Штамм плесневого гриба aspergillus oryzae-3-продуцент @ - амилазы

Штамм плесневого гриба aspergillus oryzae-3-продуцент @ - амилазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Р. В. Зуева, Н. М. Павлова, В. П. Кремвнцова, С. А, Коновалов, А. М. Миневич, М. П. Мудрецова и Г. В. (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский бнотехнич (7l ) Заявитель

1О

k (54) ШТАММ ПЛЕСНЕВОГО ГРИБА ЮРERG)4 БВ

ОЮ2 АИ-3 ПРОДУЦЕНТ Ы -АМИЛАЗЫ

Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности и может быть использовано в хлебопекарной, спиртовой и других областях народного хозяйства. Известен ряд.. IIJTBMMoB - продуцентов +-амилаэы, образующих комплекс амилолитических ферментов как при поверхностном так и при глубинном культи1 вировании .

Известен штамм АВ СЩ4ИЖ (й Ъцй

3-9-15 активный йродуцент -амилаэы, который используется для получения ферментного препарата Амилориэина ЪЩ ..

Активность *-амилаэы 25 ед/мл культуральной жидкости (1).

Недостатком данного штамма является невысокая активность продуцируемого фер мента.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту к предлагаембму является штамм

А рег И uS ог чае 7 40-А2 — продуцент К-амилаэы. Активность о(-амилазы

200,0 ед/г сухого вещества f2).

Недостатком известного является нестабильная активность о(-амилазы при культивировании его в производственных

S условиях и повышенная восприимчивость к инфекции.

Бель изобретения — получение высокоактивного, стабильного, устойчивого

t0 штамма — продуцента амилазы.

Предлагаемый штамм ASPBl Qð0Â

От ч,иЯ-3 является активным продуиентом

Я -амилазы. Штамм хранится в коллекции культур промышленных микроорганизмов ВНИИгенетика, коллекционный !

5 номер Н -115. По активности накопления амилолитических ферментов он превышает активность известного и отвечает требованиям современного производства для получения из. него.ферментного пре20 парата Амилоризина П-10Х высшей категории качества.

Предлагаемый штамм получен в результате двух ступенчатой селекции с пря9-.537

35

3 менением мутагенов физической и химической природы. На первом этапе селекции используют в качестве мутагена нитро- эогуанидин (НГ) в концентрации 200ф- wv, на втором этапе — НГ в комбинации с 5 ультрафиолетовыми лучами (УФ-лучи);. доза 25 а 10З эрг/см . В результате многочисленных проверок амилолитической активности вьщелен мутант Asp61 gр(Ькоту. сиз -3. Он не только активно синтезирует с(.-амилазу, но и стабильно сохраняет эти свойства в течение

2 лет, Штамм имеет следующие характеристики. 15

Морфология. Мицелий сильно разветвлен, с поперечными перегородками, с мелким зернистым включением. Ширина клеток мицелия 2-5 мк. Конидиеноспы длинные, кверху расширяющиеся. и принимающие грушевидную форму. Ширина конидиеносцев 8-12,5 м. Диаметр головки конидиеносцев 12,5-25,5 мк, но чаще всего встречаются конидиеносцы

18-20 .мк. Конидии ровные, .мелкие, (блестящие, диаметр конидий 1,5-2,5 мк.

К ультуральноб иохимические признаки.

Среда сусло-аг;р. Белая, пушистая колония с ровными краями. Диаметр колонии 3-4 см на 5 сут роста. Обратная сторона колонии гладкая.

Среда Чапека. Пушистая колония белого цвета с неровными краями. Диаметр колонии 2-3 см.,На обратной стороне колонии едва заметная радиальная складчатость.

Картофельный агар. Белая пушистая колония с неровными краями. Диаметр колонии 2-3 см. Складчатость на обратной стороне колонии отсутствует. ао

Морковный агар. Белая пушистая колония, рост очень интенсивный, обратная сторона колонии отличается сильной радиальной скледчатостыо. Диаметр ко-, лонии 6-7 см. 45

Синтетическая агаризованная среда.

Мелкая колония, пушистая, серого цвета.

Диаметр колонии 1-1,5 см. Складчатость отсутствует.

Нитраты не восстанавливает.

Температурные границы развития: при 20 С вЂ” рост замедленный;

30 - рост хороший;

40 - рост есть;

50 — рост слабый.

Физиологические свойства.

Рост на молоке. Растет хорошо, мо-локо цептонизирует.

Рост на ломтиках картофеля. Рост очень интенсивный, образует много конидий зеленого цвета.

Желатину не разжижает. Маннит, сорбит, декстрины, крахмал, глюкозу, галактозу, арабинозу, ксилозу, рамнозу, лактозу, сахарозу потребляет, при этом происходит закисление среды.

Пример. Получение ферментного препарата. Амилориэина П 10Х при использовании штамма ASp8 Rug-оу;уффе 5 продупента a(-амилазы в поверхностных условиях.

Для получения ферментного препарата

Амилоризина П 10Х используют штамм

А р.ot yZg g - процуцент р/ -амилаэы при культивировании его в поверхностных условиях. Выращивание поверхностной грибной культуры проводят в растительнык камерах на среде из пшеничных отрубей с содержанием в них 19% крахмала и с начальной влажностью 57-58%.

Посевной споровый материал для заcesa растительных камер готовят следующим образом.

Колбу на 750 мл с пшеничными отрубями с толщиной слоя 1,7 см и влажностью 30% засевают суспензией конидий гриба, взятой из пробирки с сусло-агаром.

Выращивают плесневый гриб в этой колбе 5 сут в термостате при 30 С до обильного спорообразования,,затем из этой культуры готовят споровую суспен we.

В отделении чистых культур атой споровой суспензией засевают посевные .

O кюветы со стерильными отрубями для по-. лучения посевного материала, который в свою очередь идет для засева растительных камер.

На одну растительную камеру расходуют 300 кг сухих пшеничных отрубей.

Для засева одной растительной камеры используют 4 кюветы посевного материала с количеством спор, равным

0,68 ° 10 1 на грамм.

При выращивании гриба температура в камере -30 C. Продолжительность культивирования 36 ч. Начальная влажность питательной среды для растительных камер 59%, конечная влажность готовой культуры гриба 34%.

Эту сирую культуру подвергают экстрагированию водопроводной водой при

30 С. Количество воды в экстракторе

400% по отношению к весу воздушносухой культуры. Содержание сухих веществ в экстракторе колеблются от 5

Составитель И, Привалова

Техред М.Рейвес Корректор Л. Бокшан

Редактор Т. Веселова

Заказ 3863/6 Тираж 505, Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113038, Москва, Ж-35, Раушская- наб., д. 4/5 филиал ППП Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 933 до 5,8%. Продолжительность экстрагирования 12 ч.

Осаждение препарата проводят спиртом на установке непрерывного действия при концентрации его в. смеси,74%. Перед осаждением спирт и экстракт грибной культуры охлаждают до 0 C. Темпера0 тура смеси спирта и экстракта не превышает 15 С.

Осадок отделяют в кларификаторе.

Влажность сырого препарата 60%.

Сушку препарата осуществляют в суб лимационной сушилке КС-30 14 ч.

Препарат представляет собой порошок светло-серого цвета. Активность прела- И рата посо -амилазе 2750 ед/г.

Полученный препарат A милоризин

П 10Х соответствует высшей категории качества.

Испытания в производственных усла- 20 .виях показывают, что штамм устойчив к посторонней микрофлоре, 704 6

Ожидаемая экономическая эффективность от применения полученного штаммамутанта - продицента g -амилазы составляет 31186 руб.

Фор мула изобре,тени я

Штамм плесневого гриба Аэрет рСЯоя

otvzee-3 (коллекция культур промышленных микроорганизмов ВНИИгенетнка, коллекционный номер Г-115). - проауцент

<-амилазы.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Калунянц К. А. и Голгер Л. И. Микробные ферментные препараты. М., Пищевая промышленность, 1979, с. 8-13.

2. Там же, с. 8-9.