Иммуноглобулины k cd52 человека

Иммуноглобулины k cd52 человека

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Данная заявка заявляет на приоритетность относительно временной заявки на патент США 61/177837 от 13 мая 2009 г. описание указанной заявки включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Данная заявка содержит Перечень Последовательностей представленную через EFS-Web и введенную сюда в виде ссылки во всей его полноте (см. в конце описания). Указанная копия ASCII созданная в июне 2010, называется 001662WO.txt и занимает объем 182208 бт.

ИЗВЕСТНЫЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

CD52 представляет собой гликозилированный, заякоренный гликозилфосфатидилинозитолом (ГФИ) белок на поверхности клетки, находящийся в большом количестве (500000 молекул/клетка) на поверхности различных здоровых и злокачественных лимфоидных клеток (например, Т- и В-клеток). См., например, Hale et. al., J Biol regul Homeost Agents 15:386-391 (2001); Huh et. al., Blood 92: Abstract 4199 (1998); Elsner et. al., Blood 88:4684-4693 (1996); Gilleece et. al., Blood 82:807-812 (1993); Rodig et. al., Clin Cancer Res 12:7174-7179 (2006); Ginaldi et. al., Leuk Res 22:185-191 (1998). CD52 экспрессируется в более меньшем количестве на миелоидных клетках, таких как моноциты, макрофаги, и дендритных клетках, и незначительная экспрессия отмечается на зрелых клетках-естественных киллерах (NK-клетках), нейтрофилах и гематологических стволовых клетках. Id. CD52 также вырабатывается эпителиальными клетками в придатках яичка и семявыносящего протока и попадает в сперму во время прохождения ее через половые пути (Hale et. al., 2001, supra; Domagala et. al., Med Sci Monit 7:325-331 (2001)). Точная биологическая функция CD52 остается неясной, но некоторые доказательства позволяют предположить, что он может быть задействован в миграции и ко-стимуляции Т-клеток (Rowan et. al., Int Immunol 7:69-77 (1995); Masuyama et. al., J Exp Med 189:979-989 (1999); Watanabe et. al., Clin Immunol 120:247-259 (2006)).

Кампат-1H^® (алемтузумаб, Кампат^®, МабКампат^®) является гуманизированным моноклональным антителом к CD52 человека, которое проявляет сильные цитотоксические эффекты in vitro (антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (АЗКЦ) и комплемент-зависимую цитотоксичность (КЗЦ)). Кампат® распознает антигенную детерминанту, состоящую из четырех аминокислот на карбоксильном конце зрелого белка CD52 и участка отрицательно заряженного якоря ГФИ. По причине своих значительных цитотоксических эффектов, препарат Кампат® способен приводить к снижению количества CD52-положительных клеток in vivo и утвержден для терапии первой и третьей линии для лечения хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ). Препарат Кампат® был подвергнут оценке относительно своего использования в лечении нескольких аутоиммунных заболеваний, включая ревматоидный артрит, васкулит, миозит и болезнь Вегенера. Однако самые передовые исследования препарата Кампат® относятся к лечению рецидивирующе-ремитирующего рассеянного склероза (РС). Эти исследования выявили значительное улучшение во времени до рецидива относительно активного препарата сравнения (Ребиф® (т.е. интерферона-бета-1a)).

Существует необходимость поиска дополнительных терапевтических агентов и способов нацеливания на CD52 в качестве мишени.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Гуманизированные иммуноглобулины

Изобретение описывает гуманизированные иммуноглобулины, обладающие специфичностью связывания с CD52 человека (huCD52). Они могут состоять из гипервариабельных участков (CDR) мышиных антител к CD52 человека. Гуманизированные иммуноглобулины по изобретению содержат аминокислотные последовательности, отличающиеся от последовательностей других гуманизированных иммуноглобулинов и, в частности, от последовательностей других гуманизированных иммуноглобулинов, которые образуют CDR мышиных антител к CD52 человека. Гуманизированные иммуноглобулины по изобретению отличаются от гуманизированного иммуноглобулина Кампат®. В некоторых вариантах воплощения изобретения они обладают преимуществом в сравнении с другими гуманизированными антителами, включающими CDR антитела Кампат®.

Описанные здесь иммуноглобулины могут состоять из гуманизированной тяжелой цепи и гуманизированной легкой цепи. В одном варианте воплощения изобретения гуманизированный иммуноглобулин состоит из легкой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 3, и тяжелой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 16; легкой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 4, и тяжелой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 17; легкой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 5, и тяжелой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 18; легкой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 6, и тяжелой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 19; легкой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 7, и тяжелой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 20; легкой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 8, и тяжелой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 21; легкой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 9, и тяжелой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 22; легкой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 10, и тяжелой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 23; легкой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 11, и тяжелой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 24; легкой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 12, и тяжелой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 25; легкой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 12, и тяжелой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 137; или легкой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 13, и тяжелой цепи, включающей один или несколько CDR (например, все три CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 26. CDR в представленных выше последовательностях указаны на ФИГУРАХ 2 и 3, а также в представленных в документе Таблицах 1-6.

В другом варианте воплощения изобретения гуманизированный иммуноглобулин, обладающий специфичностью связывания с CD52 человека, состоит из легкой цепи, содержащей один или несколько CDR (например, все три), выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 и SEQ ID NO: 48; тяжелой цепи, содержащей один или несколько CDR (например, все три), выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74 и SEQ ID NO: 294; или такой легкой или такой тяжелой цепи, при этом гуманизированный иммуноглобулин не является антителом Кампат®.

В другом варианте воплощения изобретения гуманизированный иммуноглобулин, обладающий специфичностью связывания с CD52 человека, состоит из легкой цепи, состоящей из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 13; тяжелой цепи, состоящей из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 или SEQ ID NO: 137; или такой легкой или такой тяжелой цепи, при этом гуманизированный иммуноглобулин не является антителом Кампат®.

В некоторых вариантах воплощения изобретения каркасный участок гуманизированного иммуноглобулина обладает, по меньшей мере, 50% гомологичностью относительно каркасного участка иммуноглобулина, из которого получены CDR легкой цепи и CDR тяжелой цепи. Например, каркасный участок гуманизированного иммуноглобулина может быть, по меньшей мере, на 50%, по меньшей мере, на 60%, по меньшей мере, на 70%, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере, на 90%, по меньшей мере, на 95%, по меньшей мере, на 98%, по меньшей мере, на 99%, или, по меньшей мере, на 100% идентичным последовательности иммуноглобулина человека клеток зародышевой линии. В одном варианте воплощения изобретения каркасный участок гуманизированного иммуноглобулина может быть получен из вариабельного участка человеческого антитела класса IgG. В другом варианте воплощения изобретения CD52 представлен человеческим CD52 дикого типа. В еще одном варианте воплощения изобретения гуманизированный иммуноглобулин может конкурировать с алемтузумабом за связывание с человеческим CD52, например, он может связываться с антигенной детерминантой, которая идентична или перекрывает антигенную детерминанту, с которой связывается алемтузумаб.

Изобретение также описывает гуманизированную легкую цепь гуманизированного иммуноглобулина по изобретению. В одном варианте воплощения изобретения гуманизированная легкая цепь состоит из одного или нескольких CDR, состоящих из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 и SEQ ID NO: 48 или их комбинации, при этом гуманизированная легкая цепь не является гуманизированной легкой цепью антитела Кампат®.

В другом варианте воплощения изобретения гуманизированная легкая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 13, при этом гуманизированная легкая цепь не является гуманизированной легкой цепью антитела Кампат®.

Изобретение также описывает гуманизированную тяжелую цепь гуманизированного иммуноглобулина по изобретению. В одном варианте воплощения изобретения гуманизированная тяжелая цепь состоит из одного или нескольких CDR вариабельного домена Ig, состоящих из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74 и SEQ ID NO: 294 или их комбинации, при этом гуманизированная тяжелая цепь не является гуманизированной тяжелой цепью антитела Кампат®.

В других вариантах воплощения изобретения гуманизированная тяжелая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 или SEQ ID NO: 137, при этом гуманизированная тяжелая цепь не является гуманизированной тяжелой цепью антитела Кампат®.

Преимущественно, гуманизированные иммуноглобулины по данному изобретению состоят из гуманизированной легкой цепи по изобретению и гуманизированной тяжелой цепи по изобретению.

В других вариантах воплощения изобретения описан гуманизированный иммуноглобулин, связывающийся с той же самой антигенной детерминантой на CD52 человека, или конкурирующий прямым или перекрестным образом с мышиным моноклональным антителом, состоящим из вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 3 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 16; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 4 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 17; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 5 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 18; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 6 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 19; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 7 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 20; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 8 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 21; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 9 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 22; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 10 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 23; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 11 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 24; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 12 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 25; или вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 13 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 26. В других вариантах воплощения изобретения гуманизированный иммуноглобулин связывается с антигенной детерминантой на CD52 человека, которая перекрывается с антигенной детерминантой, с которой связывается мышиное моноклональное антитело.

В других вариантах воплощения изобретения описан гуманизированный иммуноглобулин, который связывается с антигенной детерминантой на CD52 человека (например, SEQ ID NO: 104) и состоит, по меньшей мере, из остатка 1 последовательности зрелого CD52 человека (при этом остаток 1 является N-концом последовательности зрелого CD52 человека, т.е. N-терминальным остатком глицина [G]; см. ФИГ.4). Гуманизированный иммуноглобулин может связываться с антигенной детерминантой, состоящей, по меньшей мере, из остатков 1, 3, 4 и 5 последовательности зрелого CD52 человека (такие остатки представлены глицином [G], аспарагином [N], аспартатом [D] и треонином [T], соответственно). Гуманизированный иммуноглобулин может связываться с антигенной детерминантой, состоящей, по меньшей мере, из остатков 1, 2, 3, 4 и 5 последовательности зрелого CD52 человека (такие остатки представлены глицином [G], глутамином [Q], аспарагином [N], аспартатом [D] и треонином [T], соответственно). В других вариантах воплощения изобретения описан гуманизированный иммуноглобулин, который связывается с антигенной детерминантой CD52 человека, состоящей, по меньшей мере, из остатков 7, 8 и 9 последовательности зрелого CD52 человека (такие остатки представлены глутамином [Q], треонином [T] и серином [S], соответственно). В некоторых вариантах воплощения изобретения антигенная детерминанта состоит, по меньшей мере, из остатков 7 (Q), 8 (T) и 11 (P) последовательности зрелого CD52 человека. В некоторых вариантах воплощения изобретения антигенная детерминанта состоит, по меньшей мере, из остатков 4 (D) и 11 (P) последовательности зрелого CD52 человека.

В некоторых вариантах воплощения изобретения описан гуманизированный иммуноглобулин, связывающийся с CD52 человека и состоящий из легкой цепи с одним или несколькими CDR, выбираемыми из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 118 и SEQ ID NO: 121 (например, всех трех указанных CDR), или тяжелой цепи с одним или несколькими CDR, выбираемыми из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 127 и SEQ ID NO: 130 (например, всех трех указанных CDR), или обеих тяжелой и легкой цепи. В других вариантах воплощения изобретения описан гуманизированный иммуноглобулин, связывающийся с CD52 человека и состоящий из легкой цепи с одним или несколькими CDR, выбираемыми из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 119 и SEQ ID NO: 122 (например, всех трех указанных CDR), или тяжелой цепи с одним или несколькими CDR, выбираемыми из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 128 и SEQ ID NO: 131 (например, всех трех указанных CDR), или обеих тяжелой и легкой цепи. В еще одних вариантах воплощения изобретения описан гуманизированный иммуноглобулин, связывающийся с CD52 человека и состоящий из легкой цепи с одним или несколькими CDR, выбираемыми из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 120 и SEQ ID NO: 123 (например, всех трех указанных CDR), или тяжелой цепи с одним или несколькими CDR, выбираемыми из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 129 и SEQ ID NO: 132 (например, всех трех указанных CDR), или обеих тяжелой и легкой цепи.

В определенных вариантах воплощения изобретения гуманизированный иммуноглобулин состоит из легкой цепи, включающей CDR с последовательностями SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 118 и SEQ ID NO: 121, и тяжелой цепи, включающей CDR с последовательностями SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 127 и SEQ ID NO: 130. В других вариантах воплощения изобретения гуманизированный иммуноглобулин состоит из легкой цепи, включающей CDR с последовательностями SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 119 и SEQ ID NO: 122, и тяжелой цепи, включающей CDR с последовательностями SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 128 и SEQ ID NO: 131. В других вариантах воплощения изобретения гуманизированный иммуноглобулин состоит из легкой цепи, включающей CDR с последовательностями SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 120 и SEQ ID NO: 123, и тяжелой цепи, включающей CDR с последовательностями SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 129 и SEQ ID NO: 132.

Гуманизированные иммуноглобулины по данному изобретению отличаются от гуманизированного иммуноглобулина Кампат®.

Аминокислотные последовательности указанных выше последовательностей SEQ ID NO: 115-132 представлены ниже и основаны на аминокислотных последовательностях, указанных в Таблицах 1-6 ниже. В таких аминокислотных последовательностях «X» обозначает любую аминокислоту, а символ «/» указывает, что любая аминокислота, рядом с которой ставится такой символ, может присутствовать в указанном месте (например, K/R обозначает, что остаток лизина или аргинина присутствует в указанном положении, а F/L/V обозначает, что в указанном положении присутствует остаток фенилаланина, лейцина или валина).

Последовательности CDR-1 легкой цепи

K/RSSQSLL/V/IXS/TN/DGXS/TYLX (SEQ ID NO: 115)

K/RSSQSLL/V/IHS/TNGXS/TYLH (SEQ ID NO: 116)

RSSQSLVHTNGNS/TYLH (SEQ ID NO: 117)

Последовательности CDR-2 легкой цепи

XVSXXXS (SEQ ID NO: 118)

XVSXRXS (SEQ ID NO: 119)

MVSXRFS (SEQ ID NO: 120)

Последовательности CDR-3 легкой цепи

XQXXH/R/KF/L/V/IXX (SEQ ID NO: 121)

SQSXH/R/KF/L/V/IPX (SEQ ID NO: 122)

SQSXHVPF/P (SEQ ID NO: 123)

Последовательности CDR-1 тяжелой цепи

GFXFXXYW/YMX (SEQ ID NO: 124)

GFTFXXYW/YMX (SEQ ID NO: 125)

GFTFTDYW/YMS (SEQ ID NO: 126)

Последовательности CDR-2 тяжелой цепи

XIRXKXBXYXTXYXXSVKG (SEQ ID NO: 127)

XIRXKXNXYTTEYXXSVKG (SEQ ID NO: 128)

FIRNKANGYTTEYXXSVKG (SEQ ID NO: 129)

Последовательности CDR-3 тяжелой цепи

TXXXY/F/W (SEQ ID NO: 130)

TRYXY/F/WFDY (SEQ ID NO: 131)

TRYIF/WFDY (SEQ ID NO: 132)

Изобретение также описывает гуманизированную легкую цепь, состоящую из одного или нескольких CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 118 и SEQ ID NO: 121 (например, всех трех указанных CDR); гуманизированную легкую цепь, состоящую из одного или нескольких CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 119 и SEQ ID NO: 122 (например, всех трех указанных CDR); или гуманизированную легкую цепь, состоящую из одного или нескольких CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 120 и SEQ ID NO: 123 (например, всех трех указанных CDR).

Изобретение также описывает гуманизированную тяжелую цепь, состоящую из одного или нескольких CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 127 и SEQ ID NO: 130 (например, всех трех указанных CDR); гуманизированную тяжелую цепь, состоящую из одного или нескольких CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 128 и SEQ ID NO: 131 (например, всех трех указанных CDR); или гуманизированную тяжелую цепь, состоящую из одного или нескольких CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 129 и SEQ ID NO: 132 (например, всех трех указанных CDR).

Гуманизированные легкие цепи и гуманизированные тяжелые цепи по данному изобретению отличаются от гуманизированной легкой цепи и гуманизированной тяжелой цепи гуманизированного иммуноглобулина Кампат®.

В некоторых вариантах воплощения данного изобретения гуманизированные иммуноглобулины по изобретению (независимо от того, каким образом они могут быть определены, например, независимо от того, должны ли они быть также определены относительно последовательностей одного или нескольких CDR и/или по их способности перекрестно связываться с мышиным моноклональным антителом или другим гуманизированным иммуноглобулином): (1) обладают способностью связываться с гликозилированным и дегликозилированным CD52 без видимого предпочтения; (2) обладают способностью связываться с гликозилированным CD52; (3) обладают способностью связываться с дегликозилированным CD52; или (4) обладает способностью предпочтительного связывания с дегликозилированным CD52 в сравнении с гликозилированным CD52. В определенных вариантах воплощения изобретения гуманизированные иммуноглобулины по изобретению обладают большей аффинностью связывания с гликозилированным CD52 человека в сравнении с агликозилированным или дегликозилированным CD52 человека. В определенных вариантах воплощения данного изобретения гуманизированные иммуноглобулины по данному изобретению обладают способностью специфически связываться с гликозилированным CD52 человека. Аффинность связывания с агликозилированным или дегликозилированным CD52 человека может быть определена с использованием зрелого CD52 человека, который был подвергнут дегликозилированию с использованием гликозидазы, например, с использованием эндогликозидазы PNGase-F. В определенных вариантах воплощения по данному изобретению гуманизированные иммуноглобулины по изобретению связываются с антигенной детерминантой на зрелом CD52, состоящим из N-присоединенной молекулы углевода. Такая молекула углевода представлена сиалированным, содержащим полилактозамин, тетраантеннальным N-присоединенным олигосахаридом с фукозилированным ядром (Treumann, A. et. al., (1995) J. Biol. Chem. 270:6088-6099). Такая антигенная детерминанта также может состоять из, по меньшей мере, остатка 1 последовательности зрелого CD52 человека, по меньшей мере, остатка 3 последовательности зрелого CD52 человека, по меньшей мере, остатков 1, 3, 4 и 5 последовательности зрелого CD52 человека, или, по меньшей мере, остатков 1, 2, 3, 4 и 5 последовательности зрелого CD52 человека. В некоторых вариантах воплощения изобретения мышиные или химерные антитела по данному изобретению могут обладать любым из таких свойств связывания.

Также представлено описание изолированных молекул нуклеиновых кислот, кодирующих гуманизированный иммуноглобулин, гуманизированную легкую цепь или гуманизированную тяжелую цепь по изобретению, как это определено в тексте данной заявки. В некоторых вариантах воплощения изобретение представляет собой одну или несколько изолированных молекул, кодирующих гуманизированную тяжелую цепь и гуманизированную легкую цепь, которые объединяются вместе с образованием гуманизированного иммуноглобулина, который обладает специфичностью связывания с человеческим CD52, при этом гуманизированная легкая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 3, а тяжелая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 16; легкая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 4, а тяжелая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 17; легкая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 5, а тяжелая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 18; легкая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 6, а тяжелая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 19; легкая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 7, а тяжелая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 20; легкая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 8, а тяжелая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 21; легкая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 9, а тяжелая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 22; легкая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 10, а тяжелая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 23; легкая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 11, а тяжелая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 24; легкая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 12, а тяжелая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 25; легкая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 12, а тяжелая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 137; или легкая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 13, а тяжелая цепь состоит из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 26.

В некоторых вариантах воплощения изобретения описана одна или несколько изолированных молекул нуклеиновых кислот, кодирующих гуманизированную тяжелую цепь и гуманизированную легкую цепь, которые соединяются вместе с образованием гуманизированного иммуноглобулина, обладающего специфичностью связывания с CD52 человека, при этом гуманизированный иммуноглобулин связывается с той же самой антигенной детерминантой на CD52 человека, что и мышиное моноклональное антитело, и состоит из вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 3 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 16; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 4 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 17; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 5 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 18; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 6 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 19; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 7 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 20; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 8 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 21; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 9 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 22; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 10 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 23; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 11 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 24; вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 12 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 25; или вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 13 и вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 26. В других вариантах воплощения изобретение представлено одной или несколькими изолированными молекулами нуклеиновых кислот, кодирующих гуманизированную тяжелую цепь и гуманизированную легкую цепь, которые соединяются вместе с образованием гуманизированного иммуноглобулина, обладающего специфичностью связывания с CD52 человека, при этом гуманизированный иммуноглобулин связывается с антигенной детерминантой CD52 человека, которая перекрывается с антигенной детерминантой, с которой связывается мышиное моноклональное антитело.

В других вариантах воплощения изобретение представлено одной или несколькими изолированными молекулами нуклеиновых кислот, кодирующих гуманизированную тяжелую цепь и гуманизированную легкую цепь, которые соединяются вместе с образованием гуманизированного иммуноглобулина, обладающего специфичностью связывания с CD52 человека, при этом гуманизированный иммуноглобулин связывается с антигенной детерминантой, состоящей, по меньшей мере, из остатка 1 зрелого CD52 человека; гуманизированный иммуноглобулин связывается с антигенной детерминантой, состоящей, по меньшей мере, из остатков 1, 3, 4 и 5 зрелого CD52 человека; гуманизированный иммуноглобулин связывается с антигенной детерминантой, состоящей, по меньшей мере, из остатков 1, 2, 3, 4 и 5 зрелого CD52 человека; или гуманизированный иммуноглобулин связывается с антигенной детерминантой, состоящей, по меньшей мере, из остатков 7, 8 и 9 зрелого CD52 человека. В некоторых вариантах воплощения изобретения антигенная детерминанта состоит, по меньшей мере, из остатков 7, 8 и 11 последовательности зрелого CD52 человека. В некоторых вариантах воплощения изобретения антигенная детерминанта состоит, по меньшей мере, из остатков 4 и 11 последовательности зрелого CD52 человека.

В других вариантах воплощения изобретение представлено одной или несколькими изолированными молекулами нуклеиновых кислот, кодирующих гуманизированную тяжелую цепь и гуманизированную легкую цепь, которые соединяются вместе с образованием гуманизированного иммуноглобулина, обладающего специфичностью связывания с CD52 человека, при этом гуманизированный иммуноглобулин состоит из легкой цепи, включающей один или несколько CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 118 и SEQ ID NO: 121 (например, всех трех указанных CDR), и/или тяжелой цепи, включающей один или несколько CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 127 и SEQ ID NO: 130 (например, всех трех указанных CDR); легкой цепи, включающей один или несколько CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 119 и SEQ ID NO: 122 (например, всех трех указанных CDR), и/или тяжелой цепи, включающей один или несколько CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 128 и SEQ ID NO: 131 (например, всех трех указанных CDR); или легкой цепи, включающей один или несколько CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 120 и SEQ ID NO: 123 (например, всех трех указанных CDR), и/или тяжелой цепи, включающей один или несколько CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 129 и SEQ ID NO: 132 (например, всех трех указанных CDR).

В определенных вариантах воплощения изобретение представлено одной или несколькими изолированными молекулами нуклеиновых кислот, кодирующих гуманизированную тяжелую цепь и гуманизированную легкую цепь, которые соединяются вместе с образованием гуманизированного иммуноглобулина, обладающего специфичностью связывания с CD52 человека, при этом гуманизированный иммуноглобулин состоит из легкой цепи, включающей CDR с последовательностями SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 118 и SEQ ID NO: 121, и тяжелой цепи, включающей CDR с последовательностями SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 127 и SEQ ID NO: 130; легкой цепи, включающей CDR с последовательностями SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 119 и SEQ ID NO: 122, и тяжелой цепи, включающей CDR с последовательностями SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 128 и SEQ ID NO: 131; или легкой цепи, включающей CDR с последовательностями SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 120 и SEQ ID NO: 123, и тяжелой цепи, включающей CDR с последовательностями SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 129 и SEQ ID NO: 132.

Одна или несколько нуклеиновых кислот по изобретению не кодируют гуманизированный иммуноглобулин Кампат®.

В других вариантах воплощения изобретение представлено одной или несколькими изолированными молекулами нуклеиновых кислот, кодирующих гуманизированную тяжелую цепь и гуманизированную легкую цепь, которые соединяются вместе с образованием гуманизированного иммуноглобулина, обладающего специфичностью связывания с CD52 человека, при этом гуманизированный иммуноглобулин имеет большую аффинность связывания с гликозилированным CD52 человека, чем с агликозилированным или дегликозилированным CD52 человека, например, обладает специфичностью связывания с гликозилированным CD52 человека. Гуманизированный иммуноглобулин может связываться с антигенной детерминантой на зрелом CD52 человека, которая состоит из N-присоединенной молекулы углевода. Такая антигенная детерминанта также может состоять из, по меньшей мере, остатка 1 последовательности зрелого CD52 человека, по меньшей мере, остатка 3 последовательности зрелого CD52 человека, по меньшей мере, остатков 1, 3, 4 и 5 последовательности зрелого CD52 человека, или, по меньшей мере, остатков 1, 2, 3, 4 и 5 последовательности зрелого CD52 человека.

В других вариантах воплощения изобретение представлено изолированной молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей гуманизированную легкую цепь, состоящую из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 13, при этом гуманизированная легкая цепь не является гуманизированной легкой цепью антитела Кампат®.

В других вариантах воплощения изобретение представлено изолированной молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей гуманизированную тяжелую цепь, состоящую из одного или нескольких CDR (например, всех трех CDR) с последовательностью SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 или SEQ ID NO: 137, при этом гуманизированная тяжелая цепь не является гуманизированной тяжелой цепью антитела Кампат®.

В других вариантах воплощения изобретение представлено изолированной молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей гуманизированную легкую цепь, состоящую из одного или нескольких CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 и SEQ ID NO: 48 или их комбинации, при этом гуманизированная легкая цепь не является гуманизированной легкой цепью антитела Кампат®.

В других вариантах воплощения изобретение представлено изолированной молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей гуманизированную тяжелую цепь, состоящую из одного или нескольких CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74 и SEQ ID NO: 294 или их комбинации, при этом гуманизированная тяжелая цепь не является гуманизированной тяжелой цепью антитела Кампат®.

В других вариантах воплощения изобретение представлено изолированной молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей гуманизированную легкую цепь, состоящую из одного или нескольких CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 118 и SEQ ID NO: 121 (например, всех трех указанных CDR); гуманизированную легкую цепь, состоящую из одного или нескольких CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 119 и SEQ ID NO: 122 (например, всех трех указанных CDR); или гуманизированную легкую цепь, состоящую из одного или нескольких CDR, выбираемых из группы последовательностей, включающей SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 120 и SEQ ID NO: 123 (например, всех трех указанных CDR).

В других вариантах воплощения изобретение представлено изолированной молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей гуманизированную тяжелую цепь, состоящую из одного или нескольких CDR, выбир