Способ получения иммобилизованной пектиназы

Способ получения иммобилизованной пектиназы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

3. Я. Муйжниеце, А. К. Арен, Д. Я. Дайя и В. С. Чударс (72) Авторы изобретения (7I) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММОБИЛИЗОВАННОЙ

ПЕКТИНА ЗЫ

Изобретение относится к получению кммобилизованных ферментов, в частности пектиназы, которая широко используется в пищевой промышленности.

Известен способ получения иммобилизованной пектиназы путем связывания

S ее в водной среде с кремнеэемным носи-. телем - силохромом с удельной поверхностью 30 м /г, активированным диизоцианатом адипиновой кислоты, 1,6-гексаie метилендиамином и повторно диизоцианатом адипиновой кислоты, причем процесс связывания пектинаэы с активированным силохромом осуществляют при концентрации фермента в среде 3-10%. Активность препарата 1,08-1,09 Е/г 11.

Однако этот способ характеризуется недостаточно высокой активностью получаемой иммобилизованной пектиназы.

Белью изобретения является повышение активности целевого продукта.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения иммобилиэованной пектиназы, заключаюшемуся в связывании пектинаэы в водной среде ! ,с предварительно активированным кремнеземным носителем, в качестве носителя используют а миноэпоксисилохром, активированный глутаровым альдегидом, с удельной поверхностью 60-90 м /г, а

z. процесс проводят при ко шентрации фермента в среде 3-10%.

Используемый в данном способе аминоэпоксисипохром, активированный глутаровым альдегидом, содержит реакционноспособные группы в количестве 80150 мк-экв/ г.

Из-за увеличения удельной поверхности по сравнению с известным носителем, количества реакционноспособных групп (в известном способе носитель содержит изоцианатные т;руппы в количестве 30-60 мк-экв/г) и их.расположения увеличиэается емкость носителя и активность свяэанногр фермента.

Концентрация фермента в среде 3-10% способствует образованию более активного препарата.

6008 4

15 з 92

Предлагаемый способ дает возможность получать им мобилизованную пектиназу с активностью 1,28-3,8 Е/г сухого носителя.

Пример 1. 10 r аминоэпоксисилохрома, (удельная поверхность 80 м /r) обрабатывают 3 ч 100 мл 2%-ного раствора глутарового альдегида, затем носитель фильтруют и промывают дистиллированной водой до исчезновения следов глутарового альдегида в промывных водах, потом высушивают при комнатной температуре. К 10 r активированного аминоэпоксисилохрома при перемешивании добавляют 35 мл 3%-ного раствора пектиназы в дистиллированной воде, после чего сосуд с реакционной смесью . вакуумируют посредством водоструйного .насоса 0,5 ч. Затем суспензию иммобилизованного препарата фильтруют и промывают на воронке Бюхнера 120 мл цитратного буфера рН 4,2; 100 мл 1 М раствора 805(и наконец 80 мл цитратного буфера рН 4,2.

Активность 1,28 Е/г сухого носителя (активность в исходном ферментном растворе 310 E/ã белка). о

При хранении при + 4 С препарат теряет 50% активности в течение 4 мес.

Пример 2. 10 r аминоэпоксисилохрома обрабатывают 3 ч 109 мл

2 !o-ного раствора глутарового альдегида, затем носитель фильтруют и промывают дистиллированной водой для исчезновения следов глутарового альдегида в промывных водах, потом высушивают. при комнатной температуре. К 10 r активированного аминоэпоксисилохрома при перемешивании добавляют 35 мл 5%-ного раствора пектиназы в дистиллированной воде, после чего сосуд с реакционной смесью вакуумируют посредством водоструйного насоса 0,5 ч. ЗатеМ суспензию иммобилизованного препарата фильтруют и промывают на воронке Бюхнера

120 мл цитратного буфера рН 4,2;

100 мл 1 M раствора NaCC и. наконец

80 мл цитратного буфера рН 4,2.

Активность 2,41 Е/г сухого носителя (активность в исходном ферментном растворе 310 Е/r белка).

При хранении при + 4 С преперат теряет 50% активности в течение 4 мес.

Пример 3. 10 r аминоэпоксисилохрома обрабатывают 3 ч 100 мл 27oо-ного раствора глутарового альдегида, зате м нос итель фильтруют и про мы вают дистиллированной водой до исчезновения следов глутарового альдегида в промыв20

Яо

Я5

55 ных водах, потом высушивают при комнатной температуре. К 10 r активированного аминоэпоксисилохрома при перемешивании добавляют 36 мл 10%-ного раствора пектиназы в дистиллированной воде, после чего сосуд с реакционной смесью вакуумируют посредством водоструйного насоса 0,5 ч. Затем суспензию. иммобилизованного препарата фильтруют и промывают на воронке Бюхнера 120 мл цитратного буфера рН 4,2; 100 мл 1 М раствора I40 и наконец 80 мл цитратного буфера рН 4,2.

Активность 3,8 Е/r сухого носителя (активность в исходном ферментом растворе 310 Е/r белка).

При хранении при + 4ОС препарат теряет 50% активности течение 4 мес.

Пример 4. 10 r аминоэпоксисилсхрома (удельная поверхность 60 м /r)

2. обрабатывают 3 ч 100 мл 2%-ного раствора глутарового альдегида, затем носитель фильтруют и промывают дистиллированной водой до исчезновения следов глутарового альдегида в промывных водах, потом высушивают при комнатной температуре. К 10 г активированного аминоэпоксисилохрома при перемешивании добавляют 35 мл 3%-ного раствора пектиназы в дистиллированной воде, после чего сосуд с реакционной смесью вакуумируют посредством водоструйного насоса

0,5 ч. Затем суспензию иммобилизованного препарата фильтруют и промывают на воронке Бюхнера 120 мл цитратного буфера рН 4,2; 100 мл 1 М раствора

NaDE и наконец 80 мл цитратного буфера рН 4,2.

Активность 1,18 Е/г сухого носителя (активность в исходном .ферментном растворе 310 Е/г белка). о

При хранении при + 4 С препарат теряет 50% активности в течение 4 мес.

Пример 5. 10 r аминоэпоксисилохрома (удельная поверхность 90.м /г) обрабатывают 3 ч 100 мл 27о-ного раствора глутарового альдегида, затем носитель фильтруют и промывают дистиллированной водой до исчезновения следов глутарового альдегида в промывных водах, потом высушивают при комнатной температуре. К 10 r активированного. аминоэпоксисилохрома при перемешивании добавляют 35 мл 3%-ного пектиназы в дистиллированной воде, после чего сосуд с реакционной смесью вакуумируют посредством водоструйного насоса 0,5 ч.

Затем суспензию иммобилизованного пре5 926008 6 парата фильтруют и промывают на ворон- среде с предварительно активированным ке Бюхнера 120 мл цитратного буфера кремнеземным носителем, о т л и ч а— рН 4,2; 100 мл 1 М раствора Ма И и ю ш и и с я тем, что, с целью повышенаконец 80 мл цитратного буфера рН 4,2. ния активности целевого продукта, в каАктивность 2,58 Е/г сухого носите- S честве носителя используют аминоэпокля (активность в исходном ферментном сисилохром, активированный глутаровым растворе 310 Е/r белка). альдегидом, с удельной поверхностью

При хранении при + 4аC препарат те- 60-90 м /г, а процесс связывания проряет 50% активности в течение 4 мес. всаят при концентрации фермента в сре о де 3-10 .

Источники информации, Формула изобретения принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

Способ получения иммобилизованной М 736592, кл. G 07 С 7/02, 1978 пектиназы путем связывании ее в водной д (прототип).

Заказ 2889/9 Тираж 505

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4

Составитель О. Скородумова

Редактор М. Петрова Техред.А. Ач Корректор Ю. Макаренко