Липосомы с ретиноидом для усиления модуляции экспрессии hsp47

Липосомы с ретиноидом для усиления модуляции экспрессии hsp47

Иллюстрации

Показать все

Реферат

РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ НА ПОЛУЧЕНИЕ ПАТЕНТА

Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно предварительной заявке на патент США №61/497,447, поданной 15 июня 2011 г., и предварительной заявке на патент США №61/494,832, поданной 8 июня 2011 г. Каждая из которых включена в настоящий документ в полном объеме посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие липосомы с ретиноидом для усиления модуляции экспрессии hsp47, осуществляемой siRNA.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Фиброз печени может быть вызван звездчатыми клетками печени (HSC), приводящими к тому, что множество типов молекул коллагена и фибронектина осаждается на интерстициальной ткани. Это приводит к циррозу печени, печеночной недостаточности и/или гепатоцеллюлярной карциноме. Кроме того, хронический панкреатит развивается в результате панкреатического фиброза по тому же механизму, что и фиброз печени (Madro, et al, 2004; Med Sci Monit. 10:RA166-70; Jaster, 2004, Mol Cancer. 6:26). Кроме того, звездчатые клетки участвуют в нарушениях в голосовых связках и гортани, таких как рубцевание голосовых связок, фиброз слизистой оболочки голосовых связок и ларингеальный фиброз. Для профилактики или лечения фиброза в этих органах и в другом месте в организме необходимо разработать носитель для лекарственного средства и набор носителя для лекарственного средства.

Звездчатые клетки являются одним из важных целевых кандидатов для лечения фиброза (Fallowfield et al, 2004, Expert Opin Ther Targets. 8:423-35; Pinzani, et al, 2004, Dig Liver Dis.36:231-42). В ходе фиброза звездчатые клетки активируются цитокинами из близлежащих клеток с продуцированием множества факторов, которые вызывают фиброз печени. Звездчатые клетки несут витамин А и принадлежат к семейству миофибробластов.

С помощью терапевтических способов профилактики или лечения фиброза пытаются контролировать метаболизм коллагена, содействовать системе разрушения коллагена и ингибировать активацию звездчатых клеток. Однако во всех этих случаях низкая специфичность действия и/или низкая специфичность к органу вызывают проблемы, связанные с ограниченной эффективностью и нежелательными побочными эффектами.

Ингибирование синтеза белка коллагена не было установлено как терапевтический способ. Потенциал молекул, направленный на продуцирование коллагена, ограничен возможностью возникновения побочных эффектов. Непосредственное ингибирование продуцирования коллагена обеспечивает другой терапевтический способ профилактики или лечения фиброза. В таком способе требуется контролирование одного или более различных типов коллагена типов I-IV. Этот способ может осуществляться через белок теплового шока (HSP47), специфичный к коллагену молекулярный шаперон, который необходим для внутриклеточного транспорта и молекулярного созревания, необходимого для всех типов коллагена. Поэтому если функция HSP47 может специфически контролироваться в звездчатые клетки, существует возможность ингибирования фиброза печени.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к носителю для лекарственного средства и набору носителя для лекарственного средства, которые обеспечивают специфический транспорт диагностического и/или терапевтического лекарственного средства в звездчатые клетки. Носитель для лекарственного средства согласно настоящему изобретению может быть выбран из полимерных мицелл, липосом, эмульсий, микросфер и наносферных форм, и посредством связывания с ним или включения в него ретиноида или конъюгата ретиноида и терапевтическое средство могут быть специфически транспортированы в HSC. Ретиноиды включают следующие: витамин А, ретиноевая кислота, насыщенный витамин А, ретиналь, третиноин, адапален, ретинола пальмитат или фенретинид (4-HPR). Кроме того, при получении лекарственное средство включает одну молекулу или множество молекул, выбранных из следующего: ингибиторы активности TGFP, усеченный рецептор TGFP типа II и растворимый рецептор TGFP типа II, препараты фактора роста, такие как HGF, промоторы продукции ММР, такие как ММР ген-содержащий аденовирусный вектор, ингибиторы клеточной активации и/или ингибиторы роста, включающие PPARγ-лиганд, антагонист рецептора ангиотензина-II типа I, PDGF тирозинкиназный ингибитор, и ингибитор натриевых каналов, такой как амилорид, и индукторы апоптоза, такие как соединение 861 и глиотоксин; и при введении его, например, перорально, парентерально, внутривенно или интраперитонеально субъекту, у которого есть риск развития фиброза или симптомов фиброза, или субъектам, имеющим различные связанные с фиброзом нарушения, такие как, например, цирроз печени, печеночная недостаточность, рак печени или хронический панкреотит, активация звездчатых клеток может подавляться, и. таким образом, предотвращается, ингибируется или облегчается фиброз и/или связанное с фиброзом нарушение у указанного субъекта. Альтернативно или в дополнение к этому, посредством применения носителя для лекарственного средства, который заключает в себя рибозим, антисмысловую РНК или siRNA, которая специфически ингибирует HSP47 или TIMP, который является ингибитором ММР, секреция коллагенов типа I-IV может одновременно ингибироваться, и, как результат, фиброгенез может быть эффективно ингибирован. Вариантом выполнения настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая двухнитевую молекулу нуклеиновой кислоты и молекулу, содержащую смысловая нить и антисмысловую нить, где смысловая нить и антисмысловая нить выбираются из олигонуклеотидов, описанных как SERPINH12 (SEQ ID NOS: 60 и 127), SERPINH1_45a (SEQ ID NOS: 98 и 165), и SERPINH1_51 (SEQ ID NOS: 101 и 168) в Таблице 4, приводится ниже, и носитель для лекарственного средства, содержащий смесь липосомы и ретиноида или конъюгата ретиноида. Ретиноидом может быть одно или более из следующего: витамин А, ретиноевая кислота, насыщенный витамин А, ретиналь, третиноин, адапален, ретинола пальмитат или фенретинид. Предпочтительно ретиноид содержит конъюгат ретиноевой кислоты, более предпочтительно ретиноид-PEG конъюгат. Липосома может состоять из бислоя липидных молекул и, кроме того, может состоять из ретиноида. Ретиноид предпочтительно присутствует в концентрации от 0.2 до 20 мас. % в носителе для лекарственного средства. Липосома может состоять из внутренней поверхности, которая инкапсулирует внутреннюю часть липосомы, и внешней поверхности, которая доступна для внешней жидкой среды липосомы. Ретиноид может быть связан с липидным бислоем. Двухнитевая нуклеиновая кислота может быть выставлена на внешней поверхности липосомы.

В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения, двухнитевая молекула нуклеиновой кислоты включает антисмысловую нить, имеющую SEQ ID NO:127 и содержащую 2'-O-метил остаток сахар, (2'ОМе)-модифицированные рибонуклеотиды; 2'-5'-рибонуклеотиды в по меньшей мере одном из положений 1, 5, 6 или 7; и 3'-терминальную ненуклеотидную составляющую, ковалентно связанную с 3'-концом; и смысловую нить, имеющую SEQ ID NO:60 и содержащую по меньшей мере один2'-5'-рибонуклеотид или 2'ОМе модифицированный рибонуклеотид; ненуклеотидную составляющую, ковалентно присоединенную к 3-концу; и инвертированную составляющую без основания, ковалентно присоединенную к 5'-концу. В предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловая нить представляет собой SEQ ID NO:127 и содержит 2'ОМе модифицированные рибонуклеотиды в положениях 3, 5, 9, 11, 13, 15, 17, и 19; 2'-5'-рибонуклеотид в положении 7; и ненуклеотидную составляющую, ковалентно присоединенную к 3'-концу; и смысловая нить представляет собой SEQ ID NO:60 и содержит пять последовательных 2'-5'-рибонуклеотиды в 3'-концевых положениях 15,16,17, 18, и 19; ненуклеотидную составляющую, ковалентно присоединенную к 3'-концу; и инвертированную составляющую без основания, ковалентно присоединенную к 5'-концу. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения двухнитевая молекула нуклеиновой кислоты дополнительно включает 2'ОМе модифицированный рибонуклеотид или 2'-5'-рибонуклеотид в положении 1 антисмысловой нити. (Все ссылки на нуклеотидные положения приводятся на основе 5'>3' направления олигонуклеотида как для смысловой, так и для антисмысловой нитей двухнитевой молекулы нуклеиновой кислоты.)

В различных вариантах выполнения настоящего изобретения смысловая нить представляет собой SEQ ID NO:98 и содержит 2'-5'-рибонуклеотиды в положениях при 3'-конце; ненуклеотидную составляющую, ковалентно присоединенную к 3'-концу; и инвертированную составляющую без основания, ковалентно присоединенную к 5'-концу; и антисмысловая нить представляет собой SEQ ID NO:165 и содержит 2'ОМе модифицированные рибонуклеотиды; 2'-5'-рибонуклеотид в по меньшей мере одном из положений 5, 6 или 7; и ненуклеотидную составляющую, ковалентно присоединенную к 3'-концу. В предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения смысловая нить представляет собой SEQ ID NO:98 и содержит 2'-5'-рибонуклеотиды в положениях 15, 16, 17, 18, и 19; С3-ОН 3' составляющую, ковалентно присоединенную к 3'-концу; и инвертированную дезоксирибонуклеотидную составляющую без основания, ковалентно присоединенную к 5'-концу; и антисмысловая нить представляет собой SEQ ID NO:165 и содержит 2'OMe модифицированные рибонуклеотиды в положениях 4, 6, 8, 11, 13, 15, 17, и 19; 2'-5'-рибонуклеотид в положении 7; и C3Pi-C3OH составляющую, ковалентно присоединенную к 3'-концу. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения двухнитевая молекула нуклеиновой кислоты дополнительно содержит 2'ОМе модифицированный рибонуклеотид в положении 2.

В различных вариантах выполнения настоящего изобретения смысловая нить представляет собой SEQ ID NO:101 и содержит 2'ОМе модифицированные рибонуклеотиды; необязательный 2'-5'-рибонуклеотид в положении 9 или 10; ненуклеотидную составляющую, ковалентно присоединенную к 3'-концу; и инвертированную составляющую без основания, ковалентно присоединенную к 5'-концу; и антисмысловая нить представляет собой SEQ ID NO:168 и содержит 2'OMe модифицированные рибонуклеотиды; 2'-5'-рибонуклеотид в по меньшей мере одном из положений 5, 6, или 7; и ненуклеотидную составляющую, ковалентно присоединенную к 3'-концу. В предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения смысловая нить представляет собой SEQ ID NO:101 и содержит 2'OMe модифицированные рибонуклеотиды в положениях 4, 11, 13, и 17; 2'-5'-рибонуклеотид в положении 9; С3ОН ненуклеотидную составляющую, ковалентно присоединенную к 3'-концу; и инвертированную дезоксирибонуклеотидную составляющую без основания, ковалентно присоединенную к 5'-концу; и антисмысловая нить представляет собой SEQ ID NO:168 и содержит 2'OMe модифицированные рибонуклеотиды в положениях 1, 4, 8, 11 и 15; 2'-5'-рибонуклеотид в положении 6; и C3Pi-C3OH составляющую, ковалентно присоединенную к 3'-концу. В определенных вариантах выполнения настоящего изобретения двухнитевая молекула нуклеиновой кислоты дополнительно содержит 2'OMe модифицированный рибонуклеотид в положении 13 в антисмысловой нити и или в положении 2 в смысловой нити.

Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая двухнитевую молекулу нуклеиновой кислоты и носитель для лекарственного средства, содержащий смесь ретиноида и липида, где двухнитевое олигонуклеотидное соединение содержит структуру (A1):

(A1) 5' (N)_x-Z 3' (антисмысловая нить)

3' Z'-(N')_y-z'' 5' (смысловая нить)

где каждый N и Ν' представляет собой нуклеотид, который является немодифицированным или модифицированным, или нестандартной составляющей;

где каждый (Ν)_x и (N')_y представляет собой олигонуклеотид, в котором каждый последующий N или Ν' соединен со следующим N или N' ковалентной связью;

где каждый Ζ и Z' независимо присутствует или отсутствует, но если присутствует, то включает 1-5 последовательных нуклеотида или ненуклеотидных составляющих или их комбинацию, ковалентно присоединенную к 3'-концу нити, в которой присутствует;

где z'' может присутствовать или отсутствовать, но если присутствует, то является кэппирующей группой, присоединенной к 5'-концу (N')_y;

где каждый из х и у независимо представляет собой целое число от 18 до 40;

где последовательность (N')_y комплементарна последовательности (N)_x; и где (N)_x включает антисмысловую последовательность к мРНК кодирующей последовательности для человеческого hsp47, где примером является SEQ ID NO:1, которая показана далее.

В настоящей заявке обеспечиваются композиции, способы и наборы для модуляции экспрессии генов-мишеней. Согласно различным объектам и вариантам настоящего изобретения композиции, способы и наборы, которые обеспечиваются в настоящей заявке, модулируют экспрессию белка теплового шока 47 (hsp47), который также известен как SERPINH1. Композиции, способы и наборы могут включать применение молекул нуклеиновых кислот (например, малые интерферирующие нуклеиновые кислоты (siNA), короткие интерферирующие РНК (siRNA), двухцепочечные РНК (dsPHK), микро-РНК (miPHK) или короткие РНК, образующие шпильки (shPHK)), которые связывают последовательность нуклеотидов (например, последовательность мРНК), кодирующую hsp47, например, кодирующую последовательность мРНК hsp47 человека, примером которой является SEQ ID NO:1. Согласно некоторым предпочтительным вариантам реализации композиции, способы и наборы согласно настоящему описанию подавляют экспрессию hsp47. Например, обеспечиваются молекулы siNA (например, молекулы dsNA длины RISC или молекулы dsNA длины дайсера), которые снижают или подавляют экспрессию hsp47. Также обеспечиваются композиции, способы и наборы для лечения и/или предотвращения заболеваний, состояний или нарушений, вызываемых hsp47, таких как фиброз печени, цирроз печени, пневмофиброз, включая фиброз легких (включая интерстициальный легочный фиброз (ILF)), фиброз почек в результате любых заболеваний (например, хроническое заболевание почек (CKD), включая терминальную стадию почечной недостаточности (ESRD), перитонеальный фиброз, хроническое повреждение печени, фибриллогенез, фибротические заболевания других органов, аномальные рубцы (келоидные рубцы) в результате любых возможных типов повреждений кожи: случайных и ятрогенных (операции); склеродермия; кардиофиброз, неудачная фильтрующая операция при глаукоме, а также кишечные спайки.

Одним объектом настоящего изобретения являются фармацевтические композиции, как описано выше, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты (например, siNA молекулы) в качестве компонента фармацевтической композиции, в которой молекула включает смысловую нить и антисмысловую нить; каждая нить молекулы нуклеиновой кислоты независимо составляет 15-49 нуклеотидов в длину; 15-49 нуклеотидная последовательность антисмысловой нити комплементарна последовательности мРНК, кодирующей человеческий hsp47 (например, SEQ ID NO: 1); и 15-49 нуклеотидная последовательность смысловой нити комплементарна последовательности антисмысловой нити и включает 15-49 нуклеотидную последовательность мРНК, кодирующую человеческий hsp47 (например, SEQ ID NO: 1).

В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения, последовательность антисмысловой нити, которая комплементарна последовательности мРНК, кодирующей человеческий hsp47, включает последовательность, комплементарную последовательности между нуклеотидами 600-800; или 801-899; или 900-1000; или 1001-1300 последовательности SEQ ID NO: 1; или между нуклеотидами 650-730; или 900-975 последовательности SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловая нить включает последовательность, комплементарную последовательности мРНК, кодирующей человеческий hsp47, соответствующую нуклеотидам 674-693 последовательности SEQ ID NO: 1 или ее части; или нуклеотидам 698-716 последовательности SEQ ID NO: 1 или ее части; или нуклеотидам 698-722 последовательности SEQ ID NO: 1 или ее части; или нуклеотидам 701-720 последовательности SEQ ID NO: 1 или ее части; или нуклеотидам 920-939 последовательности SEQ ID NO: 1 или ее части; или нуклеотидам 963-982 последовательности SEQ ID NO: 1 или ее части; или нуклеотидам 947-972 последовательности SEQ ID NO: 1 или ее части; или нуклеотидам 948-966 последовательности SEQ ID NO: 1 или ее части; или нуклеотидам 945-969 последовательности SEQ ID NO: 1 или ее части; или нуклеотидам 945-963 последовательности SEQ ID NO: 1 или ее части.

В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловая нить молекулы нуклеиновой кислоты (например, siNA молекула) как раскрывается в настоящей заявке в качестве компонента фармацевтической композиции, включает последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 4 или ее части; или SEQ ID NO: 6 или ее части; или SEQ ID NO: 8 или ее части; или SEQ ID NO: 10 или ее части; или SEQ ID NO: 12 или ее части; или SEQ ID NO: 14 или ее части; или SEQ ID NO: 16 или ее части; или SEQ ID NO: 18 или ее части; или SEQ ID NO: 20 или ее части; или SEQ ID NO: 22 или ее части; или SEQ ID NO: 24 или ее части; или SEQ ID NO: 26 или ее части; или SEQ ID NO: 28 или ее части; или SEQ ID NO: 30 или ее части; или SEQ ID NO: 32 или ее части; или SEQ ID NO: 34 или ее части; или SEQ ID NO: 36 или ее части; или SEQ ID NO: 38 или ее части; или SEQ ID NO: 40 или ее части; или SEQ ID NO: 42 или ее части; или SEQ ID NO: 44 или ее части; или SEQ ID NO: 46 или ее части; или SEQ ID NO: 48 или ее части; или SEQ ID NO: 50 или ее части; или SEQ ID NO: 52 или ее части; или SEQ ID NO: 54 или ее части; или SEQ ID NO: 56 или ее части; или SEQ ID NO: 58 или ее части. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения смысловая нить молекулы нуклеиновой кислоты (например, siNA молекула), как раскрывается в настоящей заявке, включает последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 3 или ее части; или SEQ ID NO: 5 или ее части; или SEQ ID NO: 7 или ее части; или SEQ ID NO: 9 или ее части; или SEQ ID NO: 11 или ее части; или SEQ ID NO: 13 или ее части; или SEQ ID NO: 15 или ее части; или SEQ ID NO: 17 или ее части; или SEQ ID NO: 19 или ее части; или SEQ ID NO: 21 или ее части; или SEQ ID NO: 23 или ее части; или SEQ ID NO: 25 или ее части; или SEQ ID NO: 27 или ее части; или SEQ ID NO: 29 или ее части; или SEQ ID NO: 31 или ее части; или SEQ ID NO: 33 или ее части; или SEQ ID NO: 35 или ее части; или SEQ ID NO: 37 или ее части; или SEQ ID NO: 39 или ее части; или SEQ ID NO: 41 или ее части; или SEQ ID NO: 43 или ее части; или SEQ ID NO: 45 или ее части; или SEQ ID NO: 47 или ее части; или SEQ ID NO: 49 или ее части; или SEQ ID NO: 51 или ее части; или SEQ ID NO: 53 или ее части; или SEQ ID NO: 55 или ее части; или SEQ ID NO: 57 или ее части.

В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловая нить молекулы нуклеиновой кислоты (например, siNA молекула), как раскрывается в настоящей заявке в качестве компонента фармацевтической композиции, включает последовательность, соответствующую любой из антисмысловых последовательностей, показанных в Таблице 4. В определенных вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловая нить и смысловая нить выбираются из пары последовательностей, показанных в Таблице 4. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловая нить и смысловая нить выбираются из пары последовательностей, как показано в SERPINH1_4, SERPINH1_2, SERPINH1_18, SERPINH1_30, SERPINH1_58 и SERPINH1_88. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловая нить и смысловая нить выбираются из пары последовательностей, как показано в SERPINH1_4 (SEQ ID NOS: 195 и 220), SERPINH1_12 (SEQ ID NOS: 196 и 221), SERPINH1_30 (SEQ ID NOS: 199 и 224), и SERPINH1_58 (SEQ ID NOS: 208 и 233).

В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловая и смысловая нити молекулы нуклеиновой кислоты (например, siNA молекула), как раскрывается в настоящей заявке в качестве компонента фармацевтической композиции, включают пару последовательностей, как показано в SERPINH1_4 (SEQ ID NOS: 195 и 220). В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловая и смысловая нити молекулы нуклеиновой кислоты (например, siNA молекула), как раскрывается в настоящей заявке, включают пару последовательностей, как показано в SERPINH1_12 (SEQ ID NOS: 196 и 221). В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловая и смысловая нити молекулы нуклеиновой кислоты (например, siNA молекула), как раскрывается в настоящей заявке, включают пару последовательностей, как показано в SERPINH1_30 (SEQ ID NOS: 199 и 224). В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловая и смысловая нити молекулы нуклеиновой кислоты (например, siNA молекула), как раскрывается в настоящей заявке, включают пару последовательностей, как показано в SERPINH1_58 (SEQ ID NOS: 208 и 233).

В определенных вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловая нить молекулы нуклеиновой кислоты (например, siNA молекула), как раскрывается в настоящей заявке в качестве компонента фармацевтической композиции, включает последовательность, соответствующую любой из антисмысловых последовательностей, показанных в Таблицах В или С.

В особенно предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловая нить молекулы нуклеиновой кислоты (например, siNA молекула), как раскрывается в настоящей заявке в качестве компонента фармацевтической композиции, включает последовательность, соответствующую одной из антисмысловых последовательностей, как показано в Таблице 5. В особенно предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловая нить и смысловая нить выбираются из пар последовательностей, как показано в Таблице 5. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты (например, siNA молекула), как раскрывается в настоящей заявке, включает антисмысловую и смысловую нити, выбранные из пар последовательностей, как изложено далее

В некоторых предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловая и смысловая нити выбираются из пар последовательностей, представленных далее

В некоторых предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты (например, siNA молекула), как раскрывается в настоящей заявке в качестве в качестве компонента фармацевтической композиции, включает антисмысловую и смысловую нити, выбранные из пар последовательностей, как изложено в SERPINH1_2 (SEQ ID NOS: 60 и 127). В некоторых предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловые и смысловые нити включают пары последовательностей как изложено в SERPINH1_6 (SEQ ID NOS: 63 и 130). В некоторых предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты (например, siNA молекула), как раскрывается в настоящей заявке в качестве в качестве компонента фармацевтической композиции, включает антисмысловую и смысловую нити, выбранные из пар последовательностей, как изложено в SERPINH1_11 (SEQ ID NOS: 68 и 135). В некоторых предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловые и смысловые нити включают пары последовательностей как изложено в SERPINH1_13 (SEQ ID NOS: 69 и 136). В некоторых предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловые и смысловые нити включают пары последовательностей как изложено в SERPINH1_45 (SEQ ID NOS: 97 и 164). I В некоторых предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловые и смысловые нити включают пары последовательностей как изложено в SERPINH1_45a (SEQ ID NOS: 98 и 165). В некоторых предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения антисмысловые и смысловые нити включают пары последовательностей как изложено в SERPINH1_51 (SEQ ID NOS: 101 и 168).

Согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения антисмысловая нить молекулы нуклеиновой кислоты(например, молекула siNA), как раскрывается согласно настоящему изобретению в качестве компонента фармацевтической композиции, включает последовательность, соответствующую любой из антисмысловых последовательностей, показанных в любой из Таблиц D или Е.

В различных вариантах выполнения настоящего изобретения молекулы нуклеиновой кислоты (например, siNA молекулы), как раскрывается в настоящей заявке в качестве компонента фармацевтической композиции, антисмысловая нить может иметь 15-49 нуклеотидов в длину (например, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или 49 нуклеотидов в длину); или 17-35 нуклеотидов в длину; или 17-30 нуклеотидов в длину; или 15-25 нуклеотидов в длину; или 18-25 нуклеотидов в длину; или 18-23 нуклеотидов в длину; или 19-21 нуклеотидов в длину; или 25-30 нуклеотидов в длину; или 26-28 нуклеотидов в длину. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения молекулы нуклеиновой кислоты (например, siNA молекулы), как раскрывается в настоящей заявке в качестве компонента фармацевтической композиции, антисмысловая нить может иметь 15-49 нуклеотидов в длину (например, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45,46, 47,48 или 49 нуклеотидов в длину); или 17-35 нуклеотидов в длину; или 17-30 нуклеотидов в длину; или 15-25 нуклеотидов в длину; или 18-25 нуклеотидов в длину; или 18-23 нуклеотидов в длину; или 19-21 нуклеотидов в длину; или 25-30 нуклеотидов в длину; или 26-28 нуклеотидов в длину. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения в молекулах нуклеиновой кислоты (например, siNA молекулы), как раскрывается в настоящей заявке, смысловая нить может иметь 19 нуклеотидов в длину. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения в молекулах нуклеиновой кислоты (например, siNA молекулы), как раскрывается в настоящей заявке, антисмысловая нить и смысловая нить могут иметь 19 нуклеотидов в длину. Область дуплекса молекул нуклеиновой кислоты (например, siNA молекулы), как раскрывается в описании настоящего изобретения, может иметь 15-49 нуклеотидов в длину (например, около 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или 49 нуклеотидов в длину), 15-35 нуклеотидов в длину; или 15-30 нуклеотидов в длину; или около 15-25 нуклеотидов в длину; или 17-25 нуклеотидов в длину; или 17-23 нуклеотидов в длину; или 17-21 нуклеотидов в длину; или 25-30 нуклеотидов в длину; или 25-28 нуклеотидов в длину. В различных вариантах выполнения настоящего изобретения в молекулах нуклеиновой кислоты (например, siNA молекулы), как раскрывается в настоящей заявке, область дуплекса может иметь 19 нуклеотидов в длину.

Согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения смысловая и антисмысловая нити нуклеиновой кислоты (например, молекулы нуклеиновой кислоты SINA), обеспечиваемой согласно настоящему изобретению в качестве компонента фармацевтической композиции, являются отдельными полинуклеотидными нитями. Согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения, отдельная антисмысловая и смысловая нити образуют двухцепочечную структуру посредством водородных связей, например, путем связывания пар оснований по Уотсону-Крику. Согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения смысловая и антисмысловая нити являются отдельными нитями, которые ковалентно связаны друг с другом. Согласно другим вариантам выполнения настоящего изобретения смысловая и антисмысловая нити являются частью одной нити полинуклеотидов, имеющей как смысловой, так и антисмысловой участок; согласно некоторым предпочтительным вариантам выполнения настоящего изобретения указанная полинуклеотидная нить имеет шпилечную структуру.

Согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты (например, молекула sINA) представляет собой молекулу двухцепочечной нуклеиновой кислоты (dsNA), которая симметрична в отношении липких концов и имеет тупой конец с обоих концов. Согласно другим вариантам реализации молекула нуклеиновой кислоты (например, молекула SINA) представляет собой молекулу dsNA, которая имеет симметричные выступающие концы и имеет выступающий конец с обеих сторон молекулы dsNA; предпочтительно указанная молекула имеет липкие концы длиной 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 нуклеотидов; предпочтительно молекула имеет липкие концы из 2 нуклеотидов. Согласно некоторым вариантам реализации липкие концы представляют собой 5' липкие концы; согласно другим вариантам реализации липкие концы представляют собой 3' липкие концы. Согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения нуклеотиды на липких концах модифицированы с помощью модификаций согласно настоящему описанию. Согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения нуклеотиды на липких концах представляют собой 2'-дезоксинуклеотиды.

Согласно некоторым предпочтительным вариантам выполнения настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты (например, молекула SINA), в качестве компонента фармацевтической композиции, представляет собой молекулу dsNA, которая является асимметричной по липким концам и имеет тупой конец на одном конце молекулы и липкий конец на другом конце молекулы. Согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения липкий конец имеет длину 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 нуклеотидов; предпочтительно липкий конец составляет 2 нуклеотида. Согласно некоторым предпочтительным вариантам выполнения настоящего изобретения асимметричная молекула dsN А имеет 3'-липкий конец (например, 3'-липкий конец из 2 нуклеотидов) на одной стороне двухнитевого участка, образованного на смысловой нити, и тупой конец на другом конце молекулы. Согласно некоторым предпочтительным вариантам выполнения настоящего изобретения асимметричная молекула dsNA имеет 5'-липкий конец (например, 5'-липкий конец длиной 2 нуклеотида) на одной стороне дуплекса, образованного на смысловой нити, и тупой конец на другой стороне молекулы. Согласно другим предпочтительным вариантам выполнения настоящего изобретения асимметричная молекула dsNA имеет 3'-липкий конец (например, 3'- липкий конец длиной 2 нуклеотида) на одной стороне двухнитевого участка, образованного на антисмысловой нити, и тупой конец на другой стороне молекулы. Согласно некоторым предпочтительным вариантам выполнения настоящего изобретения асимметричная молекула dsNA имеет 5'-липкий конец (например, 5'-липкий конец длиной 2 нуклеотида) на одной стороне двухнитевого участка, образованного на антисмысловой нити, и тупой конец на другой стороне молекулы. Согласно некоторым предпочтительным вариантам выполнения настоящего изобретения липкие концы представляют собой 2'-дезоксинуклеотиды.

Согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты (например, молекула SINA), как компонент фармацевтической композиции, имеет шпилечную структуру (имеющую смысловую и антисмысловую нити на одном полинуклеотиде) со структурой петли на одном конце и тупым концом на втором конце. Согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты имеет шпилечную структуру со структурой петли на одном конце и выступающим вторым концом (например, выступающим концом длиной 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 нуклеотидов); согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения липкий конец представляет собой 3'-липкий конец; согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения липкий конец представляет собой 5'-липкий конец; согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения липкий конец находится на смысловой нити; согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения липкий конец находится на антисмысловой нити.

Согласно некоторым предпочтительным вариантам выполнения настоящего изобретения молекулу нуклеиновой кислоты выбирают из молекул нуклеиновых кислот, показанных в Таблице 3.

Молекулы нуклеиновой кислоты (например, молекула SINA), как раскрывается в настоящей заявке в качестве компонента фармацевтической композиции, могут включать одну или несколько модификаций или модифицированных нуклеотидов, такие как описанные в настоящей заявке. Например, молекула нуклеиновой кислоты (например, молекула SINA) согласно настоящему изобретению может включать модифицированный нуклеотид, имеющий модифицированный остаток сахара; модифицированный нуклеотид, имеющий модифицированное нуклеиновое основание, или модифицированный нуклеотид, имеющий модифицированную фосфатную группу. Аналогично, молекула нуклеиновой кислоты (например, молекула SINA) согласно настоящему изобретению может включать модифицированный фосфодиэфирный остов и/или может включать модифицированную концевую фосфатную группу.

Молекулы нуклеиновой кислоты (например, молекулы SINA), как раскрывается в настоящей заявке в качестве компонента фармацевтической композиции, могут иметь один или несколько нуклеотидов, которые включают модифицированную сахарную группу, например, согласно настоящему описанию. Согласно некоторым предпочтительным вариантам выполнения настоящего изобретения модифицированную сахарную группу выбирают из группы, состоящей из 2'-0-метила, 2'-метоксиэтокси, 2'-дезокси, 2'-фторо, 2'-аллила, 2'-0-(2-(метиламино)-2-оксиэтила), 4'-тио, 4'-(СН₂)₂-0-2'-мостика, 2'-LNA (рибозная составляющая LNA нуклеотида модифицирована внешним мостиком, соединяющим 2' кислород и 4' углерод) и 2'-0-(N-метилкарбамата).

Молекулы нуклеиновой кислоты (например, молекулы sINA), как раскрывается в настоящей заявке в качестве компонента фармацевтической композиции, могут иметь одно или несколько модифицированных нуклеиновых оснований, например, согласно настоящему изобретению, которые предпочтительно могут представлять собой нуклеиновое основание, выбранное из группы, состоящей из ксантина, гипоксантина, 2-аминоаденина, 6-метила и других алкильных производных аденина и гуанина, 2-пропила и других алкильных производных аденина и гуанина, 5-галоурацила и цитозина, 5-пропинилурацила и цитозина, 6-азо урацила, цитозина и тимина, 5-урацила (псевдоурацила), 4-тиоурацила, 8-гало, амино, тиола, тиоалкила, гидроксила и других замещенных в положении 8-замещенных аденинов и гуанинов, 5-трифторметила и других 5-замещенных урацилов и цитозинов, 7-метилгуанина и ациклонуклеотидов.

Молекулы нуклеиновой кислоты (например, молекулы sINA), как раскрывается в настоящей заявке в качестве компонента фармацевтической композиции, могут иметь одну или более модификаций фосфодиэфирного остова, например, как раскрывается в настоящем изобретении. Согласно некоторым предпочтительным вариантам выполнения настоящего изобретения фосфодиэфирная связь модифицирована посредством замещения фосфодиэфирной связи на фосфотиоатную, 3'-(или -5')дезокси-3'- (или-5')тио-фосфотиоатную, фосфодитиоатную, фосфоселенатную, 3'-(или -5')дезокси фосфинатную, боранофосфатную, 3'-(или -5')дезокси-3'-(или 5'-)амино фосфоамидатную, гидрофосфонатную, боранофосфатэфирную, фосфоамидатную, алкил или арил фосфонатную и фосфотриэфирную или фосфористую связи.

Согласно различным вариантам выполнения настоящего изобретения обеспечиваемые молекулы нуклеиновой кислоты (например, молекулы siNA), в качестве компонента фармацевтической композиции, могут включать одну или несколько модификаций в смысловой нити, но не в антисмысловой нити. Согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения обеспечиваемые молекулы нуклеиновой кислоты (например, молекулы siNK) включают одну или несколько модификаций в антисмысловой нити, но не в смысловой нити. Согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения обеспечиваемые молекулы нуклеиновой кислоты (например, молекулы siNK) включают одну или несколько модификаций как в смысловой нити, так и в антисмысловой нити.

Согласно некоторым вариантам выполнения настоящего изобретения молекулы нуклеиновой кислоты (например, молекулы siNA) в качестве компонента фармацевтической композиции имеют модификации, смысловая нить включает последовательность чередующихся модифицированных и немодифицированных нуклеотидов, и/или антисмысловая нить включает последовательность чередующихся модифицированных и не модифицированных нуклеотидов; согласно некоторым предпочтительным вариантам таких вариантов выполнения настоящего изобретения указанная модификация представляет собой 2'ОМе составляющую. Последовательность чередующихся модифицированных и немодифицированных нуклеотидов может начинаться с модифицированного нуклеотида на 5'-конце или 3'-конце одной из нитей; например последовательность чередующихся модифицированных и немодифицированных нуклеотидов может начинаться с модифицированного нуклеотида на 5'-конце или 3'-конце смысловой нити, и/или последовательность чередующихся модифицированных и немодифицированных нуклеотидов может начинаться с модифицированного нуклеотида на 5'-конце или 3'-конце антисмысловой нити. Если и антисмысловая и смысловая нити включают последовательность чер