Штамм 220-тесткультура для выявления вирулентных и умеренных бактериофагов мезофильных молочнокислых стрептококков

Штамм 220-тесткультура для выявления вирулентных и умеренных бактериофагов мезофильных молочнокислых стрептококков

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

! с,есоп как

1 —.. - т;зн т но-тех н вчем о и и минв

ИЗОБРЕТЕН И

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛбСТВ (11 600l79

Со1оэ Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свпд-ву (22) Заявлено 19.11.76 (21) 2421973/28-13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет (43) Опубликовано 30.03.78. Бюллетеш X (45) j,àòà опубликования описания 28. (51) М. Кл."- С 12К I!02

А 23С 9/12

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам иэобретеннй и открытий (53) УД» GG3.13(088.8) (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Л. А. Банникова, Л. Г. Мытник и С. Б. Задояна

Всесоюзный научно-исследовательский институт молочной промышленности (54) ШТАММ STREPTOCOCCUS LACTIS

220 — ТЕСТ-КУЛЬТУРА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУЛЕНТНЪ|Х

И УМЕРЕННЪ|Х БАКТЕРИОФАГОВ МЕЗОФИЛЬНЫХ

МОЛОЧНОКИСЛЪ|Х СТРЕПТОКОККОВ

Изобретение относится к технической микробиологии, связанной с производством молочных продуктов, и представляет собой новый штамм молочнокислых стрептококков, используемый для выявления умеренны.; и вирулснтных бактериофагов мезофильных молочнокислых стрептококков в производственных условиях.

Известны штамм Яг. lactis № 93 — S", используемый для выявления вирулснтных бактериофагов молочнокислых стрептококков (1), и штамм Str. lactis № 563 $, применяемый для выявлсния лизогенных штаммов молочнокислых стрептококков (21.

Известен также штамм мезофильного молочнокислого стрептококка P 1/2, чувствительный к 62 вирулентным фагам из 86 (степень чувствительности его к ним 72%) i(3).

Однако чувствительность его к умеренным фагам неизвестна.

Таким образом, все указанные штаммы могут выявлять либо вирулентныс, либо умерснныс фаги.

Цель изобретения — получить штамм мезофильных моло «10к11слых стрсптокОкков, спОсобный быть тест-культурой для выявления вирулснтных фагов с широким спектром литического действия на производстве и умеренных фагов, продуцируемых лизогенными культурами.

Для получения такого штамма было изучено

76 культур мсзофильных молочнокислых стрептококков — Str lac!is, Str. cremoris, Str.

acetoinic«s, Str. diacetilactis, Str. citrovor«s H

Str. paracitrovor«», выделенных из природных источников II применяемых в молочной промышленности. Оии были исследованы к пяти вирулсíTHûм и трем умсрснHым бактериофагам. В результате исследования штамм Str. !

О lactis 220 оказался единственным, который лизировался почти всеми фагами. »ромс того, из !9 заквасок, взятых для исследования, он выявлял фаг у 18-ти заквасок. Следовательно, штамм Str. lacti» 220 по своим свойствам отвечал требованиям, прсдьявляемым к TccTкультурам для выявления умеренных и вирулснтных бактсриофагов.

Предлагаемый штамм был выделен из смстаны. Идентификация его проводилась по основным морфологичсским, культуральиым, физиологическим и биохимическим признакам, согласно определителям Берджс и Красильникова. Он хранится з отраслевой коллекции

В НИ У|И.

Предлагаемый штамм Яг. lactis 220 имеет следующие морфолого-культуральные и физиолого-оиохимическис характеристики.

Морфологические и культуральныс признаВе 111 IIIHа I ;IcT01 . 17- I аc0в0й кульTK pbl Hа стерильном обезжиренном молоке 0,8 — 1,1 мкм

600179

3 в диаметре. Форма клеток кокки, диплококки и короткие цепочки по 4 — б сегментов. На поверхности агара с гидролизованным MOJIO ком чсрсз двое суток образует круглые белые колонии с гладкими краями и размером 1—

2 мм в диаметре. На агаре с гидролизованным молоком и мелом и бромкрезолпурпуром двухсуточные колонии белые, слегка матовые, с ровным краем и зонами. Размер»х 1,8—

4,0 мм в диаметрс дает обильный рост на жидком гпдролизованном молоке, сусле и капустном отваре, образуя равномерное помутнение культуральной среды и слабый осадок.

Оптимальная температура роста 28 — 30" С.

За 6 — 7 ч при росте на молоке образует плотный колющийся сгусток со слегка крупитчатой консистенцией.

Физиолого-биохимические признаки. Энергия кислотообразования 88 — 96 Т, предел кпслотообразования 120 Т. В течение 17 ч культивирования образует 0,9 мл 0,1 N NaOH летучих кислот и незначительное количество (следы) четырехуглеродных соединений. При сбраживании аргинина образует аммиак.

Протеолитическая активность 6,5 мг. /о тирозина.

Отношение к источникам углерода.

Сбраживает арабинозу, глюкозу, фруктозу., галактозу, мальтозу, лактозу и декстрин. Не сбраживает рафинозу, маннит и сорбит.

Для сравнения чувствительности выявленного штамма 220 к фагам были проведены исследования культур из отраслевой коллекции

ВНИМИ.

Было установлено, что по сравнению со штаммами 553 и 629 он обладает более высокой чувствительностью к вирулентным фагам и в отличие от них способен лизироваться умеренными фагами, следовательно, выявлять лизогснные культуры. Кроме того, популяция указанного штамма отличается тем, что полностью состоит из клеток, чувствительных к фагам. Это свидетельствует о гомогенности популяции штамма, т. е. о его ценности как тест-культуры.

Пример 1. Выявление лизогенного состояния культур мезофильных молочнокислых стрептококков на тест-культуре 220 при селекции культур.

Испытуемую на лизогенность культуру выращивают в гидролизованном молоке. После

5 — 6 ч роста ее обрабатывают хлороформом, внесенным в соотношении 10:1, смесь взбалтывают и центрифугируют при 4 — 5 тыс. об/мин в течении 30 мин. Наличие фага в надосадочной жидкости исследуют методом агаровых слоев. Нижним слоем является агар из гидролизованного молока (1,5 ). Верхний слой готовится следующим образом: в пробирку с 3,5 мл полужидкого агара с гидролизованным молоком (0,75О/о) вносят 0,1 — 0,2 мл

5 — 6-часовой тест-культуры Str. lactis 220 и

1 мл надосадочной жидкости исследуемого на лизогенность штамма. Чашки термостатируют

1()

4

17 — 19 ч, после этого отмечают наличие или отсутствие негативных колоний фага.

Наличие мелки.; негативных колоний с мутным центром свидетельствует о лизогенносги культур.

Пример 2. Выявление вирулснтных бактсриофагов мсзофильных молочнокислых стрспToKoi

Исследование вирулентных бактсриофагов на тест-культуре Str. lactis 220 проводят следующим образом. FIa чашку Петри с подсушенной плотной питательной средой (1,5"/о агара) наносят 0,1 — 0,2 мл 5 †-6-часовой тссткультуры Str. lactis 220, выращенной в гидролизованном молоке, и распределяют шпателем на поверхности для получcHuÿ сплошного роста культуры (газона).

Образцы, подготовленные для исследования на наличие фага (лабораторная и производственная закваска, сыворотка, сырое и пастеризованное молоко, смывы с оборудования и т. д.), наносят дорожкой на культуру, засеянную газоном; чашки термостатируют при

30 С 17 — 19 ч. Если в месте нанесения образца появляется зона лизиса или отдельные негативные колонии круглые прозрачные d=

=1,8 — 2,3 мм, то считают, что в нем имеется бактериофаг. При отсутствии зон лизиса или отдельных негативных колоний в месте нанесения образца считают, что в нем (образце) бактериофаг отсутствует.

Использование предлагаемого штамма Str.

lactis 220 в качестве тест-культуры для определения вирулентных фагов с широким спектром литического действия и умеренных фагов, продуцируемых лизогенными культурами, позволяет достаточно полно выявлять вирулентные фаги и лизогенные культуры (носителп умеренных фагов) и тем самым своевременно предупреждать случаи нарушения кисломолочного процесса на производстве, вызываемого бактериофагом.

Формула изобретения

Штамм Streptococcus lactis 220 — тест-культура для выявления вирулснтных и умеренных ба лсриофагов мсзофильных молочнокислых стрептококков. Хр анится в коллекции

Всесоюзного научно-исследовательского института молочной промышленности, Морфологические признаки. Величина клеток 0,8 — 1,1 мм. Форма — кокки, диплококки и короткие цепочки по 4 — 6 сегментов.

Органические среды.

Лгар с гидролизованным молоком. Образует двухсуточные колонии, белые с гладкими краями и размером 1 — 2 мм в диаметре.

Лгар с гидролизованным молоком, мелом н бромкрсзолпурпуром †двухсуточн колонии белыс, слегка матовые, с ровным краем и с зонами. Размер 1,8 — 4,0 мм в диаметре. жидкое гидролизованное молоко. Сусло.

Капустный отвар. Образует равномерное помутнение и слабый осадок, 600179

Составитель Л. Шпитонкова

Техред И. Михайлова

Корректоры: Л. Денискина и Л. Орлова

Редактор М. Дмитриева

Заказ 264/16 Изд.. и 314 Тираж 568

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раугпская иаб., д. 4/5

Подписное

Типография, пр. Сапунова, 2

Молоке. Образует плотный колющийся сгусток со слегка крупитчатой консистенцией.

Время сквашивания молока 6 — 7 ч. Оптимальная температура роста 28 — 30 С.

Физиолого-биохимические признаки.

Отношение к источникам углерода.

Сбраживает арабинозу, глюкозу, фруктозу, галaêòoçó, мальтозу, лактозу и декстрин. Нс сбраживает рафинозу, маннит и сорбит.

Энергия кислотообразования 88 — 96 Т, предел кислотообразования 120 Т. Образует

0,9 мл 0,1 N 1х1аОН летучих кислот и незначительное количество четырех углеродных соединений.

При сбраживании аргинина образует аммиак. Протеолитическая активность 6,5 мг. j, тирозина.

Обладает высокой чувствительностью к вирулентным и умеренным фагам. Популяция штамма является высокогомогенной по чувствительности клеток к фагам (на 100% состоит из чувствительных клеток).

5 Источники информации, принятыс во внимание при экпсртизс

1. Авторское свидетельство СССР 1х 557099

С 12К 1/02, 1975.

2. Авторское свидетельство по заявке

l0 ¹ 2357583/28-13, кл. С 12К 1/02, 1976, по которой принято решение о выдаче авторского свидетельства.

3. Von G. Engcl, К. Е. von М1!сксж81ц und

А. Lcrnbl c. Vcrsuche zur Diffcrcnzicrung von

15 Phagcn dcr Streptococcus lactis- und cremorisGruppe: Ва tericnspektrum. scrologische Beziehungen und morphologische Кг11сг1сп.—

«К1с1 milchivirtschaftlichc Forschungsberichte», 1975, v. 27, Y,о. 1, S. 25 — 48.