Штамм 332-продуцент д-глюкозоизомеразы

Штамм 332-продуцент д-глюкозоизомеразы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

"емеца -.ТЕЫТ.. -;.;,, <"; с .

ОП ИСЛНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

1 111 542763

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВМДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 11.07.75 (21) 2156870, 13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет (51) М. Кл. - С 12К I j00

С 12D 13/10

Государственный комитет

Совета Министров СССР (53) УДК 615.779.94 (088.8) Опубликовано 15.01.77, Бюллетень № 2 по делам изабретеиий и открытий

Дата опубликования описания 09.03.77 (72) Авторы изобретения

И. М. Грачева, М. С. Мосичсв, A. В. Гавристов и С. А. Филиппов

Московский ордена Трудового Красного Знамени технологический институт пищевой промышленности (71) Заявитель (54) ШТАММ ACTINÎÌÓÑЕЯ VENEZUELAE332 — ПРОДУЦЕНТ

D-ГЛ 1ОКОЗОИЗОМЕРАЗЫ

Изобретение относится к микробиологической промышленности.

Известен штамм Streptomyces venezuelae

АТСС № 21113, который продуцирует D-глюкозоизомеразу (1).

Однако известный штамм обладает невысокой активностью.

Целью изобретения является штамм АсЫпоmyces venezuelae 332, продуцирующий D-глюкозоизомеразу с повышенной активностью.

Штамм Act. venezuelae 332 был выделен из образцов почв южного Крыма и хранится в коллекции МТИПП под номером 332.

Предлагаемый штамм Act. venezuelae 332 обладает следующими культурально-морфологическими признаками.

Спороиосцы иесииральные, длинные или копоткие, волнистые или прямые, одиночныс, моиоиодиальные, концы иногда изоп1уты в виде крючка. Споры овальные, палочковидные с гладкой оболочкой.

СР— 1. Рост хороший, колонии бежевого цвета, среда ие окрашивается.

Мясо-пептонный агар с 1% D-глюкозы.

Рост хороший, колонии кремового цвета, со складчатостью в центре, воздушный мицелий серого цвета.

Картофельный агар. Рост хороший, колонии складчатые, серо-белого цвета, среда буреет, воздушный мицелий серого цвета.

Ксилозо-крахмальный агар. Рост хороший, колонии складчатые, серо-белого цвета, среда буреет, воздуишый мицелпй серого цвета.

Агаризированная среда из солодовых рост5 ков с 1% крахмала. Рост хороший, колонии бугристые, слегка морщинистые, серые, спороносцы прямые, споры овальные, колонии светло-коричневого цвета.

Ломтики картофеля. Рост средний, кола

10 иип светло-коричневого цвета, гладкис, воздушный мицелий светло-серого цвета с коричневым оттенком.

Физиолого-биохимические приз1гаки.

15 Желатину разжижает слабо. Крахмал гидролпзует. Молоко псптоиизирует, Нитрат11 нс восста на г I I I H ac T.

Хорошо ассимигп1руст D-глюкозу, D-фруктозу, D-мальтозу, D-ксилозу, слабо ассимили20 рует галактозу, D-арабинозу, D-маш|озу, очень слабо усваивает сахарозу и ие ассимилирует D-лактозу, L-рамнозу, D-маннит и

D-сорбит.

Аэрофил, оптимум температуры выращивад IIII 28 — 30 С, при культивировании на >Kll lких IIIITBTenüíûê средах с перемешиваиием и аэрацией синтезирует активную эидо-D-глюкозоизомеразу.

Биосинтез D-глюкозоизомеразы осуществля30 ют следующим образом.

542763

ЦНИИПИ Заказ 108/6 Изд. Ма

144 Тираж 589 Подписное

Типография, пр. Сапунова, 2

П р и м ер. Штамм Act. venezuelae 332 вы- пой жидкости, что в 1,5 — 2,0 раза превышает ращивают в пробирках на скошенном ксплоз- активность известного штамма (5,2— но-крахмальном агаре. Состав среды, %: 5,7 мг/мл).

Картофельный крахмал 1,0 Применение предлагаемого штамма Act.

D-Ксилоза 1,0 5 cnezuelae 332 — продуцента D-глюкозоизоПептон 1,0 меразы для производства D-фруктозосодержаДрожжевой экстракт 0,5 щпх сиропов позволит улучшить технико-экоMgS04 7Н О 0,1 номпческие показатели этого процесса, что явСоС1 бН О 0,024 ляется важным для увеличения производства

Агар 2,0 10 сахаристых веществ. рН среды до стерилизации равно 7,0; стерилизация при 0,5 ати в течение 20 мин. Форм

Полученным споровым материалом засева- Штамм Actinomyces venezuelae 332 — проют качалочпые колбы, содер;кашне по 50мл дуцент D-глюкозоизомеразы. Хранится в колосновной питательной среды следующего со- 13 лекции Московского ордена Трудового КрассТаВа /о . ного Знамени технологического института пиD-Ксилоза 1,0 шевой промышленности под номером 332.

Пептон 1,0 Культурально-морфологические признаки.

Дрожжевой экстракт 1,0 Спороносцы неспиральные, длинные или коК НРО4 0,3 20 роткие, волнистые или прямые, одиночные, моМО304 7Н О 0,1 ноподпальные, концы иногда изогнуты в виде

Агар 0,1 крючка. Споры гладкие, овальные или палочрН среды до стерилизации равно 7,0; стерили- ковидные. зация при 0,5 ати в течение 20 мин. Среда СР-1. Рост хороший, колонии бежеКолбы с засеянной питательной средой по- 28 вого цвета, среда не окрашена. мещали на качалки (п=200 об/мин). Темпе- Мясо-пептонный агар с 1 ц D-глюкозы. ратура культивирования составляет 30 С. Вы- Рост хороший, колонии кремового цвета, со ращенный в течение 48 ч инокулят в количе- складчатостью в центре, воздушный мицелий стве 5 мл используют для засева 50 мл основ- серого цвета. ной питательной среды. Культивирование про- 30 Ксилозо-крахмальный агар. 1 ост хороший, дуцента на второй стадии проводят при тех колонии складчатого типа, серо-белого цвета, же технологических параметрах в течение 48 ч. среда буреет, воздушный мицелий серого

Полученную в результате культуральную цвета. жидкость подвергают центрифугированию в Картофельный агар. Рост хороший, колонии течение 15 мин при 8000 об/мин; отделенную 38 складчатые, серо-белого цвета, среда буреет, биомассу дважды промывают дистиллирован- воздушный мицелий серого цвета. ной водой, а затем подвергают разрушению и Агаризованная среда из солодовых ростков последующему центрифугированию в течение с 1 крахмала. Рост хороший, колонии буг20 мин при 8000 об/мин. Полученный супер- ристые, слегка морщинистые, серого цвета, натант используют в качестве источника фер- 40 спороносцы прямые, споры овальные, колонии мента D-глюкозоизомеразы. Реакцию изомери- светло-коричневого цвета. зации проводят в среде следующего состава, Ломтики картофеля. Рост умеренный. Коломл: нии светло-коричневого цвета, гладкие, воз0,2М фосфатный буфер душный мицелпй светло-серого цвета с корич(рН =7,5) 2,5 45 невым оттенком.

1,0М D-глюкоза 1,0 Физиолого-биохимические признаки.

0 1 М MgSO4 7Н О 0,5 5Келатину разжижает слабо. Крахмал гидФерментиый раствор 1,0. ролизует. Молоко пептонизирует. Нитраты не

Общий объем смеси доводят дистиллирован- восстанавливает. ной водой до 10 мл. Для контрольного опре- 50 Хорошо ассимилирует D-глюкозу, D-фруктоделения сразу же отбирают 2 мл смеси и вно- зу, D-ксилозу, D-мальтозу, слабо ассимилирусят в пробирку, содержащую 2 мл 0,5М НС1, ет D-арабинозу, галактозу, D-маннозу, очень производя тем самым инактивацию фермента. слабо усваивает сахарозу, не ассимилирует

Оставшееся количество термостатпруют в D-лактозу, 1 -рамнозу, D-сорбит, D-маннит. течение 60 мин при 70 С, после чего снова от- 55 Аэрофилл, оптимум температуры выращпвабирают 2 мл и приливают к этому количеству ния 28 — 30 С.

2 мл 0,5 м НС1. Количество D-фруктозы в контрольном и опытном вариантах определя- Источники информации, принятые во внима ют с помощью цистеинкарбазольного метода. ние при экспертизе

Активность Act. venezuelae 332 составляет 00 1. Патент США М 3622463, Кл. 195-66, 10 — 11,0 мг D-фруктозы на 1 мл культураль- 1973 (прототип).