2621035 - Способы получения конъюгатов

Способы получения конъюгатов

Иллюстрации

Показать все

Изобретение относится к способу получения конъюгата, включающего агент, связывающийся с клетками (СВА), конъюгированный с цитотоксическим соединением посредством связывающей группы, причем указанный способ включает взаимодействие модифицированного цитотоксического соединения с модифицированным СВА при pH от приблизительно 4 до приблизительно 9, причем модифицированный СВА включает остаток бифункционального сшивающего агента, связанный с СВА, а указанный остаток включает связывающую группу и группу, способную взаимодействовать с тиолом, где СВА представляет собой антитело, и модифицированный СВА представлен формулами, указанными в формуле изобретения, модифицированное цитотоксическое соединение включает тиоловую группу и его получают взаимодействием имин-содержащего цитотоксического соединения, несущего тиоловую группу, с реагентом, способным взаимодействовать с иминами, и где имин-содержащее цитотоксическое соединение представлено формулой:

в которой X' представляет собой –Н, Y' представляет собой -Н или оксогруппу, W' представляет собой -N(R^e)-, R^e представляет собой -(CH₂-CH₂-O)_n-R^k, где R^k является -H, линейным, разветвленным или циклическим алкилом, имеющим от 1 до 6 атомов углерода, n является целым числом от 1 до 24, R^x является линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 6 атомов углерода, А и А' являются -О-, R₆ является -OR, R, в каждом случае, представляет собой линейный или разветвленный алкил, имеющий от 1 до 6 атомов углерода, G представляет собой -CH-, и реагент, способный взаимодействовать с иминами, выбран из группы, состоящей из сульфита, метабисульфита и дитионита. Изобретение также относится к иным способам получения конъюгата. Технический результат: предложены новые способы получения конъюгата с использованием реагента, способного взаимодействовать и иминами, для модификации имин-содержащих цитотоксических соединений. 6 н. и 48 з.п. ф-лы, 28 ил., 16 табл., 16 пр.

Реферат

ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[01] Настоящая заявка, согласно 35 USC §119 (е), испрашивает приоритет даты подачи предварительной заявки США №61/443062, поданной 15 февраля 2011 г., предварительной заявки США №61/483499, поданной 6 мая 2011 г., и предварительной заявки США №61/443092, поданной 15 февраля 2011 г., полное содержание которых, включая все чертежи, формулы, описания и формулы изобретения, включено сюда посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[02] Настоящее изобретение описывает использование реагентов, способных взаимодействовать с иминами, для получения конъюгатов агентов, связывающихся с клетками, с ДНК-связывающими цитотоксическими лекарственными веществами, содержащими одну или более иминовых функциональных групп.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[03] В качестве терапевтических средств против рака все чаще тестируются моноклональные антитела. Несколько моноклональных антител против антигенов поверхности раковых клеток уже одобрено для лечения рака, например ритуксимаб - для неходжкинской лимфомы, трастузумаб - для рака молочной железы, цетуксимаб - для рака головы и шеи и рака толстой кишки, цетуксимаб, панитимумаб и бевацизумаб - для рака толстой кишки, и алемтузумаб для хронического лимфолейкоза (Strome, S.Е., Sausville, Е.A., and Mann, D., 2007, The Oncologist, 12, 1084-1095). Тем не менее, цитотоксическая активность "оголенного" антитела может быть ограничена механизмами ингибирования рецепторной функции, комплемент-зависимой цитотоксичностью (CDC) и антитело-зависимой клеточноопосредованной цитотоксичностью (ADCC).

[04] Подход к усилению цитотоксической активности антител к раковым клеткам-мишеням заключается в связывании антитела с цитотоксическими эффекторами (А.D. Ricart, and A.W. Tolcher, 2007, Nat. din. Pract. Oncol. 4, 245-255; Lambert, J., 2010, Drugs of the Future 35, 471-480). Конъюгат антитело/цитотоксическое лекарственное вещество (АЦК) специфически связывается с раковыми клетками, затем происходит интернализация и разрушение конъюгата, что приводит к внутриклеточному высвобождению токсичного лекарственного вещества и, в конечном итоге, к гибели раковых клеток. Цитотоксические лекарственные вещества, используемые в соединении с антителами, включают антитубулиновые лекарственные вещества, например майтанзиноиды и ауристатины, ДНК-связывающие лекарственные вещества, например калихеамицин, вызывающий сайт-специфическое расщепление двухцепочечной ДНК. Еще один класс ДНК-связывающих цитотоксических лекарственных веществ включает имин-содержащие пирролбензодиазепины (PBD), например N-2-имидазолилалкил-замещенный 1,2,5-бензотиадиазепин-1,1-диоксид, патент США №6156746), бензо-пиридо- или -дипиридотиадиазепин (WO 2004/069843), пиррол[1,2-b][1,2,5]бензотиадиазепины и производные пиррол[1,2-b][1,2,5]бензодиазепина (WO 2007/015280), производные томаймицина (например, пиррол[1,4]бензодиазепины), например, описанные в WO 00/12508, WO 2005/085260, WO 2007/085930, ЕР 2019104 и патенте США №6156746). Другие ДНК-связывающие бензодиазепиновые лекарственные вещества описаны в патентной публикации США №2010/0203007 А1. Указанные бензодиазепиновые лекарственные вещества, содержащие иминовые связи, связываются с малой бороздкой ДНК и вносят помехи в функционирование ДНК, что приводит к гибели клеток.

[05] Существует потребность в новых способах получения конъюгатов агента, связывающего клетки, и цитотоксических лекарственных веществ, несущих иминовую группу.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[06] Настоящее изобретение описывает использование реагентов, способных взаимодействовать с иминами, для обработки имин-содержащего лекарственного вещества, приводящей к неожиданному улучшению реакции его конъюгирования с агентами, связывающимися с клетками (СВА), например антителами. Указанные реагенты являются таковыми, что не ослабляется свойство лекарственных веществ уничтожать клетки и полностью сохраняется целостность СВА (антитела).

[07] В одном варианте воплощения настоящее изобретение относится к способу получения конъюгата, включающего агент, связывающийся с клетками (СВА), конъюгированный с цитотоксическим соединением посредством связывающей группы, причем указанный способ включает взаимодействие цитотоксического соединения с модифицированным СВА при рН приблизительно от 4 до 9, причем:

а) модифицированный СВА включает остаток бифункционального сшивающего агента, связанный с СВА, а указанный остаток включает связывающую группу и группу, способную взаимодействовать с тиолом; и

б) цитотоксическое соединение включает тиоловую группу и группу, представленную формулой:

где:

Y является уходящей группой и является сульфитом (HSO₃, HSO₂ или солью HSO₃^-, SO₃^2- или HSO₂^-, образованной катионом), метабисульфитом (H₂S₂O₅ или солью S₂O₅^2-, образованной катионом), моно-, ди-, три- и тетратиофосфатом (PO₃SH₃, PO₂S₂H₂, POS₃H₂, PS₄H₂ или солью PO₃S^3-, PO₂S₂^3-, POS₃^3- или PS₄^3-, образованной катионом), сложным эфиром тиофосфата (RⁱO)₂PS(ORⁱ), RⁱS-, RⁱSO, RⁱSO₂, RⁱSO₃, тиосульфатом (HS₂O₃ или солью S₂O₃^2-, образованной катионом), дитионитом (HS₂O₄ или солью S₂O₄^2-, образованной катионом), фосфородитиоатом (P(=S)(OR^k')(S)(OH) или его солью, образованной катионом), гидроксамовой кислотой (R^k'C(=O)NOH или солью, образованной катионом), формальдегидсульфоксилатом (HOCH₂SO₂^- или солью HOCH₂SO₂^-, образованной катионом, например HOCH₂SO₂^-Na⁺) или их смесью, где Rⁱ является линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, и замещен по меньшей мере одним заместителем, выбранным из -N(R^j)₂, -CO₂H, -SO₃H и -РО₃Н; Rⁱ, необязательно, может быть дополнительно замещен заместителем для алкила, описанным здесь; R^j является линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 6 атомов углерода; R^k' является линейным, разветвленным или циклическим алкилом, алкенилом или алкинилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, арилом, гетероциклилом или гетероарилом.

[08] В некоторых вариантах воплощения цитотоксическое соединение получают взаимодействием имин-содержащего цитотоксического соединения, несущего тиоловую группу, с реагентом, способным взаимодействовать с иминами.

[09] В еще одном варианте воплощения настоящее изобретение относится к способу получения конъюгата, включающего агент, связывающийся с клетками (СВА), конъюгированный с цитотоксическим соединением посредством связывающей группы, способу, включающему взаимодействие СВА с имин-содержащим цитотоксическим соединением, реагентом, способным взаимодействовать с иминами, и бифункциональным сшивающим агентом, включающим связывающую группу, с образованием конъюгата.

[10] В еще одном варианте воплощения настоящее изобретение относится к способу получения конъюгата, включающего агент, связывающийся с клетками (СВА), конъюгированный с цитотоксическим соединением посредством связывающей группы, способу, включающему:

а) взаимодействие цитотоксического соединения с бифункциональным сшивающим агентом, включающим связывающую группу, группу, реагирующую с СВА (например, тиоловую группу, малеимидную группу, галоацетамидную группу или аминогруппу), и группу, реагирующую с цитотоксическим соединением, с образованием модифицированного цитотоксического соединения, ковалентно связанного с остатком бифункционального сшивающего агента, причем указанный остаток включает связывающую группу и группу, реагирующую с СВА;

причем цитотоксическое соединение представлено одной из следующих формул или ее фармацевтически приемлемой солью:

и,

где:

Y является уходящей группой и является сульфитом (HSO₃, HSO₂ или солью HSO₃^-, SO₃^2- или HSO₂^-, образованной катионом), метабисульфитом (H₂S₂O₅ или солью S₂O₅^2-, образованной катионом), моно-, ди-, три- и тетратиофосфатом (PO₃SH₃, PO₂S₂H₂, POS₃H₂, PS₄H₂ или солью PO₃S^3-, PO₂S₂^3-, POS₃^3- или PS₄^3-, образованной катионом), сложным эфиром тиофосфата (RⁱO)₂PS(ORⁱ), RⁱS-, RⁱSO, RⁱSO₂, PⁱSO₃, тиосульфатом (HS₂O₃ или солью S₂O₃^2-, образованной катионом), дитионитом (HS₂O₄ или солью S₂O₄^2-, образованной катионом), фосфородитиоатом (P(=S)(OR^k')(S)(OH) или его солью, образованной катионом), гидроксамовой кислотой (R^k'C(=O)NOH или солью, образованной катионом), формальдегидсульфоксилатом (HOCH₂SO₂^- или солью HOCH₂SO₂^-, образованной катионом, например HOCH₂SO₂^-Na⁺) или их смесью, где Rⁱ является линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, и замещен по меньшей мере одним заместителем, выбранным из -N(R^j)₂, -CO₂H, -SO₃H и -РО₃Н; Rⁱ, необязательно, может быть дополнительно замещен заместителем для алкила, описанным здесь; R^j является линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 6 атомов углерода; R^k' является линейным, разветвленным или циклическим алкилом, алкенилом или алкинилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, арилом, гетероциклилом или гетероарилом;

X' выбран из -Н, амин-блокирующей группы, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, мономера полиэтиленгликоля -(CH₂CH₂O)_n-R^c, необязательно замещенного арила, имеющего от 6 до 18 атомов углерода, необязательно замещенного 5-18-членного гетероарильного кольца, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, и необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, содержащего от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из О, S, N и Р;

Y' выбран из -Н, оксогруппы, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенного 6-18-членного арила, необязательно замещенного 5-18-членного гетероарильного кольца, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, имеющего от 1 до 6 гетероатомов;

R^c является -Н или замещенным или незамещенным линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 4 атомов углерода;

каждая из R₁, R₂, R₃, R₄, R₁', R₂', R₃' и R₄', независимо, выбрана из группы, состоящей из -Н, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, мономера полиэтиленгликоля -(OCH₂CH₂)_n-R^c, галогена, гуанидиния [-NH(ONH)NH₂], -OR, -NR'Rʺ, -NO₂, -NCO, -NR'CORʺ, -SR, сульфоксида, представленного -SOR', сульфона, представленного -SO₂R', сульфоната -SO₃^-M⁺, сульфата -OSO₃^-M⁺, сульфонамида, представленного -SO₂NR'Rʺ, цианогруппы, азидной группы, -COR', -OCOR', -OCONR'Rʺ;

R, в каждом случае независимо, выбрана из группы, состоящей из -Н, амин-блокирующей группы, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, мономера полиэтиленгликоля -(CH₂CH₂O)_n-R^c, необязательно замещенного арила, имеющего от 6 до 18 атомов углерода, необязательно замещенного 5-18-членного гетероарильного кольца, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, или необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, содержащего от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из О, S, N и Р;

каждая из R' и Rʺ, независимо, выбрана из -Н, -ОН, -OR, -NHR, -NR₂, -COR, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, мономера полиэтиленгликоля -(CH₂CH₂O)_n-R^c и необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, имеющего от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из О, S, N и Р;

n является целым числом от 1 до 24;

W выбрана из С=O, C=S, CH₂, ВН, SO и SO₂;

R₆ является -Н, -R, -OR, -SR, -NR'Rʺ, -NO₂ или галогеном;

Z и Z', независимо, выбраны из -(CH₂)_n'-, -(CH₂)_n'-CR₇R₈-(CH₂)_na'-, -(СН₂)_n'-NR₉-(CH₂)_na'-, -(CH₂)_n'-O-(CH₂)_na'- и -(CH₂)_n'-S-(CH₂)_na'-;

n' и na' являются одинаковыми или различными и выбраны из 0, 1, 2 и 3;

R₇ и R₈ являются одинаковыми или различными, и каждая из них, независимо, выбрана из -Н, -ОН, -SH, -СООН, -NHR', мономера полиэтиленгликоля -(ОСН₂СН₂)_n-, аминокислоты, пептидной единицы, несущей от 2 до 6 аминокислот, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода;

R₉, независимо, выбрана из -Н, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, мономера полиэтиленгликоля -(ОСН₂СН₂)_n-;

А и А' являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из -O-, оксо (-С(=O)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -N(R₅)- и -CRR'N(R₅)-,

R₅, в каждом случае независимо, является -Н или, необязательно, замещенным линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода;

D и D' являются одинаковыми или различными и независимо отсутствуют или выбраны из группы, состоящей из необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, аминокислоты, пептида, несущего от 2 до 6 аминокислот, и мономера полиэтиленгликоля (-ОСН₂СН₂)_n-;

L отсутствует или, если присутствует, включает тиоловую группу, или является мономером полиэтиленгликоля (-ОСН₂СН₂)_n-, линейным, разветвленным или циклическим алкилом или алкенилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, фенильной группой, 3-18-членным гетероциклическим кольцом или 5-18-членным гетероарильным кольцом, имеющим от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из О, S, N и Р, где алкил, алкенил, фенил или гетероциклическое или гетероарильное кольцо является необязательно замещенным; и

б) взаимодействие модифицированного цитотоксического соединения с СВА посредством группы, реагирующей с СВА, при рН от приблизительно 4 до приблизительно 9, с образованием конъюгата.

[11] В любом из вышеописанных вариантов воплощения имин-содержащее цитотоксическое соединение может быть представлено любой из следующих формул или ее фармацевтически приемлемой солью:

где:

X' выбрана из -Н, амин-блокирующей группы, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, мономера полиэтиленгликоля -(CH₂CH₂O)_n-R^c, необязательно замещенного арила, имеющего от 6 до 18 атомов углерода, необязательно замещенного 5-18-членного гетероарильного кольца, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, и необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, содержащего от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из О, S, N и Р;

Y' выбрана из -Н, оксогруппы, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенного 6-18-членного арила, необязательно замещенного 5-18-членного гетероарильного кольца, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, имеющего от 1 до 6 гетероатомов;

каждая из R₁, R₂, R₃, R₄, R₁', R₂', R₃' и R₄', независимо, выбрана из группы, состоящей из -Н, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, мономера полиэтиленгликоля -(OCH₂CH₂)_n-R^c, галогена, гуанидиния [-NH(C=NH)NH₂], -OR, -NR'Rʺ, -NO₂, -NCO, -NR'CORʺ, -SR, сульфоксида, представленного -SOR', сульфона, представленного -SO₂R', сульфоната -SO₃^-M⁺, сульфата -OSO₃^-M⁺, сульфонамида, представленного -SO₂NR'Rʺ, цианогруппы, азидной группы, -COR', -OCOR', -OCONR'Rʺ и связывающей группы;

n является целым числом от 1 до 24;

W выбрана из С=O, C=S, CH₂, ВН, SO и SO₂;

R₆ является -Н, -R, -OR, -SR, -NR'Rʺ, -NO₂ или галогеном;

Z и Z', независимо, выбраны из -(СН₂)_n'-, -(CH₂)_n'-CR₇R₈-(CH₂)_na'-, -(CH₂)_n'-NR₉-(CH₂)_na'-, -(СН₂)_n'-O-(СН₂)na_'- и -(CH₂)_n'-S-(CH₂)_na'-;

n' и na' являются одинаковыми или различными и выбраны из 0, 1, 2 и 3;

А и А' являются одинаковыми или различными и, независимо, выбраны из -O-, оксо(-С(=O)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -N(R₅)- и -CRR'N(R₅)-,

R₅, в каждом случае независимо, является -Н или необязательно замещенным линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода;

D и D' являются одинаковыми или различными и, независимо, отсутствуют или выбраны из группы, состоящей из необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, аминокислоты, пептида, несущего от 2 до 6 аминокислот, и мономера полиэтиленгликоля (-ОСН₂СН₂)_n-;

L отсутствует или, если присутствует, включает тиоловую группу и является мономером полиэтиленгликоля (-ОСН₂СН₂)_n-, линейным, разветвленным или циклическим алкилом или алкенилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, фенильной группой, 3-18-членным гетероциклическим кольцом или 5-18-членным гетероарильным кольцом, имеющим от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из О, S, N и Р, где алкил, алкенил, фенил или гетероциклическое или гетероарильное кольцо является, необязательно, замещенным.

[12] В еще одном варианте воплощения настоящее изобретение относится к способу получения конъюгата, включающего агент, связывающийся с клетками (СВА), конъюгированный с цитотоксическим соединением посредством связывающей группы, причем указанный способ включает взаимодействие модифицированного цитотоксического соединения с СВА при рН приблизительно от 4 до 9, причем модифицированное цитотоксическое соединение включает:

а) остаток бифункционального сшивающего агента, связанный с цитотоксическим соединением и включающий связывающую группу и реакционно-способную группу, выбранную из реакционно-способного сложного эфира, и группы, реагирующей с тиолами, и

б) группу, представленную:

где:

Y является уходящей группой и является сульфитом (HSO₃, HSO₂ или солью HSO₃^-, SO₃^2- или HSO₂^-, образованной катионом), метабисульфитом (_H2S2O5s или солью S₂O₅^2-, образованной катионом), моно-, ди-, три- и тетратиофосфатом (PO₃SH₃, PO₂S₂H₂, POS₃H₂, PS₄H₂ или солью PO₃S^3-, PO₂S₂^3-, POS^3- или PS₄^3-, образованной катионом), сложным эфиром тиофосфата (R_iO)₂PS(ORⁱ), RⁱS-, RⁱSO, RⁱSO₂, RⁱSO₃, тиосульфатом (HS₂O₃ или солью S₁O₃^2-, образованной катионом), дитионитом (HS₂O₄ или солью S₂O₄^2-, образованной катионом), фосфородитиоатом (P(=S)(OR^k')(S)(OH) или его солью, образованной катионом), гидроксамовой кислотой (R^k'C(=O)NOH или солью, образованной катионом), формальдегидсульфоксилатом (HOCH₂SO₂^- или солью HOCH₂SO₂^-, образованной катионом, например HOCH₂SO₂^-Na⁺) или их смесью, где Rⁱ является линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, и замещен по меньшей мере одним заместителем, выбранным из -N(R^j)₂, -CO₂H, -SO₃H и -РО₃Н; Rⁱ, необязательно, может быть дополнительно замещена заместителем для алкила, описанным здесь; R^j является линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 6 атомов углерода; R^k' является линейным, разветвленным или циклическим алкилом, алкенилом или алкинилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, арилом, гетероциклилом или гетероарилом.

[13] В некоторых вариантах воплощения модифицированное цитотоксическое соединение получают путем взаимодействия реагента, способного взаимодействовать с иминами, с имин-содержащим цитотоксическим соединением, несущим связывающую группу и реакционно-способную группу.

[14] В любом из вышеописанных вариантов воплощения модифицированное цитотоксическое соединение представлено любой из следующих формул:

или ее фармацевтически приемлемой солью, где:

Y является сульфитом (HSO₃, HSO₂ или солью HSO₃^-, SO₃^2- или HSO₂^-, образованной катионом), метабисульфитом (H₂S₂O₅ или солью S₂O₅^2-, образованной катионом), моно-, ди-, три- и тетратиофосфатом (PO₃SH₃, PO₂S₂H₂, POS₃H₂, PS₄H₂ или солью PO₃S^3-, PO₂S₂^3-, POS₃^3- или PS₄^3-, образованной катионом), сложным эфиром тиофосфата (RⁱO)₂PS(ORⁱ), RⁱS-, RⁱSO, RⁱSO₂, RⁱSO₃, тиосульфатом (HS₂O₃ или солью S₂O₃^2-, образованной катионом), дитионитом (HS₂O₄ или солью S₂O₄^2-, образованной катионом), фосфородитиоатом (P(=S)(OR^k')(S)(OH) или его солью, образованной катионом), гидроксамовой кислотой (R^k'C(=O)NOH или солью, образованной катионом), формальдегидсульфоксилатом (HOCH₂SO₂^- или солью HOCH₂SO₂^-, образованной катионом, например HOCH₂SO₂^-Na⁺) или их смесью, где R¹ является линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, и замещен по меньшей мере одним заместителем, выбранным из -N(R^j)₂, -CO₂H, -SO₃H и -РО₃Н; Rⁱ, необязательно, может быть дополнительно замещен заместителем для алкила, описанным здесь; R^j является линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 6 атомов углерода; R^k' является линейным, разветвленным или циклическим алкилом, алкенилом или алкинилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, арилом, гетероциклилом или гетероарилом;

X' выбрана из -Н, амин-блокирующей группы, связывающей группы с присоединенной к ней реакционно-способной группой, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, мономера полиэтиленгликоля -(CH₂CH₂O)_n-R^c, необязательно замещенного арила, имеющего от 6 до 18 атомов углерода, необязательно замещенного 5-18-членного гетероарильного кольца, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, и необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, содержащего от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из О, S, N и Р;

Y' выбрана из -Н, оксогруппы, связывающей группы с присоединенной к ней реакционно-способной группой, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенного 6-18-членного арила, необязательно замещенного 5-18-членного гетероарильного кольца, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, имеющего от 1 до 6 гетероатомов;

R^c является -Н или замещенным или незамещенным линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 4 атомов углерода, или связывающей группой с присоединенной к ней реакционно-способной группой;

каждая из R₁, R₂, R₃, R₄, R₁', R₂', R₃' и R₄', независимо, выбрана из группы, состоящей из -Н, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, мономера полиэтиленгликоля -(ОСН₂СН₂)_n-R^c, галогена, гуанидиния [-NH(C=NH)NH₂], -OR, -NR'Rʺ, -NO₂, -NCO, -NR'CORʺ, -SR, сульфоксида, представленного -SOR', сульфона, представленного -SO₂R', сульфоната -SO₃^-M⁺, сульфата -OSO₃^-M⁺, сульфонамида, представленного -SO₂NR'Rʺ, цианогруппы, азидной группы, -COR', -OCOR', -OCONR'Rʺ и связывающей группы с присоединенной к ней реакционно-способной группой;

n является целым числом от 1 до 24;

W выбрана из С=O, C=S, CH₂, ВН, SO и SO₂;

R₆ является -Н, -R, -OR, -SR, -NR'Rʺ, -NO₂, галогеном или связывающей группой с присоединенной к ней реакционно-способной группой;

Z и Z', независимо, выбраны из -(CH₂)_n'-, -(CH₂)_n'-CR₇R₈-(CH₂)_na'-, -(СН₂)_n'-NR₉-(CH₂)_na'-, -(СН₂)_n'-O-(СН₂)na_'- и -(CH₂)_n'-S-(CH₂)_na'-;

n' и na' являются одинаковыми или различными и выбраны из 0, 1, 2 и 3;

R9, независимо, выбрана из -Н, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, мономера полиэтиленгликоля -(OCH₂CH₂)_n-;

А и А' являются одинаковыми или различными и, независимо, выбраны из -O-, оксо (-С(=О)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -NR₅ и -CRR'N(R₅)-;

L отсутствует, является связывающей группой с присоединенной к ней реакционно-способной группой, мономером полиэтиленгликоля (-ОСН₂СН₂)_n-, линейным, разветвленным или циклическим алкилом или алкенилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, фенильной группой, 3-18-членным гетероциклическим кольцом или 5-18-членным гетероарильным кольцом, имеющим от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из О, S, N и Р, где алкил или алкенил, необязательно, замещены связывающей группой с присоединенной к ней реакционно-способной группой; фенил или гетероциклическое или гетероарильное кольцо могут быть, необязательно, замещены, причем заместитель может являться связывающей группой с присоединенной к ней реакционно-способной группой.

[15] В любом из вышеописанных вариантов воплощения цитотоксическое соединение и связывающая группа конъюгата представлены любой из следующих формул:

или ее фармацевтически приемлемой солью, где:

Y является уходящей группой и является сульфитом (HSO₃, HSO₂ или солью HSO₃^-, SO₃^2- или HSO₂^-, образованной катионом), метабисульфитом (H₂S₂O₅ или солью S₂O₅^2-, образованной катионом), моно-, ди-, три- и тетратиофосфатом (PO₃SH₃, PO₂S₂H₂, POS₃H₂, PS₄H₂ или солью PO₃S^3-, PO₂S₂^3-, POS₃^3- или PS₄^3-, образованной катионом), сложным эфиром тиофосфата (RⁱO)₂PS(ORⁱ), RⁱS-, RⁱSO, RⁱSO₂, RⁱSO₃, тиосульфатом (HS₂O₃ или солью S₂O₃^2-, образованной катионом), дитионитом (HS₂O₄ или солью S₂O₄^2-, образованной катионом), фосфородитиоатом (P(=S)(OR^k')(S)(OH) или его солью, образованной катионом), гидроксамовой кислотой (R^k'C(=O)]NOH или солью, образованной катионом), формальдегидсульфокеилатом (HOCH₂SO₂^- или солью HOCH₂SO₂^-, образованной катионом, например HOCH₂SO₂^-Na⁺) или их смесью, где Rⁱ является линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, и замещен по меньшей мере одним заместителем, выбранным из -N(R^j)₂, -CO₂H, -SO₃H и РО₃Н; Rⁱ, необязательно, может быть дополнительно замещен заместителем для алкила, описанным здесь; R^j является линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 6 атомов углерода; R^k' является линейным, разветвленным или циклическим алкилом, алкенилом или алкинилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, арилом, гетероциклилом или гетероарилом;

X' выбрана из -Н, амин-блокирующей группы, связывающей группы, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, мономера полиэтиленгликоля -(CH₂CH₂O)_n-R^c, необязательно замещенного арила, имеющего от 6 до 18 атомов углерода, необязательно замещенного 5-18-членного гетероарильного кольца, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, и необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, содержащего от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из О, S, N и Р;

Y' выбрана из -Н, оксогруппы, связывающей группы, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенного 6-18-членного арила, необязательно замещенного 5-18-членного гетероарильного кольца, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы, необязательно замещенного 3-18-членного гетероциклического кольца, имеющего от 1 до 6 гетероатомов;

R^c является -Н или замещенным или незамещенным линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 4 атомов углерода, или связывающей группой;

каждая из R₁, R₂, R₃, R₄, R₁', R₂', R₃' и R₄', независимо, выбрана из группы, состоящей из -Н, необязательно замещенного линейного, разветвленного или циклического алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 атомов углерода, мономера полиэтиленгликоля -(OCH₂CH₂)_n-R^c, галогена, гуанидиния [-NH(C=NH)NH₂], -OR, -NR'Rʺ, -NO₂, -NCO, -NR'CORʺ, -SR, сульфоксида, представленного -SOR', сульфона, представленного -SO₂R', сульфоната -SO₃^-M⁺ сульфата -OSO₃^-M⁺ сульфонамида, представленного -SO₂NR'Rʺ, цианогруппы, азидной группы, -COR', -OCOR', -OCONR'Rʺ и связывающей группы;

М является -Н или фармацевтически приемлемым катионом, например Na⁺;

n является целым числом от 1 до 24;

W выбрана из С=O, OS, CH₂, BH, SO и SO₂;

R₆ является -Н, -R, -OR, -SR, -NR'Rʺ, -NO₂, галогеном или связывающей группой;

Z и Z', независимо, выбраны из -(CH₂)_n'-, -(CH₂)_n'-CR₇R₈-(CH₂)_na', -(CH₂)_n'-NR₉-(CH₂)_na'-, -(CH₂)_n'-O-(CH₂)_na'- и -(CH₂)_n-S-(CH₂)_na'-;

n' и na' являются одинаковыми или различными и выбраны из 0, 1, 2 и 3;

А и А' являются одинаковыми или различными и, независимо, выбраны из -O-, оксо (-С(=O)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -N(R₅)- и -CRR'N(R₅)-,

Способы получения конъюгатов

Патент 2621035