Пиперазино[1,2-а]индол-1-оны и [1,4]диазепино[1,2-а]индол-1-он

Пиперазино[1,2-а]индол-1-оны и [1,4]диазепино[1,2-а]индол-1-он

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящее изобретение относится к соединениям общей формулы I

где

R¹ представляет собой галоген, низший алкил, низший алкокси, низший алкил, замещенный галогеном, низший алкокси, замещенный галогеном или циано;

R² представляет собой водород, CF₃ или низший алкил;

R³ представляет собой водород, низший алкил, низший алкенил, низший алкинил, гетероциклоалкил, низший алкил, замещенный циано, циано, бензил, замещенный галогеном, 2-окса-6-аза-спиро[3.3]гепт-6-ил или представляет собой низший алкокси, замещенный галогеном;

X представляет собой -СН₂- или -СН₂-СН₂-;

или их фармацевтически приемлемым кислотно-аддитивным солям, рацемическим смесям или их соответствующим энантиомерам и/или оптическим изомерам.

Было показано, что соединения по настоящему изобретению стимулирует нейрогенез из нервных стволовых клеток (НСК). Нейрогенез наблюдается как в развивающемся, так и во взрослом мозге. Концептуально, данный процесс нейрогенеза можно разделить на четыре стадии: (I) пролиферации НСК; (II) определение нейронального предназначения НСК; (III) выживание и созревание новых нейронов; и (IV) функциональная интеграция новых нейронов в нейронную сеть.

Нейрогенез у взрослых - это процесс развития, который происходит на протяжении жизни во взрослом мозге в результате чего образуются новые функциональные нейроны из взрослых нервных стволовых клеток. Конститутивный взрослый нейрогенез в физиологических условиях наблюдается в основном в двух "нейрогенных" областях мозга, 1) в субгранулярной зоне (SGZ) в зубчатой извилине гиппокампа, где образуются новые зубчатые зернистые клетки, 2) в субвентрикулярной зоне (SVZ) боковых желудочков, где новые нейроны образуются и затем мигрируют через ростральный миграционный тракт (RMS) в обонятельную луковицу, чтобы стать интернейронами.

Многочисленные свидетельства предполагают, что нейрогенез гиппокампа у взрослых играет важную роль в когнитивных и эмоциональных состояниях, хотя его точная функция остается неясной. Было высказано мнение, что относительно небольшое число новообразованных зернистых нейронов может повлиять на общую функцию мозга вследствие того, что они иннервируют много интернейронов в зубчатой извилине, каждый из которых ингибирует сотни зрелых зернистых клеток, приводящих к нейрогенез-зависимому ингибированию обратной связи. В сочетании с низким порогом возбуждения новообразованные нейроны вызывают ответы на очень тонкие изменения в окружении. Нарушения в этом процессе поведенчески могут проявляться в дефиците разделения паттернов, связанных с психическими заболеваниями. Например, нейрогенез взрослого гиппокампа коррелирует с познавательной и эмоциональной способностью, например, физические упражнения, контакт с обогащенной средой и типичные антидепрессанты одновременно способствуют нейрогенезу взрослого гиппокампа и познанию и/или эмоциональному состоянию, в то время как хронический стресс, депрессия, лишение сна и старение снижают нейрогенез и ассоциируются с когнитивными и/или эмоциональными состояниями (Neuron 70, May 26, 2011, рр 582-588 и рр 687-702; WO 2008/046072). Интересно, что антидепрессанты способствуют нейрогенезу гиппокампа и для их влияния на определенное поведение требуется стимуляция нейрогенеза. Нейрогенез в других взрослых регионах ЦНС, как правило, считается очень ограниченным в нормальных физиологических условиях, но может быть вызван после травмы, такой как инсульт, и повреждения центрального и периферического отделов головного мозга.

Таким образом, предполагается, что такая стимуляция нейрогенеза у взрослых представляет собой нейрорегенеративную терапевтическую цель при нормальном старении и, в частности, при различных нейродегенеративных и нейропсихиатрических, включая шизофрению, обсессивно-компульсивное расстройство личности, большую депрессию, биполярные расстройства, тревожные расстройства, эпилепсию, дегенерацию сетчатки, черепно-мозговую травму, повреждения спинного мозга, посттравматический стресс, панические расстройства, болезнь Паркинсона, деменцию, болезнь Альцгеймера, болезни умеренных когнитивных нарушений, вызванную химиотерапией когнитивную дисфункцию («Химический мозг»), синдром Дауна, нарушения аутистического спектра, потерю слуха (Neuroscience, 167 (2010) 1216-1226; Nature Medicine, Vol. 11, number 3, (2005), 271-276) шум в ушах, спиноцеребеллярную атаксию, латеральный амиотрофический склероз, рассеянный склероз, болезнь Хантингтона, инсульт, и нарушения в результате лучевой терапии, хронический стресс, или злоупотребления нейроактивных препаратов, таких как алкоголь, опиаты, метамфетамин, фенциклидин или кокаин (US 2012/0022096).

Следовательно, химическая стимуляция нейрогенеза у взрослых предлагает новый путь и возможности для развития новых лекарств для лечения неврологических заболеваний и нейропсихиатрических нарушений.

Таким образом, объектом настоящего изобретения является идентификация соединений, которые модулируют нейрогенез. Было установлено, что соединения формулы I являются активными в данной области и, таким образом, они могут применяться для лечения шизофрении, обсессивно-компульсивного расстройства личности, большой депрессии, биполярного расстройства, тревожных расстройств, нормального старения, эпилепсии, дегенерации сетчатки, черепно-мозговой травмы, повреждений спинного мозга, посттравматического стресса, панического расстройства, болезни Паркинсона, деменции, болезни Альцгеймера, болезни умеренных когнитивных нарушений, вызванной химиотерапией когнитивной дисфункции («Химический мозг»), синдрома Дауна, нарушений аутистического спектра, потери слуха, шума в ушах, спиноцеребеллярной атаксии, латерального амиотрофического склероза, рассеянного склероза, болезни Хантингтона, инсульта, и нарушений в результате лучевой терапии, хронического стресса, или злоупотребления нейроактивных препаратов, таких как алкоголь, опиаты, метамфетамин, фенциклидин или кокаин.

Наиболее предпочтительными показаниями для соединений формулы I являются болезнь Альцгеймера, депрессия, тревожные расстройства и инсульт.

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, к этим соединениям в качестве фармацевтически активных веществ, способам их получения, а также к применению при лечении или предотвращении нарушений, связанных с нейрогенезом, шизофрении, обсессивно-компульсивного расстройства личности, большой депрессии, биполярного расстройства, тревожных расстройств, нормального старения, эпилепсии, дегенерации сетчатки, черепно-мозговой травмы, повреждений спинного мозга, посттравматического стресса, Болезни Паркинсона, деменции, болезни Альцгеймера, болезни умеренных когнитивных нарушений, вызванной химиотерапией когнитивной дисфункции, синдрома Дауна, нарушений аутистического спектра, потери слуха, шума в ушах, спиноцеребеллярной атаксии, латерального амиотрофического склероза, рассеянного склероза, болезни Хантингтона, инсульта и нарушений в результате лучевой терапии, хронического стресса или злоупотребления нейроактивных препаратов, таких как алкоголь, опиаты, метамфетамин, фенциклидин или кокаин, и к фармацевтическим композициям, содержащим соединения формулы I.

Следующие определения общих терминов, используемых в настоящем изобретении применяются независимо от того, используются ли данные термины самостоятельно или в комбинации.

Как здесь используется, термин "низший алкил" обозначает насыщенную, т.е. алифатическую углеводородную группу, включающую линейную или разветвленную углеродную цепочку из 1-7 атомов углерода. Примерами "алкила" являются метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, 2-бутил, трет-бутил и т.д. Предпочтительными являются алкильные группы с 1-4 атомами углерода.

Как здесь используется, термин "низший алкенил " обозначает углеводородную группу, включающую линейную или разветвленную углеродную цепочку из 2-7 атомов углерода, где присутствует по меньшей мере одна двойная связь, например, -СН=СН₂, -СН₂СН=СН₂ и т.д.

Как здесь используется, термин "низший алкинил " обозначает углеводородную группу, включающую линейную или разветвленную углеродную цепочку из 2-7 атомов углерода, где присутствует по меньшей мере одна тройная связь, например -С≡СН, -СН₂-С≡СН и т.д.

Термин "алкокси" обозначает группу -O-R', где R' представляет собой низший алкил, как определено выше.

Термин "галоген" обозначает хлор, бром, фтор или йод.

Термин "низший алкил, замещенный циано" обозначает алкильную группу, как определено выше, где по меньшей мере один атом водорода заменен на циано, например CH₂CN, CH₂CH₂CN, CH₂CH₂CH₂CN и т.д.

Термин "гетероциклоалкил" обозначает неароматическое кольцо с 5 или 6 кольцевыми атомами, содержащее по меньшей мере один атом N, S или О, например морфолинил, тиоморфолинил, 1,1-диоксо-тиоморфолинил, пиперидинил, пиперазинил, пирролидинил, тетрагидрофуранил или тетрагидротиофенил.

Термин "фармацевтически приемлемая соль" или "фармацевтически приемлемая кислотно-аддитивная соль" охватывает соли неорганических и органических кислот, таких как соляная кислота, азотная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, лимонная кислота, муравьиная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, уксусная кислота, янтарная кислота, винная кислота, метансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота и т.д.

Одним воплощением настоящего изобретения являются соединения формулы

где

R¹ представляет собой галоген, низший алкил, низший алкокси, низший алкил, замещенный галогеном, низший алкокси, замещенный галогеном или циано;

R² представляет собой водород, CF₃ или низший алкил;

R³ представляет собой водород, низший алкил, низший алкенил, низший алкинил, гетероциклоалкил, низший алкил, замещенный циано, циано, бензил, замещенный галогеном, 2-окса-6-аза-спиро[3.3]гепт-6-ил или представляет собой низший алкокси, замещенный галогеном;

или их фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли, рацемические смеси или соответствующие энантиомеры и/или оптические изомеры, например, следующие соединения

8-фтор-6-метил-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-фтор-6-изобутил-10-метил-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-фтор-10-метил-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-фтор-6,10-диметил-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-фтор-10-метил-6-морфолин-4-ил-3,4-дигидро-2H-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-хлор-6,10-диметил-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

6-этил-8-фтор-10-метил-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

6-(1,1-Диоксо-1λ⁶-тиоморфолин-4-ил)-8-фтор-10-метил-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-хлор-6-этил-10-метил-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

6-аллил-8-фтор-10-метил-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-фтор-10-метил-6-(3-метил-бутил)-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

4-(8-фтор-10-метил-1-оксо-1,2,3,4-тетрагидро-пиразино[1,2-а]индол-6-ил)-бутиронитрил

8-хлор-6-изобутил-10-метил-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-фтор-6-(4-фтор-бензил)-10-метил-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-фтор-10-метил-6-(2-окса-6-аза-спиро[3.3]гепт-6-ил)-3,4-дигидро-2H-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-хлор-6-(1,1-диоксо-1λ⁶-тиоморфолин-4-ил)-10-метил-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-хлор-10-метил-6-морфолин-4-ил-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

6-(1,1-Диоксо-1λ⁶-тиоморфолин-4-ил)-10-метил-1-оксо-1,2,3,4-тетрагидро-пиразино[1,2-а]индол-8-карбонитрил

6-этинил-8-фтор-10-метил-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

6-Изобутил-1-оксо-1,2,3,4-тетрагидро-пиразино[1,2-а]индол-8-карбонитрил

8-фтор-6-(2-метилпропил)-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-фтор-10-метил-6-(2,2,2-трифторэтокси)-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-хлор-6-(2-метилпропил)-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-хлор-6-метил-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-фтор-10-метил-1-оксо-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-6-карбонитрил

10-метил-1-оксо-6-(трифторметокси)-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-8-карбонитрил

8-метил-6-(2-метилпропил)-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

6,8-диметил-3,4-дигидро-2H-пиразино[1,2-а]индол-1-он

8-метокси-6-(2-метилпропил)-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

6-(2-Метилпропил)-8-(трифторметокси)-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

10-метил-6-морфолин-4-ил-1-оксо-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-8-карбонитрил или

6-морфолин-4-ил-1-оксо-3,4-дигидро-2H-пиразино[1,2-а]индол-8-карбонитрил.

Дополнительным объектом настоящего изобретения являются соединения формулы

где

R¹ представляет собой галоген, низший алкил, низший алкокси, низший алкил, замещенный галогеном, низший алкокси, замещенный галогеном или циано;

R² представляет собой водород, CF₃ или низший алкил;

R³ представляет собой водород, низший алкил, низший алкенил, низший алкинил, гетероциклоалкил, низший алкил, замещенный циано, циано, бензил, замещенный галогеном, 2-окса-6-аза-спиро[3.3]гепт-6-ил или представляет собой низший алкокси, замещенный галогеном;

или их фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли, рацемические смеси или соответствующие энантиомеры и/или оптические изомеры, например, следующие соединения:

9-фтор-7-метил-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-1-он

9-фтор-7-изобутил-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-1-он

9-хлор-7-(2-метилпропил)-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-1-он

9-хлор-7-метил-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-1-он

9-метил-7-(2-метилпропил)-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-1-он

11-метил-7-(2-метилпропил)-1-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-9-карбонитрил

7,11-диметил-1-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-9-карбонитрил

9-хлор-11-метил-7-(2-метилпропил)-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-1-он

9-хлор-7,11-диметил-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-1-он

7-(2-Метилпропил)-1-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-9-карбонитрил

7-(1,1-Диоксо-1,4-тиазинан-4-ил)-11-метил-1-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-9-карбонитрил

7-(1,1-Диоксо-1,4-тиазинан-4-ил)-1-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-9-карбонитрил

11-метил-7-морфолин-4-ил-1-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-9-карбонитрил или

7-морфолин-4-ил-1-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-9-карбонитрил.

Дополнительным объектом настоящего изобретения являются соединения формулы I

где

R¹ представляет собой галоген, низший алкил, низший алкокси, низший алкил, замещенный галогеном, низший алкокси, замещенный галогеном или циано;

R² представляет собой водород, CF₃ или низший алкил;

R³ представляет собой водород, низший алкил, низший алкенил, низший алкинил, гетероциклоалкил, низший алкил, замещенный циано, циано, бензил, замещенный галогеном, 2-окса-6-аза-спиро[3.3]гепт-6-ил или представляет собой низший алкокси, замещенный галогеном;

X представляет собой -СН₂- или -СН₂-СН₂-;

или их фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли, рацемические смеси или соответствующие энантиомеры и/или оптические изомеры для применения в качестве терапевтически активных веществ для лечения шизофрении, обсессивно-компульсивного расстройства личности, большой депрессии, биполярного расстройства, тревожных расстройств, нормального старения, эпилепсии, дегенерации сетчатки, черепно-мозговой травмы, повреждений спинного мозга, посттравматического стресса, панического расстройства, Болезни Паркинсона, деменции, болезни Альцгеймера, болезни умеренных когнитивных нарушений, вызванной химиотерапией когнитивной дисфункции, синдрома Дауна, нарушений аутистического спектра, потери слуха, шума в ушах, спиноцеребеллярной атаксии, латерального амиотрофического склероза, рассеянного склероза, болезни Хантингтона, инсульта, и нарушений в результате лучевой терапии, хронического стресса, или злоупотребления нейроактивных препаратов, таких как алкоголь, опиаты, метамфетамин, фенциклидин или кокаин.

Соединения настоящего изобретения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли могут быть получены способами, известными в уровне техники, например, способом, описанным ниже, который содержит

взаимодействие соединения формулы

с соединением формулы

или в случае образования азот-углеродной связи посредством реакции связывания Бухвальда,

с получением соединения формулы

где заместители являются такими, как описано выше, и,

если необходимо, конвертирование полученных соединений в фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли.

Получение соединений формулы I согласно настоящему изобретению может проводиться в соответствии с последовательными или конвергентными путями синтеза. Синтез соединений согласно настоящему изобретению показан на следующей схеме 1. Навыки, необходимые для осуществления реакций и очистки полученных соединений известны квалифицированным специалистам. Заместители и индикаторы, используемые в данных ниже описаниях способов получения, прежде всего, имеют значения данные здесь, если не указано иного.

Более детально, соединения формулы I могут быть получены способами, описанными ниже, способами, приведенными в примерах или аналогичными способами. Подходящие реакционные условия для индивидуальных реакций известны квалифицированным специалистам. Последовательности реакций не ограничены показанными на схеме 1, однако, в зависимости от исходного материала и его соответствующей химической активности последовательности реакционных стадий может быть изменена без ограничений. Исходные материалы являются как коммерчески доступными, так и могут быть получены согласно способам аналогичным описанным здесь, способами, описанными в примерах или способами известными в уровне техники..

Схема 1

где заместители являются такими, как описано выше, и R⁴ представляет собой низший алкил.

С использованием в качестве исходного вещества анилинов формулы 3 получили соответствующие гидразины формулы 4. Эти производные являлись исходной точкой для классического синтеза индолов, дающего индол-2-карбоксилаты формулы 6 через промежуточные соединения формулы 5. N-алкилирование с использованием коммерчески доступных реагентов формулы 7 приводит к образованию N-Boc защищенных предшественников формулы 8, которые после отщепления защитной группы, конвертируют в структурные элементы формулы 1. Взаимодействие с, например, коммерчески доступными бороновыми кислотами дает конечные соединения формулы I.

Выделение и очистка соединений

Выделение и очистка соединений и промежуточных соединений, описанных здесь, может быть осуществлена, если необходимо, с помощью любым подходящим способом разделения или очистки, таких как, например, фильтрации, экстракции, кристаллизации, колоночной хроматографии, тонкослойной хроматографии, хроматография в толстом слое, препаративная жидкостная хроматография низкого или высокого давления или комбинации этих способов. Конкретные иллюстрации подходящих методик разделения и выделения могут быть даны со ссылкой на способы и примеры, изложенные ниже. Тем не менее, другие эквивалентные процедуры разделения или выделения, конечно, также могут быть использованы.

Соли соединений Формулы I

Соединения формулы I являются основными и могут быть превращены в соответствующие кислотно-аддитивные соли. Превращение осуществляют путем обработки по меньшей мере стехиометрическим количеством соответствующей кислоты, такой как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и т.п., и органической кислоты, такой как уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, яблочная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота и т.п.. Как правило, свободное основание растворяют в инертном органическом растворителе, таком как диэтиловый эфир, этилацетат, хлороформ, этанол или метанол и т.п., и добавляют кислоту в аналогичном растворителе. Температуру поддерживают в пределах от 0°С до 50°С. Полученная соль выпадает в осадок самопроизвольно или может быть выделена из раствора с помощью менее полярного растворителя.

Кислотно-аддитивные соли основных соединений формулы I могут быть превращены в соответствующие свободные основания обработкой по меньшей мере стехиометрическим эквивалентом подходящего основания, такого как гидроксид натрия или калия, карбонат калия, бикарбонат натрия, аммиак, и т.д.

Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые аддитивные соли обладают ценными фармакологическими свойствами. В частности, было обнаружено, что соединения настоящего изобретения обладают активностью в качестве нейрогенных агентов.

Соединения были исследованы в соответствии с тестом, приведенным далее.

Анализ нейрогенеза

Анализ пролиферации нервных стволовых клеток

Нейрогенные свойства малых молекул определяли на основе пролиферации нервных стволовых клеток (НСК), полученных из эмбриональных стволовых клеток человека, которые получили посредством ингибирования сигнального пути SMAD, как ранее было описано (Chambers, S.M., et al., Highly efficient neural conversion of human ES and iPS cells by dual inhibition of SMAD signaling, Nature biotechnology, 2009. 27(3): p. 275-80.)

Ответ соединений измеряют посредством увеличения в клетках на основании уровней АТФ (Promega:CellTiterGlo®) после периода инкубирования в течение 4 дней.

НСК оттаивали и увеличивали их количество за 3 пассажа. На 14-й день НСК посеяли в покрытые полиорнитином/ламинином 384 луночные планшеты при плотности клеток 21'000 клетка/см² в 38 мкл среды.

Через 4 часа после посева, добавили растворы соединений в объеме 2 мкл. Стоковые растворы соединений (вода, 5% ДМСО) разбавили для получения кривой доза-ответ (11 точек, коэффициент разбавления 2), в диапазоне от 8 мкМ до 8 нМ. Контроли использовали для достоверного определения нейрогенных свойств клеток:

Отрицательный контроль (нейтральный) представлял собой среду для культивирования клеток (конечная концентрация ДМСО: 0.25%).

Положительными контролями являлись:

1. среда для культивирования клеток + 100 нг/мл FGF2 (конечная концентрация ДМСО: 0.1%)

2. среда для культивирования клеток + 20 нг/мл EGF (конечная концентрация ДМСО: 0.1%)

3. среда для культивирования клеток + 100 нг/мл Wnt3a (конечная концентрация ДМСО: 0.1%)

Через 4 дня инкубации при 37°С, 5% СO₂, подсчитывали количество АТФ в каждой лунке. Концентрация АТФ пропорциональна количеству клеток. АТФ подсчитывали с помощью набора Promega CellTiterGlo®. Реагенты CellTiterGlo® содержат буфер для клеточного лизиса, термостабильную люциферазу (рекомбинантная люцифераза UltraGlo™), магний и люциферин. Люциферин взаимодействует с АТФ с получением оксилюциферина, АМФ и света. Люминесцентный сигнал пропорционален содержанию АТФ.

Значение отрицательного (нейтрального) контроля определялись для каждого тестируемого планшета с использованием среднего для 16 лунок с отрицательным контролем. Нейрогенный ответ соединений рассчитывался для каждого соединения как (соединение/отрицательный контроль)^*100.

Значения ЕС₁₅₀ из кривой доза-ответ определялись для каждого тестируемого соединения. Значение ЕС150 представляет собой концентрацию соединения при котором достигается 150% активность по сравнению с контролем (100%).

Предпочтительные соединения показали значения ЕС₁₅₀ (мкМ) в диапазоне <4.0 мкМ, как показано в таблице ниже.

Список примеров и данных EC₁₅₀

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут применяться в качестве лекарственных средств, например в виде фармацевтических препаратов. Фармацевтические препараты могут быть введены перорально, например, в виде таблеток, таблеток с покрытием, драже, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, эмульсий или суспензий. Однако введение также может быть осуществлено ректально, например, в форме суппозиториев, или парентерально, например, в виде растворов для инъекций.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть переработаны с фармацевтически инертными, неорганическими или органическими носителями для получения фармацевтических препаратов. Лактоза, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновая кислота или ее соли и т.п. могут быть использованы, например, в качестве таких носителей для таблеток, таблеток с покрытием, драже и твердых желатиновых капсул. Подходящими носителями для мягких желатиновых капсул являются, например, растительные масла, воски, жиры, полутвердые и жидкие полиолы и т.п.; в зависимости от природы активного вещества никаких носителей, однако, обычно не требуется в случае мягких желатиновых капсул. Подходящими носителями для получения растворов и сиропов являются, например, вода, полиолы, сахароза, инвертный сахар, глюкоза и т.п. Адъюванты, такие как спирты, полиолы, глицерин, растительные масла и т.п., могут быть использованы для водных инъекционных растворов на основе водорастворимых солей соединений формулы (I), но, как правило, не являются необходимыми. Подходящими носителями для суппозиториев являются, например, природные или отвержденные масла, воски, жиры, полужидкие или жидкие полиолы и т.п.

Кроме того, фармацевтические препараты могут содержать консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, смачивающие агенты, эмульгаторы, подсластители, красители, ароматизаторы, соли для изменения осмотического давления, буферы, маскирующие агенты или антиоксиданты. Они также могут содержать другие терапевтически ценные вещества.

Как упоминалось ранее, лекарственные средства, содержащие соединение формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли и терапевтически инертный эксципиент, также являются объектом настоящего изобретения, так же как и способ получения таких лекарственных средств, который включает приведение одного или более соединений формулы I или их фармацевтически приемлемых солей и, при необходимости, одного или более других терапевтически ценных веществ в галенову лекарственную форму вместе с одним или более терапевтически инертным носителем.

Как также упоминалось ранее, применение соединений формулы (I) для получения лекарственных средств для профилактики и/или лечения указанных выше заболеваний также является объектом настоящего изобретения.

Дозировка может варьироваться в широких пределах и, конечно, должна соответствовать индивидуальным требованиям в каждом конкретном случае. В общем, эффективное дозирование для перорального или парентерального введения находится в интервале 0,01-20 мг/кг/день, дозировка 0,1-10 мг/кг/день является предпочтительной для всех описанных показаний. Суточная доза для взрослого человека весом 70 кг, соответственно, находится в интервале 0,7-1400 мг в день, предпочтительно между 7 и 700 мг в день.

Фармацевтические композиции, содержащие соединения по изобретению:
Таблетки (влажная грануляция)
Номер	Ингредиент	мг/таблетка
		5	25	100	500
1.	Соединение формулы I	5	25	100	500
2.	Безводная лактоза DTG	125	105	30	150
3.	Sta-Rx 1500	6	6	6	30
4.	Микрокристаллическая
целлюлоза	30	30	30	150
5.	Стеарат магния	1	1	1	1
	Всего	167	167	167	831

Процедура изготовления

1. Смешать ингредиенты 1, 2, 3 и 4 и гранулировать с очищенной водой.

2. Высушить гранулы при 50°С.

3. Пропустить гранулы через подходящее размольное устройство.

4. Добавить ингредиент 5 и перемешивать в течение 3 минут; спрессовать на подходящем прессе.

Капсула
Номер Ингредиент	мг/капсула
	5	25	100	500
1. Соединение формулы I	5	25	100	500
2. Водная лактоза	159	123	148	-
3. Кукурузный крахмал	25	35	40	70
4. Тальк	10	15	10	25
5. Стеарат магния	1	2	2	5
Всего	200	200	300	600

Процедура изготовления

1. Смешать ингредиенты 1, 2 и 3 в подходящем миксере в течение 30 минут.

2. Добавить ингредиенты 4 и 5 и смешивать в течение 3 минут.

3. Заполнить в подходящие капсулы.

Экспериментальная часть

Промежуточные соединения

Промежуточное соединение 1

6-бромо-8-фтор-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

Стадия А

К перемешанной смеси гидрида натрия [дисп. 55-65%] (175 мг, 4.37 ммоль) в ДМФ (5.6 мл) добавили по каплям при комнатной температуре в атмосфере аргона раствор коммерчески доступного этил 7-бромо-5-фтор-1Н-индол-2-карбоксилата [CAS No. 396076-60-1] (1.04 г, 3.64 ммоль) в ДМФ (2.8 мл). После этого смесь оставили перемешиваться в течение 5 мин при комнатной температуре, затем добавили коммерчески доступный 2,2-диоксо-[1,2,3]оксатиазолидин-3-карбоновой кислоты трет-бутиловый эфир [CAS No. 459817-82-4] (975 мг, 4.37 ммоль) и раствор оставили перемешиваться при комнатной температуре в течение 15 ч. Раствор охладили в ванне со льдом, и лимонную кислоту (10%, 62 мл) добавили по каплям. Смесь оставили перемешиваться при комнатной температуре в течение 1 ч, и после этого экстрагировали этилацетатом (2×70 мл). Объединенные органические слои промыли солевым раствором (80 мл), высушили (MgSO₄) и эвапорировали. Неочищенное вещество (2.04 г) очистили с помощью флеш-хроматографии на силикагеле (гептан/этилацетат 0-80%) с получением 7-бромо-1-(2-трет-бутоксикарбониламино-этил)-5-фтор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты этилового эфира в виде светло-желтого масла (1.37 г, 88%), MS (ISN) m/z=431.2 [(М+Н)⁺].

Стадия В

К перемешанному раствору этил 7-бромо-1-(2-(трет-бутоксикарбониламино)этил)-5-фтор-1Н-индол-2-карбоксилата (стадия А) (1.43 г, 3.33 ммоль) в дихлорметане (15.2 мл) добавили по каплям при 0°С трифторуксусную кислоту (4.79 г, 3.23 мл, 42.0 ммоль). После этого раствор оставили перемешиваться в течение 15 мин при 0°С, и в течение 30 мин при комнатной температуре. Реакционную смесь эвапорировали и оставшийся материал растворили в метаноле (15.2 мл). Карбонат калия (1.83 г, 13.3 ммоль) добавили и смесь оставили перемешиваться при комнатной температуре в течение 17 ч. Смесь эвапорировали, добавили воду (50 мл) и смесь экстрагировали дихлорметаном (2×40 мл). Объединенные органические слои промыли солевым раствором (50 мл), высушили (MgSO₄) и эвапорировали. Неочищенный продукт (0.86 г) очистили посредством тритурирования с дихлорметаном (3 мл) и гептаном (15 мл) с получением соединения, указанного в заголовке, в виде серо-белого осадка (0.85 г, 90%), MS (ISN) m/z=283.2 [(М+Н)⁺], Тпл 253.5°С.

Промежуточное соединение 2

7-бромо-9-фтор-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-1-он

Стадия А

7-бромо-1-(3-трет-бутоксикарбониламино-пропил)-5-фтор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты этиловый эфир, желтое масло (0.29 г, 74%), MS (ISP) m/z=443.2 [(М+Н)⁺], получили в соответствии с общим способом для промежуточного соединения 1, стадия А, из коммерчески доступного этил 7-бромо-5-фтор-1Н-индол-2-карбоксилата [CAS No. 396076-60-1] (0.25 г, 0.88 ммоль) и коммерчески доступного 2,2-диоксо-2λ'-[1,2,3]оксатиазинан-3-карбоновой кислоты трет-бутилового эфира [CAS No. 521267-18-5] (0.25 г, 1.06 ммоль).

Стадия В

Соединение, указанное в заголовке, серо-белый осадок (0.14 г, 71%), MS (ISP) m/z=297.2 [(М+Н)⁺], Тпл 249°С, получили в соответствии с общим способом для промежуточного соединения 1, стадия В, из 7-бромо-1-(3-трет-бутоксикарбониламино-пропил)-5-фтор-1H-индол-2-карбоновой кислоты этилового эфира (стадия А) (0.29 г, 0.66 ммоль).

Промежуточное соединение 3

(RS)-7-бромо-9-фтор-5-метил-2,3,4,5-тетрагидро-[1,4]диазепино[1,2-а]индол-1-он

Стадия А

7-бромо-1-(3-трет-бутоксикарбониламино-1-метил-пропил)-5-фтор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты этиловый эфир, желтое масло (0.38 г, 19%), MS (ISP) m/z=457.2 [(М+Н)⁺], получили в соответствии с общим способом для промежуточного соединения 1, стадия А, из коммерчески доступного этил 7-бромо-5-фтор-1Н-индол-2-карбоксилата [CAS No. 396076-60-1] (1.25 г, 4.38 ммоль) и 2,2-диоксо-6-метил-2λ'-[1,2,3]оксатиазинан-3-карбоновой кислоты трет-бутилового эфира [CAS No. 1311368-91-8] (1.32 г, 5.25 ммоль).

Стадия В

Соединение, указанное в заголовке, светло-желтый осадок (0.2 г, 77%), MS (ISP) m/z=313.1 [(М+Н)⁺], Тпл 152.5°С, получили в соответствии с общим способом для промежуточного соединения 1, стадия В, из 7-бромо-1-(3-трет-бутоксикарбониламино-1-метил-пропил)-5-фтор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты этилового эфира (стадия А) (0.38 г, 0.83 ммоль).

Промежуточное соединение 4

6-бромо-8,9-дифтор-3,4-дигидро-2Н-пиразино[1,2-а]индол-1-он

Стадия А

Перемешанную смесь коммерчески доступного 2-бромо-4,5-дифтор-анилина (5 г, 24.0 ммоль) и соляной кислоты (25%, 22.9 мл) охладили до 0°С, раствор нитрита натрия (1.91 г, 27.6 ммоль) в воде (15 мл) добавили по каплям в течение 15 мин (температура не должна превышать 10°С). Затем смесь оставили перемешиваться при 0°С в течение 1 ч, раствор хлорида олова(II) (20.5 г, 108 ммоль) в соляной кислоте (25%, 34.2 мл) добавили по каплям при 0°С (температура не превышает приблизительно 10°С). Затем реакционную смесь оставили перемешиваться в течение 1 ч при 0°С, образовавшийся преципитат собрали посредством фильтрации и промыли водой и гептаном. Воду (46 мл) и раствор гидроксида натрия (37%, 25 мл) добавили в неочищенный продукт, и смесь экстрагировали дихлорметаном (3×70 мл). Объединенные органические слои промыли солевым раствором (100 мл), высушили (MgSO₄) и эвапорировали.