильную группу, 2,4-дихлорбензильную группу, п-бромбензильную группу, аллильную группу, трет-бутоксикарбонильную группу, бензилоксикарбонильную группу, о-метилбензилоксикарбонильную группу, п-нитробензилоксикарбонильную группу, п-метоксибензилоксикарбонильную группу, o-хлорбензилоксикарбонильную группу, 2,4-дихлорбензилоксикарбонильную группу, п-бромбензилоксикарбонильную группу, аллилоксикарбонильную группу, трет-бутилдиметилсилильную группу, трет-бутилдифенилсилильную группу, триэтилсилильную группу, триметилсилильную группу, триизопропилсилильную группу, метоксиметильную группу, тетрагидропиранильную группу, карбонильные защитные группы (например, защитные группы с этандиолом, пропандиолом, меркаптоэтанолом, меркаптопропанолом, этандитиолом, пропандитиолом и т.д.) и т.д.

Соединение, представленное общей формулой (I), можно получать, например, посредством реакции из представленных ниже стадии 1 и стадии 2.

Схема 1:

(В формулах X, Y и Z имеют те же значения, как указано выше).

<Стадия 1>

На стадии 1 к соединению (II) добавляют гидроксиламин или его соль с получением соединения, представленного общей формулой (III). В случае, когда гидроксиламин представляет собой соль (гидрохлорид, ацетат и т.д.), реакцию присоединения проводят в присутствии неорганического основания, такого как карбонат калия, карбонат натрия, гидрокарбонат натрий, гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид лития и т.д. Конкретно не определяя, реакционный растворитель может представлять собой любой растворитель, не препятствующий реакции в значительной степени, но предпочтительно представляет собой воду, тетрагидрофуран, простой циклопентилметиловы