Антитела к fcrh5, их иммуноконъюгаты и способы их применения

Антитела к fcrh5, их иммуноконъюгаты и способы их применения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Ссылка на список последовательностей

Данная заявка на изобретение содержит перечень последовательностей, который был получен посредством EFS-Web и включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Указанная копия ASCII была создана 9 сентября 2011 г., файл был назван GNE0351P.txt и имеет размер 96,991 байта.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Данное изобретение описывает композиции, используемые для лечения гематобластозов у млекопитающих, а также способы использования таких композиций для указанных целей.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Злокачественные опухоли (рак) являются второй ведущей причиной смертности в Соединенных штатах Америки после сердечных заболеваний (Boring et al., CA Cancel J. Clin. 43:7 (1993)). Рак характеризуется увеличением количества патологических клеток (или клеток новообразования), произошедших из здоровой ткани, с образованием опухолевой массы, инвазией таких клеток новообразования в прилегающие ткани и образованием злокачественных клеток, которые, в конце концов, распространяются посредством кровеносной или лимфатической системы в региональные лимфатические узлы и отдаленные участки организма в результате процесса, называемого метастазированием. При наличии рака клетки пролиферируют в условиях, при которыхздоровые клетки не стали бы расти. Рак проявляет себя в виде целого ряда форм, которые характеризуются по различной степени инвазивности и агрессивности.

Виды рака, включающие клетки, образующиеся в ходе гематопоэза, т.е. процесса образования клеточных элементов крови, таких как лимфоциты, лейкоциты, тромбоциты, эритроциты и клетки-естественные киллеры, относятся к гематобластозам. Лимфоциты, находящиеся в крови и лимфатической ткани, играют важную роль в иммунном ответе и подразделяются на два основных класса лимфоцитов: В-лимфоциты (В-клетки) и Т-лимфоциты (Т-клетки), которые опосредуют гуморальный и клеточно-опосредованный иммунитет, соответственно.

В-клетки созревают в костном мозге, и при выходе из костного мозга такие клетки имеют возможность экспрессировать на своей поверхности антигенсвязывающее антитело. При первой встрече нативного антитела с антигеном, к которому специфично мембраносвязанное антитело, клетка начинает быстро делиться, и ее потомство дифференцирует в В-клетки памяти и эффекторные клетки, называемые «плазмацитами». В-клетки памяти имеют большую продолжительность жизни и продолжают экспрессировать мембраносвязанное антитело с такой же самой специфичностью, что и исходная родительская клетка. Плазмациты не вырабатывают мембраносвязанного антитела, но вместо этого вырабатывают антитело в форме, предполагающей секрецию. Секретированные антитела являются основной молекулой-эффектором в гуморальном иммунитете.

Т-клетки созревают в тимусе, обеспечивающем среду для пролиферации и дифференциации незрелых Т-клеток. Во время созревания Т-клеток, последние подвергаются реаранжировке генов, отвечающих за рецептор Т-клеток и положительный и отрицательный отбор, что позволяет определить фенотип клеточной поверхности зрелой Т-клетки. Характерными маркерами клеточной поверхности зрелых Т-клеток являются комплекс CD3:T-клеточный рецептор и один из корецепторов (CD4 или CD8).

В попытках открыть эффективные клеточные мишени для лечения рака, исследователи решили идентифицировать трансмембранные или связанные иным образом с мембраной полипептиды, которые специфическим образом экспрессируются на поверхности раковых клеток одного или нескольких отдельных видов в сравнении с одним или несколькими типами здоровых нераковых клеток. Часто такие мембраносвязанные полипептиды экспрессируются на поверхности раковых клеток в большем количестве, чем на поверхности нераковых клеток. Идентификация таких опухолеассоциированных антигенов-полипептидов клеточной поверхности позволила специфически использовать раковые клетки в качестве мишени для их разрушения в ходе терапий, основанных на использовании антител. В данном случае сообщается, что основанная на использовании антитела терапия оказалась очень эффективной в лечении определенных видов рака. Например, ГЕРЦЕПТИН® и РИТУКСАН® (оба производства Genentech Inc., Южный Сан-Франциско, шт. Калифорния) являются антителами, которые с успехом использовались для лечения рака молочной железы и неходжкинской лимфомы, соответственно. В частности, ГЕРЦЕПТИН® является рекомбинантным гуманизированным ДНК-производным моноклональным антителом, которое избирательно связывается с внеклеточным доменом протоонкогена человеческого эпидермального фактора роста 2 (HER2). Гиперэкспрессия белка HER2 отмечается в 25-30% случаев первичного рака молочной железы. РИТУКСАН® получен путем генной инженерии и представлен химерным мышиным/человеческим моноклональным антителом, чье действие направлено против антигена CD20, находящегося на поверхности нормальных и злокачественных В-лимфоцитов. Оба таких антитела вырабатываются рекомбинантным образом в клетках яичников китайского хомячка (CHO-клетках).

В ходе других попыток открыть эффективные клеточные мишени для лечения рака исследователи идентифицировали (1) не связанные с мембраной полипептиды, которые специфически вырабатываются одним или несколькими типами раковых клеток в сравнении с одним или несколькими отдельными типами нераковых здоровых клеток, (2) полипептиды, вырабатываемые раковыми клетками на таком уровне экспрессии, который существенно превышает таковой уровень одной или нескольких здоровых нераковых клеток, или (3) полипептиды, экспрессия которых особенно ограниченна только одним (или очень ограниченным количеством различных типов) типом ткани как при наличии, так и при отсутствии рака (например, здоровая ткань предстательной железы и ткань опухоли предстательной железы). Такие полипептиды могут оставаться локализированными внутри клетки или могут секретироваться раковыми клетками. Более того, такие полипептиды могут экспрессироваться не только раковыми клетками, но также и клетками, которые вырабатывают и/или секретируют полипептиды, обладающие усиливающим или повышающим рост воздействием на раковые клетки. Подобные секретируемые полипептиды часто представлены белками, придающими раковым клеткам преимущество в росте в сравнении со здоровыми клетками, и включают, например, ангиогенные факторы, факторы клеточной адгезии, факторы роста и т.п. Идентификация антагонистов подобных не связанных с мембраной полипептидов, как ожидается, может помочь выявить эффективных терапевтических агентов для лечения подобных типов рака. Более того, идентификация схемы экспрессии таких полипептидов окажется полезной для диагностики отдельных типов рака у млекопитающих.

Несмотря на представленные выше достижения в лечении рака у млекопитающих, существует большая потребность в дополнительных терапевтических агентах, позволяющих определить наличие опухоли у млекопитающего и эффективно ингибировать рост клеток новообразования, соответственно. Согласно этому, целью данного изобретения является идентификация полипептидов, связанных с клеточной мембраной, секретируемых или внутриклеточных полипептидов, экспрессия которых особенно ограниченно только одним типом ткани (или очень ограниченным количеством типов тканей), кроветворными тканями, как в присутствии, так и в отсутствии рака, а также использование таких полипептидов и кодирующих их кислот для получения композиций, которые могут использоваться в лечении и/или определении гематобластозов у млекопитающих.

При В-клеточных злокачественных новообразованиях, включая В-клеточную лимфому и миелому, часто встречаются аномалии хромосомы 1q21, однако гены, задействованные в ходе таких аберраций, в большинстве своем неизвестны. Хромосомные аномалии дисков 1q21-q23 встречаются наиболее часто среди нарушений генома при В-клеточной неходжкинской лимфоме и множественной миеломе. Среди подтипов неходжкинской лимфомы, точки разрыва транслокаций 1q21-q23, включая транслокации и дупликации, часто отмечались в виде одиночной хромосомной аномалии при фолликулярной и диффузной В-крупноклеточной лимфоме (ДВКЛ), В-клеточной лимфоме маргинальной зоны и лимфоме Беркитта. Путем клонирования точек разрыва хромосомальной транслокации t(1:14)(q21:q32) в клеточной линии миеломы было выявлено два гена, названных геном рецептора суперсемейства иммуноглобулинов, ассоциированным с транслокацией (IRTA), 1 и IRTA2. IRTA2 идентичен последовательностям, обозначаемым BXMAS1 (Nakayama et al., Biochm. Biophys. Res. Commun. 285:830-7, 2001) и FcRH5 (Davis et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:9772-7, 2001). IRTA1 и IRTA2 являются членами семейства родственных генов IRTA.

FcRH5 (или IRTA2) является поверхностным клеточным рецептором, гомологичным семейству рецепторов Fc. Он обычно экспрессируется в зрелых В-клетках и имеет разное распределение в периферических лимфоидных органах в сравнении с FcRH4 (IRTA1). IRTA1 экспрессируется в В-клетках маргинальной зоны, в то время как IRTA2 также экспрессируется в центроцитах и иммунобластах зародышевого центра. Экспрессия IRTA2 прекращается в клеточных линиях множественной миеломы и лимфомы Беркитта с аномалиями 1q21 (см. Miller et al., Blood 99:2662-2669, 2002). Высокая частота вовлечения структурных перестроек 1q21 в В-клетках злокачественных новообразований указывает, что IRTA1 и IRTA2 играют критическую роль в патогенезе таких заболеваний (см. опубликованную PCT заявку № WO 01/38490; опубликованную заявку на патент США № 20080292632) (см. также Polson, et al., Int Immunol. 2006 Sep.; 18(9):1363-73).

Принимая во внимание экспрессию FcRH5, предпочтительным будет выработка терапевтических антител к антигену FcRH5, чем создание минимальной или отсутствующей антигенности при введении пациентам, особенно при хроническом лечении. Данное изобретение удовлетворяет этой и другим потребностям. Данное изобретение представляет антитела к FcRH5, которые помогут преодолеть ограничения используемых в настоящее время терапевтических композиций, а также дополнительные преимущества, которые окажутся очевидными на основе представленного ниже подробного описания.

Использование конъюгатов антитело-препарат (КАП), т.е. иммуноконъюгатов, для локальной поставки цитотоксических или цитостатических агентов, т.е. препаратов для гибели или ингибирования опухолевых клеток при лечении рака (Lambert, J. (2005) Curr. Opinion in Pharmacology 5:543-549; Wu et al., (2005) Nature Biotechnology 23(9):1137-1146; Payne, G. (2003) Cancer Cell 3:207-212; Syrigos and Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614; Niculescu-Duvaz and Springer (1997) Adv. Drug Del. Rev. 26:151-172; US 4975278), позволяет производить целенаправленную поставку молекулы препарата к опухолям, а также внутриклеточное накопление таких молекул, при этом системное введение таких неконъюгированных лекарственных препаратов может привести к недопустимым уровням токсичности для здоровых клеток, а также опухолевых клеток, которые должны элиминироваться (Baldwin et al., (1986) Lancet pp. (Mar. 15, 1986):603-05; Thorpe, (1985) “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review,” в Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, A. Pinchera et al., (ed.s.), pp. 475-506). Попытки для улучшения терапевтического индекса, т.е. максимальной эффективности и минимальной токсичности КАП, были направлены на избирательность поликлональных (Rowland et al., (1986) Cancer Immunol. Immunother., 21:183-87) и моноклональных антител (МАТ), а также свойства связывания и высвобождения препарата (Lambert, J. (2005) Curr. Opinion in Pharmacology 5:543-549). Молекулы препаратов, используемых в конъюгатах препарата с антителом, включают белки бактериальных токсинов, такие как дифтерийный токсин, белки токсинов растений, такие как рицин, небольшие молекулы, такие как ауристатины, гелданамицин (Mandler et al., (2000) J. of the Nat. Cancer Inst. 92(19):1573-1581; Mandler et al., (2000) Bioorganic & Med. Chem. Letters 10:1025-1028; Mandler et al., (2002) Bioconjugate Chem. 13:786-791), майтансиноиды (EP 1391213; Liu et al., (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623), калихимицин (Lode et al., (1998) Cancer Res. 58:2928; Hinman et al., (1993) Cancer Res. 53:3336-3342), дауномицин, доксорубицин, метотрексат и виндесин (Rowland et al., (1986) см. выше). Молекулы препаратов могут влиять на цитотоксические и цитостатические механизмы, включая связывание тубулина, связывание ДНК или ингибирование топоизомеразы. Некоторые цитотоксические препараты могут быть неактивными или менее активными при конъюгации с большими антителами или лигандами белковых рецепторов.

Белки ауристатина, ауристатин E (AE) и монометилауристатин (MMAE), синтетические аналоги доластатина (WO 02/088172), были конъюгированы в виде молекул препарата с: (i) химерными моноклональными антителами cBR96 (специфичными к антигену Y Льюиса карциномы); (ii) cAC10, специфичному к CD30 гемобластозов (Klussman, et al., (2004), Bioconjugate Chemistry 15(4):765-773; Doronina et al., (2003) Nature Biotechnology 21(7):778-784; Francisco et al., (2003) Blood 102(4):1458-1465; US 2004/0018194; (iii) антителами к CD20, такими как ритуксан (WO 04/032828), для лечения видов рака с экспрессией CD20 и иммунных расстройств; (iv) антителами к EphB2R 2H9 для лечения колоректального рака (Mao et al., (2004) Cancer Research 64(3):781-788); (v) антителом к E-селектину (Bhaskar et al., (2003) Cancer Res. 63:6387-6394); (vi) трастузумабом (ГЕРЦЕПТИН®, US 2005/0238649), и (vi) антителами к CD30 (WO 03/043583). Варианты ауристатина E описаны в патентах США 5767237 и 6124431. Монометиловый ауристатин Е, конъюгированный с моноклональными антителами, описан в Senter et al., Proceedings of the American Association for Cancer Research, Том 45, номер аннотации 623 (от 28 марта 2004 г.). Аналоги ауристатина MMAE и MMAF были конъюгированы с целым рядом антител (US 2005/0238649).

Стандартные способы присоединения, т.е. связывание посредством ковалентных связей, молекулы препарата с антителом обычно приводят к гетерогенной смеси молекул, в которой молекулы препаратов присоединены к целому ряду участков антитела. Например, цитотоксические препараты обычно конъюгированы с антителами посредством многочисленных остатков лизина антитела, что приводит к образованию гетерогенной смеси конъюгата антитело-препарат. В зависимости от условий реакции, гетерогенная смесь обычно состоит из антител с от 0 до примерно 8 или более присоединенными молекулами. Кроме того, в каждой подгруппе конъюгатов с тем или иным целочисленным соотношением молекул препаратов к антителу существует потенциально гетерогенная смесь, в которой молекула препарата присоединена к различным участкам антитела. Аналитические и препаративные способы могут оказаться недостаточными для сепарации и характеристики молекул конъюгатов антитело-препарат в гетерогенной смеси, образованной в результате реакции конъюгации. Антитела представлены большими, комплексными и структурно различными биомолекулами, часто содержащими много реакционных функциональных групп. Их реакционная способность с линкерными реагентами и промежуточными соединениями препарат-линкер зависят от факторов, таких как рН, концентрация, концентрация соли и ко-растворители. Более того, многоэтапный процесс конъюгации может быть невоспроизводимым по причине затруднений в контроле условий реакции и характеристики реагентов и промежуточных веществ.

Тиолы (цистеин) реакционноспособны при нейтральном значении рН, в отличие от большинства аминов, которые протонированы и менее нуклеофильны при рН около 7. Поскольку несвязанные группы тиолов (меркаптаны, сульфгидрил) относительно реакционноспособны, белки с цистеиновыми остатками часто существуют в окисленной форме в виде дисульфидно-связанных олигомеров или имеют внутренние дисульфидные группы. Внеклеточные белки обычно не имеют свободных тиолов (Garman, 1997, Non-Radioactive Labelling: A Practical Approach, Academic Press, London, стр. 55). Цистеиновые тиоловые группы антитела обычно более реакционноспособные, т.е. более нуклеофильные, относительно электрофильных реагентов конъюгации, чем аминные или гидроксильные группы антитела. Цистеиновые остатки были включены в белки путем процедур генной инженерии для образования ковалентных связей с лигандами или образования новых внутримолекулярных дисульфидных мостиков (Better et al., (1994) J. Biol. Chem. 13:9644-9650; Bernhard et al., (1994) Bioconjugate Chem. 5:126-132; Greenwood et al., (1994) Therapeutic Immunology 1:247-255; Tu et al., (1999) Proc. Natl. Acad. Sci USA 96:4862-4867; Kanno et al., (2000) J. of Biotechnology, 76:207-214; Chmura et al., (2001) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 98(15):8480-8484; US 6248564). Тем не менее, процедура рекомбинации в тиоловых группах цистеина путем мутации различных аминокислотных остатков белка в цистеиновые аминокислоты потенциально проблематична, особенно в случае неспаренных (несвязанного Цис) остатков или остатков, которые относительно доступны для реакции или окисления. В концентрированных растворах белка, например, периплазме E. coli, супернатанте культуры или растворах частично или полностью очищенного белка, неспаренные остатки Цис на поверхности белка могут связываться и окисляться с образованием межмолекулярных дисульфидных связей, а, следовательно, димеров или мультимеров. Образование дисульфидного димера приводит к неактивности нового Цис для конъюгации с препаратом, лигандом или другой меткой. Кроме того, если белок при окислении образует внутримолекулярный дисульфидный мостик между новыми включенными и существующими остатками Цис, обе тиоловых группы Цис недоступны для активного участка и взаимодействий. Кроме того, белок может оставаться неактивным или неспецифическим при неправильном скручивании или потере третичной структуры (Zhang et al., (2002) Anal. Biochem. 311:1-9).

Антитела с введенным цистеином путем рекомбинации были разработаны в виде фрагментов антитела FAB (тиоFab) и экспрессируются в виде моноклональных антител IgG полной длины (тиоМАТ) (Junutula, J.R. et al., (2008) J Immunol Methods 332:41-52; US 2007/0092940, содержание включено в виде ссылки). ТиоFab и тиоМАТ были конъюгированы посредством линкеров в положении новых введенных тиолов цистеина с использованием тио-реакционных линкерных реагентов и препарат-линкерных реагентов для получения конъюгатов антитело-препарат (Тио КАП).

Все процитированные здесь ссылки, включая заявки на патенты и публикации, включены в данный документ в виде ссылки во всей своей полноте.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение описывает антитела к FcRH5 или их функциональные фрагменты, а также способ их использования в лечении гематобластозов.

В одном аспекте изобретение описывает антитело, которое связывается, преимущественно специфически, с любым из описанных выше или ниже полипептидов. В некоторых случаях антитело представлено моноклональным антителом, фрагментом антитела, включая фрагменты Fab, Fab', F(ab')₂ и Fv, диателом, антителом с одним доменом, химерным антителом, гуманизированным антителом, одноцепочечным антителом или антителом, которое конкурентным образом ингибирует связывание полипептидного антитела к FcRH5 с соответствующей антигенной детерминантой. Антитела по данному изобретению могут быть в некоторых случаях представлены в виде конъюгатов с препаратами-ингибиторами роста или цитотоксическим агентом, например токсином, включая, например, ауристатин, майтансиноид, производное долостатина или калихимицина, антибиотик, радиоактивный изотоп, нуклеолитический фермент или т.п. Антитела по данному изобретению могут в некоторых случаях вырабатываться в клетках CHO или бактериальных клетках, и преимущественно индуцировать гибель клетки, с которой они связываются. В целях определения, антитела по данному изобретению могут быть помечены, присоединены к твердому субстрату или т.п.

В одном аспекте изобретение описывает гуманизированное антитело к FcRH5, отличающееся тем, что моновалентная аффинность (т.е. аффинность антитела как фрагмента Fab к FcRH5) или аффинность в двухвалентной форме антитела к FcRH5 (т.е. аффинность антитела как фрагмента IgG к FcRH5) практически такая же, ниже или выше, чем моновалентная аффинность или аффинность в двухвалентной форме, соответственно, мышиного антитела (например, аффинность мышиного антитела как фрагмента Fab или фрагмента IgG к FcRH5) или химерного антитела (например, аффинность химерного антитела как фрагмента Fab или фрагмента IgG к FcRH5), состоящего или включающего последовательность вариабельного домена легкой цепи и тяжелой цепи, как это указано на Фигуре 9 (SEQ ID NO: 18) и Фигуре 10 (SEQ ID NO:20).

В другом своем аспекте изобретение описывает гуманизированное антитело к FcRH5, которое отличается тем, что аффинность антитела в его двухвалентной форме к FcRH5 (например, аффинность антитела в виде IgG к FcRH5) составляет 0,4 нМ, 0,2 нМ или 0,5 нМ.

В одном аспекте описано антитело, связывающееся с FcRH5 и отличающееся тем, что такое антитело состоит, по меньшей мере, из одного, двух, трех, четырех, пяти или шести гипервариабельных участков (HVR), выбираемых из следующих групп:

(i) HVR-L1, включающий последовательность KASQNVGSNVA (SEQ ID NO: 28)

(ii) HVR-L2, включающий последовательность SASYRYS (SEQ ID NO: 29)

(iii) HVR-L3, включающий последовательность QQYKTWT (SEQ ID NO: 30)

(iv) HVR-H1, включающий последовательность GYTFTNYGMN (SEQ ID NO: 37)

(v) HVR-H2, включающий последовательность NTYTGEPTYTDDFKG (SEQ ID NO: 38); и

(vi) HVR-H3, включающий последовательность ARRSIPYYYAMDY (SEQ ID NO: 39). В одном варианте воплощения изобретения остаток номер 9 в HVR-H1 представлен I. В одном варианте воплощения изобретения антитело состоит из HVR-H2 с последовательностью SEQ ID NO: 38. В другом варианте воплощения изобретения, по меньшей мере, участок последовательности каркасного участка представлен консенсусной последовательностью каркасного участка. В другом варианте воплощения изобретения антитело включает 1 консенсусную последовательность каркасного участка подгруппы k человека. В еще одном варианте воплощения изобретения антитело состоит из консенсусной последовательности каркасного участка подгруппы III тяжелой цепи человека. В одном варианте воплощения изобретения последовательность каркасного участка включает замену в положении 11, 12, 13, 18, 19, 20, 75, 78, 82, 82a, 83 и/или 34. В другом варианте воплощения изобретения замещение представлено L11V, V12K, V13K, L18V, R19K, L20V, K75V, V78A, N82I, N82aS, R83K и/или M34I. В еще одном варианте воплощения изобретения последовательность каркасного участка включает замену в положении 12, 13, 34 и/или 78. В еще одном варианте воплощения изобретения замещение представлено V12K, V13K, M34I и/или V78A.

В другом варианте воплощения изобретения антитело включает вариабельный домен легкой цепи, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 19. В одном варианте воплощения изобретения антитело включает вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 21. В другом варианте воплощения изобретения антитело включает вариабельный домен легкой цепи, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 19.

В еще одном варианте воплощения изобретения антитело включает вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 21. В другом варианте воплощения изобретения антитело включает вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 22. В другом варианте воплощения изобретения антитело включает вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 23.

В одном варианте воплощения изобретения антитело включает вариабельный домен тяжелой цепи, состоящий из одного, двух, трех или четырех аминокислотных последовательностей каркасных участков, выбираемых из SEQ ID No: 33, 34, 35 и 36. В других вариантах воплощения изобретения антитело включает вариабельный домен легкой цепи, состоящий из одного, двух, трех или четырех аминокислотных последовательностей каркасных участков, выбираемых из SEQ ID NO: 24, 25, 26, 27 и 28. В другом варианте воплощения изобретения антитело включает вариабельный домен тяжелой цепи, состоящий из одного, двух, трех или четырех аминокислотных последовательностей каркасных участков, имеющих, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотными последовательностями, выбираемыми из SEQ ID NO: 33, 34, 35 и 36. В других вариантах воплощения изобретения антитело включает вариабельный домен легкой цепи, состоящий из одного, двух, трех или четырех аминокислотных последовательностей каркасных участков, имеющих, по меньшей мере, 90% идентичность аминокислотной последовательности в сравнении с аминокислотными последовательностями, выбираемыми из SEQ ID NO: 24, 25, 26, 27 и 28.

В одном аспекте изобретения описано антитело, связывающееся с FcRH5 и отличающееся тем, что указанное антитело состоит, по меньшей мере, из одного варианта HVR, при этом последовательность такого варианта HVR включает модификацию, по меньшей мере, одного остатка последовательности, указанной как SEQ ID NO: 28, 29, 30, 37, 38 или 39. В еще одном варианте воплощения изобретения модификация представлена замещением, вставкой или делецией.

В другом варианте воплощения изобретение описывает гуманизированное антитело к FcRH5, отличающееся тем, что моновалентная аффинность антитела к человеческому FcRH5 практически такая же, что и моновалентная аффинность мышиного антитела, включающего последовательность вариабельного домена легкой цепи и тяжелой цепи, как это указано на Фигуре 9 (SEQ ID NO: 18) и Фигуре 10 (SEQ ID NO: 20).

В одном аспекте изобретение описывает гуманизированное антитело к FcRH5, отличающееся тем, что моновалентная аффинность антитела к человеческому FcRH5, по меньшей мере, в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 раз больше, чем моновалентная аффинность мышиного антитела, включающего последовательность вариабельного домена легкой цепи и тяжелой цепи, как это указано на Фигуре 9 (SEQ ID NO: 18) и Фигуре 10 (SEQ ID NO: 20).

В одном аспекте изобретение описывает гуманизированное антитело к FcRH5, отличающееся тем, что моновалентная аффинность антитела к человеческому FcRH5, по меньшей мере, в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 или 60 раз меньше, чем моновалентная аффинность мышиного антитела, включающего последовательность вариабельного домена легкой цепи и тяжелой цепи, как это указано на Фигуре 9 (SEQ ID NO: 18) и Фигуре 10 (SEQ ID NO: 20).

В другом аспекте изобретение описывает гуманизированное антитело к FcRH5, отличающееся тем, что аффинность антитела в его двухвалентной форме к человеческому FcRH5 практически такая же, что и аффинность мышиного антитела в его двухвалентной форме, включающего последовательность вариабельного домена легкой цепи и тяжелой цепи, как это указано на Фигуре 9 (SEQ ID NO: 18) и Фигуре 10 (SEQ ID NO: 20).

В одном аспекте изобретение описывает гуманизированное антитело к FcRH5, отличающееся тем, что аффинность антитела к человеческому FcRH5 в его двухвалентной форме, по меньшей мере, в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 раз больше, чем аффинность мышиного или химерного антитела в его двухвалентной форме, включающего последовательность вариабельного домена легкой цепи и тяжелой цепи, как это указано на Фигуре 9 (SEQ ID NO: 18) и Фигуре 10 (SEQ ID NO: 20).

В другом аспекте изобретение описывает гуманизированное антитело к FcRH5, отличающееся тем, что аффинность антитела к человеческому FcRH5 в его двухвалентной форме, по меньшей мере, в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 или 60 раз меньше, чем аффинность мышиного или химерного антитела в его двухвалентной форме, включающего последовательность вариабельного домена легкой цепи и тяжелой цепи, как это указано на Фигуре 9 (SEQ ID NO: 18) и Фигуре 10 (SEQ ID NO: 20).

В еще одном аспекте изобретение описывает гуманизированное антитело к FcRH5, отличающееся тем, что аффинность такого антитела в его двухвалентной форме к человеческому FcRH5 составляет 0,4 нМ. В одном варианте воплощения изобретения аффинность антитела в его двухвалентной форме к человеческому FcRH5 составляет 0,4±0,04 нМ.

В еще одном аспекте изобретение описывает гуманизированное антитело к FcRH5, отличающееся тем, что аффинность такого антитела в его двухвалентной форме к человеческому FcRH5 составляет 0,2 нМ. В одном варианте воплощения изобретения аффинность антитела в его двухвалентной форме к человеческому FcRH5 составляет 0,2±0,02 нМ.

В еще одном аспекте изобретение описывает гуманизированное антитело к FcRH5, отличающееся тем, что аффинность такого антитела в его двухвалентной форме к человеческому FcRH5 составляет 0,5 нМ. В одном варианте воплощения изобретения аффинность антитела в его двухвалентной форме к человеческому FcRH5 составляет 0,5±0,01 нМ.

Во всех аспектах изобретения аффинность связывания выражена в виде значения K_d. В одном аспекте изобретения аффинность связывания измеряется с помощью анализа Biacore или радиоиммунноанализа.

В еще одном аспекте изобретение описывает гуманизированное антитело к FcRH5, отличающееся тем, что гуманизированное антитело при его конъюгации с цитотоксическим агентом ингибирует рост клеток опухоли.

В другом аспекте изобретение описывает гуманизированное антитело к FcRH5, отличающееся тем, что гуманизированное антитело при его конъюгации с цитотоксическим агентом ингибирует рост клеток опухоли.

В одном варианте воплощения изобретения гуманизированное антитело и химерное антитело являются моновалентными или двухвалентными. В другом варианте воплощения изобретения гуманизированное антитело и химерное антитело включают один участок Fab, присоединенный к участку Fc.

В другом аспекте изобретение описывает антитело, состоящее из вариабельного домена тяжелой цепи, включающего последовательность HVR1-HC, HVR2-HC и/или HVR3-HC, указанную на Фигуре 12 (SEQ ID NO: 37-39). В одном варианте воплощения изобретения вариабельный домен включает последовательность FR1-HC, FR2-HC, FR3-HC и/или FR4-HC, указанную на Фигуре 12 (SEQ ID NO: 33-36). В другом варианте воплощения изобретения антитело включает последовательность CH1 и/или Fc, указанную на Фигуре 12 (SEQ ID NO: 40 и/или 41).

В еще одном аспекте изобретение описывает антитело, состоящее из вариабельного домена легкой цепи, включающего последовательность HVR1-LC, HVR2-LC и/или HVR3-LC, указанную на Фигуре 12 (SEQ ID NO: 28-30). В одном варианте воплощения изобретения вариабельный домен включает последовательность FR1-LC, FR2-LC, FR3-LC и/или FR4-LC, указанную на Фигуре 12 (SEQ ID No: 24-27). В другом варианте воплощения изобретения антитело включает последовательность CL1, указанную на Фигуре 12 (SEQ ID NO: 31).

В одном аспекте изобретение описывает полипептид, состоящий из последовательности, указанной на Фигуре 11 (SEQ ID NO: 21). В другом аспекте изобретение описывает полипептид, состоящий из последовательности, указанной на Фигуре 9 (SEQ ID NO: 19). В другом аспекте изобретение описывает полипептид, состоящий из последовательности, указанной на Фигуре 11 (SEQ ID NO: 22). В другом аспекте изобретение описывает полипептид, состоящий из последовательности, указанной на Фигуре 11 (SEQ ID NO: 23).

В другом аспекте изобретение описывает антитело, полученное в процессе (а) культивации клетки, экспрессирующей антитело, состоящее из описанного здесь вариабельного домена тяжелой цепи и описанного здесь вариабельного домена легкой цепи; и (б) изоляции антитела из указанной культивируемой клетки.

В другом аспекте изобретение описывает антитело, состоящее из описанного здесь вариабельного домена тяжелой цепи и описанного здесь вариабельного домена легкой цепи. В одном варианте воплощения изобретения антитело моновалентно и включает участок Fc.

В одном аспекте изобретение описывает полинуклеотид, кодирующий описанное здесь антитело. В одном варианте воплощения изобретение описывает вектор, состоящий из полинуклеотида. В другом варианте воплощения изобретение описывает клетку-хозяина, включающую вектор.

В одном аспекте изобретение включает антитело к FcRH5 с включенным в ходе рекомбинации цистеином и состоящим из одного или нескольких несвязанных аминокислот цистеин и последовательности, выбираемой из SEQ ID NO: 251-298. Антитело к FcRH5 с включенным в ходе рекомбинации цистеином может связываться с полипептидом FcRH5. Антитело к FcRH5 с включенным в ходе рекомбинации цистеином может быть получено путем процесса, включающего замену одного или нескольких аминокислотных остатков исходного антитела к FcRH5 цистеином.

В одном аспекте изобретение включает антитело к FcRH5 с включенным в ходе рекомбинации цистеином, включающее одну или несколько несвязанных аминокислот цистеин, при этом антитело к FcRH5 с включенным в ходе рекомбинации цистеином связывается с полипептидом FcRH5, и его получают с помощью процесса, состоящего из замены одного или нескольких аминокислотных остатков исходного антитела к FcRH5 цистеином, при этом исходное антитело включает, по меньшей мере, одну последовательность HVR, выбираемую из:

(i) HVR-L1, включающий последовательность KASQNVGSNVA (SEQ ID NO: 28)

(ii) HVR-L2, включающий последовательность SASYRYS (SEQ ID NO: 29)

(iii) HVR-L3, включающий последовательность QQYKTWT (SEQ ID NO: 30)

(iv) HVR-H1, включающий последовательность GYTFTNYGMN (SEQ ID NO: 37)

(v) HVR-H2, включающий последовательность NTYTGEPTYTDDFKG (SEQ ID NO: 38); и

(vi) HVR-H3, включающий последовательность ARRSIPYYYAMDY (SEQ ID NO: 39).

Антитело к FcRH5 с включенным в ходе рекомбинации цистеином может быть представлено моноклональным антителом, фрагментом антитела, химерным антителом, гуманизированным антителом, одноцепочечным антителом или антителом, которое конкурентным образом ингибирует связывание полипептидного антитела к FcRH5 с соответствующей антигенной детерминантой. Антитела по данному изобретению могут быть в некоторых случаях представлены конъюгатами с агентом, ингибирующим рост, или цитотоксическим агентом, таким как токсин, включая, например, ауристатин или майтансиноид. Антитела по данному изобретению могут в некоторых случаях вырабатываться в клетках CHO или бактериальных клетках, и преимущественно ингибируют рост или пролиферацию или индуцируют гибель клетки, с которой они связываются. В целях диагностики, антитела по данному изобретению могут быть помечены, присоединены к твердому субстрату или т.п.

В одном аспекте изобретение описывает способы для получения антител по изобретению. Например, изобретение описывает способ получения антитела к FcRH5 (который, как это определено в данной заявке, включает антитело полной длины или его фрагмент), и такой способ включает экспрессию в подходящей клетке-хозяине рекомбинантного вектора по изобретению, кодирующего указанное антитело (или его фрагмент), и восстановление указанного антитела.

В другом аспекте изобретение описывает биспецифическое антитело, способное связываться с первой клеткой, которая экспрессирует FcRH5, и второй клеткой, экспрессирующей антиген-мишень на клеточной поверхности. В одном варианте воплощения изобретения вторая клетка представлена Т-клеткой. В одном варианте воплощения изобретения антиген-мишень на клеточной поверхности представлен CD3. В определенных вариантах воплощения изобретения биспецифическое антитело представлено антителом с выпуклостью. В одном варианте воплощения изобретения биспецифическое антитело агликозилировано. В одном варианте воплощения изобретения биспецифическое антитело вырабатывается в клетке-хозяине Escherichia coli. В одном варианте воплощения изобретения биспецифическое антитело не содержит одну или несколько эффекторных функций Fc. В одном варианте воплощения изобретения биспецифическое антитело не имеет АЗКЦ.

В одном аспекте изобретение представлено фармацевтической композицией, включающей антитело по изобретению или конъюгат антитело-препарат, а также фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель или вспомогательное вещество.

В одном аспекте изобретение описывает готовое изделие, состоящее из контейнера, включающее композицию, при этом композиция состоит из одного или нескольких антител к FcRH5.

В одном аспекте изобретение описывает набор, состоящий из одного контейнера с композицией, включающей одно или несколько антител к FcRH5, и другого контейнера, включающего буфер.

В одном аспекте изобретение описывает использование антитела к FcRH5 в виде лекарственной формы для терапевтического и/или профилактического использования для лечения заболевания, такого как рак, опухоль и/или нарушение пролиферации клеток.

В одном аспекте изобретение описывает использование готового продукта в виде лекарственной формы для терапевтического и/или профилактического использования для лечения заболевания, такого как рак, опухоль и/или нарушение пролиферации клеток.

В одном аспекте изобретение описывает использование набора в виде лекарственной формы для терапевтического и/или профилактического применения для лечени