Способ получения консерванта для эритроцитов

Способ получения консерванта для эритроцитов

Реферат

 

Изобретение касается способа получения консерванта для эритроцитов. Целью изобретения является повышение качества целевого продукта за счет повышения длительности сохранения морфофункциональных свойств эритроцитов. Желатин растворяют в дистиллированной воде, затем проводят термодеструкцию при температуре 122 - 126°С и после охлаждения раствора до 50 - 60°С и подают на систему последовательно соединенных колонок с катионитом КУ-2 и анионитом АВ-17. Деионизированный раствор желатина выдерживают при нагревании с янтарным ангидридом, охлаждают и выдерживают под давлением, проводят повторный гидролиз в идентичных условиях до достижения мол.м. желатина 13 - 20 тыс. дальтон, гидролизат охлаждают до 50 - 60°С, добавляют гидроцитрат натрия до конечной концентрации 0,08 - 0,12% и после нейтрализации - хлорид натрия до конечной концентрации не более 0,35% и разбавляют его дистиллированной водой до концентрации желатина 8%. 2 табл.

Изобретение относится к медицине и касается способа получения консерванта для эритроцитов. Целью изобретения является повышение качества целевого продукта за счет повышения длительности сохранения морфофункциональных свойств эритроцитов. П р и м е р 1. В реактор загружают 4,5 кг желатина (влажность 12,6%) и 20 л дистиллированной воды для набухания и растворения желатина при 60^оС в течение 1 ч при перемешивании. Далее повышают температуру в реакторе до 122-126^оС и проводят (во избежание желатинизации раствора) предварительную термодеструкцию желатина в течение 1,5 ч при перемешивании, после чего раствор охлаждают до 50-60^оС и подают на систему последовательно соединенных колонок, заполненных на 80% объема набухшим катионитом КУ-2 и анионитом АВ-17. Раствор желатина пропускают через смолы при 45^оС с удельной нагрузкой 2-3 л/л смолы/ч. Деионизированный раствор собирают в промежуточную стерильную емкость, тщательно перемешивают, измеряют объем (20 л), рефрактометрически определяют концентрацию желатина (12%) и разбавляют дистиллированной водой (5,26 л) до концентрации 9,5%. Затем раствор передавливают в стерильный реактор и добавляют 0,06 кг янтарного ангидрида (0,2%). Реакционную смесь нагревают до 122^оС при 1,2 ати и гидролизуют в течение 1 ч, после чего реактор охлаждают и выдерживают под давлением около 14 ч (до утра). Повторный гидролиз проводят в идентичных условиях в течение 1,5 ч и прекращают по достижении мол.м. раствора желатина 13-20 тыс. дальтон. Затем гидролизат охлаждают до 50-60^оС, добавляют 0,6 л стерильного 5%-ного раствора двузамещенного гидроцитрата натрия до конечной концентрации 0,1% и нейтрализуют 8%-ным раствором бикарбоната натрия (2,35 л, рН 8,5) стерилизованным в негерметичных условиях при 98-102^оСв течение 15 мин. Затем в гидролизат добавляют 0,42 л 20%-ного стерильного раствора хлорида натрия до конечной концентрации 0,30% и разбавляют его дистиллированной водой (1,37 л) до концентрации желатина 8%. Регенерацию катионита проводят раствором 2 н. соляной кислоты, анионита - раствором 1н. NaOH с последующим промыванием их дистиллированной и деонизированной водой. П р и м е р 2. В реактор загружают 3,57 кг желатина (влажность 10%) и 20 л дистиллированной воды для набухания и растворения желатина при 60^оС в течение 1 ч при перемешивании. Далее повышают температуру в реакторе до 122-126^оС и проводят (во избежание желатинизации раствора) предварительную теpмодеструкцию желатина в течение 1,5 ч пи перемешивании, после чего раствор охлаждают до 50-60^оС и подают на систему последовательно соединенных колонок, заполненных на 80% объема набухшими катионитом КУ-2 и анионитом АВ-17. раствор желатина пропускают через смолы при 45^оС с удельной нагрузкой 2-3 л/л смолы/ч. Деионизированный раствор собирают в промежуточную стерильную емкость, тщательно перемешивают, измеряют объем (18 л), рефрактометрически определяют концентрацию желатина (12%) и разбавляют дистиллированной водой (3,29 л) до концентрации 9,5%. Затем раствор передавливают в стерильный реактор и добавляют 0,04 кг янтарного ангидрида (0,2%). Реакционную смесь нагревают до 122^оС при 1,2 ати и гидролизуют в течение 1 ч, после чего реактор охлаждают и выдерживают под давлением около 14 ч (до утра). Повторный гидролиз проводят в идентичных условиях в течение 1,5 ч и прекращают по достижении мол.м. раствора желатина 13-20 тыс.дальтон. Затем гидролизат охлаждают до 50-60^оС, добавляют 0,42 л стерильного 5%-ного раствора двузамещенного гидроцитрата натрия до конечной концентрации 0,08% и нейтрализуют 8%-ным раствором бикарбоната натрия (2,52 л, рН 8,4), стерилизованным в негерметичных условиях при 98-102^оС в течение 15 мин. Затем в гидролизат добавляют 0,35 л 20%-ного стерильного раствора хлорида натрия до конечной концентрации 0,25%, разбавляют его дистиллированной водой (0,17 л) до концентрации желатина 8%. Регенерацию катионита проводят раствором 2 н. соляной кислоты, анионита - раствором 1 н. NaOH с последующим промыванием их дистиллированной и деионизированной водой. П р и м е р 3. В реактор загружают 3,93 кг желатина (влажность 11%) и 20 л дистиллированной воды для набухания и растворения желатина при 60^оС в течение 1 ч при перемешивании. Далее повышают температуру в реакторе до 122-126^оС и проводят (во избежание желатинизации раствора) предварительную термодеструкцию желатина в течение 1,5 ч при перемешивании, после чего раствор охлаждают до 50-60^оС и подают на систему последовательно соединенных колонок, заполненных на 80% объема набухшими катионитом КУ-2 и анионитом АВ-17. Раствор желатина пропускают через смолы при 45^оС с удельной нагрузкой 2-3 л/л смолы/ч. Деионизированный раствор собирают в промежуточную стерильную емкость, тщательно перемешивают, измеряют объем (18,5), рефрактометрически определяют концентрацию желатина (12%) и разбавляют дистиллированной водой (2,95 л) до концентрации 9,5%. Затем раствор передавливают в стерильный реактор и добавляют 0,05 кг янтарного ангидрида (0,2%). Реакционную смесь нагревают до 122^оС при 1,2 ати и гидролизуют в течение 1 ч, после чего реактор охлаждают и выдерживают под давлением около 14 ч (до утра). Повторный гидролиз проводят в идентичных условиях в течение 1,5 ч и прекращают по достижении мол.м. раствора желатина 13-20 тыс.дальтон. Затем гидролизат охлаждают до 50-60^оС, добавляют 0,64 л стерильного 5%-ного раствора двузамещенного гидроцитрата натрия до конечной концентрации 0,12% и нейтрализуют 8% -ным раствором бикарбоната натрия (2,29 л, рН 8,3), стерилизованным в негерметичных условиях при 98-102^оС в течение 15 мин. Затем в гидролизат добавляют 0,45 л 20%-ного стерильного раствора хлорида натрия до конечной концентрации 0,35% без последующего разбавления. Регенерацию катионита проводят раствором 2 н. соляной кислоты, анионита - раствором 1 н. NaОН с последующим промыванием их дистиллированной водой и деионизированной водой. Препарат, полученный предлагаемым способом, представляет собой 8%-ный раствор модифицированного (сукцинилированного) деионизированного, частично расщепленного желатина, прозрачный, коричневато-желтого цвета, слегка пенящийся при встряхивании, со специфическим запахом, стерильный, нетоксичный, апирогенный. Препарат характеризуется следующими биохимическими показателями: Мол. м. , дальтон 13-20 тыс. Содержание общего азота, г/л 12-17 Содержание ионов, ммоль/л: натрия 120-170 хлора Не более 60 цитрата 3,0-4,6 кальция Не более 0,25 Осмолярность, мосм/кг 270-300 Цветной показатель Не более 0,2 рН 6,4-7,4 Морфологические изменения эритроцитов изучались микроскопированием нативной капли взвеси и оценивались процентным содержанием нормальных (дискоциты) и измененных (тутовые, сфероциты) форм клеток крови. Данные представлены в табл. 1. Функциональная сохранность эритроцитов оценивалась по содержанию свободного гемоглобина (бензидиновым методом), количеству осмотически неустойчивых клеток (по степени гемолиза в 0,6%-ном растворе хлорида натрия) и содержанию АТФ (энзимоспектрофотометрическим методом). Данные представлены в табл. 2. Из представленных таблиц следует, что через 21 сутки хранения соотношение нормальных (дискоидных) и измененных форм оказалось наиболее благоприятным при хранении эритроцитов в консерванте, полученном предлагаемым способом. Осмотически неустойчивые эритроциты при хранении их в предлагаемом консерванте составляют 17,5%, в то время как в известном консерванте - 56,2%.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНСЕРВАНТА ДЛЯ ЭРИТРОЦИТОВ путем термодеструкции желатина, последовательной деионизации на катионите и анионите, гидролиза, нейтрализации и стерилизующей фильтрации, отличающийся тем, что, с целью повышения качества целевого продукта за счет повышения длительности сохранения морфофункциональных свойств эритроцитов, перед нейтрализацией добавляют гидроцитрат натрия до конечной концентрации 0,08 - 0,12% и после нейтрализации - хлорид натрия до конечной концентрации не более 0,35%.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 18.06.2004

Извещение опубликовано: 20.08.2005        БИ: 23/2005