Композиции и способы для диагностики и лечения опухолей

Композиции и способы для диагностики и лечения опухолей

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Родственные заявки

По настоящей заявке испрашивается приоритет предварительной заявки на патент США № 61/307338, поданной 23 февраля 2010, и предварительной заявки на патент США № 61/308791, поданной 26 февраля 2010, которые вводятся в настоящую заявку в качестве ссылки в полном объеме.

Область, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к рассматриваемым в настоящем описании композициям, которые могут быть использованы для диагностики и лечения опухоли у млекопитающих, и к способам применения таких композиций.

Предшествующий уровень техники

В Соединенных Штатах, злокачественные опухоли (рак), после болезней сердца, являются вторым лидирующим заболеванием, приводящим к летальному исходу (Boring et al., CA Cancel J. Clin. 43:7 (1993)). Рак характеризуется увеличением числа патологических или опухолевых клеток, происходящих от нормальной ткани, которая пролифирирует с образованием опухолевой массы и инвазией смежных тканей такими неопластическими опухолевыми клетками, а также с образованием злокачественных клеток, которые, в конечном счете, распространяются через систему кровообращения или лимфатическую систему в региональные лимфоузлы и в периферические области по механизму, называемому метастазированием. При раке клетки пролиферируют в условиях, при которых нормальные клетки расти не могут. Само раковое заболевание проявляется в различных формах широкого ряда, характеризующихся различной степенью инвазивности и агрессивности.

В попытках выявления эффективных клеточных мишеней для диагности рака и противораковой терапии были проведены исследования по идентификации трансмембранных или каких-либо других мембраносвязанных полипептидов, которые специфически экспрессируются на поверхности раковых клеток одного или нескольких конкретных типов по сравнению с одной или несколькими нормальными не раковыми клетками. В большинстве случаев, такие мембраносвязанные полипептиды в большом количестве экспрессируются на поверхности раковых клеток, и не экспрессируются на поверхности не раковых клеток. Идентификация таких связанных с опухолью полипептидов-антигенов клеточной поверхности дает возможность специфически разрушать раковые клетки-мишени путем проведения терапии с использованием антител. В этой связи следует отметить, что терапия на основе антител оказалась очень эффективной для лечения некоторых раковых опухолей. Так, например, герцептин (HERCEPTIN®) и ритуксан (RITUXAN®) (оба этих антитела поставляются компанией Genentech Inc., South San Francisco, California) представляют собой антитела, которые с успехом применялись для лечения рака молочной железы и не ходжкинской лимфомы, соответственно. Более конкретно, HERCEPTIN® представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, которое было получено методами рекомбинантных ДНК, и которое селективно связывается с внеклеточным доменом протоонкогена рецептора эпидермального фактора роста 2 человека (HER2). Сверхэкспрессия белка HER2 наблюдалась в 25-30% случаев заболеваний первичным раком молочной железы. RITUXAN® представляет собой генетически сконструированное химерное моноклональное антитело «мышь/человек», направленное против антигена CD20, находящегося на поверхности нормальных и злокачественных В-лимфоцитов. Оба эти антитела рекомбинантно продуцируются в клетках СНО.

Несмотря на упомянутые выше успехи в противораковой терапии млекопитающих, необходимость в получении дополнительных диагностических и терапевтических средств, способных детектировать присутствие опухоли у млекопитающих, и эффективно ингибировать рост опухолевых клеток, соответственно, остается особенно актуальной. В соответствии с этим, целью настоящего изобретения является идентификация полипептидов, а именно, мембраносвязанных полипептидов, которые преимущественно экспрессируются на раковых клетках одного или нескольких типов, но, в основном, не экспрессируются на нормальных клетках или каких-либо других раковых клетках; и применение таких полипептидов и кодирующих их нуклеиновых кислот для получения композиций согласно изобретению, которые могут быть использованы в терапии и в диагностике рака у млекопитающих.

Краткое описание сущности изобретения

В настоящей заявке, заявителями была впервые описана идентификация клеточных полипептидов (и кодирующих их нуклеиновых кислот или фрагментов), которые в более высокой степени экспрессируются на поверхности раковой(ых) клетки(ок) одного или нескольких типов, чем на поверхности нормальных не-раковых клеток одного или нескольких типов. Эти полипептиды были названы в настоящем описании опухолеассоциированными антигенными полипептидами-мишенями (полипептидами «TAT»), и было высказано предположение, что они могут служить в качестве эффективных мишеней для терапии и диагностики рака у млекопитающих.

В соответствии с этим, в одном из своих вариантов, настоящее изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность, которая кодирует опухолеассоциированный антигенный полипептид-мишень или его фрагмент (полипептид «ТАТ»).

В некоторых аспектах изобретения выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, и альтернативно, по меньшей мере примерно на 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична (а) последовательности молекулы ДНК, кодирующей полноразмерный полипептид ТАТ, имеющий описанную в настоящем описании аминокислотную последовательность, аминокислотную последовательность полипептида ТАТ, не содержащую описанного в настоящем описании сигнального пептида, внеклеточный домен трансмембранного полипептида ТАТ с описанным в настоящем описании сигнальным пептидом или без этого сигнального пептида, или любой другой конкретно определенный фрагмент аминокислотной последовательности описанного в настоящем описании полноразмерного полипептида ТАТ или (b) последовательности комплемента молекулы ДНК, описанной в (a).

В других аспектах изобретения выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, и альтернативно, по меньшей мере примерно на 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична (а) последовательности молекулы ДНК, содержащей описанную в настоящем описании кодирующую последовательность кДНК полноразмерного полипептида ТАТ, описанную в настоящем описании последовательность, кодирующую полипептид ТАТ без сигнального пептида, описанную в настоящем описании последовательность, кодирующую внеклеточный домен трансмембранного полипептида ТАТ с описанным в настоящем описании сигнальным пептидом или без этого сигнального пептида, или описанную в настоящем описании последовательность, кодирующую любой другой конкретно определенный фрагмент аминокислотной последовательности описанного в настоящем описании полноразмерного полипептида ТАТ, или (b) последовательности комплемента молекулы ДНК, описанной в (a).

В другом аспекте настоящее изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид ТАТ, у которого трансмембранный домен либо делетирован, либо инактивирован, или последовательность, комплементарную такой кодирующей нуклеотидной последовательности, где трансмембранный(е) домен(ы) такого (таких) полипептида(ов) описан(ы) в настоящей заявке. Поэтому, в настоящем изобретении рассматриваются растворимые внеклеточные домены описанных в настоящем описании полипептидов ТАТ.

В других аспектах настоящее изобретение относится к выделенным молекулам нуклеиновой кислоты, которые гибридизуются (a) с нуклеотидной последовательностью, кодирующей полипептид ТАТ, имеющий описанную в настоящем описании полноразмерную аминокислотную последовательность, описанную в настоящем описании аминокислотную последовательность полипептида ТАТ без сигнального пептида; внеклеточный домен трансмембранного полипептида ТАТ с описанным в настоящем описании сигнальным пептидом или без этого сигнального пептида; или описанный в настоящем описании любой другой конкретно определенный фрагмент аминокислотной последовательности полноразмерного полипептида ТАТ; или (b) с последовательностью комплемента нуклеотидной последовательности, описанной в (a). В соответствии с этим, в одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к описанным в настоящем описании фрагментам последовательности, кодирующей полноразмерный полипептид TAT, или к комплементарной ей последовательности, которые могут быть использованы, например, в качестве гибридизационных зондов, применяемых, например, в качестве диагностических зондов, ПЦР-праймеров, антисмысловых олигонуклеотидных зондов, или к фрагментам, которые кодируют полноразмерный полипептид ТАТ, и могут, но необязательно, кодировать полипептид, содержащий сайт связывания с антителом против полипептида ТАТ. Такие фрагменты нуклеиновой кислоты обычно имеют длину по меньшей мере примерно 5 нуклеотидов, и альтернативно, по меньшей мере примерно 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990 или 1000 нуклеотидов, где слово «примерно» в этом контексте описания означает указанную длину нуклеотидной последовательности плюс/минус 10% от указанной длины. Кроме того, такие фрагменты нуклеиновой кислоты обычно состоят из последовательно расположенных нуклеотидов, происходящих от полноразмерной последовательности, кодирующей полипептид ТАТ, или от комплементарной ей последовательности. Следует отметить, что новые фрагменты нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид ТАТ, или комплементарной ей последовательности, могут быть определены рутинным способом путем выравнивания нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид ТАТ, с другими известными нуклеотидными последовательностями с применением любых различных хорошо известных программ выравнивания последовательностей, что позволяет установить, является(ются) ли фрагмент(ы) нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид ТАТ, или комплементарной ей последовательности, новым(и). Все эти новые фрагменты нуклеотидных последовательностей, кодирующих полипептид ТАТ, или комплементарных им последовательностей, рассматриваются в настоящей заявке. Также рассматриваются фрагменты полипептида ТАТ, кодируемые этими фрагментами нуклеотидной молекулы, предпочтительно, фрагменты полипептида ТАТ, содержащие сайт связывания с анти-ТАТ антителом.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенным полипептидам TAT, кодируемым любой из идентифицированных вышевыделенных последовательностей нуклеиновой кислоты.

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к выделенному полипептиду ТАТ, содержащему аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, и альтернативно, по меньшей мере примерно на 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности описанного в настоящем описании полипептида ТАТ, имеющего полноразмерную аминокислотную последовательность, описанной в настоящем описании аминокислотной последовательности полипептида ТАТ без сигнального пептида; описанному в настоящем описании внеклеточному домену трансмембранного белка полипептида ТАТ, содержащего или не содержащего указанный сигнальный пептид; аминокислотной последовательности, кодируемой любой из описанных в настоящем описании последовательностей нуклеиновой кислоты; или любому другому конкретно определенному фрагменту аминокислотной последовательности описанного в настоящем описании полноразмерного полипептида ТАТ.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к выделенному полипептиду ТАТ, содержащему аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью, которая гибридизуется с комплементом молекулы ДНК, кодирующей (a) полипептид TAT, имеющий описанную в настоящем описании полноразмерную аминокислотную последовательность, (b) описанную в настоящем описании аминокислотную последовательность полипептида TAT без сигнального пептида, (с) описанный в настоящем описании внеклеточный домен трансмембранного белка полипептида ТАТ, содержащего или не содержащего сигнальный пептид, (d) аминокислотную последовательность, кодируемую любой из описанных в настоящем описании последовательностей нуклеиновой кислоты, или (e) любой другой конкретно определенный фрагмент описанной в настоящем описании аминокислотной последовательности полноразмерного полипептида ТАТ.

В конкретном аспекте настоящее изобретение относится к выделенному полипептиду TAT, который не содержит N-концевой сигнальной последовательности и/или инициирующего метионина, и кодируется нуклеотидной последовательностью, кодирующей описанную выше аминокислотную последовательность. В настоящей заявке также описаны способы получения такого полипептида, где указанные способы включают культивирование клетки-хозяина, содержащей вектор, который содержит соответствующую кодирующую молекулу нуклеиновой кислоты, в условиях, подходящих для экспрессии полипептида ТАТ, и выделение полипептида ТАТ из клеточной культуры.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к выделенному полипептиду TAT, у которого трансмембранный домен либо делетирован, либо инактивирован. В настоящей заявке также описаны способы получения такого полипептида, где указанные способы включают культивирование клетки-хозяина, содержащей вектор, который содержит соответствующую кодирующую молекулу нуклеиновой кислоты, в условиях, подходящих для экспрессии полипептида ТАТ, и выделение полипептида ТАТ из клеточной культуры.

В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к векторам, содержащим ДНК, кодирующую любой из описанных в настоящем описании полипептидов. Настоящее изобретение также относится к клеткам-хозяевам, содержащим любой из таких векторов. Так, например, клетками-хозяевами могут быть клетки CHO, клетки E. coli или дрожжевые клетки. Настоящее изобретение также относится к способу получения любого из описанных в настоящем описании полипептидов, где указанный способ включает культивирование клеток-хозяев в условиях, подходящих для экспрессии нужного полипептида, и выделение нужного полипептида из клеточной культуры.

В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к выделенным химерным полипептидам, содержащим любой из описанных в настоящем описании полипептидов TAT, слитых с гетерологичным (не являющимся полипептидом TAT) полипептидом. Примерами таких химерных молекул являются любой из описанных в настоящем описании полипептидов TAT, слитых с гетерологичным полипептидом, таким как, например, последовательность эпитопа-метки или Fc-область иммуноглобулина.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителу, которое связывается, предпочтительно, специфически, с любым из вышеописанных или нижеописанных полипептидов. Указанным антителом является, но необязательно, моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело, одноцепочечное антитело или антитело, которое конкурентно ингибирует связывание антитела против полипептида ТАТ с его соответствующим антигенным эпитопом. Антитела согласно изобретению могут быть, но необязательно, конъюгированы с рост-ингибирующим средством или с цитотоксическим средством таким как токсин, включая, например, майтанзиноид или калихеамицин, антибиотик, радиоактивный изотоп, нуклеолитический фермент или т.п. Антитела согласно изобретению могут продуцироваться, но необязательно, в клетках CHO или в бактериальных клетках, и предпочтительно, ингибируют рост или пролиферацию клеток, с которыми они связываются, или индуцируют гибель этих клеток. В диагностических целях, антитела согласно изобретению могут быть детектируемо помечены, присоединены к твердому носителю или т.п.

В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к векторам, содержащим ДНК, кодирующую любое из вышеописанных антител. Так, например, настоящее изобретение также относится к клеткам-хозяевам, содержащим любой из указанных векторов. Такими клетками-хозяевами могут быть, например, клетки CHO, клетки E. coli или дрожжевые клетки. Настоящее изобретение также относится к способу получения любого из описанных в настоящем описании антител, где указанный способ включает культивирование клеток-хозяев в условиях, подходящих для экспрессии нужного антитела, и выделение указанного нужного антитела из клеточной культуры.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к композиции, содержащей описанный в настоящем описании полипептид ТАТ, описанный в настоящем описании химерный полипептид ТАТ или описанное в настоящем описании анти-ТАТ антитело в комбинации с носителем. Указанным носителем является, но необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к промышленному изделию, включающему контейнер и рассматриваемую композицию, содержащуюся в контейнере, где указанная композиция может содержать описанный в настоящем описании полипептид ТАТ, описанный в настоящем описании химерный полипептид ТАТ или описанное в настоящем описании анти-ТАТ антитело. Такое изделие может также включать, но необязательно, этикетку, прикрепленную к контейнеру, или вкладыш в упаковке, вложенной в контейнер, где имеются инструкции по применению рассматриваемой композиции для терапии или диагностики опухоли.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению описанного в настоящем описании полипептида TAT, описанного в настоящем описании химерного полипептида TAT или описанного в настоящем описании антитела против полипептида ТАТ для получения лекарственного препарата, который может быть использован для лечения состояния, восприимчивого к полипептиду TAT, химерному полипептиду TAT или антителу против полипептида TAT.

В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к любому выделенному антителу, содержащему одну или несколько описанных в настоящем описании последовательностей CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 или CDR-H3, или к любому антителу, которое связывается с тем же эпитопом, с которым связывается любое из указанных антител.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу ингибирования роста клеток, которые экспрессируют полипептид TAT, где указанный способ включает приведение в контакт указанных клеток с антителом, которое связывается с полипептидом ТАТ, где связывание антитела с полипептидом TAT приводит к ингибированию роста клеток, экспрессирующих полипептид TAT. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения, клеткой является раковая клетка, а связывание антитела против полипептида TAT приводит к гибели клеток, экспрессирующих полипептид TAT. Антителом является, но необязательно, моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело или одноцепочечное антитело. Антитела, используемые в способах согласно изобретению, могут быть, но необязательно, конъюгированы с рост-ингибирующим средством или цитотоксическим средством, таким как токсин, включая, например, майтанзиноид или калихеамицин, антибиотик, радиоактивный изотоп, нуклеолитический фермент или т.п. Антитела, используемые в способах согласно изобретению, могут, но необязательно, продуцироваться в клетках CHO или в бактериальных клетках.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу терапевтического лечения млекопитающего с раковой опухолью, содержащей клетки, экспрессирующие полипептид ТАТ, где способ включает введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества антитела, которое связывается с полипептидом ТАТ, для эффективного терапевтического лечения опухоли. Антителом является, но необязательно, моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело или одноцепочечное антитело. Антитела, используемые в способах согласно изобретению, могут быть, но необязательно, конъюгированы с рост-ингибирующим средством или цитотоксическим средством, таким как токсин, включая, например, майтанзиноид или калихеамицин, антибиотик, радиоактивный изотоп, нуклеолитический фермент или т.п. Антитела, используемые в способах согласно изобретению, могут, но необязательно, продуцироваться в клетках CHO или в бактериальных клетках.

В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу определения присутствия полипептида ТАТ в образце, который, как предполагается, содержит полипептид ТАТ, где способ включает обработку образца антителом, которое связывается с полипептидом ТАТ (или приведение в контакт образца с антителом) и определение или детектирование связывания антитела против полипептида ТАТ в образце, где наличие такого связывания указывает на присутствие полипептида ТАТ в образце. Указанный образец может содержать, но необязательно, клетки (которые могут быть раковыми клетками), которые, как предполагается, экспрессируют полипептид ТАТ. Антитело, используемое в указанном способе, может быть, но необязательно, детектируемо помечено, присоединено к твердому носителю или т.п.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу диагностики присутствия опухоли у млекопитающего, где способ включает детектирование уровня экспрессии гена, кодирующего полипептид ТАТ (a) в тест-образце клеток ткани, выделенных у указанного млекопитающего, и (b) в контрольном образце известных нормальных не-раковых клеток ткани того же происхождения или того же типа, где более высокий уровень экспрессии полипептида ТАТ в тест-образце по сравнению с контрольным образцом указывает на присутствие опухоли у млекопитающего, у которого был взят указанный тест-образец.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу диагностики присутствия опухоли у млекопитающего, где указанный способ включает (a) приведение в контакт тест-образца, содержащего клетки ткани, выделенные у млекопитающего, с антителом, которое связывается с полипептидом ТАТ, и (b) детектирование образования комплекса «антитело-полипептид ТАТ» в указанном тест-образце, где образование комплекса указывает на присутствие опухоли у млекопитающего. Используемое антитело может быть, но необязательно, детектируемо помечено, присоединено к твердому носителю или т.п., и/или тест-образец клеток ткани берут у индивидуума с подозрением на раковую опухоль.

В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики клеточно-пролиферативного расстройства, связанного с изменением, предпочтительно, с повышением уровня экспрессии или активности полипептида ТАТ, где указанный способ включает введение индивидууму, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества антагониста полипептида ТАТ. Предпочтительным клеточно-пролиферативным расстройством является рак, а антагонистом полипептида ТАТ является антитело против полипептида ТАТ или антисмысловой олигонуклеотид. Эффективное лечение или профилактика клеточно-пролиферативного расстройства может быть достигнуто в результате непосредственного уничтожения клеток или ингибирования роста клеток, экспрессирующих полипептид ТАТ, или подавления активности полипептида ТАТ, стимулирующей рост клеток.

В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу связывания антитела с клеткой, которая экспрессирует полипептид ТАТ, где указанный способ включает приведение в контакт клетки, экспрессирующей полипептид ТАТ, с указанным антителом, в условиях, подходящих для связывания антитела с указанным полипептидом ТАТ, и благоприятствующих такому связыванию. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения, антитело метят молекулой или соединением, которые являются подходящими для качественного и/или количественного определения локализации и/или уровня связывания антитела с клеткой.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу доставки цитотоксического или диагностического средства в клетку, которая экспрессирует полипептид ТАТ, где способ включает получение цитотоксического или диагностического средства, конъюгированного с антителом, которое связывается с указанным полипептидом ТАТ, с образованием конъюгата «антитело-средство», и обработку указанной клетки конъюгатом «антитело-средство». Антителом является, но необязательно, моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело или одноцепочечное антитело.

В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению полипептида ТАТ, нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид ТАТ, или вектора или клетки-хозяина, содержащих указанную нуклеиновую кислоту, или антитела против полипептида ТАТ, для получения лекарственного препарата, который может быть использован для (i) терапии или диагностики рака или опухоли, или (ii) лечения или профилактики клеточно-пролиферативного расстройства.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу ингибирования роста раковой клетки, где рост указанной раковой клетки по меньшей мере частично зависит от рост-потенцирующего действия полипептида ТАТ (где полипептид ТАТ может экспрессироваться либо самой раковой клеткой, либо клеткой, которая продуцирует полипептид(ы), обладающий(е) потенцирующим действием на рост раковых клеток), где указанный способ включает приведение в контакт полипептида ТАТ с антителом, которое связывается с полипептидом ТАТ, что приводит к ингибированию рост-потенцирующей активности полипептида ТАТ, и в свою очередь, к ингибированию роста раковой клетки. Предпочтительно, чтобы рост раковых клеток полностью ингибировался. Еще более предпочтительно, чтобы связывание антитела с полипептидом ТАТ индуцировало гибель раковых клеток. Указанным антителом является, но необязательно, моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело или одноцепочечное антитело. Антитела, используемые в способах согласно изобретению, могут быть, но необязательно, конъюгированы с рост-ингибирующим средством или цитотоксическим средством, таким как токсин, включая, например, майтанзиноид или калихеамицин, антибиотик, радиоактивный изотоп, нуклеолитический фермент или т.п. Антитела, используемые в способах согласно изобретению, могут, но необязательно, продуцироваться в клетках CHO или в бактериальных клетках.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу терапевтического лечения опухоли у млекопитающего, где рост указанной опухоли по меньшей мере частично зависит от рост-потенцирующего действия полипептида ТАТ, где способ включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества антитела, которое связывается с полипептидом ТАТ, и тем самым ингибирует рост-потенцирующую активности указанного полипептида ТАТ, что позволяет осуществлять эффективное терапевтическое лечение опухоли. Антителом является, но необязательно, моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело или одноцепочечное антитело. Антитела, используемые в способах согласно изобретению, могут быть, но необязательно, конъюгированы с рост-ингибирующим средством или цитотоксическим средством, таким как токсин, включая, например, майтанзиноид или калихеамицин, антибиотик, радиоактивный изотоп, нуклеолитический фермент или т.п. Антитела, используемые в способах согласно изобретению, могут, но необязательно, продуцироваться в клетках CHO или в бактериальных клетках.

В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к нижеследующим пунктам возможных притязаний, которые могут быть заявлены в настоящей заявке или в будущих заявках:

1. Выделенная нуклеиновая кислота, имеющая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична (a) молекуле ДНК, кодирующей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, (b) молекуле ДНК, кодирующей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, в которой отсутствует сигнальный пептид, (c) молекуле ДНК, кодирующей внеклеточный домен полипептида SEQ ID NO:2 вместе с его сигнальным пептидом, (d) молекуле ДНК, кодирующей внеклеточный домен полипептида SEQ ID NO:2, в котором отсутствует сигнальный пептид, (e) нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, (f) полноразмерной кодирующей нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, или (g) комплементу (a), (b), (c), (d), (e) или (f).

2. Выделенная нуклеиновая кислота, имеющая (а) нуклеотидную последовательность, которая кодирует аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, (b) нуклеотидную последовательность, которая кодирует аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, в которой отсутствует сигнальный пептид, (c) нуклеотидную последовательность, которая кодирует внеклеточный домен полипептида SEQ ID NO:2, в котором присутствует сигнальный пептид, (d) нуклеотидную последовательность, которая кодирует внеклеточный домен полипептида SEQ ID NO:2, в котором отсутствует сигнальный пептид, (e) нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1, (f) полноразмерную кодирующую область нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, или (g) комплемент (a), (b), (c), (d), (e) или (f).

3. Выделенная нуклеиновая кислота, которая гибридизуется (а) с нуклеиновой кислотой, кодирующей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, (b) с нуклеиновой кислотой, кодирующей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, в которой отсутствует сигнальный пептид, (c) с нуклеиновой кислотой, кодирующей внеклеточный домен полипептида SEQ ID NO:2, в котором присутствует сигнальный пептид, (d) с нуклеиновой кислотой, кодирующей внеклеточный домен полипептида SEQ ID NO:2, в котором отсутствует сигнальный пептид, (e) с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:1, (f) с полноразмерной кодирующей областью нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, или (g) с комплементом (a), (b), (c), (d), (e) или (f).

4. Нуклеиновая кислота по пункту 3, где гибридизацию осуществляют в жестких условиях.

5. Нуклеиновая кислота по пункту 3, которая имеет длину по меньшей мере примерно 5 нуклеотидов.

6. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по пунктам 1, 2 или 3.

7. Вектор экспрессии по пункту 6, где указанная нуклеиновая кислота функционально присоединена к регуляторным последовательностям, распознаваемым клеткой-хозяином, трансформированной указанным вектором.

8. Клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по пункту 7.

9. Клетка-хозяин по пункту 8, которая представляет собой клетку CHO, клетку E. coli или дрожжевую клетку.

10. Способ получения полипептида, включающий культивирование клетки-хозяина по пункту 8, в условиях, подходящих для экспрессии указанного полипептида, и выделение указанного полипептида из клеточной культуры.

11. Выделенный полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична (a) полипептиду SEQ ID NO:2, (b) полипептиду SEQ ID NO:2, в котором отсутствует сигнальный пептид, (c) внеклеточному домену полипептида SEQ ID NO:2, в котором присутствует сигнальный пептид, (d) внеклеточному домену полипептида SEQ ID NO:2, в котором отсутствует сигнальный пептид, (e) полипептиду, кодируемому нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1, или (f) полипептиду, кодируемому полноразмерной кодирующей областью нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 1.

12. Выделенный полипептид, имеющий (a) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, (b) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, в которой отсутствует сигнальная пептидная последовательность, (c) аминокислотную последовательность внеклеточного домена полипептида SEQ ID NO:2, в котором присутствует сигнальная пептидная последовательность, (d) аминокислотную последовательность внеклеточного домена полипептида SEQ ID NO:2, в котором отсутствует сигнальная пептидная последовательность, (e) аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:1, или (f) аминокислотную последовательность, кодируемую полноразмерной кодирующей областью нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1.

13. Химерный полипептид, содержащий полипептид по пункту 11 или 12, слитый с гетерологичным полипептидом.

14. Химерный полипептид по пункту 13, где указанным гетерологичным полипептидом является последовательность эпитопа-метки или Fc-область иммуноглобулина.

15. Выделенное антитело, которое связывается с полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична (a) полипептиду SEQ ID NO:2, (b) полипептиду SEQ ID NO:2, в котором отсутствует сигнальный пептид, (c) внеклеточному домену полипептида SEQ ID NO:2, в котором присутствует сигнальный пептид, (d) внеклеточному домену полипептида SEQ ID NO:2, в котором отсутствует сигнальный пептид, (e) полипептиду, кодируемому нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:1, или (f) полипептиду, кодируемому полноразмерной кодирующей областью нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1.

16. Выделенное антитело, которое связывается с полипептидом, имеющим (a) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, (b) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, в которой отсутствует сигнальная пептидная последовательность, (c) аминокислотную последовательность внеклеточного домена полипептида SEQ ID NO:2, в котором присутствует сигнальная пептидная последовательность, (d) аминокислотную последовательность внеклеточного домена полипептида SEQ ID NO:2, в котором отсутствует сигнальная пептидная последовательность, (e) аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:1, или (f) аминокислотную последовательность, кодируемую полноразмерной кодирующей областью нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1.

17. Антитело по пункту 15 или 16, которое представляет собой моноклональное антитело.

18. Антитело по пункту 15 или 16, которое представляет собой фрагмент антитела.

19. Антитело по пункту 15 или 16, которое представляет собой химерное или гуманизированное антитело.

20. Антитело по пункту 15 или 16, которое конъюгировано с рост-ингибирующим средством.

21. Антитело по пункту 15 или 16, которое конъюгировано с цитотоксическим средством.

22. Антитело по пункту 21, где указанное цитотоксическое средство выбрано из группы, состоящей из токсинов, антибиотиков, радиоактивных изотопов и нуклеолитических ферментов.

23. Антитело по пункту 21, где указанным цитотоксическим средством является токсин.

24. Антитело по пункту 23, где указанный токсин выбран из группы, состоящей из майтанзиноида, калихеамицина и ауристатина.

25. Антитело по пункту 23, где указанным токсином является майтанзиноид.

26. Антитело по пункту 15 или 16, которое продуцируется в бактериях.

27. Антитело по пункту 15 или 16, которое продуцируется в клетках CHO.

28. Антитело по пункту 15 или 16, индуцирующее гибель клеток, с которыми оно связывается.

29. Антитело по пункту 15 или 16, которое является детектируемо меченым.

30. Выделенная нуклеиновая кислота, имеющая нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело по пункту 15 или 16.

31. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по пункту 30, функционально присоединенную к регуляторным последовательностям, распознаваемым клеткой-хозяином, трансформированной указанным вектором.

32. Клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по пункту 31.

33. Клетка-хозяин по пункту 32, которая представляет собой клетку CHO, клетку E. coli или дрожжевую клетку.

34. Способ получения антитела, включающий культивирование клетки-хозяи