Способ отбора и получения селективных и мультиспецифических терапевтических молекул с заданными свойствами, включающих по меньшей мере две различные нацеливающие группировки, и их применения

Способ отбора и получения селективных и мультиспецифических терапевтических молекул с заданными свойствами, включающих по меньшей мере две различные нацеливающие группировки, и их применения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

В данном документе сообщается о способах отбора и получения мультиспецифических терапевтических молекул, изготовленных из полипептид-полинуклеотидного комплекса, где специфичности терапевтической молекулы выбраны в зависимости от фенотипа терапевтических мишеней.

Уровень техники

За последние годы было разработано и подвергнуто клиническим испытаниям широкое разнообразие опухолеспецифических терапевтических белков, включая антитела, фрагменты антител и лиганды рецепторов клеточной поверхности. Эти терапевтические белки были конъюгированы с несколькими классами терапевтических токсинов, такими как низкомолекулярные лекарственные вещества, ферменты, радиоизотопы, белковые токсины и другие токсины для специфической доставки пациентам.

Эффективная доставка к месту заболевания является необходимым условием для высокой эффективности и низкой токсичности любой терапевтической молекулы. Например, в данном контексте могут использоваться антитела. Если антитело само по себе не является терапевтическим, то конъюгация лекарственного препарата с антителом позволяет достичь высокого уровня локализации лекарственного средства в нужном месте в организме человека. Это увеличивает эффективную концентрацию лекарственного средства в его целевой области, тем самым оптимизируя терапевтический эффект агента. Кроме того, с целевой доставкой врач может иметь возможность понизить дозу терапевтического агента, что особенно актуально, если полезная нагрузка препарата имеет ассоциированные токсичности, или если он будет использоваться для лечения хронических заболеваний (см., например, McCarron, Р.А., et al., Mol. Interventions 5 (2005) 368-380).

О создании биспецифических антител, например, сообщается в WO 2004/081051. Был разработан и создан широкий спектр форматов биспецифических антител (см., например, Fischer, N. and Leger, О., Pathobiology 74 (2007) 3-14). О хелатирующих рекомбинантных антителах (CRAb) первоначально сообщалось в Neri, D., et al. (Neri, D., et al., J. Mol. Biol. 246 (1995) 367-373). Wright, M.J. and Deonarain, MP. (Molecular Immunology 44 (2007) 2860-2869) сообщали о библиотеке фагового дисплея для создания хелатизированных рекомбинантных антител.

О молекулярных носителях для целевой доставки лекарственных препаратов сообщается в Backer, M.V., et al., Bioconjugate Chem. 13 (2002) 462-467. В WO 2010/118169 сообщается о человеческих белковых матрицах с контролируемой фармакокинетикой в сыворотке крови. Способы и композиции, связанные с пептидами и белками с C-концевыми элементами, имеют перекрестную ссылку на родственные заявки и описаны в WO 2009/105671. В WO 2007/038658 сообщается о конъюгатах «антитело-лекарственный препарат» и способах их применения. Композиции и способы для целевой биологической доставки молекулярных носителей приведены в WO 2004/062602. В WO 2002/072141 сообщается о целевых лигандах.

В WO 2009/037659 сообщается о магнитном обнаружении малых группировок. Об обнаружении однородного анализируемого вещества сообщается в WO 2006/137932. В US 2008/0044834 сообщается о трехкомпонентном биосенсоре для обнаружения макромолекул и других анализируемых веществ. О разработке и синтезе биспецифических реагентов сообщается в WO 95/05399.

В US 2002/051986 сообщается о способах обнаружения анализируемого вещества с помощью нуклеиновокислотного репортера. В WO 95/053990 сообщается о разработке и синтезе биспецифичных реагентов с использованием двухцепочечных ДНК в качестве химически и пространственно сшивающих линкеров.

Gosuke, Н., et al. сообщают о применении L-ДНК в качестве молекулярной метки (Nucl. Acids Symp. Ser. 49 (2005) 261-262). Применение амфипатических спиралей для продукции функциональных гибко связанных димерных Fv-фрагментов с высокой авидностью в E. coli описано в Pack, P., et al. (Biochem. 31 (1992) 1579-1584). Kostelny, S.A., et al. сообщают о формировании биспецифического антитела с использованием лейциновых молний (J. Immunol. 148 (1992) 1547-1553). Димерное биспецифическое миниантитело, объединяющее две специфичности с авидностью, описано в Muller, К.М., et al. (FEBS Lett. 432 (1998) 45-49). Goldenberg, D.M., et al. сообщают о продукции многофункциональных антител способом «dock-and-lock» для улучшения визуализации и лечения рака за счет предварительного нацеливания (J. Nuc. Med. 49(2008) 158-163).

Сущность изобретения

В данном документе сообщается о способе получения высокоспецифической мультиспецифической терапевтической молекулы с заданными свойствами для лечения заболевания, такого как рак, у пациента, нуждающегося в лечении, где терапевтическая молекула адаптирована к характеристикам заболевания пациента и/или к генотипу/фенотипу пациента.

Такая адаптация достигается путем изготовления молекулы с заданными свойствами с учетом генотипа/фенотипа вызывающих заболевание/пораженных клеток пациента.

На первом этапе определяется генотип/фенотип клеток (например, наличие и число/количество специфических для заболевания антигенов клеточной поверхности), которые станут мишенями терапевтической молекулы. Это может быть достигнуто, например, с помощью методик клеточной визуализации, таких как иммуногистохимическое окрашивание (IHC, иммуногистохимия) клеток пациента, полученных, например, из крови и/или биопсийного материала, с использованием флуоресцентно меченных моноспецифических (терапевтических или диагностических) антител. Альтернативно генотип/фенотип клеток может быть проанализирован после окрашивания мечеными терапевтическими или диагностическими антителами с использованием способов на основе FACS. Методики визуализации in vivo, включая оптическую визуализацию, молекулярную визуализацию, флуоресцентную визуализацию, биолюминесцентную визуализацию, ЯМР, ПЭТ, ОФЭКТ, КТ и прижизненную микроскопию, также могут быть использованы для определения генотипа/фенотипа связанных с заболеванием клеток пациента. В зависимости от определенного генотипа/фенотипа клеток пациента, связанных с заболеванием, может быть выбрана/выбирается комбинация нацеливающих/связывающих группировок с заданными свойствами, и они объединяются в терапевтическую молекулу. Такая терапевтическая молекула может быть, например, биспецифическим антителом.

Такие терапевтические молекулы с заданными свойствами i) будут высокоспецифичными, ii) будут иметь хорошую эффективность и iii) будут вызывать меньше побочных эффектов по сравнению с обычными выбранными терапевтическими средствами. Это может быть достигнуто путем придания терапевтической молекуле улучшенной адресности и/или улучшенных свойств доставки с заданными свойствами, например, для полезной нагрузки терапевтического препарата в месте его предполагаемого действия.

Улучшенная доставка терапевтической молекулы к месту его действия, такому как, например, раковая клетка, может быть достигнута за счет более высокой/повышенной селективности и/или специфичности целевой терапевтической молекулы по сравнению с обычными выбранными терапевтическими молекулами. Терапевтическая молекула содержит по меньшей мере две группировки, которые специфически связываются с различными антигенами (например, с двумя различными поверхностными маркерами) или с различными эпитопами на одном и том же антигене (например, с двумя различными эпитопами на одном и том же поверхностном маркере).

Повышенная селективность и/или специфичность терапевтической молекулы с заданными свойствами может быть достигнута за счет одновременного связывания обеих нацеливающих группировок с их соответствующими мишенями/эпитопами, т.е. она достигается за счет эффекта авидности. Особенно подходящим является сочетание двух связывающих группировок, имеющих аффинность от низкой до средней к их соответствующим мишеням/эпитопам. Кроме того, нецелевое связывание значительно уменьшается или даже может быть полностью устранено.

Специфичности связывания предоставляются по отдельности исходными компонентами, из которых формируется мультиспецифическая терапевтическая молекула. Таким образом, можно сделать мультиспецифическую терапевтическую молекулу с заданными свойствами, такую как биспецифическое антитело, просто путем определения поверхностных маркеров, присутствующих на клетке, например на раковой клетке, и конъюгации соответствующих связывающих группировок, таких как фрагменты антител, которые специфически связываются с этими поверхностными маркерами, с нуклеиновой кислотой и соединения их с помощью линкерного нуклеотида.

Было обнаружено, что для направленной доставки эффекторной группировки особенно полезным является комплекс, содержащий полипептидный и полинуклеотидный компоненты. Эффекторная группировка, полипептидный компонент и полинуклеотидный линкер комплекса нековалентно связаны друг с другом. Это делает возможным модульное производство отдельных компонентов комплекса. Благодаря модульной архитектуре комплекса отдельные компоненты могут быть изменены без необходимости изменения других компонентов комплекса. Это позволяет легко и эффективно собирать множество вариантов комплекса, например, для получения библиотеки, на основе которой может быть выбрана высокоспецифическая мультиспецифическая терапевтическая молекула с заданными свойствами.

Одним из аспектов, описанном в данном документе, является способ выбора по меньшей мере двух связывающих группировок из коллекции/библиотеки связывающих группировок, которые собирают в одну мультиспецифическую связывающую молекулу путем инкубации (a) Fab-фрагмента антитела или scFv-фрагмент антитела, каждый из которых содержит или конъюгирован с первым элементом или элементом первой связывающей пары, где этот Fab-фрагмент или scFv специфически связывается с первым маркером клеточной поверхности или с первым эпитопом первого маркера клеточной поверхности, (b) Fab-фрагмента антитела или scFv-фрагмента антитела, каждый из которых содержит или конъюгирован с первым элементом или элементом второй связывающей пары, где этот Fab-фрагмент или scFv-фрагмент антитела специфически связывается со вторым маркером клеточной поверхности или со вторым эпитопом первого маркера клеточной поверхности, и (с) линкера, содержащего на одном его конце второй элемент первой связывающей пары и на соответствующем другом конце второй элемент второй связывающей пары, для использования в качестве терапевтического агента. Такой агент имеет улучшенные свойства нацеливания/доставки.

Одним из аспектов, описанных в данном документе, является способ получения мультиспецифической связывающей молекулы, включающий следующие этапы:

(i) определение маркеров клеточной поверхности, присутствующих в образце, содержащем клетку, и i) выбор по меньшей мере первого маркера клеточной поверхности и, возможно, второго маркера клеточной поверхности, или ii) выбор множества маркеров клеточной поверхности, соответствующего числу специфичностей связывания мультиспецифической связывающей молекулы,

(ii) инкубация (а) множества связывающих группировок, каждая из которых содержит первый элемент или участника связывающей пары, где каждая из связывающих группировок специфически связывается с другим маркером клеточной поверхности или его лигандом или эпитопом того же маркера клеточной поверхностности, где каждый первый элемент или участник связывающей пары связывается только с соответствующим вторым элементом или элементом и не связывается с любым другим вторым элементом или участником связывающей пары, и (b) линкера, содержащего соответствующие вторые элементы связывающих пар,

и, таким образом получение мультиспецифической связывающей молекулы.

Одним из аспектов, описанных в данном документе, является способ получения биспецифического антитела, включающий следующие этапы:

(i) определение маркеров клеточной поверхности, присутствующих в образце, содержащем клетку, и выбор первого поверхностного маркера и второго поверхностного маркера,

(ii) инкубация (а) Fab-фрагмента антитела или scFv-фрагмент антитела, содержащего или конъюгированного с первым элементом или участником первой связывающей пары, где этот Fab-фрагмент или scFv специфически связывается с первым маркером клеточной поверхности, (b) Fab-фрагмента антитела или scFv-фрагмента антитела, содержащего или конъюгированного с первым элементом или участником второй связывающей пары, где этот Fab-фрагмент или scFv-фрагмент антитела специфически связывается со вторым маркером клеточной поверхности, и (с) линкера, содержащего на одном его конце второй элемент первой связывающей пары и на соответствующем другом конце второй элемент второй связывающей пары.

и, таким образом получение биспецифического антитела.

Одним из аспектов, описанных в данном документе, является способ определения комбинации связывающих группировок для мультиспецифической связывающей молекулы, включающий следующие этапы:

(i) определение специфичности связывания и/или селективности и/или аффинности и/или эффекторной функции и/или периода полужизни in vivo множества мультиспецифических связывающих молекул, где во множестве мультиспецифических связывающих молекул содержится каждая (возможная) комбинация связывающих группировок,

и

(ii) выбор мультиспецифической связывающей молекулы с подходящей специфичностью связывания и/или селективностью и/или аффинностью и/или эффекторной функцией и/или периодом полужизни in vivo, и тем самым определение комбинации антигенсвязывающих группировок.

Одним из аспектов, описанных в данном документе, является способ определения комбинации антигенсвязывающих сайтов, включающий следующие этапы:

(i) определение специфичности связывания и/или селективности и/или аффинности и/или эффекторной функции и/или периода полужизни in vivo множества биспецифических антител, полученных путем объединения каждого элемента первого множества Fab-фрагментов антител или scFv-фрагментов антител, содержащего или конъюгированного с первым элементом первой связывающей пары, с каждым элементом второго множества Fab-фрагментов антител или scFv-фрагментов антител, содержащим или конъюгированным с первым элементом второй связывающей пары, и линкером, содержащим на одном его конце второй элемент первой связывающей пары и на соответствующем другом конце второй элемент второй связывающей пары,

где первое множество специфически связывается с первым маркером клеточной поверхности, а второе множество специфически связывается со вторым маркером клеточной поверхности,

и

(ii) выбор биспецифического антитела с подходящей специфичностью связывания и/или селективностью и/или аффинностью и/или эффекторной функцией и/или периодом полужизни in vivo, и тем самым определение комбинации антигенсвязывающих сайтов.

Одним из аспектов, описанных в данном документе, является биспецифическое антитело, содержащее

a) первый Fab-фрагмент или scFv-фрагмент антитела,

i) который специфически связывается с первым поверхностным маркером и

ii) который конъюгирован с первым элементом первой связывающей пары,

b) второй Fab-фрагмент или scFv-фрагмент антитела,

i) который специфически связывается со вторым поверхностным маркером и

ii) который конъюгирован с первым элементом второй связывающей пары, и

c) энантиомерный ДНК-полинуклеотидный линкер,

i) который конъюгирован со вторым элементом первой связывающей пары и

ii) который конъюгирован со вторым элементом второй связывающей пары,

при этом первый и второй Fab-фрагмент или scFv-фрагмент антитела образуют нековалентный комплекс.

Ниже приведены воплощения всех аспектов, описании в данном документе. При этом нужно отметить, что каждое воплощение может быть объединено с каждым из аспектов, а также со всеми другими отдельными воплощениями, приведенными в данном документе.

В одном воплощении связывающие группировки независимо друг от друга выбраны среди связывающей группировки на основании дарпинового домена, связывающей группировки на основании антикалинового домена, связывающей группировки на основании фрагмента Т-клеточного рецептора, такого как домен scTCR, связывающей группировки на основании верблюжьего VH-домена, связывающей группировки на основании десятого домена фибронектина III типа, связывающей группировки на основании тенасцинового домена, связывающей группировки на основании кадгеринового домена, связывающей группировки на основании ICAM-домена, связывающей группировки на основании домена титина, связывающей группировки на основании GCSF-R-домена, связывающей группировки на основании домена цитокинового рецептора, связывающей группировки на основании домена ингибитора гликозидазы, связывающей группировки на основании домена супероксидсупероксиддисмутазы или фрагментов антител (Fab- или scFv-фрагментов).

В одном воплощении всех аспектов мультиспецифическая связывающая молекула является биспецифическим антителом, или первая и вторая связывающие группировки независимо друг от друга являются фрагментами антитела.

В одном воплощении фрагмент антитела выбран из группы, содержащей Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂, димерное антитело, линейное антитело, scFv, scFab и dsFv.

В одном воплощении по меньшей мере два компонента биспецифического антитела, содержащего эффекторную группировку, специфичности связывания и полинуклеотидный линкер, нековалентно связаны друг с другом.

В одном воплощении связывающая группировка выбрана среди антител, фрагментов антител, рецепторов, лигандов рецепторов и связывающих мишень каркасов, при условии, что лиганд рецептора не является полипептидным лигандом рецептора инкретина.

В одном воплощении фрагмент антитела выбран из группы, содержащей Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂, димерное антитело, линейное антитело, scFv, scFab и dsFv.

В одном воплощении связывающий мишень каркас выбран среди дарпиновг гемопексин-подобных молекул и антикалинов.

В одном воплощении рецептор выбран среди фрагментов Т-клеточного рецептора и scTCR.

В одном воплощении мультиспецифическая связывающая молекула является комплексом, включающим

а) первую связывающую группировку,

i) которая специфически связывается с первым маркером клеточной поверхности или его лигандом и

ii) которая конъюгирована с первым элементом первой связывающей пары,

b) вторую связывающую группировку,

i) которая специфически связывается со вторым маркером клеточной поверхности или его лигандом и

ii) которая конъюгирована с первым элементом второй связывающей пары, и

c) полинуклеотидный линкер,

i) который конъюгирован со вторым элементом первой связывающей пары и

ii) который конъюгирован со вторым элементом второй связывающей пары.

В одном воплощении биспецифическое антитело представляет собой комплекс, содержащий

a) первый Fab-фрагмент или scFv-фрагмент антитела,

i) который специфически связывается с первым маркером клеточной поверхности и

ii) который конъюгирован с первым элементом первой связывающей пары,

b) второй Fab-фрагмент или scFv-фрагмент антитела,

i) который специфически связывается со вторым маркером клеточной поверхности и

ii) который конъюгирован с первым элементом второй связывающей пары и

c) полинуклеотидный линкер,

i) который конъюгирован со вторым элементом первой связывающей пары и

ii) который конъюгирован со вторым элементом второй связывающей пары.

В одном воплощении комплекс является нековалентным комплексом.

В одном воплощении комплекс также содержит другой полипептид, i) который специфически связывается со второй мишенью, и ii) который конъюгирован с первым элементом второй связывающей пары, а полинуклеотидный линкер конъюгирован со вторым элементом второй связывающей пары.

В одном воплощении комплекс также содержит эффекторную группировку, которая конъюгирована с полинуклеотидом, который комплементарен по меньшей мере части полинуклеотидного линкера.

В одном воплощении комплекс также содержит эффекторную группировку, конъюгированную с полинуклеотидом, который i) комплементарен по меньшей мере части полинуклеотида, который конъюгирован с первой или второй связывающей группировкой или Fab-фрагментом или scFv-фрагментом антитела, и ii) не комплементарен полинуклеотидному линкеру.

В одном воплощении первая и вторая связывающие группировки или Fab-фрагмент или scFv-фрагмент антитела связываются с одной и той же мишенью и с неперекрывающимися эпитопами на ней.

В одном воплощении полинуклеотидный линкер содержит от 8, 10, 15, 20, 25, 50, 100 нуклеотидов. В одном воплощении полинуклеотидный линкер содержит до 500, 750, 1000 или 2000 нуклеотидов. В одном воплощении полинуклеотидный линкер содержит от 10 до 500 нуклеотидов.

В одном воплощении полинуклеотидный линкер является энантиомерной ДНК. В одном воплощении энантиомерная ДНК является L-ДНК. В одном воплощении L-ДНК является одноцепочечной L-ДНК (оц-L-ДНК, ss-L-DNA).

В одном воплощении эффекторная группировка выбрана из группы, состоящей из связывающей группировки, меченой группировки и биологически активной группировки.

В одном воплощении полинуклеотидный линкер конъюгирован со связывающей группировкой или Fab-фрагментом или scFv-фрагментом антитела на его первом или втором конце.

В одном воплощении полинуклеотидный линкер конъюгирован с двумя вторыми элементами двух связывающих пар, где второй элемент первой связывающей пары конъюгирован с первым концом полинуклеотидного линкера, а второй элемент второй связывающей пары конъюгирован со вторым концом полинуклеотидного линкера.

В одном воплощении первый и второй элементы первой связывающей пары содержат нуклеиновокислотные последовательности SEQ ID № 05 и SEQ ID № 08, соответственно.

В одном воплощении первый и второй элементы второй связывающей пары содержат нуклеиновокислотные последовательности SEQ ID № 06 и SEQ ID № 07, соответственно.

В одном воплощении способ включает следующие этапы:

a) синтез первой связывающей группировки или Fab-фрагмента или scFv-фрагмента антитела, который специфически связывается с первым маркером клеточной поверхности или его лигандом, и который конъюгирован с первым элементом первой связывающей пары,

b) синтез второй связывающей группировки или Fab-фрагмента или scFv-фрагмента антитела, который специфически связывается со вторым маркером клеточной поверхности или его лигандом, и который конъюгирован с первым элементом второй связывающей пары,

c) синтез полинуклеотидного линкера, который конъюгирован с вторым элементом первой связывающей пары, и который конъюгирован со вторым элементом второй связывающей пары, и

d) формирование комплекса путем объединения синтезированных компонентов.

Другим аспектом, описанным в данном документе, является фармацевтическая композиция, содержащая мультиспецифическую связывающую молекулу или биспецифическое антитело, описанном в данном документе, и, возможно, фармацевтически приемлемый носитель.

Другим аспектом, описанным в данном документе, является мультиспецифическая связывающая молекула или биспецифическое антитело, описанное в данном документе, для применения в качестве лекарственного средства.

Также аспектом, описанным в данном документе, является мультиспецифическая связывающая молекула или биспецифическое антитело, описанное в данном документе, для применения в лечении рака.

Другим аспектом, описанным в данном документе, является применение мультиспецифической связывающей молекулы или биспецифического антитела, описанного в данном документе, в производстве лекарственного средства.

В одном воплощении лекарственное средство предназначено для лечения рака.

Одним из аспектов, описанных в данном документе, является способ лечения индивидуума, страдающего от рака, который включает введение индивидууму эффективного количества мультиспецифической связывающей молекулы или биспецифического антитела, описанного в данном документе.

Подробное описание воплощений изобретения

I. Определения

Объекты в единственном числе используются в данном документе для обозначения одного или более чем одного (т.е. по меньшей мере одного) из грамматических объектов пункта. В качестве примера, "антитело" означает одно антитело или более чем одно антитело.

«Акцепторная человеческая каркасная область» является каркасной областью, включающей аминокислотную последовательность каркасной области вариабельного домена легкой цепи (VL) или каркасной области вариабельного домена тяжелой цепи (VH), полученной из каркасной области человеческого иммуноглобулина или человеческой консенсусной каркасной области, определенной ниже. Акцепторная человеческая каркасная область, «полученная из» каркасной области человеческого иммуноглобулина или человеческой консенсусной каркасной области, может содержать одну и ту же аминокислотную последовательность, или она может содержать аминокислотные замены. В некоторых воплощениях число аминокислотных замен составляет 10 или менее, 9 или менее, 8 или менее, 7 или менее, 6 или менее, 5 или менее, 4 или менее, 3 или менее, или 2 или менее. В некоторых воплощениях акцепторная человеческая каркасная область VL по своей последовательности идентична VL каркасной последовательности человеческого иммуноглобулина или консенсусной человеческой каркасной последовательности.

Понятие «аффинность» относится к силе суммарных общих нековалентных взаимодействий между одним сайтом связывания молекулы (например, полипептида или антитела) и его партнером по связыванию (например, мишенью или антигеном). Если не указано иное, то термин «аффинность связывания», используемый в данном документе, относится к внутренней аффинности связывания, которая отражает взаимодействие 1:1 между элементами пары связывания (например, в полипептид-полинуклеотидном комплексе или между полипептидом и его мишенью, или между антителом и его антигеном). Аффинность молекулы X в отношении ее партнера Y может быть выражена, в основном, константой диссоциации (kD). Аффинность может быть измерена обычными способами, известными в данной области, такими как поверхностный плазменный резонанс, а также включая те, которые описаны в данном документе.

Понятие «антитела со зрелой аффинностью» относится к антителу с одним или более чем одним изменением в одной или более чем одной гипервариабельной области (HVR) по сравнению с родительским антителом, которое не содержит такие изменения, причем такие изменения приводят к повышению аффинности антитела к антигену.

Термин "запертый" означает, что эффектор защищен защитной группой, имеющей контролируемое время полужизни в сыворотке крови и жидкостях организма. Защитная группа может быть ферментативно отщеплена эндогенными ферментами. Защитная группа может быть удалена, расщеплена, разложена, ферментативно расщеплена или метаболизирована вторым эффектором, который вводят снаружи путем инъекции или перорально, таким как аскорбиновая кислота. Запертые эффекторные молекулы могут быть активированы с помощью ферментов, которые в природе находятся в жидкостях организма. Запертые эффекторные группировки могут быть активированы восстанавливающими агентами, также находящимися в жидкостях организма, такими как аскорбиновая кислота.

Термин "эффекторная группировка" означает любую молекулу или комбинацию молекул, чья активность, желательно, должна быть доставлена (в) и/или локализована в клетке. Эффекторные группировки включают, но не ограничиваясь ими, метки, цитотоксины (например, экзотоксин Pseudomonas, рицин, абрин, дифтерийный токсин и т.п.), ферменты, факторы роста, факторы транскрипции, лекарственные вещества, радионуклиды, лиганды, антитела, Fc-области антител, липосомы, наночастицы, вирусные частицы, цитокины и т.п.

Термин «антитело» в данном документе используется в самом широком его смысле и охватывает различные структуры антитела, в том числе, но не ограничиваясь ими, моноклональные антитела и фрагменты антител, до тех пор пока они проявляют нужную антигенсвязывающую активность.

Термин «фрагмент антитела» относится к фрагменту полного или полноразмерного антитела, который сохраняет способность связываться с антигеном. Примеры фрагментов антитела включают, но не ограничиваясь ими, Fv, FAB, FAB', FAB'-SH, F(ab')₂; димерные антитела; линейные антитела; одноцепочечные молекулы антител (например, scFv). Обзор определенных фрагментов антител см. в Hudson, P.J., et al., Nat. Med. 9 (2003) 129-134. Более детально, термин «фрагмент антитела» охватывает (i) FAB-фрагмент, т.е. одновалентный фрагмент антитела, состоящий из доменов VL, VH, CL и СН1 (обсуждение FAB- и Р(ab')₂-фрагментов, содержащих остатки эпитопа связывания рецептора реутилизации и имеющих увеличенное время полужизни in vivo, см. в 5869046), (ii) F(ab')₂-фрагмент, т.е. двухвалентный фрагмент, содержащий два FAB-фрагмента, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области, (iii) Fd-фрагмент, состоящий из доменов VH и СН1, (iv) Fv-фрагмент, состоящий из VL- и VH-доменов одной ветви антитела (см., например, Plueckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore (eds.), (Springer-Verlag, New York), (1994) pp. 269-315, WO 93/16185, US 5,571,894, US 5,587,458), (v) dAb-фрагмент (см., например, Ward, E.S., et al., Nature 341 (1989) 544-546), который состоит из VH-домена, и (vi) выделенная область, определяющая комплементарность (CDR). Кроме того, хотя два домена Fv-фрагмента, VL и VH, кодируются отдельными генами, они могут быть соединены с использованием рекомбинантных способов синтетическим линкером, который позволяет им быть сделанными в виде одной белковой цепи, в которой VL- и VH-области объединяются и образуют одновалентные молекулы (известные как одноцепочечный Fv (scFv), см., например, Bird, R.E., et al., Science 242 (1988) 423-426; Huston, J.S., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 (1988) 5879-5883). Эти фрагменты антител могут быть получены с использованием обычных способов, известных специалистам в данной области, и могут быть подвергнуты скринингу на предмет их связывающих свойств таким же образом, как и интактные антитела.

Понятие "антитело, которое связывается с тем же эпитопом", что и референсное антитело, относится к антителу, которое блокирует связывание референсного антитела с его антигеном в конкурентном анализе на 50% или более, и, наоборот, референсное антитело блокирует связывание антитела с его антигеном в конкурентном анализе на 50% или более.

Термин "химерное" антитело относится к антителу, в котором часть тяжелой и/или легкой цепи получена из конкретного источника или вида, в то время как остальная часть тяжелой и/или легкой цепи получена из другого источника или вида.

"Класс" антитела относится к типу константного домена или константной области, которой обладает его тяжелая цепь. Есть пять основных классов антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из них могут быть разделены на подклассы (изотипы), например, IgG₁, IgG₂, IgG₃, IgG₄, IgA₁ и IgA₂. Константные домены тяжелой цепи, которые соответствуют различным классам иммуноглобулинов, называются α, δ, ε, γ и μ, соответственно.

«Химиотерапевтический агент» представляет собой химическое соединение, используемое в лечении рака. Примеры химиотерапевтических агентов включают алкилирующие агенты, такие как тиотепа и циклофосфамид (CYTOXAN™); алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбохон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфарамид и триметиломеламин; азотистые иприты, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлоретамин, оксигидрохлорид мехлоретамина, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урацил мустард; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин; антибиотики, такие как аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, доксорубицин, эпирубицин, эсорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, микофенольная кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурина, такие как флюдарабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; аналоги пиримидина, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин, 5-FU; андрогены, такие как калустерон, дромостанолон пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; анти-адреналиновые средства, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; вещество, пополняющее запас фолиевой кислоты, такое как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамидный гликозид; аминолевулиновая кислота; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демекольцин; диазиквон; элфорнитин; эллиптиний ацетат; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидамин; митогуазон; митоксантрон; мопидамол; нитракрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; PSK®; разоксан; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквуон; 2,2',2''-трихлортриэтиламин; уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид («Ara-С»); циклофосфамид; тиотепа; таксаны, например паклитаксел (TAXCOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Принстон, Нью-Джерси) и доксетаксел (TAXOTERE®, Rhône-Poulenc Rorer, Антони, Франция); хлорамбуцил; гемцитабин; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; платина; этопозид (VP-16); ифосфамид; митомицин С; митоксантрон; винкристин; винорелбин; навелбин; новантрон; тенипозид; дауномицин; аминоптерин; кселода; ибандронат; СРТ-Н; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноевая кислота; эсперамицины; капецитабин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеуказанных препаратов. В это определение также включены антигормональные агенты, которые регулируют или ингибируют воздействие гормонов на опухоли, такие как антиэстрогены, включая, например, тамоксифен, ралоксифен, ингибирующие ароматазу 4(5)-имидазолы, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY117018, онапристон и торемифен (Fareston); и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и гозерелин; и их фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеуказанных препаратов.

Понятие "антиангиогенный агент" относится к соединению, которое блокирует или препятствует в некоторой степени развитию кровеносных сосудов. Антиангиогенный агент, например, может быть малой молекулой или антителом, которое связывается с фактором роста или рецептором фактора роста, вовлеченным в стимуляцию ангиогенеза. Антиангиогенный фактор в одном воплощении представляет собой антитело, которое связывается с сосудистым эндотелиальным фактором роста (VEGF).

Термин "цитокин" является общим термином для белков, высвобождаемых одной популяцией клеток, которые действуют на другие клетки как межклеточные медиаторы. Примерами таких цитокинов являются лимфокины, монокины и традиционные полипептидные гормоны. В число цитокинов входит гормон роста, такой как человеческий гормон роста, человеческий N-метионин-гормон роста и бычий гормон роста; паратгормон; тироксин; инсулин; проинсулин; релаксин; прорелаксин; гликопротеиновые гормоны, такие как фолликулостимулирующий гормон (FSH), тиреотропный гормон (TSH) и лютеинизирующий гормон (LH); фактор роста гепатоцитов; фактор роста фибробластов; пролактин; плацентарный лактоген; фактор некроза опухоли α и β; ингибирующее вещество Мюллера; мышиный гонадотропин-ассоциированный пептид; ингибин; активин; сосудистый эндотелиальный фактор роста; интегрин; тромбопоэтин (ТРО); факторы роста нервов, такие как NGF-β; фактор роста тромбоцитов; трансформирующие факторы роста (TGF), такие как TGF-α и TGF-β; инсулиноподобный фактор роста I и II; эритропоэтин (ЕРО); остеоиндуктивные факторы; интерфероны, такие как интерферонт α, β и γ; колониестимулирующие факторы (CSF), такие как макрофагальный CSF (M-CSF); гранулоцитарно-макрофагальный CSF (GM-CSF); и гранулоцитарный CSF (GCSF); интерлейкины (IL), такие как IL-I, IL-Ia, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-IO, IL-II, IL-12; фактор некроза опухоли, такой как TNF-α или TNF-β; и другие полипептидные факторы, включая LIF и kit-лиган