Штамм @ @

Штамм @ @

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Штамм Bacillua .subtille v-50-продуцент протеазы (коллекция лаборатории чистых микробных культур Всесоюзного научно-исследовательского института прикладной энзимологии под номером ИПЭ-74),Морфологические признаки. Клетки имеют форму палочек размером 1,7- 3,0x0,4-0,6 мкм, обычно расположенные в цепочках. Клетки равномерно окрашиваются, грамполежительны, подвижны, имеют перитрихиальный тип жгути- . кования. Капсул не имеют. Споры обраэуются терминально, реже в центре. Споры имеют цилиндрическую или эллипсоидальную форму, размеры 1,2-1,4х хО,6-0,8 мкм.Культуральные гфизнаки. На мясо-пептонном агаре после суточной инкубации при 37^С образуются сероватые, непрозрачные, шероховатые складчатые колонки диаметром 3-6 мм. На ломтиках картофеля рост обильный в виде серовато-белой сухой и толстой морщинистой пленки, иногда со складками. На мясЬ-пептонном бульоне рост в ви- ' де поверхностной желтовато-белой толстой и морщинистой пленки, при этом собственно бульон остается прозрачньм.Физиологические признаки. Аэроб. Оптимальные условия роста; температура 37°С, рН. 5,8-6,2. Гидролизует крахмал, молоко свертывает и частично ; пептонизирует, разжижает желатину. Культура ^1спользует для роста глюкозу, сахарозу ,1/3 маннита и фруктозу с об- 'разованием кислоты без выделения газа. Не усваивает лактозу, арабинозу, ксилозу, мальтозу, рамнозу, кульцйт, инозит и сорбит. На среде Кларка . образует ацетилметилкарбинол, не растет на среде с нитратом, восстанавливает нитраты до нитритов. Хорошо развивается на среде с 7%-ным раствором NaCl. Культура устойчива;к фаголизи-су.- ,Культура хранится в анаэробнг^пс условиях на ломтиках картофеля в пробирках с дополнительной пробкой, смоченной пирогаллолом, а также в лиофилизированном виде.^ -^ •^СП

таа i.сл.гиа я

1:;. г й»

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

09) (И) g@g С 12 Я 15/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ я с

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 2532870/28-13 (22) 10. 10. 77 (46) 07. 10.84. Бюл. 11р 37. (72) Т.Ю. Падегимас, IO.Ô. Василяускас, А.-С.А. Глемжа, Ю.IO . Степановичюс, Г.И. Иицкуте, А.С. Виджюнас, И.И. Кюдулас, А.-А.И. Аленис и А.Л. Юргулис (71) Всесоюзный научно-йсследова- тельский институт прикладной энзимологии (53) 577.15.07(088.8) (56) 1. Авторское свидетельства СССР

М 283152, кл. С 12 К 3/00, 1968. (54) ИТАЫ1 ВАСТЬЖЯ SUBYILlS

V-50-ПРОДУЦЕНТ ПРОТЕЗЫ. (57) Штамм Bacillus,su5tilis

v-50-продуцент протеазы (коллекция лаборатории чистых микробных культур

Всесоюзного научно-исследовательского института прикладной энзимологии под номером ИПЭ-74) . морфологические признаки. Клетки имеют форму палочек размером 1,73,0х0,4"0,6 мкм, обычно расположен- ные в цепочках. Клетки равномерно окрашиваются, грамположительны, подвижны, имеют перитрихиальный тип жгути- . кования. Капсул не имеют. Споры образуются терминально, реже в центре.

Споры имеют цилиндрическую или зллипсоидальную форму, размеры 1,2-1,4х х0 6-0,8 мкм.

Культуральные признаки. На мясопептонном агаре после суточной инкубации при 37 С образуются сероватые, непрозрачныеу шероховатые складчатые колонки диаметром 3-6 мм. На ломтиках картофеля рост обильный в виде серовато-белой сухой и толстой морщинистой пленки, иногда со складками.

На мясо-пептонном бульоне рост в виде поверхностной желтовато-белой толстой и морщинистой пленки, при этом собственно бульон остается прозрачным.

Физиологические признаки. Аэроб.

Оптимальные условия роста: температура 37 С, рН 5,8-6,2. Гйдролизует крахмал, молоко свертывает и частично " ф пептонизирует, разжижает желатину.

Культура Лсь лольауат для роста глюка- Я зу, сахарозу,1/3 маннита и фруктозу с об- разованием кислоты без выделения газа.

Не усваивает лактозу, арабинозу, кси- р лозу, мальтозу, рамнозу, кульцит, инозит и сорбит. На среде Кларка, ре образует ацетилметилкарбинол, не растет на среде с нитратом, восстанав ливает нитраты до нитритов. Хорошо развивается на среде с 7Х-ным раствором

NaCl. Культура устойчива к фаголиэи-, Сут

Культура хранится в анаэробных условиях на ломтиках картофеля в пробирках с дополнительной пробкой, смоченной пирогаллолом, а также в лиофилизированном виде. . В

Изобретение относится к микробиологической промьшЫенности, в частности к получению нового штамма, используемого для биосинтеэа фермента протеаэы.

Наиболее распространенными продуцентами протеаз являются микроорганизмы †грибы, дрожжи, бактерии, в том числе бактерии рода. Bacillus, По своим культурально-морфологи-. ческим и физиологическим сйойствам наиболее близок к заявляемому штамм

Bacillus зоЬЫ1ъв 103, который в настоящее время используется для йроизводства протеазй в йромьппленном масш- 1 табе (1 3.

Однако известный шамм-продуцент протеаз Bacillus ваЬйх1хs I03 имеет недостаточно высокую активность, кроме того, при углубленном культивировании данного штамма ферментации мало стабильны, сама культура подвержена фаголизису„и, как следствие, выход изготовления продукции невысок.

Целью изобретения является получе-2 ние высокоактивного нового штаммапродуцента протеазы, относящегося к виду Bacillus subtilis и -отвечающего всем требованиям производства данного фермента с высокой и стабильной про-теолитической активностъю в условиях глубинного культивирования.

Для получения. такого штамма из различных природных сусбстратов были выделены чистые культуры бактерий

35 способных к биосинтезу протеаз. Иэ них далее был отобран высокоактивный штамм, обоэначеннйй после проведения видовой идентификации как Вас111из

subtilis V-50.

4О

Полученный новый штамм Bacillus

sqbtilis V--50 обладает следующими морфологическими и культурально-физи6логическими свойствами. Величины клеток односуточной культуры на мясопептонном агаре 1,7-3,0х0,4-0,6 мкм.

g$

На богатых органических средах (NHA с глюкозой, картофельная среда) толстйе крупные клеткй обычно расположены в цепочках. Палочки равномерно ок» рашиваются, грамположительны, подвюхны, имеют. перитрихиальный тип жгути кования.

Сйоры образуются термийально, реже расположены в центре, Споры цилиндри4 2 ческне или эллипсоидальные размером

1, 2-1„4х0, 6-0. 8 мкм.

На МПА после суточной инкубации при 37 С образуются сероватые, непрозрачные шероховатые, складчатые колонки диаметром 3-6 мм.

IIa ломтиках картофеля рост обильный в виде серовато-белой сухой толстой, морщинистой, иногда со складками пленки.

На мясо-пептонном бульоне рост в виде поверхностной толстой морщинистой желтовато-белой пленки.

Аэроб. Оптимальные условия роста: температура 37 С, рН 5,8-6,2, Культура использует для роста следующие .сахара: глюкозу, сахароэу, фруктозу и 1/3 маннита с образованием кислоты без выделения газа. Не . усваивает лактоэу,- арабинозу, ксилозу, мальтозу, рамнозу, дульцит, ино зит и сорбит. Восстанавливает нитраты до нитритов. Образует ацетилметилкарбинол на среде Кларка. Не ассими-. лирует нитрат. Хорошо развивает в среде с 77-ным раствором NaC1, гидролиэует крахмал, молоко свертывает и частично его пептонизирует, жела,тину разжижает. Культура устойчива

0 к фаголиэису

Пример. Выращивание нового штамма -- продуцента протезы Bacillus

sibtilis V-50 производят на стандарт. ной производственной питательной сре де (ГОСТ 59-12-73,Главмикробиопром) при 37 С в термостате на круговых о чалках (180 об/мин), а также на бродильных установках типа "Биолофит".

На 48 часу роста в культуральной жидкости определяют протеолитическую . активность по стандартной методике (ГОСТ 20264 2.74 Главмикробиопром).

Во всех опытах в качестве контроля взят производственный штамм Bacillus

sibtilis 103, f

Результаты определения протеолитической активности представлены в таблице

При использовании нового штамма продуцента протеазы Васi11чз subtilis

V-50 для производства ферментного пре" парата протосубтилина активностью в культуральной жидкости увеличивается .на 17% по сравнению со штаммом Bacil1из sc btilis 103.

677504

Количество Протеолитическая опытов активность (ед/мл) Способ культивирования

В штамма

3,42

V-50 в колбах

2,89

103

4 05

s биолофитах

V-50.

3,4Ь

103

Редактор Е. Месропова Техред JI,ÊoöþáHÿê Корректор А. Ильин

Заказ 7029/1 Тираж 521 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по далам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб, д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная,. 4