Способ исследования повышения антибиотикочувствительности патогенной и условно-патогенной микрофлоры in vitro молочнокислой кормовой добавкой, содержащей культуру микроорганизмов propionobacterium freundenreichii shermanii ac-103

Способ исследования повышения антибиотикочувствительности патогенной и условно-патогенной микрофлоры in vitro молочнокислой кормовой добавкой, содержащей культуру микроорганизмов propionobacterium freundenreichii shermanii ac-103

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в лабораторной работе при изучении антибиотикочувствительности микроорганизмов.

Известен «Препарат для профилактики и лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта "ТоксиБиоВит"» (патент РФ №2475254, кл. A61K 35/74 от 13.12.2011) и способ его применения, включающий введение в организм веществ, тормозящих развитие патогенной микрофлоры, стимулирующих ферментную активность и антиоксидантную защиту, а также обладающих широким спектром микроэлементов и стимулирующих развитие полезных микроорганизмов, а именно метаболитов микроорганизмов Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Halobacterium halobium, иммобилизованных на активном носителе, представляющем собой смесь глауконита с клеточными оболочками пивных дрожжей Saccharomyces cerevisiae.

К недостаткам известного способа является отсутствие данных по росту антибиотикочувствительности к конкретному виду антибактериального вещества, а также отсутствие данных по росту показателей зон задержки роста тест-культуры до и после контакта с испытуемым супернатантом (надосадочная жидкость) культуры пробиотика.

Ближайшим техническим решением к данному изобретению, принятым за прототип, является способ оценки антибиотикочувствительности микроорганизмов, описанный в методических указаниях «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» (МУК №4.2.1890-04, 2004 г.), способ включает выращивание культуры тест-штамма микроорганизма на мясопептонном бульоне (МПБ) в течение 18-20 ч при Т=37,0±0,5°С, с последующим инкубированием на мясопептонном агаре (МПА) с дисками, пропитанными различными видами антибактериальных препаратов в течение 18-20 ч при Т=37,0±0,5°С.

Задача изобретения - расширение арсенала способов повышения антибиотикочувствительности микроорганизмов in vitro. Технический результат изобретения состоит в реализации этого назначения.

Решение задачи состоит в том, что способ повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры in vitro молочнокислой кормовой добавкой, содержащей культуру микроорганизмов Propionobacterium freundenreichii shermanii Ас-103, включает использование молочнокислой кормовой добавки, содержащей культуру микроорганизмов Propionobacterium freundenreichii shermanii Ас-103 полученного в разные сроки культивирования в 1, 10, 20, 30 день. Согласно изобретению, к 0,5 мл мясо-пептонного бульона (МПБ) добавляют 0,5 мл супернатанта пробиотика, после чего вносят 0,5 мл МПБ суточной культуры условно-патогенной микрофлоры, полученный раствор инкубируют 18-24 ч при Т=37,0±0,5°С, после чего проводят определение антибиотикочувствительности микроорганизмов на мясо-пептонном агаре (МПА) с 24 видами антибактериальных препаратов дискодиффузионным методом.

Пример 1. Анализ изменения зоны задержки роста микроорганизмов при определении антибиотикочувствительности после контакта с супернатантом пробиотической культуры разных сроков культивирования показал разную чувствительность у исследуемых представителей условно-патогенной микрофлоры. Так, наибольший рост антибиотикочувствительности микроорганизмов отмечается после культивирования с десяти и тридцати дневными культурами (табл. 1).

Р<0,05

Рост антибиотикочувствительности Е. cloaceae 200, St. albus АТСС 25923, S. enteritidis 182, E.coli ATCC 25222, Pr. vulgaris 192, Kl. pneumonia 71 после контакта с Propionobacterium freundenreichii shermanii Ac-103 первого дня культивирования составил от 11,4 до 62,5%, десятого дня - от 20,7 до 96%, двадцатого дня от 34 до 44,2% и тридцатого дня от 53,1 до 77,7% соответственно.

Наибольшее увеличение антибиотикочувствительности (на 96%) отмечено у Е. cloaceae 200 после контакта с десятидневной молочно-кислой кормовой добавкой, содержащей культуру микроорганизмов Propionobacterium freundenreichii shermanii Ас-103.

Пример 2. Установлено, что на протяжении всего эксперимента, супернатант Propionobacterium freundenreichii shermanii Ac-103 разного срока культивирования, вызывает устойчивый рост количества антибактериальных препаратов, к которым чувствительны изучаемые штаммы условно-патогенной микрофлоры. Кроме того, увеличение срока инкубирования пробиотика совпадает со снижением количества малочувствительных препаратов у штаммов условно-патогенной микрофлоры (табл. 2).

Примечание: количество препаратов, к которым микрофлора устойчива - У, малочувствительна - М, чувствительна - Ч.

Способ исследования повышения антибиотикочувствительности Ent. cloaceae 200, St. albus АТСС 25923, S. enteritidisl82, E.coli ATCC 25222, Pr. Vulgaris 192, Kl. pneumonia 71 in vitro молочнокислой кормовой добавкой, содержащей культуру микроорганизмов Propionobacterium freundenreichii shermanii Ас-103, включающий использование молочнокислой кормовой добавки, содержащей культуру микроорганизмов Propionobacterium freundenreichii shermanii Ас-103, полученную в разные сроки культивирования в 1, 10, 20, 30 день, при этом к 0,5 мл мясо-пептонного бульона (МПБ) добавляют 0,5 мл супернатанта пробиотика, после чего вносят 0,5 мл МПБ суточной культуры условно-патогенной микрофлоры, полученный раствор инкубируют 18-24 ч при Т=37,0±0,5°С, затем проводят определение антибиотикочувствительности микроорганизмов на МПА с 24 видами антибактериальных препаратов дискодиффузионным методом.