Композиции и способы для диагностики и лечения опухоли

Композиции и способы для диагностики и лечения опухоли

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Родственная заявка

Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно предварительной патентной заявке США № 61/330698 от 3 мая 2010 г., полное описание которой включено в настоящий документ посредством данной ссылки.

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к композициям веществ, пригодных для диагностики и лечения опухолей млекопитающих, и к способам применения этих композиций веществ для вышеуказанных целей.

Уровень техники

Злокачественные (раковые) опухоли являются второй по значимости причиной смертности в США после сердечно-сосудистых заболеваний (Boring et al., CA Cancel J. Clin. 43:7 (1993)). Рак характеризуется увеличением количества аномальных, или неопластических, клеток, происходящих из нормальной ткани, которые пролиферируют, образуя опухолевую массу, инвазией прилежащих тканей этими неопластическими опухолевыми клетками и образованием злокачественных клеток, которые с течением времени распространяются по кровеносной или лимфатической системе в региональные лимфатические узлы и в удаленные органы в ходе способа, называемого метастазированием. В злокачественном состоянии клетка пролиферирует при условиях, в которых не происходит роста нормальных клеток. Рак проявляется в разнообразных формах, характеризующихся различной степенью инвазионной способности и агрессивности.

Пытаясь обнаружить эффективные клеточные мишени для диагностики и терапии рака, исследователи преследуют цели идентификации трансмембранных или иным образом ассоциированных с мембраной полипептидов, специфически экспрессирующихся на поверхности одного или более конкретного(ых) вида(ов) раковых клеток по сравнению с одной или более нормальной(ых) нераковой(ых) клеткой(ми). Часто такие ассоциированные с мембраной полипептиды в большем количестве экспрессируются на поверхности раковых клеток по сравнению с поверхностью нераковых клеток. Идентификация таких антигенных полипептидов, ассоциированных с поверхностью раковых клеток, дает возможность специфического адресного разрушения раковых клеток за счет терапии, основанной на использовании антител. В этом отношении следует отметить, что терапия, основанная на использовании антител, продемонстрировала высокую эффективность при лечении некоторых видов рака. Например, герцептин (HERCEPTIN®) и ритуксан (RITUXAN®) (производимые Genentech Inc., Южный Сан-Франциско, штат Калифорния, США) представляют собой антитела, успешно применяемые для лечения рака молочной железы и неходжкинской лимфомы, соответственно. Конкретнее, HERCEPTIN® представляет собой гуманизированные моноклональные антитела, получаемые за счет использования рекомбинантной ДНК, которые селективно связываются с внеклеточным доменом протоонкогена - рецептора-2 эпидермального фактора роста человека (HER2). Сверхэкспрессия белка HER2 наблюдается при 25-30% случаев первичного рака молочной железы. RITUXAN® представляет собой рекомбинантные химерные моноклональные антитела мыши/человека против антигена CD20, находящегося на поверхности нормальных и злокачественных B-лимфоцитов. Оба этих антитела рекомбинантно продуцируют в клетках CHO.

Несмотря на вышеописанные достижения терапии рака млекопитающих, существует значительная потребность в дополнительных диагностических и терапевтических агентах, способных обнаруживать наличие опухоли в организме млекопитающего и эффективно подавлять рост неопластических клеток, соответственно. В связи с этим, целью данного изобретения является идентификация полипептидов, ассоциированных с клеточной мембраной, которые в большем количестве экспрессируются на раковой(ых) клетке(ах) одного или более видов по сравнению с нормальными клетками или другими раковыми клетками, и использование таких полипептидов и нуклеиновых кислот, кодирующих их, для получения композиций веществ, пригодных для лечения и диагностического обнаружения рака у млекопитающих.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В данном патентном описании авторы изобретения впервые описывают идентификацию клеточных полипептидов (и нуклеиновых кислот, кодирующих их, или фрагментов этих соединений), экспрессирующихся в большей степени на поверхности одного или более типов раковых клеток по сравнению с поверхностью одного или более типов нормальных нераковых клеток. Эти полипептиды в настоящем документе называют опухолеассоциированными антигенными полипептидами-мишенями (Tumor-associated Antigenic Target, "TAT"-полипептидами); ожидается, что они могут служить эффективными мишенями для терапии и диагностики рака у млекопитающих.

В связи с этим, в одном из вариантов воплощения настоящего изобретения изобретение представляет выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, обладающую нуклеотидной последовательностью, кодирующей опухолеассоциированный антигенный полипептид-мишень или его фрагмент ("TAT"-полипептид).

В некоторых аспектах выделенная молекула нуклеиновой кислоты включает нуклеотидную последовательность, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью нуклеотидной последовательности, в альтернативном случае по меньшей мере приблизительно 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью нуклеотидной последовательности с (a) молекулой ДНК, кодирующей полноразмерный TAT-полипептид, обладающий аминокислотной последовательностью, как описано здесь, аминокислотную последовательность TAT-полипептида без сигнального пептида, как описано здесь, внеклеточный домен трансмембранного TAT-полипептида, содержащий или не содержащий сигнальный пептид, как описано здесь, или любой другой конкретно определенный фрагмент аминокислотной последовательности полноразмерного TAT-полипептида, как описано здесь, либо (б) последовательностью, комплементарной молекуле ДНК согласно (a).

В других аспектах выделенная молекула нуклеиновой кислоты включает нуклеотидную последовательность, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью нуклеотидной последовательности, в альтернативном случае по меньшей мере приблизительно 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью нуклеотидной последовательности с (a) молекулой ДНК, включающей кодирующую последовательность кДНК полноразмерного TAT-полипептида, как описано здесь, кодирующую последовательность TAT-полипептида без сигнального пептида, как описано здесь, кодирующую последовательность внеклеточного домена трансмембранного TAT-полипептида, содержащего или не содержащего сигнальный пептид, как описано здесь, или кодирующую последовательность любого другого конкретно определенного фрагмента аминокислотной последовательности полноразмерного TAT-полипептида, как описано здесь, либо (б) последовательностью, комплементарной молекуле ДНК согласно (a).

Еще один аспект изобретения представляет выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотидную последовательность, кодирующую TAT-полипептид с либо удаленным, либо инактивированным трансмембранным доменом, или комплементарную такой кодирующей нуклеотидной последовательности, причем трансмембранный(е) домен(ы) такого(их) полипептида(ов) соответствует(ют) описанию здесь. Таким образом, настоящее изобретение рассматривает растворимые внеклеточные домены TAT-полипептидов, описанных здесь.

В других аспектах настоящее изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, гибридизующейся с (a) нуклеотидной последовательностью, кодирующей полноразмерный TAT-полипептид, обладающий полноразмерной аминокислотной последовательностью, как описано здесь, аминокислотную последовательность TAT-полипептида без сигнального пептида, как описано здесь, внеклеточный домен трансмембранного TAT-полипептида, содержащий или не содержащий сигнальный пептид, как описано здесь, или любой другой конкретно определенный фрагмент аминокислотной последовательности полноразмерного TAT-полипептида, как описано здесь, либо (б) последовательностью, комплементарной нуклеотидной последовательности согласно (a). В связи с этим, вариант воплощения настоящего изобретения относится к фрагментам полноразмерной кодирующей последовательности TAT-полипептида или комплементарной ей последовательности, как описано здесь, которые могут находить применение, например, в качестве гибридизационных зондов, используемых, например, в качестве диагностических зондов, ПЦР-праймеров, антисмысловых олигонуклеотидных зондов, или к кодирующим фрагментам полноразмерного TAT-полипептида, которые необязательно могут кодировать полипептид, содержащий сайт связывания антител против TAT-полипептида. Такие фрагменты нуклеиновых кислот обычно обладают длиной по меньшей мере приблизительно 5 нуклеотидов, в альтернативном случае по меньшей мере приблизительно 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990 или 1000 нуклеотидов в длину, причем в этом контексте термин "приблизительно" означает указанную длину нуклеотидной последовательности плюс-минус 10% этой указанной длины. Кроме того, такие фрагменты нуклеиновых кислот обычно содержат последовательные нуклеотиды, происходящие из полноразмерной кодирующей последовательности TAT-полипептида или комплементарной ей последовательности. Отмечено, что новые фрагменты нуклеотидной последовательности, кодирующей TAT-полипептид, или ее комплементарной последовательности, можно определить в рабочем порядке путем выравнивания нуклеотидной последовательности, кодирующей TAT-полипептид, с другими известными нуклеотидными последовательностями с помощью любой из общеизвестных программ выравнивания последовательностей, и определения того, какой(ие) фрагмент(ы) нуклеотидной последовательности, кодирующей TAT-полипептид, или комплементарной ей последовательности, являются новыми. Все из таких новых фрагментов нуклеотидных последовательностей, кодирующих TAT-полипептиды, или последовательностей, комплементарных им, рассматриваются здесь. Кроме того, рассматриваются фрагменты TAT-полипептидов, кодируемые этими фрагментами нуклеотидных молекул, предпочтительно, фрагменты TAT-полипептидов, включающие сайт связывания антител против TAT.

В еще одном варианте воплощения изобретение представляет выделенные TAT-полипептиды, кодируемые любой из вышеуказанных выделенных нуклеотидных последовательностей.

В некоторых аспектах изобретение относится к выделенному TAT-полипептиду, включающему аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью аминокислотной последовательности, в альтернативном случае по меньшей мере приблизительно 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью аминокислотной последовательности с полноразмерным TAT-полипептидом, обладающим полноразмерной аминокислотной последовательностью, как описано здесь, аминокислотной последовательностью TAT-полипептида без сигнального пептида, как описано здесь, внеклеточным доменом белка трансмембранного TAT-полипептида, содержащим или не содержащим сигнальный пептид, как описано здесь, аминокислотной последовательностью, кодируемой любой из нуклеотидных последовательностей, описанных здесь, или любым другим конкретно определенным фрагментом аминокислотной последовательности полноразмерного TAT-полипептида, как описано здесь.

В других дополнительных аспектах изобретение относится к выделенному TAT-полипептиду, включающему аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью, гибридизующейся с последовательностью, комплементарной последовательности молекулы ДНК, кодирующей (а) TAT-полипептид, обладающий полноразмерной аминокислотной последовательностью, как описано здесь, (б) аминокислотную последовательность TAT-полипептида без сигнального пептида, как описано здесь, (в) внеклеточный домен белка трансмембранного TAT-полипептида, содержащий или не содержащий сигнальный пептид, как описано здесь, (г) аминокислотную последовательность, кодируемую любой из нуклеотидных последовательностей, описанных здесь, или (е) любой другой конкретно определенный фрагмент аминокислотной последовательности полноразмерного TAT-полипептида, как описано здесь.

В определенном аспекте изобретение представляет выделенный TAT-полипептид без N-концевой сигнальной последовательности и/или без инициирующего метионина, кодируемый нуклеотидной последовательностью, кодирующей аминокислотную последовательность, описанную выше. Здесь также описаны способы для получения указанных соединений, причем указанные способы включают культивирование клетки-хозяина, содержащей вектор, содержащий соответствующую кодирующую молекулу нуклеиновой кислоты, при условиях, подходящих для экспрессии TAT-полипептида и выделения TAT-полипептида из культуры клеток.

Еще один из аспектов настоящего изобретения представляет выделенный TAT-полипептид, в котором трансмембранный домен либо удален, либо инактивирован. Здесь также описаны способы для получения указанных соединений, причем указанные способы включают культивирование клетки-хозяина, содержащей вектор, содержащий соответствующую кодирующую молекулу нуклеиновой кислоты, при условиях, подходящих для экспрессии TAT-полипептида и выделения TAT-полипептида из культуры клеток.

В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения изобретение представляет вектор, включающий ДНК, кодирующую любой из полипептидов, описанных здесь. Кроме того, представлена клетка-хозяин, включающая любой из таких векторов. Например, клетки-хозяева могут представлять собой клетки CHO, клетки E. coli или клетки дрожжей. Кроме того, представлен способ для получения любого из описанных здесь полипептидов, включающий культивирование клеток-хозяев при условиях, подходящих для экспрессии желательного полипептида, и выделение желательного полипептида из культуры клеток.

В других вариантах воплощения изобретение представляет выделенные химерные полипептиды, включающие любой из описанных здесь TAT-полипептидов, объединенный с гетерологичным (не TAT) полипептидом. Примеры таких химерных молекул включают любой из описанных здесь TAT-полипептидов, объединенный с гетерологичным полипептидом, например, маркерной последовательностью эпитопа или Fc-областью иммуноглобулина.

В еще одном варианте воплощения изобретение представляет антитело, которое связывается, предпочтительно специфически, с любым из полипептидов, описанных выше или ниже. В необязательном случае антитело представляет собой моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело, одноцепочечное антитело или антитело, конкурентно ингибирующее связывание антитела против TAT-полипептида с его соответствующим антигенным эпитопом. Антитела по настоящему изобретению можно необязательно конъюгировать с агентом, подавляющим рост, или цитотоксическим агентом, таким как токсин, включая, например, майтанзиноид или калихеамицин, антибиотиком, радиоактивным изотопом, нуклеолитическим ферментом или подобными агентами. Антитела по настоящему изобретению можно необязательно продуцировать в клетках CHO или бактериальных клетках; в предпочтительном случае они подавляют рост или пролиферацию или индуцируют гибель клетки, с которой они связываются. Для диагностических целей антитела по настоящему изобретению можно метить обнаруживаемой меткой, прикреплять к твердому носителю и т.п.

В еще одном аспекте изобретение представляет биспецифическое антитело, способное связываться с первой клеткой, экспрессирующей TAT-полипептид, и со второй клеткой, экспрессирующей клеточный поверхностный антиген-мишень. В одном из вариантов воплощения вторая клетка представляет собой Т-клетку. В одном из вариантов воплощения клеточный поверхностный антиген-мишень представляет собой CD3.

В других вариантах воплощения настоящего изобретения изобретение представляет векторы, включающие ДНК, кодирующую любое из антител, описанных здесь. Кроме того, представлена клетка-хозяин, включающая любой из таких векторов. Например, клетки-хозяева могут представлять собой клетки CHO, клетки E. coli или клетки дрожжей. Кроме того, представлен способ для получения любого из описанных здесь антител, включающий культивирование клеток-хозяев при условиях, подходящих для экспрессии желательного антитела и выделения желательного антитела из культуры клеток.

В других вариантах воплощения изобретение относится к композиции веществ, включающей TAT-полипептид, как описано здесь, химерный TAT-полипептид, как описано здесь, или антитело против TAT-полипептида, как описано здесь, в комбинации с носителем. В необязательном случае носитель представляет собой фармацевтически приемлемый носитель.

В еще одном варианте воплощения изобретение относится к изделию, включающему контейнер и композицию веществ, содержащуюся в контейнере, причем композиция веществ может включать TAT-полипептид, как описано здесь, химерный TAT-полипептид, как описано здесь, или антитела против TAT-полипептида, как описано здесь. В необязательном случае изделие также может включать этикетку, прикрепленную к контейнеру, или вкладыш в упаковку, вложенный в контейнер, которые относятся к применению композиции веществ для терапии или диагностического обнаружения опухоли.

Еще один вариант воплощения настоящего изобретения относится к использованию TAT-полипептида, как описано здесь, химерного TAT-полипептида, как описано здесь, или антител против TAT-полипептида, как описано здесь, для изготовления медикамента, пригодного для лечения состояния, поддающегося воздействию TAT-полипептида, химерного TAT-полипептида или антител против TAT-полипептида.

Другие варианты воплощения настоящего изобретения относятся к любому выделенному антителу, включающему одну или более из последовательностей CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 или CDR-H3, описанных здесь, или к любому антителу, связывающемуся с тем же эпитопом, что и любое из таких антител.

Еще один вариант воплощения настоящего изобретения относится к способу ингибирования роста клетки, экспрессирующей TAT-полипептид, причем указанный способ включает взаимодействие клетки с антителом, связывающимся с TAT-полипептидом, и связывание антитела с TAT-полипептидом вызывает ингибирование роста клетки, экспрессирующей TAT-полипептид. В предпочтительных вариантах воплощения клетка является раковой клеткой, а связывание антитела с TAT-полипептидом вызывает гибель клетки, экспрессирующей TAT-полипептид. В необязательном случае антитело представляет собой моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело или одноцепочечное антитело. Антитела, используемые в способах по настоящему изобретению, можно необязательно конъюгировать с агентом, подавляющим рост, или цитотоксическим агентом, таким как токсин, включая, например, майтанзиноид или калихеамицин, антибиотиком, радиоактивным изотопом, нуклеолитическим ферментом или подобными агентами. Антитела, используемые в способах по настоящему изобретению, можно необязательно продуцировать в клетках CHO или бактериальных клетках.

Еще один вариант воплощения настоящего изобретения относится к способу лечения млекопитающего, организм которого содержит раковую опухоль, включающую клетки, экспрессирующие TAT-полипептид, причем указанный способ включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества антитела, связывающегося с TAT-полипептидом, что приводит к лечению опухоли. В необязательном случае антитело представляет собой моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело или одноцепочечное антитело. Антитела, используемые в способах по настоящему изобретению, можно необязательно конъюгировать с агентом, подавляющим рост, или цитотоксическим агентом, таким как токсин, включая, например, майтанзиноид или калихеамицин, антибиотиком, радиоактивным изотопом, нуклеолитическим ферментом или подобными агентами. Антитела, используемые в способах по настоящему изобретению, можно необязательно продуцировать в клетках CHO или бактериальных клетках.

Еще один вариант воплощения настоящего изобретения относится к способу определения присутствия TAT-полипептида в образце, предположительно содержащем TAT-полипептид, причем указанный способ включает воздействие антител, связывающихся с TAT-полипептидом, на образец, и определение связывания антител с TAT-полипептидом в образце, причем наличие такого связывания является признаком присутствия TAT-полипептида в образце. В необязательном случае образец может содержать клетки (которые могут являться раковыми клетками), предположительно экспрессирующие TAT-полипептид. Антитела, используемые в способе по настоящему изобретению, можно метить обнаруживаемой меткой, прикреплять к твердому носителю и т.п.

Другой вариант воплощения настоящего изобретения относится к способу диагностики наличия опухоли в организме млекопитающего, включающему обнаружение уровня экспрессии гена, кодирующего TAT-полипептид (а) в тестируемом образце клеток ткани, полученном от указанного млекопитающего, и (б) в контрольном образце известных нормальных нераковых клеток этой же ткани, происхождения или типа, причем повышенный уровень экспрессии TAT-полипептида в тестируемом образце по сравнению с контрольным образцом является признаком наличия опухоли в организме млекопитающего, от которого получен тестируемый образец.

Еще один вариант воплощения настоящего изобретения относится к способу диагностики наличия опухоли в организме млекопитающего, включающий (а) взаимодействие тестируемого образца, содержащего клетки ткани, полученные от млекопитающего, с антителами, связывающимися с TAT-полипептидом, и (б) обнаружение образования комплекса антител и TAT-полипептида в тестируемом образце, причем образование комплекса является признаком наличия опухоли в организме млекопитающего. В необязательном случае используемые антитела являются мечеными обнаруживаемой меткой, прикрепленными к твердому носителю и т.п., и/или тестируемый образец клеток ткани получен от особи, в организме которой предположительно находится раковая опухоль.

Еще один вариант воплощения настоящего изобретения относится к способу лечения или предотвращения расстройства пролиферации клеток, ассоциированного с измененной, предпочтительно повышенной, экспрессией или активностью TAT-полипептида, включающему введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества антагониста TAT-полипептида. В предпочтительном случае расстройство пролиферации клеток представляет собой рак, а антагонист TAT-полипептида представляет собой антитело или антисмысловой олигонуклеотид против TAT-полипептида. Эффективное лечение или предотвращение расстройства пролиферации клеток может являться результатом прямого уничтожения или ингибирования роста клеток, экспрессирующих TAT-полипептид, или антагонизма активности TAT-полипептида, стимулирующей клеточный рост.

Еще один вариант воплощения настоящего изобретения относится к способу связывания антител с клеткой, экспрессирующей TAT-полипептид, причем указанный способ включает взаимодействие клетки, экспрессирующей TAT-полипептид, с указанными антителами при условиях, подходящих для связывания антител с указанным TAT-полипептидом, и обеспечение их связывания друг с другом. В предпочтительных вариантах воплощения антитело метят молекулой или соединением, пригодным для качественного и/или количественного определения положения и/или количества связывания антител с клеткой.

Другие варианты воплощения настоящего изобретения относятся к использованию TAT-полипептида, нуклеиновой кислоты, кодирующей TAT-полипептид, или вектора или клетки-хозяина, содержащих эту нуклеиновую кислоту, или антител против TAT-полипептида, для изготовления медикамента, пригодного для (i) лечения или диагностического обнаружения рака или опухоли или (ii) лечения или предотвращения расстройства пролиферации клеток.

Еще один вариант воплощения настоящего изобретения относится к способу ингибирования роста раковой клетки, причем рост указанной раковой клетки по меньшей мере частично зависит от стимулирующего рост действия TAT-полипептида (причем TAT-полипептид может экспрессироваться самой раковой клеткой или клеткой, продуцирующей полипептид(ы), оказывающие стимулирующее рост действие на раковые клетки), причем указанный способ включает взаимодействие TAT-полипептида с антителом, связывающимся с TAT-полипептидом, тем самым оказывая антагонистическое действие на стимулирующую рост активность TAT-полипептида и, в свою очередь, подавляя рост раковой клетки. В предпочтительном случае рост раковой клетки полностью подавляется. В еще более предпочтительном случае связывание антитела с TAT-полипептидом вызывает гибель раковой клетки. В необязательном случае антитело представляет собой моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело или одноцепочечное антитело. Антитела, используемые в способах по настоящему изобретению, можно необязательно конъюгировать с агентом, подавляющим рост, или цитотоксическим агентом, например, токсином, включая, например, майтанзиноид или калихеамицин, антибиотиком, радиоактивным изотопом, нуклеолитическим ферментом или подобными агентами. Антитела, используемые в способах по настоящему изобретению, можно необязательно продуцировать в клетках CHO или бактериальных клетках.

Еще один вариант воплощения настоящего изобретения относится к способу лечения опухоли в организме млекопитающего, причем рост указанной опухоли по меньшей мере частично зависит от стимулирующего рост действия TAT-полипептида, причем указанный способ включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества антител, связывающихся с TAT-полипептидом, за счет чего достигается антагонистическое действие на стимулирующую рост активность указанного TAT-полипептида и эффективное лечение опухоли. В необязательном случае антитело представляет собой моноклональное антитело, фрагмент антитела, химерное антитело, гуманизированное антитело или одноцепочечное антитело. Антитела, используемые в способах по настоящему изобретению, можно необязательно конъюгировать с агентом, подавляющим рост, или цитотоксическим агентом, например, токсином, включая, например, майтанзиноид или калихеамицин, антибиотиком, радиоактивным изотопом, нуклеолитическим ферментом или подобными агентами. Антитела, используемые в способах по настоящему изобретению, можно необязательно продуцировать в клетках CHO или бактериальных клетках.

В других вариантах воплощения изобретение относится к следующему набору потенциальных пунктов формулы изобретения этой или будущих заявок:

1. Выделенная нуклеиновая кислота, обладающая нуклеотидной последовательностью, характеризующейся по меньшей мере 80% идентичностью нуклеотидной последовательности с (а) молекулой ДНК, кодирующей аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO:2, (б) молекулой ДНК, кодирующей аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO:2, без связанного с ней сигнального пептида, (в) молекулой ДНК, кодирующей внеклеточный домен полипептида, представленного как SEQ ID NO:2, со связанным с ним сигнальным пептидом, (г) молекулой ДНК, кодирующей внеклеточный домен полипептида, представленного как SEQ ID NO:2, без связанного с ним сигнального пептида, (д) нуклеотидной последовательностью, представленной как SEQ ID NO:1, (е) полноразмерной кодирующей последовательностью нуклеотидной последовательности, представленной как SEQ ID NO:1 или (ж) последовательностью, комплементарной (a), (б), (в), (г), (д) или (е).

2. Выделенная нуклеиновая кислота, обладающая (а) нуклеотидной последовательностью, кодирующей аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO:2, (б) нуклеотидной последовательностью, кодирующей аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO:2, без связанного с ней сигнального пептида, (в) нуклеотидной последовательностью, кодирующей внеклеточный домен полипептида, представленного как SEQ ID NO:2, со связанным с ним сигнальным пептидом, (г) нуклеотидной последовательностью, кодирующей внеклеточный домен полипептида, представленного как SEQ ID NO:2, без связанного с ним сигнального пептида, (д) нуклеотидной последовательностью, представленной как SEQ ID NO:1, (е) полноразмерной кодирующей областью нуклеотидной последовательности, представленной как SEQ ID NO:1 или (ж) последовательностью, комплементарной (a), (б), (в), (г), (д) или (е).

3. Выделенная нуклеиновая кислота, гибридизующаяся с (а) нуклеиновой кислотой, кодирующей аминокислотную последовательность, представленной как SEQ ID NO:2, (б) нуклеиновой кислотой, кодирующей аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO:2, без связанного с ней сигнального пептида, (в) нуклеиновой кислотой, кодирующей внеклеточный домен полипептида, представленного как SEQ ID NO:2, со связанным с ним сигнальным пептидом, (г) нуклеиновой кислотой, кодирующей внеклеточный домен полипептида, представленного как SEQ ID NO:2, без связанного с ним сигнального пептида, (д) нуклеотидной последовательностью, представленной как SEQ ID NO:1, (е) полноразмерной кодирующей областью нуклеотидной последовательности, представленной как SEQ ID NO:1 или (ж) последовательностью, комплементарной (a), (б), (в), (г), (д) или (е).

4. Нуклеиновая кислота по п.3, отличающаяся тем, что гибридизация происходит при жестких условиях.

5. Нуклеиновая кислота по п.3, отличающаяся тем, что ее длина составляет по меньшей мере 5 нуклеотидов.

6. Экспрессирующий вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.1, 2 или 3.

7. Экспрессирующий вектор по п.6, отличающийся тем, что указанная нуклеиновая кислота функционально связана с регуляторными последовательностями, распознаваемыми клеткой-хозяином, трансформированной вектором.

8. Клетка-хозяин, включающая экспрессирующий вектор по п.7.

9. Клетка-хозяин по п.8, отличающаяся тем, что является клеткой CHO, клеткой E. coli или дрожжевой клеткой

10. Способ для получения полипептида, включающий культивирование клетки-хозяина по п.8 при условиях, подходящих для экспрессии указанного полипептида, и выделение желательного полипептида из культуры клеток.

11. Выделенный полипептид, характеризующийся по меньшей мере 80% идентичностью аминокислотной последовательности с (а) полипептидом, представленным как SEQ ID NO:2, (б) полипептидом, представленным как SEQ ID NO:2, без связанного с ним сигнального пептида, (в) внеклеточным доменом полипептида, представленного как SEQ ID NO:2, со связанным с ним сигнальным пептидом, (г) внеклеточным доменом полипептида, представленного как SEQ ID NO:2, без связанного с ним сигнального пептида, (д) полипептидом, кодируемым нуклеотидной последовательностью, представленной как SEQ ID NO:1 или (е) полипептидом, кодируемым полноразмерной кодирующей областью нуклеотидной последовательности, представленной как SEQ ID NO:1.

12. Выделенный полипептид, обладающий (а) аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO:2, (б) аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO:2, без связанной с ней последовательности сигнального пептида, (в) аминокислотной последовательностью внеклеточного домена полипептида, представленного как SEQ ID NO:2, со связанной с ней последовательностью сигнального пептида, (г) аминокислотной последовательностью внеклеточного домена полипептида, представленного как SEQ ID NO:2, без связанной с ней последовательности сигнального пептида, (д) аминокислотной последовательностью, кодируемой нуклеотидной последовательностью, представленной как SEQ ID NO:1 или (е) аминокислотной последовательностью, кодируемой полноразмерной кодирующей областью нуклеотидной последовательности, представленной как SEQ ID NO:1.

13. Химерный полипептид, отличающийся тем, что содержит полипептид по п.11 или 12, объединенный с гетерологичным полипептидом.

14. Химерный полипептид по п.13, отличающийся тем, что указанный гетерологичный полипептид представляет собой маркерную последовательность эпитопа или Fc-область иммуноглобулина.

15. Выделенное антитело, связывающееся с полипептидом, характеризующимся по меньшей мере 80% идентичностью аминокислотной последовательности с (а) полипептидом, представленным как SEQ ID NO:2, (б) полипептидом, представленным как SEQ ID NO:2, без связанного с ним сигнального пептида, (в) внеклеточным доменом полипептида, представленного как SEQ ID NO:2, со связанным с ним сигнальным пептидом, (г) внеклеточным доменом полипептида, представленного как SEQ ID NO:2, без связанного с ним сигнального пептида, (д) полипептидом, кодируемым нуклеотидной последовательностью, представленной как SEQ ID NO:1 или (е) полипептидом, кодируемым полноразмерной кодирующей областью нуклеотидной последовательности, представленной как SEQ ID NO:1.

16. Выделенное антитело, связывающееся с полипептидом, обладающим (а) аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO:2, (б) аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO:2, без связанной с ней последовательности сигнального пептида, (в) аминокислотной последовательностью внеклеточного домена полипептида, представленного как SEQ ID NO:2, со связанной с ней последовательностью сигнального пептида, (г) аминокислотной последовательностью внеклеточного домена полипептида, представленного как SEQ ID NO:2, без связанной с ней последовательности сигнального пептида, (д) аминокислотной последовательностью, кодируемой нуклеотидной последовательностью, представленной как SEQ ID NO:1 или (е) аминокислотной последовательностью, кодируемой полноразмерной кодирующей областью нуклеотидной последовательности, представленной как SEQ ID NO:1.

17. Антитело по п.15 или 16, отличающееся тем, что является моноклональным антителом.

18. Антитело по п.15 или 16, отличающееся тем, что является фрагментом антитела.

19. Антитело по п.15 или 16, отличающееся тем, что является химерным или гуманизированным антителом.

20. Антитело по п.15 или 16, отличающееся тем, что конъюгируется с агентом, подавляющим рост.

21. Антитело по п.15 или 16, отличающееся тем, что конъюгируется с цитотоксическим агентом.

22. Антитело по п.21, отличающееся тем, что указанный цитотоксический агент выбирают из группы, состоящей из токсинов, антибиотиков, радиоактивных изотопов и нуклеолитических ферментов.

23. Антитело по п.21, отличающееся тем, что цитотоксический агент представляет собой токсин.

24. Антитело по п.23, отличающееся тем, что токсин выбирают из группы, состоящей из майтанзиноида и калихеамицина.

25. Антитело по п.23, отличающееся тем, что токсин представляет собой майтанзиноид.

26. Антитело по п.15 или 16, отличающееся тем, что продуцировано бактериями.

27. Антитело по п.15 или 16, отличающееся тем, что продуцировано клетками CHO.

28. Антитело по п.15 или 16, отличающееся тем, что вызывает гибель клетки, с которой оно связывается.

29. Антитело по п.15 или 16, отличающееся тем, что мечено обнаруживаемой меткой.

30. Выделенная нуклеиновая кислота, обладающая нуклеотидной последовательностью, кодирующей антитело по п.15 или 16.

31. Экспрессирующий вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.30, функционально связанную с регуляторными последовательностями, распознаваемыми клеткой-хозяином, трансформированной вектором.

32. Клетка-хозяин, включающая экспрессирующий вектор по п.31.

33. Клетка-хозяин по п.32, отличающаяся тем, что является клеткой CHO, клеткой E. coli или дрожжевой клеткой.

34. Способ продуцирования антител, включающий культивирование клетки-хозяина по п.32 при условиях, подходящих для экспрессии указанных антител, и выделение желательных антител из культуры клеток.

35. Композиция веществ, включающая (а) полипептид по п.11, (б) полипептид по п.12, (с) химерный полипептид по п.13, (г) антитело по п.15 или (е) антитело по п.16, в комбинации с носителем.

36. Композиция веществ по п.35, отличающаяся тем, что указанный носитель представляет собой фармацевтически п