Модулирование экспрессии аполипопротеина сiii (аросiii)

Модулирование экспрессии аполипопротеина сiii (аросiii)

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Перечень последовательностей

Данная заявка подана вместе с Перечнем последовательностей в электронном формате. Перечень последовательностей предоставлен в виде файла с названием BIOL0130WOSEQ.TXT, созданного 27 апреля 2012 г. размером 8 кбайт. Информация в электронном формате Перечня последовательностей включена в данное описание путем ссылки в полном объеме.

Область изобретения

В данном описании предложены способы, соединения и композиции для уменьшения экспрессии мРНК и белка Аполипопротеина CIII (ApoCIII), и увеличения активности ЛПВП или ЛПВП у животного. Также, в данном описании предложены способы, соединения и композиции ингибитора ApoCIII для уменьшения связанных с ApoCIII заболеваний или состояний у животного.

Уровень техники

Липопротеины представляют собой шаровидные, мицеллоподобные частицы, которые состоят из неполярного ядра ацилглицеридов и эфиров холестерина, окруженных амфифильным покрытием из белка, фосфолипида и холестерина. Липопротеины классифицируются на 5 широких категорий на основании их функциональных и физических свойств: хиломикроны, липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП), липопротеины промежуточной плотности (ЛППП), липопротеины низкой плотности (ЛПНП) и липопротеины высокой плотности (ЛПВП). Хиломикроны переносят пищевые липиды из кишечника к тканям. ЛПОНП, ЛППП и ЛПНП все переносят триацилглицериды и холестерин от печени к тканям. ЛПВП переносят эндогенный холестерин от тканей к печени

Частицы липопротеинов подвергаются непрерывной метаболической обработке, и их свойства и состав варьируют. Плотность липопротеинов увеличивается без увеличения диаметра частицы, поскольку плотность их внешнего покрытия меньше, чем плотность внутреннего ядра. Белковые компоненты липопротеинов известны как аполипопротеины. Как минимум, 9 аполипопротеинов распространены в значительных количествах среди различных липопротеинов человека.

Аполипопротеин C-III (ApoCIII) представляет собой компонент ЛПВП и богатых триглицеридами липопротеинов (ТГ). Повышение уровня ApoCIII связано с гипертриглицеридемией. Соответственно, ApoCIII играет роль в развитии гипертриглицеридемии, фактора риска заболевания коронарных артерий (Davidsson et al., J. Lipid Res. 2005. 46: 1999-2006). ApoCIII замедляет клиренс богатых триглицеридами липопротеинов, ингибируя липолиз как посредством ингибирования липопротеинлипазы, так и препятствуя связыванию липопротеина с гликозаминогликановой матрицей на поверхности клетки (Shachter, Curr. Opin. Lipidol., 2001, 12, 297-304).

Ген, кодирующий человеческий аполипопротеин C-III (который также носит название АРОСЗ, APOC-III, ApoCIII и АРО C-III), был клонирован в 1984 г. тремя исследовательскими группами (Levy-Wilson et al., DNA, 1984, 3, 359-364; Protter et al., DNA, 1984, 3, 449-456; Sharpe et al., Nucleic Acids Res., 1984, 12, 3917-3932). Кодирующая последовательность прерывается тремя интронами (Protter et al., DNA, 1984, 3, 449-456). Ген ApoCIII человека размещен приблизительно через 2,6 тысячи пар основ в направлении 3′ по отношению к гену аполипопротеина А-1, и эти два гена транскрибируются конвергентно (Karathanasis, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 1985, 82, 6374-6378). Также клонирован вариант аполипопротеина С-III человека с мутацией Thr74 до Ala74, выделенный у больного с необыкновенно высокими уровнями аполипопротеина C-III в сыворотке. Поскольку Thr74 O-гликозилирован, мутант Ala74, таким образом, приводил к повышению в сыворотке уровней ApoCIII без углеводного фрагмента (Maeda et al., J. Lipid Res., 1987, 28, 1405-1409). Другие варианты или виды полиморфизма, которые модулируют экспрессию ApoCIII, были идентифицированы позже. При некоторых видах полиморфизма повышается уровень ApoCIII. Повышенные уровни ApoCIII ассоциируются с повышенными уровнями триглицеридов (ТГ) и такими заболеваниями, как сердечно-сосудистое заболевание, метаболический синдром, ожирение и диабет (Chan et al., Int J Clin Pract, 2008, 62: 799-809; Onat et al., Atherosclerosis, 2003, 168: 81-89; Mendivil et al., Circulation, 2011, 124: 2065-2072).

Пять видов полиморфизма идентифицированы на участке промотора гена: С (в положении -641 гена) до A, G (в положении -630 гена) до А, делеция Т (в положении -625 гена), С (в положении -482 гена) до Т, и Т (в положении -455 гена) до С. Все эти виды полиморфизма находятся в неравновесном сцеплении с полиморфизмом SstI в 3′ нетранслируемом участке. Полиморфный сайт SstI различает аллели S1 и S2, и аллель S2 ассоциируется с повышенными уровнями триглицеридов в плазме (Dammerman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 1993, 90, 4562-4566). Промотор ApoCIII регулируется вниз инсулином, и данный полиморфный сайт отменяет регуляцию инсулином. Таким образом, потенциальная чрезмерная экспрессия ApoCIII, которая приводит к утрате регуляции инсулином, может быть фактором, способствующим развитию гипертриглицеридемии, связанной с аллелью S2 (Li et al., J. din. Invest., 1995, 96, 2601-2605). Полиморфизм Т (в положении -455 гена) до С связан с повышением риска заболевания коронарных артерий (Olivieri et al., J. Lipid Res., 2002, 43, 1450-1457). Другие виды полиморфизма гена ApoCIII человека, который связан с увеличением экспрессии ApoCIII и/или уровня триглицеридов, включают: С (в положении 1100) до Т, С (в положении 3175) до G, Т (в положении 3206) до G, С (в положениях 3238) до G, и т.п. (Tilly et al., J. Lipid Res., 2003, 44: 430-436; Waterworth et al., Arterioscler Thromb Vase Biol, 2000, 20: 2663-2669; Petersen et al., N Engi J Med, 2010, 362: 1082-1089).

В дополнение к инсулину, идентифицированы другие регуляторы экспрессии гена ApoCIII. Элемент ответа на «осиротевший» ядерный рецептор rev-erb альфа размещен в положениях от -23 до -18 гена, на участке промотора ApoCIII. Rev-erb альфа уменьшает активность промотора ApoCIII (Raspe et al., J. Lipid Res., 2002, 43, 2172-2179). Участок промотора ApoCIII от положений с -86 по -74 гена распознается двумя ядерными факторами CIIIbl и CIIIB2 (Ogami et al., J. Biol. Chem., 1991, 266, 9640-9646). Экспрессия ApoCIII также регулируется вверх ретиноидами, действующими через ретиноидный рецептор X, и изменения в распространении ретиноидного рецептора Х влияют на транскрипцию ApoCIII (Vu-Dac et al., J. din. Invest., 1998, 102, 625-632). Показано, что белок специфичности 1 (Spl) и ядерный фактор-4 (HNF-4) гепатоцитов действуют синергетично для трансактивации промотора аполипопротеина C-III через сайг связывания с HNF-4 (Kardassis et al., Biochemistry, 2002, 41, 1217-1228). HNF-4 также действует в сочетании с SMAD3-SMAD4 для трансактивации промотора ApoCIII (Kardassis et al., J. Biol. Chem., 2000, 275, 41405-41414).

Трансгенные мыши и мыши с «нокаутированными» генами дополнительно определили роль ApoCIII в липолизе. Чрезмерная экспрессия ApoCIII у трансгенных мышей приводит к гипертриглицеридемии и нарушенному клиренсу ЛПОНП-триглицеридов (de Silva et al., J. Biol. Chem., 1994, 269, 2324-2335; Ito et al., Science, 1990, 249, 790-793). Мыши с «нокаутированными» генами с полным отсутствием белка ApoCIII продемонстрировали значительно сниженные уровни холестерина и триглицеридов в плазме, по сравнению с мышами дикого типа, и были защищены от гипертриглицеридемии после приема пищи (Maeda et al., J. Biol. Chem., 1994, 269, 23610-23616).

Общие уровни ApoCIII в плазме идентифицированы как основной детерминант триглицеридов сыворотки, и эпидемиологические исследования продемонстрировали, что липопротеины ApoCIII и АроВ, которые содержат ApoCIII как компонент, являются независимыми прогностическими факторами заболевания коронарных сосудов сердца (Sacks et al., Circulation. 2000. 102: 1886-1892; Lee et al., Arterioscler Thromb Vase Biol. 2003. 23: 853-858). Исследования также демонстрируют, что ApoCIII представляет собой ключевой детерминант в клиренсе богатых триглицеридами липопротеинов и их остатков при гипертриглицеридемических состояниях, включая висцеральное ожирение, инсулинорезистентность и метаболический синдром (Mauger et al., J. Lipid Res. 2006. 47: 1212-1218; Chan et al., Clin. Chem. 2002. 278-283; Ooi et al., Clin. Sci. 2008. 114: 611-624).

Гипертриглицеридемия представляет собой общий клинический штрих, связанный с повышенным риском кардиометаболического заболевания (Hegele et al. 2009, Hum Mol Genet, 18: 4189-4194; Hegele and Pollex 2009, Mol Cell Biochem, 326: 35-43), а также случаями острого панкреатита в наиболее тяжелых формах (Toskes 1990, Gastroenterol Clin North Am, 19: 783-791; Gaudetet al. 2010, Atherosclerosis Supplements, 11: 55-60; Catapano et al. 2011, Atherosclerosis, 217S: S1-S44; Tremblay et al. 2011, J Clin Lipidol, 5: 37-44). Примеры кардиометаболических заболеваний включают, не ограничиваясь ими, диабет, метаболический синдром/инсулинорезистентность и генетические расстройства, такие как семейная хиломикронемия, семейная комбинированная гиперлипидемия и семейная Гипертриглицеридемия.

Гипертриглицеридемия представляет собой последствие повышенной выработки и/или сниженного или замедленного катаболизма богатых триглицеридами липопротеинов (ТГ): ЛПОНП и, в меньшей степени, хиломикрон (ХМ). Погранично высокие уровни ТГ (150-199 мг/дл) широко распространены в общей популяции и представляют собой общий компонент состояний метаболического синдрома/инсулинорезистентности. Это же справедливо для высоких уровней ТГ (200-499 мг/дл), за исключением того, что по мере повышения уровней ТГ в плазме, базовые генетические факторы играют все более и более важную этиологическую роль. Самые высокие уровни ТГ (≥500 мг/дл) чаще всего ассоциируются также с повышенными уровнями ХМ и сопровождаются повышенным риском острого панкреатита. Риск панкреатита рассматривается как клинически значимый, если уровень ТГ превышает 880 мг/дл (>10 ммоль), и Европейское Сообщество Атеросклероза/Европейское Сообщество Кардиологии (EAS/ESC) в директивах 2011 г. заявляют, что обязательными являются действия по предупреждению острого панкреатита (Catapanoet al. 2011, Atherosclerosis, 217S: S1-S44). Согласно директивам EAS/ESC 2011, гипертриглицеридемия является причиной приблизительно 10% всех случаев панкреатита, и развитие панкреатита может происходить при уровнях ТГ 440-880 мг/дл. На основе полученных в ходе клинических исследований доказательств, которые демонстрируют, что повышенные уровни ТГ являются независимым фактором риска для атеросклеротического ЗКС, директивы Панели III Национальной Образовательной Программы по Холестерину для Взрослых (NCEP 2002, Circulation, 106: 3143-421), а также Американской Диабетической Ассоциации (ADA 2008, Diabetes Care, 31: S12-S54) рекомендуют целевой уровень ТГ менее 150 мг/дл, чтобы снизить риск сердечно-сосудистых заболеваний.

У мышей с «нокаутированным» геном ApoCIII присутствовала нормальная кишечная абсорбция липидов и печеночная секреция триацилглицеридов ЛПОНП, но быстрый клиренс триацилглицеридов ЛПОНП и эфиров холестерина ЛПОНП из плазмы, который, возможно, объясняет наблюдаемую гиполипидемию (Gerritsen et al., J. Lipid Res. 2005. 46: 1466-1473; Jong et al., J. Lipid Res. 2001. 42: 1578-1585). Указано, что частицы ЛПОНП с ApoCIII играют ведущую роль в идентификации высокого риска заболевания коронарных сосудов сердца при гипертриглицеридемии (Campos et al., J. Lipid Res. 2001. 42: 1239-1249). Общегеномное исследование ассоциаций выявило, что нулевая мутация ApoCIII от природы встречается у населения ланкастерских аманитов и демонстрирует благоприятный профиль липидов и очевидную защиту сердца, без видимых вредных эффектов (Pollin et al., Science. 2008. 322: 1702-1705). У носителей мутации наблюдаются более низкие уровни триглицеридов и ЛПНП-холестерина в сыворотке натощак и после приема пищи, и более высокие уровни ЛПВП-холестерина.

Класс липопротеинов ЛПВП включает гетерогенную и полидисперсную популяцию частиц, которые обладают наибольшей плотностью и наименьшим размером (Havel and Kane. In, The Metabolic & Molecular Bases of Inherited Disease. 8^th Edition. McGraw-Hill, New York, 2001: 2705-16). ЛПВП представляет собой комплекс макромолекулярных липидов (холестерин, триглицериды и фосфолипиды) и белков (аполипопротеины (аро) и ферменты). Поверхность ЛПВП содержит, главным образом, аполипопротеины А, С и Е. Функция некоторых из этих апопротеинов состоит в направлении ЛПВП от периферических тканей к печени. На уровни ЛПВП в сыворотке могут повлиять базовые генетические причины (Weissglas-Volkov and Pajukanta, JLipidRes, 2010, 51: 2032-2057).

Эпидемиологические исследования показали, что повышенные уровни ЛПВП защищают против сердечно-сосудистого заболевания или заболевания коронарных сосудов сердца (Gordon et al., Am. J. Med. 1977. 62: 707-714). Такое влияние ЛПВП-холестерина не зависит от концентраций триглицеридов и ЛПНП-холестерина. В клинической практике, низкие уровни ЛПВП-холестерина в плазме обычнее ассоциируются с другими расстройствами, которые увеличивают содержание триглицеридов в плазме, например, центральное ожирение, инсулинорезистентность, сахарный диабет 2 типа и заболевание почек (хроническая почечная недостаточность или нефротическая протеинурия) (Kashyap.Am. J. Cardiol. 1998. 82: 42U-48U).

В настоящий момент не известно терапевтических средств прямого действия, которые влияли бы на функцию ApoCIII. Постулировано, что гиполипидемический эффект лекарственных средств класса фибратов осуществляется через механизм, где активируемый пролифератором пероксисом рецептор (PPAR) опосредует вытеснение HNF-4 из промотора аполипопротеина C-III, что приводит к подавлению транскрипции аполипопротеина C-III (Hertz et al., J. Biol. Chem., 1995, 270, 13470-13475). Гиполипидемические лекарственные средства класса статинов также снижают уровни триглицерида через неизвестный механизм, который приводит к повышению уровней мРНК липопротеинлипазы и снижению уровней аполипопротеина C-III в плазме (Schoonjans et al., FEBS Lett., 1999, 452, 160-164). Таким образом, остается давно ощущаемая потребность в дополнительных средствах, способных эффективно ингибировать функцию аполипопротеина C-III.

Антисмысловая технология заявляет о себе как эффективное средство уменьшения экспрессии определенных генных продуктов и, таким образом, может быть уникально пригодной для ряда сфер терапевтического, диагностического и исследовательского применения с целью модуляции ApoCIII.

Ранее нами были раскрыты композиции и способ ингибирования ApoCIII антисмысловыми соединениями в US 20040208856 (патент США 7,598,227), US 20060264395 (патент США 7,750,141) и WO 2004/093783. В настоящей заявке мы раскрываем неожиданный результат, заключающийся в том, что антисмысловое ингибирование ApoCIII приводит к повышению уровней ЛПВП и снижению уровней триглицеридов после приема пищи. Такой результат будет полезным, например, для лечения, предупреждения, отодвигания, уменьшения или облегчения любого одного или более заболеваний, таких как сердечно-сосудистое заболевание (например, заболевание коронарных сосудов сердца или атерогенные заболевания). Например, повышенные уровни триглицеридов после приема пищи (не натощак) идентифицированы как значимый фактор риска сердечно-сосудистых заболеваний (Bansal et al., JAMA, 2007, 298: 309-16; Nordestgaard et al., JAMA, 2007, 298: 299-308). Также, в настоящей заявке ингибирование экспрессии ApoCIII неожиданно приводило к увеличению клиренса хиломикрон и, таким образом, важно с точки зрения предотвращения хиломикронемии (Chait et al., 1992, Adv Intern Med. 1992, 37: 249-73), дислипидемического состояния, вызванного ненадлежащим клиренсом хиломикрон триглицеридов. Тяжелые формы хиломикронемии могут приводить к панкреатиту, угрожающему жизни состоянию. Путем ингибирования кишечного ApoCIII было бы уменьшено ингибирование липопротеинлипазы, и клиренс хиломикрон триглицеридов был бы увеличен, таким образом, предупреждая панкреатит.

Краткое описание изобретения

В данном описании предложены способы повышения уровней ЛПВП путем введения животному соединения, нацеленного на ApoCIII.

В некоторых вариантах предлагается способ профилактики, лечения, облегчения, замедления начала или снижения риска сердечно-сосудистого заболевания, расстройства или состояния у животного, включающий введение животному соединения, нацеленного на ApoCIII. Соединение, которое вводят животному, предотвращает, лечит, облегчает, замедляет начало или снижает риск сердечно-сосудистого заболевания, расстройства или состояния путем повышения уровней ЛПВП в организме животного.

В некоторых вариантах предлагается способ снижения риска сердечно-сосудистого заболевания у животного, включающий введение животному терапевтически эффективного количества соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов, причем модифицированный олигонуклеотид является комплементарным нуклеиновой кислоте ApoCIII. В некоторых вариантах нуклеиновая кислота ApoCIII является такой, как показано в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах соединение содержит модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов, в котором последовательность нуклеиновых оснований содержит, как минимум, 8 смежных нуклеиновых оснований ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). В дальнейших вариантах соединение, которое вводят животному, снижает риск сердечнососудистого заболевания путем повышения уровней ЛПВП.

В некоторых вариантах предлагается способ профилактики, лечения, облегчения или уменьшения, как минимум, одного симптома сердечно-сосудистого заболевания у животного, включающий введение животному терапевтически эффективного количества соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов, причем модифицированный олигонуклеотид является комплементарным нуклеиновой кислоте ApoCIII. В некоторых вариантах нуклеиновая кислота ApoCIII является такой, как показано в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах соединение содержит модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов, в котором последовательность нуклеиновых оснований содержит, как минимум, 8 смежных нуклеиновых оснований ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). В дальнейших вариантах соединение, которое вводят животному, предотвращает, лечит, облегчает или уменьшает, как минимум, один симптом сердечно-сосудистого заболевания у животного путем повышения уровней ЛПВП в организме животного.

В некоторых вариантах предлагается способ повышения уровней ЛПВП в организме животного путем введения животному соединения, состоящего из ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3) с целью повышения уровней ЛПВП в организме животного.

В некоторых вариантах предлагается способ профилактики, лечения, облегчения или уменьшения, как минимум, одного симптома сердечно-сосудистого заболевания у животного путем введения животному соединения, состоящего из ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3) с целью профилактики, лечения, облегчения или уменьшения, как минимум, одного симптома сердечно-сосудистого заболевания у животного путем повышения уровней ЛПВП в организме животного.

В некоторых вариантах предлагается способ повышения уровней ЛПВП в организме животного путем введения животному модифицированного олигонуклеотида, содержащего последовательность SEQ IDNO: 3 (ISIS 304801) причем модифицированный олигонуклеотид содержит: сегмент промежутка, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов; сегмент 5′ крыла, состоящий из 5 связанных нуклеозидов; сегмент 3′ крыла, состоящий из 5 связанных нуклеозидов; причем сегмент промежутка расположен непосредственно прилегающим к и между сегментом 5′ крыла и сегментом 3′ крыла, и при этом каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2′-O-метоксиэтилсахар, причем каждый цитозин представляет собой 5′-метилцитозин, и причем каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфоротиоатную связь, причем модифицированный олигонуклеотид повышает уровни ЛПВП у животного.

В некоторых вариантах предлагается способ профилактики, лечения, облегчения или уменьшения, как минимум, одного симптома сердечно-сосудистого заболевания у животного путем введения животному модифицированного олигонуклеотида, содержащего последовательность ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3) причем модифицированный олигонуклеотид содержит: сегмент промежутка, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов; сегмент 5′ крыла, состоящий из 5 связанных нуклеозидов; сегмент 3′ крыла, состоящий из 5 связанных нуклеозидов; причем сегмент промежутка расположен непосредственно прилегающим к и между сегментом 5′ крыла и сегментом 3′ крыла, и причем каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2′-O-метиоксиэтилсахар, причем каждый цитозин представляет собой 5′-метилцитозин, и причем каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфоротиоатную связь, причем модифицированный олигонуклеотид предотвращает, лечит, облегчает или уменьшает, как минимум, один симптом у животного с сердечно-сосудистым заболеванием путем повышения уровней ЛПВП в организме животного.

В некоторых вариантах предлагается способ повышения уровней ЛПВП в организме животного путем введения животному соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов, причем модифицированный олигонуклеотид является комплементарным нуклеиновой кислоте ApoCIII, как показано в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, с целью повышения уровней ЛПВП в организме животного.

В некоторых вариантах предлагается способ профилактики, лечения, облегчения или уменьшения, как минимум, одного симптома сердечно-сосудистого заболевания у животного путем введения животному соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов, причем модифицированный олигонуклеотид является комплементарным нуклеиновой кислоте ApoCIII, как показано в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, с целью профилактики, лечения, облегчения или уменьшения, как минимум, одного симптома сердечно-сосудистого заболевания у животного путем повышения уровней ЛПВП в организме животного.

В некоторых вариантах предлагается способ снижения уровней ТБХЭ путем введения животному соединения, нацеленного на ApoCIII. В некоторых вариантах соединение содержит модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов, последовательность нуклеиновых оснований которого комплементарна нуклеиновой кислоте ApoCIII. В некоторых вариантах последовательность нуклеиновых оснований содержит, как минимум, 8 смежных нуклеиновых оснований ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). В некоторых вариантах соединение состоит из нуклеиновых оснований ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3).

В некоторых вариантах предлагается способ повышения уровня ApoAl, PON1, клиренса жиров, клиренса хиломикрон триглицеридов, клиренса триглицеридов после приема пищи или уровней ЛПВП путем введения животному соединения, нацеленного на ApoCIII. В некоторых вариантах соединение содержит модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов, последовательность нуклеиновых оснований которого комплементарна нуклеиновой кислоте ApoCIII. В некоторых вариантах последовательность нуклеиновых оснований содержит, как минимум, 8 смежных нуклеиновых оснований ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). В некоторых вариантах соединение состоит из нуклеиновых оснований ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3).

В некоторых вариантах предлагается способ профилактики, замедления или облегчения течения панкреатита, который включает: (а) выбор животного, страдающего или находящегося в группе риска панкреатита, и (б) введение животному соединения, нацеленного на ApoCIII, и, причем панкреатит предотвращается, замедляется, или его течение облегчается.

В некоторых вариантах предлагается способ профилактики, замедления или облегчения течения панкреатита, который включает: (а) выбор животного, страдающего или находящегося в группе риска панкреатита, и (б) введение животному соединения, нацеленного на ApoCIII, таким образом, увеличивая клиренс хиломикрон, и, при этом, панкреатит предотвращается, замедляется, или его течение облегчается.

В некоторых вариантах животное страдает или находится в группе риска по гипертриглицеридемии. В некоторых вариантах гипертриглицеридемия относится к фредериксоновскому типу II, IV или V. В некоторых вариантах у животного присутствует генетический дефект, ведущий к гипертриглицеридемии. В некоторых вариантах генетический дефект представляет собой гетерозиготный дефицит липопротеинлипазы или полиморфизм ApoCIII. В некоторых вариантах уровень триглицеридов в организме животного составляет ≥500 мг/дл, и присутствует гетерозиготный дефицит липопротеинлипазы.

В некоторых вариантах уровень триглицеридов в организме животного находится в интервале 100-200 мг/дл, 100-300 мг/дл, 100-400 мг/дл, 100-500 мг/дл, 200-500 мг/дл, 300-500 мг/дл, 400-500 мг/дл, 500-1000 мг/дл, 600-1000 мг/дл, 700-1000 мг/дл, 800-1000 мг/дл, 900-1000 мг/дл, 500-1500 мг/дл, 1000-1500 мг/дл, 100-2000 мг/дл, 150-2000 мг/дл, 200-2000 мг/дл, 300-2000 мг/дл, 400-2000 мг/дл, 500-2000 мг/дл, 600-2000 мг/дл, 700-2000 мг/дл, 800-2000 мг/дл, 900-2000 мг/дл, 1000-2000 мг/дл, 1100-2000 мг/дл, 1200-2000 мг/дл, 1300-2000 мг/дл, 1400-2000 мг/дл или 1500-2000 мг/дл.

В некоторых вариантах увеличение клиренса хиломикрон увеличивает клиренс триглицеридов после приема пищи и/или уменьшает уровень триглицеридов после приема пищи.

В некоторых вариантах предлагается применение соединения, нацеленного на ApoCIII, с целью профилактики, лечения, облегчения или уменьшения, как минимум, одного симптома сердечно-сосудистого заболевания путем повышения уровней ЛПВП.

В некоторых вариантах предлагается применение соединения, нацеленного на ApoCIII, с целью повышения уровней ЛПВП в организме животного.

В некоторых вариантах предлагается применение соединения, нацеленного на ApoCIII, для получения лекарственного средства, предназначенного для повышения уровней ЛПВП в организме животного.

В некоторых вариантах предлагается применение соединения, нацеленного на ApoCIII, для получения лекарственного средства, предназначенного для улучшения соотношения ТГ к ЛПВП.

Подробное описание изобретения

Следует понимать, что как вышеизложенное общее описание, так и следующее подробное описание являются только иллюстративными и поясняющими, и не ограничивают заявленного изобретения. В данном описании применение единственного числа включает множественное число, если конкретно не указано иное. В данном описании "или" означает "и/или", если не указано иное. Кроме того, использование термина "включающий", а также других форм, таких как "включает" и "включенный", не является ограничивающим. Также, такие термины как "элемент" или "компонент" включают как элементы, так и компоненты, содержащие одну единицу, а также элементы и компоненты, которые содержат более чем одну субъединицу, если конкретно не указано иное.

Заголовки разделов, используемые в данном описании, предназначены только для организационных целей и не должны интерпретироваться как ограничивающие описанный объект. Все документы или части документов, цитируемых в данной заявке, в том числе, но не ограничиваясь ими, патенты, патентные заявки, статьи, книги и трактаты, таким образом, явно включены путем ссылки на части документа, обсуждаемого в данном описании, а также в полном объеме.

Определения

Если только не были предложены специфические определения, номенклатура, используемая в связи с, а также методики и методы аналитической химии, синтетической органической химии и медицинской и фармацевтической химии, описанные в данном описании, является хорошо известной и обычно применяемой в данной области. Стандартные методы могут применяться для химического синтеза и химического анализа. Если это разрешено, все патенты, заявки, опубликованные заявки и другие публикации, номера доступа GENBANK и связанная информация о последовательностях, доступная через базы данных, такие как Национальный центр биотехнологической информации (НЦБИ), и другие данные, на которые есть ссылки в данном описании, включены путем ссылки на части документа, обсуждаемого в данном описании, а также в полном объеме.

Если только не указано иное, следующие термины имеют следующие значения:

"2′-O-метоксиэтил" (также 2′-МОЭ, 2′-O(CH₂)₂-ОСН₃ и 2′-O-(2-метоксиэтил)) обозначает O-метокси-этил-модификацию положения 2′ фурозильного кольца. 2′-O-Метоксиэтил-модифицированный сахар является модифицированным сахаром.

"2′-O-Метоксиэтилнуклеотид" обозначает нуклеотид, содержащий 2′-O-метоксиэтил-модифицированный сахарный фрагмент.

"3′ Сайт-мишень" обозначает нуклеотид нуклеиновой кислоты-мишени, комплементарный к крайнему З′-нуклеотиду конкретного антисмыслового соединения.

"5′ Сайт-мишень" обозначает нуклеотид нуклеиновой кислоты-мишени, комплементарный к крайнему 5′-нуклеотиду конкретного антисмыслового соединения.

"5-Метилцитозин" обозначает цитозин, модифицированный метильной группой, присоединенной в 5′ положении. 5-Метилцитозин представляет собой модифицированное нуклеиновое основание.

"Приблизительно" означает в пределах ±10% значения. Например, если это указано, "маркер может быть увеличен приблизительно на 50%", подразумевается, что маркер может быть увеличен на 45-55%.

"Активный фармацевтический агент (средство)" обозначает субстанцию или субстанции в фармацевтической композиции, которые обеспечивают терапевтическое действие при введении индивидууму. Например, в некоторых вариантах антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на ApoCIII, представляет собой активный фармацевтический агент (средство).

"Активный участок-мишень" или "участок-мишень" обозначает участок, на который нацелено одно или более активных антисмысловых соединений. "Активные антисмысловые соединения" обозначают антисмысловые соединения, которые снижают уровни нуклеиновой кислоты-мишени или уровни белка.

"Сопутствующее введение" обозначает сопутствующее введение двух агентов (средств) в любой форме, в которой фармакологическое действие обоих проявляется в организме больного в одно и то же время. Сопутствующее введение не требует введения обоих средств в одной фармацевтической композиции, в одной лекарственной форме или одним и тем же способом. Влияние обоих агентов (средств) не обязательно проявляется в одно и то же время. Эффект должен только частично перекрываться в течение периода времени, и не должен иметь одинаковую протяженность.

"Введение" обозначает доставку фармацевтического агента (средства) в организм индивидуума, и включает, не ограничиваясь ими, введение медицинским работником и самостоятельное введение.

"Агент (средство)" обозначает активную субстанцию, которая может обеспечить терапевтическое действие при введении животному. "Первый агент (средство)" обозначает терапевтическое соединение по изобретению. Например, первый агент может быть антисмысловым олигонуклеотидом, нацеленным на ApoCIII. "Второй агент (другое средство)" обозначает второе терапевтическое соединение по изобретению (например, второй антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на ApoCIII) и/или не-ApoCIII терапевтическое соединение.

"Облегчение" обозначает уменьшение, как минимум, одного показатели, признака или симптома связанного заболевания, расстройства или состояния. Выраженность показателей может определяться субъективными или объективными мерами, которые известны специалистам в данной области.

"Животное" обозначает человека или животное, в том числе, но не ограничиваясь ими, мыши, крысы, кролики, собаки, кошки, свиньи и негуманоидные приматы, в том числе, но не ограничиваясь ими, обезьяны и шимпанзе.

"Антисмысловая активность" обозначает любую обнаружимую или измеримую активность, относящуюся к антисмысловой гибридизации соединения с нуклеиновой кислотой-мишенью. В некоторых вариантах антисмысловая активность представляет собой уменьшение количества или экспрессии нуклеиновой кислоты-мишени или белка, кодируемого такой нуклеиновой кислотой-мишенью.

"Антисмысловое соединение" обозначает олигомерное соединение, которые способно гибридизоваться с нуклеиновой кислотой-мишенью посредством водородной связи. В данном описании термин "антисмысловое соединение" включает фармацевтически приемлемые производные соединений, описанных в данном описании.

"Антисмысловое ингибирование" обозначает снижение уровней нуклеиновой кислоты-мишени или уровней белка-мишени в присутствии антисмыслового соединения, комплементарного к нуклеиновой кислоте-мишени, по сравнению с уровнями нуклеиновой кислоты-мишени или уровнями белка-мишени в отсутствие антисмыслового соединения.

"Антисмысловой олигонуклеотид" обозначает одноцепочечный олигонуклеотид, содержащий последовательность нуклеиновых оснований, которая позволяет гибридизацию с соответствующим участком или сегментом нуклеиновой кислоты-мишени. В данном описании термин "антисмысловой олигонуклеотид" включает фармацевтически приемлемые производные соединений, описанных в данном описании.

"ApoCIII обозначает любую нуклеиновую кислоту или последовательность белка, кодирующую ApoCIII. Например, в некоторых вариантах ApoCIII включает последовательность ДНК, кодирующую ApoCIII, последовательность РНК, транскрибированную из ДНК, кодирующей ApoCIII (в том числе, геномной ДНК, содержащей интроны и экзоны), последовательность мРНК, кодирующую ApoCIII, или пептидную последовательность, кодирующую ApoCIII.

"мРНК ApoCIII" обозначает мРНК, кодирующую белок ApoCIII.

"Белок ApoCIII" обозначает любую последовательность белка, кодирующую ApoCIII.

"Атеросклероз" обозначает затвердение артерий, поражающее крупные и среднего размера артерии, и характеризуется присутствием жировых отложений. Жировые отложения называются "атеромами" или "бляшками", которые состоят, в основном, из холестерина и других жиров, кальция и рубцовой ткани и повреждают выстилку артерий.

"Бициклический сахар" обозначает фурозильное кольцо, модифицированное соединением мостиком двух негеминальных атомов кольца. Бициклический сахар является модифицированным сахаром.

"Бициклическая нуклеиновая кислота" или "БНК" обозначает нуклеозид или нуклеотид, в котором фуранозная часть нуклеозида или нуклеотида содержит мостик, соединяющий два углеродных атома на фуранозном кольце, с образованием таким образом бициклической системы колец.

"Кэп-структура" или "концевой кэп-фрагмент" обозначает химические модификации, которые осуществлены на любом из концов антисмыслового соединения.

"Сердечно-сосудистое заболевание" или "сердечно-сосудистое расстройство" обозначает группу состояний, связанных с сердцем, кровеносными сосудами или кровообращением. Примеры сердечно-сосудистых заболеваний включают, не ограничиваясь ими, аневризму, стенокардию, аритмию, атеросклероз, цереброваскулярное заболевание (инсульт), заболевание коронарных сосудов сердца, гипертензию, дислипидемию, гиперлипидемию, гипертриглицеридемию или гиперхолестеринемию.

"Химически отличный участок" обозначает участок антисмыслового соединения, который некоторым образом химически отличается от другого участка такого же антисмыслового соединения. Например, участок, содержащий 2′-O-метоксиэтил-нуклеотид, химически отличается от участка, содержащего нуклеотид без 2′-O-метоксиэтил-модификаций.

"Химерное антисмысловое соединение" обозначает антисмысловое соединение, которое содержит, как минимум, два химически отличных участка.

"Холестерин" представляет собой молекулу стероида, найденную в мембранах клеток всех тканей животных. Холестерин должен транспортироваться в плазме крови животного липопротеинами, включая липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП), липопротеины промежуточной плотности (ЛППП), липопротеины низкой плотности (ЛПНП) и липопротеины высокой плотности (ЛПВП). "Холестерин плазмы" обозначает сумму всех липопротеинов (ЛПОНП, ЛППП, ЛПНП, ЛПВП), этерифицированных и/или неэтерифицированных в плазме или сыворотке.

"Ингибитор абсорбции холестерина" обозначает средство, которое тормозит абсорбцию экзогенного холестерина, поступающего из пищевых продуктов.

"Сопутствующее введение" подразумевает введение двух или более агентов (средств) индивидууму. Два или более средства могут находиться в одной фармацевтической композиции или могут находиться в отдельных фармацевтических композициях. Каждое из двух или более средств можно вводить одним и тем же или различными способами. Сопутствующее введение включает параллельное или последовательное введение.

"Комплементарность" обозначает способность к спариванию нуклеиновых оснований первой нуклеиновой кислоты и второй нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах комплементарность между первой и второй нуклеиновой кислотой может быть между двумя цепями ДНК, между двумя цепями РНК или между цепями ДНК и РНК. В некоторых вариантах определенные нуклеиновые основания на одной цепи соответствуют комплементарному основанию, образующему водородную связь, на другой цепи. В некоторых вариантах все нуклеиновые основания на одной цепи соответствуют комплементарному основанию, образующему водородную связь, на другой цепи. В некоторых вариантах первая нуклеиновая кислота представляет собой антисмысловое соединение, и вторая нуклеиновая кислота представляет собой нуклеиновую кислоту-мишень. В некоторых из таких вариантов антисмысловой олигонуклеотид представляет собой первую нуклеиновую кислоту, и нуклеиновая кислота-мишень представляет собой вторую нуклеиновую кислоту.

"Смежные нуклеиновые основания" обозначают нуклеиновые основания, непосредственно смежные друг по отношению к другу.

"Ограниченный этил" или "cEt" обозначает бициклический нук