Способ получения гиалуронидазы

Способ получения гиалуронидазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

<1 955932 (61) ???????????????????????????? ?? ??????. ????????-???? (22) ???????????????? 26.03. 81 (21) 3268286>

А 61 К 37/48//

С 12 N 9/26

Государственный комитет

СССР яо делам изобретений и открытий (23) Приоритет

)53) УДК615. 45:

:615.779.94 (088. 8) Опубликовано 070982. Бюллетень ¹33

Дата опубликования описания 070982

Л.И. Стекольников, Л. В. Алехина, М. И. Ба урина " " -=- -.. и Г.П. Горошко т . (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский инсти ут мясной проьяхаленности (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИАЛУРОНИДАЭЫ

Изобретение относится к производству лекарственных препаратов, применяемых в медицинской практике, и касается способа получения 5 препаратов из животного сырья.

Известен способ получения гиалуронидазы иэ семенников крупного рогатого скота путем экстракции сырья 0,1 н. водным раствором уксус- 10 ной кислоты при перемешивании, отделения экстракта от жьыха и последующего высушивания (11.

Однако известный способ не о0ес(печивает достаточно полного извлечения фермента гиалуронидаэы (1,3%).

Целью изобретения является ïîâûшение выхода фермента.

Поставленная цель достигается тем, что в способе получения гиалуронидазы из семенников крупного рогатого скота путем экстракции сырья

0,1 н водным раствором уксусной .кислоты при перемешивании, отделения экстракта от жмыха и последующего высушивания жмых обрабатывают

0,1 н. водным раствором уксусной кислоты, и экстракцию каждой последующей партии жмыха осуществляют экстрактом, полученным от предыдущего извлечения с добавлением 0,1 н, водного раствора уксусной кислоты, при этом экстракцию проводят до насыщения извлечения ферментом, после чего полученное извлечение объединяют с экстрактом, полученным после обработки экстрагентом сырья.

Пример. 85 кг замороженных семенников крупного рогатого скота измельчают дважды на волчке, добавляют 85 л 0,1 н. водного раствора уксусной кислоты, температуру смеси доводят до 20оC и экстрагируют при постоянном Перемешивании в течение 3 ч. Жьых отделяют сепарированием .при 8000 об/мин. в течение

30 мин., а экстракт фильтруют. Около 100 кг жмыха заливают 300 л 0,1 н, водного раствора уксусной кислоты, экстрагируют при 20оС и постоянном перемешивании 20 мин. Смесь подвергают сепарированию при 8000 об/мин в течение 30 мин., к 288 л полученного экстракта добавляют 0,1 н, водный раствор уксусной кислоты до

300 л1 переносят в 100 кг жмыха, полученйого после экстракции другой партии семенников, экстракцию осуществляют аналогичным образом и процесс повторяют с использованием

955932

Гиалуронидазная активность и выход фермента при последовательной экстракции нескольких партий жмыхов семенников

Выход фермента, Общее кол-во

ырья, подвергшегося обработке экстрагентом, кг

Гиалуронидазная активность экстракта, ед/мл

Способ обработки сырья в кг в В к массе обработанного сырья

Зкстракция семенников 0,1 н водным раствором ОН СООН по известному способу

100,0

64,0

1,3

1,30

Извлечение 1-ой партии жмыха семенников

0,1.н. водный.раствором СН,СООН

5,0

100,0

0,20

0,2

Извлечение II-ой партии жмыха семенников экстрагентом от п. 2

0,49

0,245

200,0

Извлечение III-ей партии жмыха семенников экстрагентом от п. 3

300,0

41,0

1,433

0,48

Извлечение IV-ой партии жмыха семенников экстрагентом от п. 4

78,0

2,50

0,62

400,0

Извлечение 3 -ой партии жмыха семенников экстрагентом от п. 5

500,0

83,0

3,00

0,60

Гиалуронидазная активность фер- (g.». 2-6 ), была оли»ак зяой н вырамента, изв н извлеченного из семенников и жалась вели»и»ой "1:! ел.(100 мг »оиз жмыхов семенников на всех стадиях 65 рошка ). еще трех новых партий жмыхов семенников (по 100 кг каждая ). Экстракт, полученный после извлече»ия пятой партии жмыха, фильтруют »а нутчфильтре, соединяют с экстрактом семен»иков. Объединенные фильтраты сгущают до 40 л, затем центрифугируют при

3000 об/мин в течение 20 мин °, надосадочную жидкость отделяют и вливают тонкой струей в 4 объема (около 160 л) охлажденного до О С 96%-oro этилс- 10 вого спирта. Смесь тщательно перемешивают, оставляют на 2 ч при О С, образующийся осадок отделяют, промывают пять раз по 10 л ацетоном и два раза по 2 л серным эфиром и сушат 15 в вытяжном шкафу до удаления запаха эфира. Выход порошка составляет

8,9 кг.

После определения гиалуронидазной актив»ости (512 ед. в 100 мг ) полученный порошок может быть использован для получения препарата "Ронидаза". Для этого к полученному порошку добавляют 133,5 кг наполнителя (талька ), смесь перемешивают 2 ч а шаровой мельнице, затем расфасовывают во флаконы по 5 г и получают

26700 флаконов препарата ронидазы.

В таблице представлены экспериментальные данные, показывающие гиалуронидазную активность и выход фермента, полученного при последовательной экстракции нескольких партий жмыхов семенников одним и тем же экстрагентом. При этом происходит постепенное обогащение экстрагента ферментом гиалуронидазой.

955932

Составитель В. Брусиловская

Редактор О. Филиппова Техред С.Мигунова Корректор А. Ференц

Заказ 6857/3 Тираж 714 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. ужгород, ул. Проектная, 4

Из 500 кг жмыха семенников rro предлагаемому способу получают

7,62 кг фермента гиалуронидазы с активностью 512 ед. в 100 мг, из которого после разбавления наполнителем до активности 32 ед. в 100 мг получают 121, 92 кг+отового препарата ронидаэы, или 24384 флаконов ронидазы (по 5 r во флаконе).

В целом, в дополнение к 1,3% фермента, извлекаемого из ткани 10 семенников по известному способу, при использовании предлагаемого способа удается экстрагировать из жмыхов семенников еще 2,74% фермента гиалуронидазы, что позволяет поч- 15 ти в семь раз увеличить выход готового-препарата "Ронидазы".

Формула изобретения

Способ получения гиалуронидазы 2О иэ семенников крупного рогатого скота путем экстракции сырья 0,1 н. водным раствором уксусной кислоты при перемешивании, отделения экстракта от жмыха и последующего высушивания, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода фермента, жмых обрабатывают 0,1 н. водным раствором уксусной кислоты и экстракцию каждой последующей партии жмыха осуществляют экстрактом, полученным от предыдущего извлечения с добавлением 0,1 н. водного раствора уксусной кислоты, при этом экстракцню проводят до насыщения извлечения ферментом, затем полученное извлечение объединяют с экстрактом, полученным после обработки экстрагентом сырья.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

9 566875, кл. A 61 К 37/48, 1976.