Питательная среда для выявления и количественного учета анаэробных бактерий

Питательная среда для выявления и количественного учета анаэробных бактерий

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

С А-Н-И

Союз Советскнк

Социалистических республик

<" 707957

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (63 ) Дополнительное к авт. свид-ву (5I )h4. Кл.

С 12 В 3/08

С 12 К 1/00 (22) Заявлено 29 08,77(23) 2523097/28-13 с присоединением заявки йй

egygepcvsaswii кееттт

СССР ю дтлви изебретентй и Онрьпзй (23) Приоритет

0публиковаио 05.01.80. Sloa@ev Hb (5Й Уд (663. .18 (088.8) Дата опубликования описания 05.01.80 (72) Авторы изобретения

И. Я, Овруцкая, В. E. Новицкая и А. Я. Погодаева

Всесоюзный научно-исследовательский институт по производству продуктов питания из картофеля (7l) Заявитель (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ В6!ЯВЛЕНИЯ

И КОЛИЧЕСТИ!ННОГО УЧЕТА

АНАЗРОБН6!Х БАКТЕРИЙ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к микробиологическому контролю производства картофелепродуктов., Известные питательные срепы, такие

5 как Мак-Кой, Мак-Кланга, Китт-Тароцци и Ap„gJIB выявления наличия анаэробных микроорганизмов, из-за сложности их применения практически не используются для количественного учета этих микроор1О гани змов.

Известна питательная среда цля выявления и количественного учета анаэробных бактерий, содержащая источники углерода и азота, пептон, 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый, компонент, поглощающий кислород, и вазелиновое масло

И.

Эта среда Китт-Тароции является наиболее близкой к описываемой.

Благодаря тому, что и результате рецупирующей способности бактерий бесо Ф цветная тетразолиевая соль 2,3,э-трифенилтетразолия хлористого восстанавливается в красный трифенилформазон добавление этой соли к среде Китт-Тароц-. ци дает возможность осуществить не только выявление, но и количественный учет анаэробных микроорганизмов в исследуемых объектах

Однако из- а своего темного, соломенно-желтого цвета, маскирующего появление розовой окраски, эта среда неудобна для выявления наличия и учета анаэробных бактерий, в особенности при производстве картофелепродуктов.

Бель изобретения — создание питательной среды, обеспечивающей ускоренное выявление и более точный учет анаэробных бактерий, Поставленная цель достигается тем, что указанная питательная среда дополнительно содержит дрожжевой автолизат, аскорбиновую кислоту и углекислъ1й кальциii, а в качестве исто шика углерода и азота и компонента, поглошающего кислород, и снользуют соответственно карто70 7957 4

Ю- через 6-11 ч в зависимости от инф«ц«рова«ности полуфабрикатов и готовой продукции.

При количественном учете а«ааробных бактерий подсчет количества а«ааробов производят по скорости появления и степени интенсивности розового окрашивания с помощью специальной табли. цы, эмпирически составленной по подсче10 там высевов методом Мак-Реди и трубки Вейона.

Содержание анааробных и факультативно-анааробных бактерий в 0,1 r сухого картофельного пюре

2,5 xlO

2,0 х10

1,5 х 10

3,5хlО

25 хlО, 1,5 х10

7,5

9,0

10,0

12,0

14,5

18,0

3 фель«ый отвар и картофель при следу щем соотношении компонентов, г/л:

Картофель 200-300

Пелтон 10-15

Дрожжевой автолизат. 20-25

Аскорбиновая кислота 0,0001-0,00015

2, 3, 5-три фени лтетразол хлористый 0,023-0,0

Углекислый кальций 18-20

Вазелиновое масло 70-80

Картофельный отвар Остальное

Для приготовления питательной среды 200-300 г очищенного картофеля нарезают кубиками и помещают в пробирки со стерильным углекислым кальцием, взятым иэ расчета 10-12 г на 1 л добавляемого картофельного отвара.

Картофельный отвар готовят следующим образом.

200-300 r неочищенного, тщательно отмытого и нарезанного на кусочки кар тофеля варят в .1 л воды в течение 2530 мин, фильтруют через бумажный фильтр и, добавляя воду,,доводят фильтрат до первоначального объема. К полученному отвару добавляют 10-15 r пептона, устанавливают рН 7,4-7,6„

Пробирки с картофелем и углекислым кальцием заливают приготовленным картофельным отваром до высоты 1 1 1 3 см, на поверхность которого наносят стерильное вазелиновое масло слоем Q,7 1,Q см (70-80 г/л среды) и стерилизуют 2530 мин при 125 С.

Перед посевом пробирки со средой подвергают регенерации (кипячению в течение 25-30 мин для удаления растворимого кислорода с быстрым охлаждением среды до 400С). Затем в среду вносят 0,023-0,027 г 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого, 20-25 г стерильного дрожжевого автолизата и 0,00010,00015 г стерильной аскорбиновой кислоты (все компоненты взяты из расчета на 1 л среды.).

На подготовленную таким образом питательную среду высевают смыв с полуфабрикатов и готовых картофелепродуктов.

В результате редуцирующей способности бактерий бесцветный 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый восстанавливается в красный трифенилформазон, который окрашивает среду в интенсивно-розовый цвет.

Предложенная среда позволяет обна.ружить присутствие анаароб«ых бактерий

При меры приготовления сре ды.

Пример 1. Для приготовления среды 200 г очищенного картофеля нареЗ0 зают кубиками и помещают в пробирки со стерильным углекислым кальцием, взятым в количестве 20 г на 1 л добавляемого картофельного отвара.

Картофельный отвар готовят следуюЗБ щим образом.

300 r неочищенного, тщательно отмытого и нарезанного на кусочки картофеля варят в 1 л воды в течение 30 мин, фильтруют через бумажный фильтр и, добавляя воду, доводят фильтрат до первоначального объема. К полученному отвару добавляют 12 г пептона, устанавли= вают рН 7,6.

Пробирки с картофелем и углекислым кальцием запивают приготовленным картофельным отваром до высоты 12 см, на поверхность которого наносят вазели«овое масло слоем 0,7 см (70 r «а 1 л среды) и стерилизуют 30 мин при 125 C.

После регенерации среды, осуществляемой перед посевом, в нее вносят

0,027 r 2,3,5-трифен«лтетразолия хлористого, 25 г стерильного дрожжевого автол«эата и 0,00015 г стерильной аскорбиновой кислоты.

Пример 2. Для приготовления среды 25 3 r очищенного карто юля «ареэают куС..ками и номе.«; 1 т в пробирки

707 г) со стерильным углекислым кальцием, взятым в количестве 19 г/л добавляемого КАр-îôåëbIIîrо отвара.

Картофельный отвар готовят следующим образом.

250 rнеочищенного,,тщательно отмытого и нарезанного на кусочки картофеля варят в 1 л воды в течение 30 мин, фильтруют через бумажный фильтр, и, добавляя воду, доводят фильтрат до перво- о начального объема. К полученному отвару добавляют 10 г пептопа, устанавливают рН 7,5.

Пробирки с картофелем и углекислым кальцием заливают приготовленным кар15 тофельным отваром l10 BbicoTbI 12 см, на поверхность которого наносят вазелиновое масло слоем 0,9 см (75 г/л среды) и стерилизуют 30 мин при 125 С. о о

После регенерации среды, осуществляемой перед посевом, в нее вносят

0,025 г 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого, 23 r стерильного дрожжевого автолизата и 0,00013 r стерильной аскорбиновой кислоты.

Пример 3, Для приготовления среди 300 r очищенного картофеля нарезают кубиками и помещают в пробирки со стерильным углекислым кальцием, взятым в количестве 18 г/л добавляемого картофельного отвара.

Картофельный отвар готовят следующим образом.

200 r неочищенного, тщательно отмытого и нарезанного на кусочки картофеля варят в 1 л воды 30 мин, фильтруют через бумажный фильтр и, добавляя воду, доводят фильтрат до первоначального объема. В полученный отвар вносят ) 5 г пептона, устанавливают рН 7,6.

Пробирки с картофелем и углекислым кальцием заливают приготовленным картофельн61м oTBQpoM до Высот61 1 2 сме на поверхность которого наносят вазелиновое масло слоем 1 см <80 ??>

После регенерации среды, осуществляемой перед посевом, в нее вносят 0,023 r

2,3, 5-три фени лтетразолия хлористого, 20 r стерильного дрожжевого автолизата и 0,0001 r стерильной .аскорбиновой кислоты.

Питательная среда для выявления и количественного учета анаэробных бактерий, содержащая источник углерода и азота, пептон; 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый, компонент, поглощающий кислород и вазелиновое масло, о т л и ч аю щ а я с я тем, что, с целью ускоренного выявления и более точного учета анаэробных бактерий, она дополнительно содержит дрожжевой автолизат, аскорбиновую кислоту и углекислый кальций, а в качестве источника углерода и азота и компонента, поглощающего кислород, используют соответственно картофельный отвар и картофель при следующем соотношении компонентов, г/л;

Картофель 200 — 300

Пептон 10-15

11рожжевой

C а в толи за т 20-2

Аскорбиновая кислота 0,0001-0,000 15

2,3,5-трифенилтетразолий хлористы и О, 023-0,0 2 7

На питательную картофельную среду для анаэробж (KAH), приготовленную согласно указапцым примерам, производят высев 1 мл азведеция смыва с 0,1 r продукта цля количествеiil!or учета ана57

6 эробных бактерий. 2асеянные пробирки подогревают !!а водяной бане и помещают в термостат при 37 + 0,5 С.

Наблюдения ведут каждые ЗО мин через 5 ч от начала инкубирования посевов до появления розового окрашивания.

После появления розового окрашивания инкубирование посевов прекращают.

По появлению розового окрашивания судят о наличии роста микроорганизмов, а по времени его появления — о количестве этих микроорганизмов в продукте.

Высокие питательные свойства и светлая окраска предложенной среды обусловливают ускоренное выявление и более точный учет анаэробных бактерий, в том числе СЕ, botu (inurn, CR pep f vinq egg, СЕ.

sporo yen em, С С. Ьцегjn Qi

Предложенная среда более удобна и эффективна по сравнению с известной для осуществления ускоренного выявления и учета анаэробных микроорганизмов на полуфабрикатах и готовых картофелепродуктах. Применение этой среды дает возможность улучшить микробиологический контроль производства, что способствует повышению качества выпускаемой продукции и пре дотв ращению возможности возникнове ни я пищевых отравлени й.

Формула изобретения

707957

1 8-20

70-80

Остальное

Составитель М. Ларина

Редактор Л. Ушакова Техред И. Асталош

Корректор 9. Синицкая

Подписное

Заказ 8436/23 Тираж 522

БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,; д. 4/5

Филиал ППП "Патент4, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Углекислый кальций

Базели новое масло

Картофельный отвар

Источники информации принятые во внимание при акспертизе

1. Сб. Консервная промышленность, 1973, вып. 5, с. 15-17.