Способ получения замещенных 2-окси-3-/1-(1н-имидазол-4-ил) алкил/-бензамидов или их нетоксичных фармацевтически приемлемых солей кислот

Патент 1836353

Авторы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Использование: в качестве препарата, обладающего мочегонной, противовоспалительной и гипотонической активностью. Сущность изобретения; продукт общей формулы О ОН R, Н,М-С1 & Н 1 N Н где RI - водород или С1 С4-алкил. Выход 70%, Реагент I: соответствующий 2-окси-З- 1-(1Н-имидазол-4-ил-алкил -бензонитрил. Гидролиз в кислой среде. Выделение в свободном виде или в виде нетоксичных фармацевтически приемлемых солей кислот. 2 пр. 9 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

0 он, В М н,н-с, ) 0Н а1

N=C

N (21) 4743506/04 (62) 4613927/04 .(23) 27.04.89 (22) 05.04.90 (46) 23.08.93. Бюл, М 31 (31) 8810067 (32) 28.04.88 (33) GB .(71) ЮЦБ С.А. (BE) (72) Эрик Коссман, Жан-Пьер Жерт, Жан Гобер, Филипп Мишель(BE) и Эрнст Вульферт (NO) (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЗАМЕЩЕНН6!Х

2-ОКСИ-3-(1 (1H-ИМИДАЗОЛ-4-ИЛ)АЛКИЛ)БЕНЗАМИДОВ ИЛИ ИХ НЕТОКСИЧНЫХ

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫХ С0flEA КИСЛОТ

Изобретение относится к способу получения новых замещенных 2-окси-3-(1Нимидаэол-4-ил)алкил)-бензамидов, а также . их нетоксичных, фармацевтически приемлемых солей кислот. которые могут использоваться в терапии, общей формулы! где R> вЂ” водород или С1-С4-алкил.

Известен способ получения амидов гидролизом нитрилов.

Цель изобретения вЂ” синтез новых бензамидов с использованием известной реакции получения амидов гидролизом нитрилов, обладающих мочегонной, противовоспалительной и гипотонической актив„„ Ы„„1836353 АЗ (st)s С 07 D 233/56//А 61 К 31/415 (57) Использование: в качестве препарата, обладающего мочегонной, противовоспалительной и гипотонической активностью, Сущность изобретения: продукт общей фор0 OH@ и 1 М

HgNС - x) н

k-k где й1 вЂ” водород или С1 вЂ” С4-алкил. Выход 70%, Реагент k: соответствующий 2-окси-3(1-(1Н-имидазол-4-ил-ал кил)-бензонитрил.

Гидролиз в кислой среде, Выделение в свободном виде или в виде нетоксичных фармацевтически приемлемых солей кислот, 2 пр.

9 табл. ностью и значительно превосходящих по своей активности препарат пропранолол. Ц ель достигается предлагаемым способом получения соединений общей формулы

I гидролизом в кислой среде 2-окси-3-(1-(1Нимидазол-4-ил)алкил)-бензонитрила общей формулы II где R> имеет указанные значения.

Пример 1. Получение исходных 2-окси-3-(1-(1 Н-и мидазол-4-ил)ал кил)-бе н з он ит рилов формулы!1, 1.. 2-Окси-3-((1Н-имидазол-4-ил)метил)бенэонитрил, 1а. Этил-4-бензилокси-2-((1 Н-имидазол4-ил)метил)-3-оксо-бутан оа т.

1836353

При 10 С добавляют за один раз 182 г (0,77 моль) 4-бензилокси-3-оксо-бутаноата в раствор 16,9 г (0,735 моль) натрия в 590 мл абсолютного этанола. Смесь перемешивают в течение 45 мин при температуре окружающей среды, затем охлаждают до -45 C и добавляют в нее за один раз расгвор 53,6 г (0,35 моль) хлоргидрата 4-хлорметил-1Нимидазола в 300 мл абсолютного этанола.

Смесь доводят до температуры окружающей среды и перемешивают в течение 1 ч, Затем выпаривают суспензию досуха, Осадок поглощают раствором 35 мл концентрированной хлористоводородной кислоты в

900 мл воды и экстрагируют несколько раз диэтиловым эфиром. Водную фазу нейтрализуют раствором 18 г гидроокиси натрия в

200 мл воды и экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы промывают водой и насыщенным водным раствором

20 хлорида натрия. Высушивают на сульфате натрия и выпаривают при пониженном давлении. Получают 107 г практически чистого этил-4-бензилокси-2-((1H-имидазол-4-ил)метил}-3-оксо-бутаноата, 25

Выход 97, ЯМР-спектр (DMSO): 1, 11 (ЗН, с), 2,98 (2Н, m),4,05(2Н, q),4,08(1Н, m),4,25(2Н, dd), 4,47 (2Н, S), 6,75 (1Н, S), 7,25 вЂ” 7,39 (5Н, m), 747(1H., d), 30

1б. Этил-4-бензилокси-3-окси-2-((1Нимидазол-4-ил)метил)-бутаноат.

В раствор 101,2 г (0,32 моль) атил-4-бензил окси-2-((1 Н-и мида зол-4-ил)метил)-3-о ксо-бутаноата в 600 мл этанола, охлажденно-. 35 го до -20 С, добавляют за один раз ледяной раствор 6,03 г (0,16 моль) боргидрида натрия в 25 мл воды. Доводят раствор до температуры окружающей среды и перемешивают в течение 1 ч, Затем добавляют 25 MR ацетона. 40

Выпаривают раствор досуха и поглощают . осадок посредством 500 мл воды. Экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы промывают водой и насыщенным водным раствором хлорида 45 натрия. Высушивают на сульфате натрия и выпаривают растворитель при пониженном давлении. Осадок очищают хроматог-. рафией на силикагеле (элюант: смесь дихлорметан;метанол;аммиак в объемном 50 соотношении 93,5:6:0,5. Получают 95,8 г этил-4-бензилокси-3-окси-2-((1 Н-имидазол

-4-ил)метил)-бутаноала (смесь диастереоизомеров). Выход 94 .

HMP-спектр (СОС!з): дельта 1,15 и 1,16 55 (ЗН, 2t); 2,90-3,05 (ЗН, m); 3,51 вЂ” 3,58 (2Н, m);

3,96 вЂ” 4,11 (ЗН, 2q + 1m): 4,51 и 4.53 (2Н, 2S);

6,73 вЂ” 6,75 (1H, 2S); 7,25 вЂ” 7,36 (5Н, m).

1в, Хлоргидрат 4-окси-3-((1Н-имидазол4-ил)метил)-дигидро-2(3)-фуранона.

Гидрогенизируют 93,9 г (0,295 моль), атил-4-бензилокси-3-окси-2-((1Н-имидазол-4-ил)-бутаноата в растворе в 500 мл абсолютного этанола и 65 мл раствора хлористоводородной кислоты 6,8 н. в этаноле в присутствии 5 r 10 -ного палладия на угле и при давлении 3,5 бар. Затем фильтруют катализатор и удаляют растворитель при

65 С при пониженном давлении. Получают

67,1 r хлоргидрата 4-окси-3-((1Н-имидазол4-ил)метил)-дигидро-2(ЗН)-фуранона (смесь диастереоизомеров). Практически количественный выход, Соединение используют в чистом виде на следующем этапе.

1 г. 3-(-1 Н-Им идазол-4-ил)метил)-2(5Н)фуранон, Нагревают в течение 75 мин при 160 С. при давлении 0,0013 мбар 67,1 г (0,295 моль) хлоргидрата 4-окси-3-((1Н-имидазол-4ил)метил)-дигидро-2(ЗН)-фуранона. Охлаждают и поглощают посредством 125 мл абсолютного этанола. Нейтрализуют путем добавления 70 мл раствора аммиака 5 н. в этаноле. Фильтруют суспензию и удаляют растворитель при пониженном давлении.

Осадок очищают хроматографией на силикагеле (элюант: смесь дихлорметан:метанол:аммиак в объемном соотношении

91,5:8:0,5), После рекристаллизации в ацетонитриле получают 27,5 г "((1H-имидазол4-ил)метил)-2(5Н)-фуранона. Выход 53 (рассчитанный вместе по этапам 1в и 1г).

Точка плавления 123 С.

ЯМР-спектр (СОС!з): дельта 3,63 (2H, q);

4,79 (2Н, q); 6,90 (1Н, d); 7,25 (1H, квинтуплет); 7,52 (1Н, d).

1д. 2-окси-3-((1 Н-имидазол-4-ил)-метил)-бензонитрил, В суспензию 24,6 r (0,15 моль) 3-((H-имидазол-4-ил)метил)-2(5)-фуранона в 225 мл безводного акрилонитрила последовательно добавляют 63 мл (0,45 моль) безводного триэтиламина и 57 мл (0,45 моль) триметилхлорсилана. Смесь нагревают в рефлюксе (72-74 С) в течение 4 ч. Затем выпаривают при пониженном давлении. Осадок обрабатывают за один раз посредством 75 мл концентрированного бромистого водорода и выдерживают при 80 С в течение 2 мин, Затем раствор выливают на лед, разбавляют путем добавления 300 мл этилацетата и

300 мл воды и нейтрализуют твердым бикарбонатом натрия. Фильтруют на цеолите, а фильтрат экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы промывают водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия, затем. высушивают на сульфате натрия и выпаривают при пониженном

1836353 давлении. Полученный осадок истирают в порошок в диэтиловом эфире. Получают

22,8 г 2-окси-3-((1Н-имидазол-4-ил)метил)бензонитрила. Выход 76 .

ЯМР-спектр (DMSO): дельта 3,90 (2Н, S); 5

6,88 (1Н, t); 7,06 (1Н, S); 7,41 (1Н, с!0); 7,47 (1Н, dd); 7,99 (1Н, d), Его хлоргидрат плавится при 245ОС.

2. 2-окси-3-(1-(1Н-имидазол-4-ил)зтил)бензонитрил, 10

2а. Этил-4-бензилокси-2-(1-(1Н-имидазол-4-ил)атил)-3-оксо-бутаноат, . Это соединение получают, как в примере 1а из атил-4-бензилокси -3-оксо-бутаноата и 4-(1-хпорэтил)-1Н-имидазола. 15

Выход 68 (смесь диастереоизомеров).

ЯМР-спектр (CDCIa): дельта 1,10 и 1,22 (ЗН, 2t); 1,33 и 1,36 (ЗН, 2d): 3,60 вЂ” 3,72 (1Н, m); 3,93-4,20 (ЗН, m); 4;47 и 4,55 (1 Н, 2S); 6,70 и 6,74 (1 Н, 2S); 7,26 вЂ” 7,35 (5Н, а); 7,41 и 7,45 20 (1Н, S+ d).

26. Этил-4-бензилокси-3-окси-2-(1-(1Нимидазол-4-ил)этил)-этилбута ноат.

Это соединение получают, как в примере 16, путем восстановления этил-4-бензи- 25 локси-2-(1-(1 Н-имидазол-4-ил)атил)-3-оксоэтилбутаноата. Выход 91 (смесь диастероизомеров).

Масс-спектр:

332 (M+), 314. 287, 211, 181, 135, 95, 91. 30

2в. Хлоргидрат 4-окси-3 (1-(1 Н-имидазол-4-ил)этил)-дигидро-2(3Н)-фуранон.

Это соединение получают, как в примере 1в, путем гидрогенолиза атил-4-бензилокси-3-окси-2-(1-(1Н-имидазол-4-ил)этил)- 35 бутаноата. Практически количественный выход. Получают смесь диастереоизомеров, которую используют в чистом виде на сле- дующем этапе, 2г. 3-(1-(1Н-имидазол-4-ил)этил)-2(5Н)- 40 фуранон.

Нагревают в течение 1 ч при 170 С, при давлении 13,3 мбар. 75,1 r (0,32 моль) хлоргидрата 4-окси-3-(1-(1К-имидазол-4ип)этил)- дигидро-2(ЗН)-фуранона в 30 мл 45 этиленгликоля. Затем удаляют растворитель при давлении 0,0013 мбар. Осадок поглощают в 300 мл абсолютного этанола и нейтрализуют путем добавления 63,2 мл раствора аммиака 5 н.. в этаноле, Фильтру- 50 ют суспензию и выпаривают растворитель при пониженном давлении, Осадок очищают путем хроматографии на силикагеле (элюант: смесь дихлорметан:метанол:аммиак в объемном соотношении 91,5:8:0,5). По- 55 сле рекристаллизации в ацетонитриле получают 41,9 г 3-.(1-(1Н-имидазол-4ил)этил)-2(5Н)-фуранона. Выход 74 (рассчитанный совместно по этапам 2в и 2г).

Точка плавления 127-129 С.

ЯМР-спектр (DMSO): дельта 1,40 (ЗН. d);

3,72 (1Н, q); 4,84 (2 Н, т); 6,80 (1Н. t); 7,35 (1Н, q); 7,51 (1Н, S).

2д, 2-Окси-3-(1-(1Н-имидазол-4ил)этил)-бензонитрил.

В суспензию 17,8 г (0.1 моль) 3-(1-(1Нимидазол-4-ил)атил)-2(5Н)-фуранона Ф 150 мл безводного акрилонитрила последовательно добавляют 56 мл (0,4 моль) безводного триэтиламина и 50,7 мл (0,4 моль) триметилхлорсилана. Смесь нагревают в рефлюксе в течение 3,5 ч. Затем выпаривают реакционную смесь при пониженном давлении. Осадок обрабатывают за один раз посредством 50 мл концентрированной хлористоводородной кислоты и выдерживают при 80 С в течение 2 мин. Затем раствор выливают на пед, нейтрализуют насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы промывают водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия, затем высушивают на сульфате натрия и выпаривают при пониженном давлении, Осадок очищают путем хроматографии на силикагеле (элюант: смесь дихлорметан:метанол:аммиак в объемном соотношении

93,5:6:0,5 . Получают 17,6 r 2-окси-3-(1-(1Нимидазол-4-ил)этил)-бензонитрила практически в чистом виде. Выход 83, Точка плавления 172ОС.

ЯМР-спектр (DMSO); дельта 1,52 (ЗН, d);

4,21(1Н, q); 6.86(1Н, t); 7,02(1Н, S); 7,41(1Н, dd); 7,44 (1К, dd); 7,85 (1Н, S).

3, 2-окси-3-(1-(1H-имидазол-4-ил)пентил)-бензонитрил.

Это соединение получают как в примере

2 из атил-4-бензилокси-3-оксо-бутаноата и

4-(1-хлорпентил)-1Н-имидазола, Полученное соединение используют в чистом виде на следующем этапе.

Пример 2, Получение 2-окси-3-(1-(1Mимидазол-4-ил)алкил)-бензамидов формулы

1 путем гидролиза 2-окси-3-(1-(1Н-имидазол4-ил)алкил)-бензонитрилов формулы II.

1, 2-Окси-3-((1 Н-имидазол-4-ил)метил)бенэамид.

Перемешивают до полного растворения

13,1 г (66 ммоль) 2-окси-3-((1Н-имидазол-4ил)метил)-бензонитрила (полученного по примеру 1.1) в 50 мл водного раствора 80 ной серной кислоты (об,). Затем нагревают до 65 С в течение 3 ч, Реакционную смесь выливают на лед и нейтрализуют бикарбонатом натрия, фильтруют и многократно экстрагируют фильтрат этилацетатом.

Органические фазы промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, высушивают на сульфате натрия и выпари1836353

4. Хлоргидраты (+) -2-окси-3-(1-(1Н-имидазол-4-ил)этил)-бензамида и (-) -2-окси-3((1-(1Н-имидазол-4-ил)этил)-бензамида.

Рацемический 2-окси-3-(1-(1Н-имида5 зол-4-ил)атил)бензамид (полученный в п.3) разлагают на его два энантиомера путем хроматографии на хиральной фазе альфагликопротеин (элюант: изопропиловый спирт:фосфатный буферный раствор 0,02

10 моль; рН 7; в объемном соотношении 1:99.

Затем преобразуют каждый энантимер амида в соответствующей хлоргидрат указанным способом. Таким образом получают в почти равных количествах .

15 а) хлоргидрат гидратированного (+) -2окси-3-(1-(1Н-имидазола-4-ил этил)-бензамида. Точка плавления 107,8 С (вода). (а)о25 =+82,04 (с ) 1, метанол).

ЯМР-спектр (DMSO): дельта 1,57 (ЗН, d);

20 3,30 (5Н (5Н; m); 4,56 (1Н, р); 6,83 (1 Н, t); 7,23 (1 Н, d d); 7,40 (1 Н, S); 7,82 (1 Н, dd); 7,92 (1 Н, m);

8,51 (1Н, m); 8,98(1Н, d), 13,5-14,5(2Н, m). б) хлоргидрат гидратированного (-) -2окси-3-(1-(1 Н-имидазол-4-ил)этил)-бенэами25 да. Точка плавления 107,4 С (вода).

fa)p = -79,13 (с = 1, метанол).

° ЯМР-спектр: идентичен предыдущему..

5. Хлоргидрат 2-окси-3-(1-(1Н-имидазол4-ил)пентил)-бензамид.

30 Это соединение получа рт, как в и, 1 из

2-окси-3-(1-(1 Н-имидазол-4- ил)пентил)-бензонитрила {полученного по примеру 1.3), Полученный таким образом 2-окси-3-(1(1Н-имидазол-4-ил)пентил)-бензамид раство35 ряют в растворе хлористоводородной кислоты 2,5 н, в этаноле, а хлоргидрат 2-окси -3-(1-(1Í-имидазол-4-ил)пентил)-бензамида осаждают . путем добавления диэтилового эфира.

50 вают при пониженном давлении. Осадок очищают путем хроматографии на силикагале

{элюант: смесь дихлорметан:метанол:аммиак в объемном соотйошении 84;15:1. Получают 9,8 г

2-окси-3-((1Н-имидазол-4-ил)метил)-бензамида. Выход 68%. Точка плавления 197,6 С, Анализ для С»Н»йзОъ %: расчетный: С 60,83; Н 5,07; N 19.35, фактический: С 60,91; Н 5,06; N 19,32.

2, Хлоргидрат 2-окси-3-((1Н-имидазол4-ил)метил)-бензамид.

Добавляют 2г2-окси-3-((1 Н-имидазол-4ил)метил)-бензонитрила (полученного по примеру 1.1) и 4 мл воды в 40 мл метанола, предварительно насыщенного при -10 С газообразным потоком хлористоводородной кислоты. Смесь перемешивают в течение 24 ч при температуре окружающей среды. Затем концентрируют раствор при пониженном давлении и нагревают осадок при 75 .C в течение 3 ч. Затем осадок дважды рекристаллифуют в воду. Получают 15 г хлоргидрата

2-окси-3-((1 Н-имидазол-4-ил) метил)-бе нзамида. Выход 59% Точка плавления 287,8 С.

Анализ для C»C»NaOz HCI, %: расчетный . С 52,07; Н 4,73; N 16,57;

СГ 14,0, фактический; С 52,04; Н 4,76; N 16,54; СГ

13,94, 3. Хлоргидрат 2-окси-3-(1-{1Н-имидазол-4-ил)этил)-бензамид, Перемешивают при 65 С в течение 3 ч суспензию 1,07,г (5 ммоль) 2-окси-3-(1-(1Н- . имидазол-4-ил)атил)-бенэонитрила (полученного по примеру 1.2) в 4 мл водного ,раствора 80%-ной серной кислоты (об),.Затем реакционную смесь выливают на лед и нейтрализуют бикарбонатом натрия. Экстрагируют несколько раз этилацетатом. Орган ические фазы высушивают на сульфате натрия, а 4 растворитель выпаривают при пониженномдавлении. Осадок поглощают посредством 50 мл водного раствора хлористоводороднои кис1 лоты 6 н. и затем нейтрализуют посредством водного раствора гидроокиси натрия 1 н. Об- 4 разовавшийся осадок фильтруют, промывают водой и диэтиловым эфиром и высушивают в вакууме. Получают 0,7 r 2-окси-3-(1-(1H-имидазол-4-ил)этил)-бензамида (В) в практически чистом виде. Выход 70%.

Полученное соединение преобразуют в хлоргидрат в этаноловом растворе хлористоводородной кислоты в присутствии диэтилового эфира. Точка плавления 240-243 С, Анализ для C12HtaNg02 НС1, %: 5 расчетный: С 53.83: Н 4,86: N 15.70;

СГ 13,27. фактический: С 54,0; Н 4,88; N 15,73;

С! 13,17.

ЯМР-спектр (DMSO): дельта 0,83 (ЗН, t); f,08 вЂ” 1,34 (4Н, m); 3-3-3,5 (2Н, m); 4,44 (1Н, 1);

6,82 (1 Н, t); 7,37-7,40 (2 Н, S + d); 7,82 (1 Н, d);

8,97 (1Н, S).

Фармакологическим испытаниям подвергались следующие соединения. полученные согласно изобретению: хлоргидрат 2-окси-3-((1Н-имидазол-4ил)метил)-бензамид (соединение А), хлоргидрат 2-окси-3-(1-(1 Н-имидазол-4ил)этил)-бензамид (соединение В); хлоргидрат (+) -2-окси-3-(1-(1Н-имидазол-4-ил)этил)-бензамид (соединение С).

1. Противоишемическая сердечная активность. а). Модель острой коронарной недостаточности у живой собаки.

У живой собаки, снабженной приспособлениями (пневматическая манжетка вокруг нижней и исходящей коронарйой ар1836353

10 терии и внутрисердечные электроды), на 6 мин перекрывается коронарная артерия посредством пневматической манжеты, что вызывает миокардную ишемию, которая отражается на электрокардиограмме посредством повышения линия S r. Противоишемическое действие соединения выражается в уменьшении повышения сегмента Sr.

В табл. 1 показано, что соединения, подвергшиеся испытанию при дозе DE2o, ммоль/кг, и введенные внутривенно группам из 10 животных, вызывают среднее

10 уменьшение, по меньшей мере на 20 повышения линии Ss у всех животных. В качестве контрольного соединения используют 1-(иэопропил-аминоэ-3-(1-нафти- . локси)-2-пропинол (или и ропанолол).

Из табл. 1 видно, что соединения, полученные согласно изобретению, обладают поразительной противоишемической активностью. б). Испытание на бегущей дорожке.

Использована группа иэ по меньшей мере 4 собак, снабженных приспособлениями (внутрисердечные электроды), которые имеют на уровне коронарной артерии органический стеноз. Он вызывает нарушение равновесия между потребностью и прито. ком кислорода, когда от животного требуется нагрузка, Это нарушение равновесия отражается на электрокардиограмме путем повышения линии Sr.

При испытании собака бежит со скоростью 12 км/ч по бегущей дорожке с уклоном

15 в течение 1 мин. При испытании регист- 35 рируется повышение линии S ти естественное повышение частоты биения сердца.

Эксперимент повторяют по меньшей мере 4 раза, а среднее из полученных значений принимается за контрольное значение 40 (100 ) для группы животных. Затем животное оставляют в покое как минимум 24 ч перед новым испытанием под действием изучаемого соединения. Изучаемое соединение медленно вво- 45 дится (за 1 мин) внутривенно за 5 мин перед новым испытанием усилия, В ходе испытания регистрируются те же самые парамет-. ры. В табл. 2 приводится для указанной дозы среднее наблюдаемое уменьшение ли- 50

-нии $х (в%) и снижение частоты биения сердца (биение/мин) по отношению к значениям частоты, получаемым в ходе первона- . чального испытания, Иэ табл. 2 видно, что соединение А обладает хорошей противоишемической активностью, подтвержденной сильным уменьшением линии Ят, что также отмечается при использовании пропранолола, но только при намного увеличенной дозе. Кроме того, в противоположность пропранололу, который одновременно вызывает сильное снижение сердечного ритма в течение испытания, что нежелательно и вредно для поддержания усилия, соединение А не препятствует естественному повышению частоты биения сердца в ходе испытания.

Следовательно, оно способствует правильной адаптации частоты биения сердца по отношению к усилию с одновременным препятствованием ишемии.

2. Противоишемическая мозговая активность а). Общая перманентная мозговая ишемия у крыс.

Самцы крыс (рода Вистар (масса 200вЂ”

250 r) анестезируются путем ингаляции галотана (1-57;), содержащегося в смеси NOz-Oz (70:30). Обе общие сонные артерии одновременно перевяэываются вблизи перекрестка внутренней сонной артерии и наружной.сонной артерии по технологии, описанной M,Ëå

Понсэн-Лафит и др. Фармакологический журнал (Париж), 14, (1983), 99 вЂ” 102.

Тестируемое соединение вводится внутрибрюшинным путем первый раз эа

30 мин перед перевяэыванием и затем через

30 и 270 мин после перевяэывания.

На следующий день и через день определяют неврологический дефицит у выживших животных по известному методу. В ходе этой оценки принимаются во внимание следующие сенсорно-моторные функции: самопроизвольная подвижность, рефлекс схватывания, зрительная реакция и реакция на потерю опоры, рефлекс сгибания лап, рефлекс выпрямления, тест подвешивания за хвост. Минимально возможное количество очков для животного, не подверженного ишемии, составляет 17.

В табл. 3 приводится применительно к соединению А, введенному внутрибрюшинно при дозе 0,76 мг/кг (3,2 нмоль), среднее значение неврологических очков, определенных для всех выживших животных контрольной группы и обработанной группы, зарегистрированных через 2 дня после перевязываний. Статистическое значение (P) разницы между этими средними значениями определяется по тесту Ман-Витнея.

Из табл. 3 видно, что соединение А при очень слабой дозе значительно смягчает у обработанных животных неврологический дефицит, вызванный ишемией. б) Односторонняя многочасовая мозговая ишемия у крыс.

У самцов крыс Спрага вЂ” Доулея (SPF), возрастом 8 вЂ” 9 недель вызывают постоян1836353

12 ную одностороннюю церебральную ишемию (или эмболизацию) путем введения в правую сонную артерию 2000 микросфер диаметром (58 2) мкм после перевязывания правой артерии птеригопалатины.

Исследуемое соединение вводят в первый раз за 30 мин до и второй раз после через 30 мин после эмболизации, а контрольной группе животных вводят только физиологическую сыворотку, Затем крыс оставляют в покое, У выживших животных через 6 дней после восстановления измеряют:

1) остаточный неврологический дефицит с помощью теста положения тела и походки животных (тест А, максимальное количество очков 4), В этом тесте оцениваются анормальное положение задних лап; контралатеральный наклон тела при передвижении; гомолатеральное продольное сгибание тела и анормальная походка.

2) сенсорно-моторные функции (самопроизвольная подвижность, рефлекс схватывания, зрительная реакция и реакция на потерю опоры (тест В, максимальное количество очков 10), (С.Капдевиль, ... см. выше).

3) латеризованная сенсорно-моторная ответная реакция (контралатеральная сторона) (тест С, максимальное количество очков 3). Она оценивается в комбинации .измерений зрительной реакции, рефлекса ориентации головы к боковому сенсорному раздражителю и кожно-подошвенного рефлекса.

4) осязательное отмирание с левой сТо роны (тест О, максимальное количество очков 300). B противоположность другим указанным тестам, для которых дефицит тем больше смягчается, тем больше счет, здесь дефицит тем больше, чем ближе счет к 300.

На седьмой день измеряют еще отек, имеющийся в различных гомолатеральных мозговых структурах, В табл,4 приводится для соединения

А, введенного внутрибрюшинным путем при дозе 0,76,игlкг (3,2 нмоль/кг), результаты, полученные в тестах А-О, т.е. среднее .значение неврологических очков, определенных по всем выжившим животным контрольной группы и обработанной группы через 6 дней. В ней указано также среднее изменение массы тела. измеренной на седьмой день.

Статистическое значение (Р) разницы между средними значениями, рассчитанными для контрольных животных и обработанных животных, определяется по тесту МанвЂ”

Витнея.

Из табл, 4 видно, что соединение А значительно смягчает неврологический дефи5 цит и поведение, вызываемое ишемией, и улучшает ход изменения массы обработанных животных.

В табл. 5 указано количество воды, удержанное в различных гомолатеральных

10 мозговых структурах и у контрольных животных, и у выживших обработанных животных на 7-й день после вынесения болезни.

Полученные результаты показывают, что обработка соединением А значительно

15 уменьшает гомолатерэльный отек в различных изучениях мозговых структурах.

3. Агонистической а -адренергическое свойство. а), Сравнительна я фиксация с радиоли20 гандом.

Целью экспериментов по сравнительной фиксации является измерение сродства, которое имеет соединение, полученные согласно изобретению, для ар-адренерги25 ческих рецепторов. Эти эксперименты выявляют сравнительность фиксации на

° адренергических рецепторах, с одной GTQроны, изучаемого соединения и, с другой стороны, радиолигэнда, который с этом ча30 стном случае ау-адренергических рецепторов, является (Н) клонидином, известным как избирательный az-адренергический аго.нист, Кривые смещения фиксации (Н) клони35 дина определяют при девяти концентрациях соединения А, составляющих 10 -10 моль/л, и с тремя различными мембранны.-, ми составами мозга крысы. Образцы инкубируют в течение 30 мин, затем фильтруют

40 в вакууме на фильтре Ватман GF/B. Фибтипы промывают три раза посредством 5 мл буферного раствора трис-НО (рН 7,5 вЂ” при

0 С), затем высушивают в течение 1 мин.

Радиоактивность измеряют в среде эко45 нофтор (-NENCorp,) Использующийся (H) клонидин (25,5 Cilììîëü) представляется фирмой Амерхэм, Сродство соединения А для à2-адренергических рецептордв рассчитывают из кривых перемещения (H) клонидина. Оно выражается концентраций (ICgp в моль/л) соединения А, необходимой для получения

50 -ного торможения фиксации радиолиганда на рецепторах. Полученные результа55 ты показывают, что соединение А имеет значительное сродство для а -адренергических рецепторов:

1Сщ (8,90ч-0,72) х 10 9 моль/л.

1836353.б). Раздражение выделенного предсердия морской свинки, Выделение норадреналина на уровне нервных окончаний регулируется механизмом ретроконтроля пресинаптическими а -адренергическими рецепторами. Этот механизм на предсердии морской свинки, Электрическое раздражение выделенного предсердия морской свинки приводит к выделению норадреналина, которое выражается в повышении частоты биения сердца (тахикардия), что тормозится а2-агонистом, таким, как, например, клонидин, в пропорции, которая зависит от использованной дозы агониста.

Действие а2-агониста может ограничиваться в присутствии а -специфического антагониста, такого, как альфа-йохимбин.

Активность!п чего соединений, полученных согласно изобретению, по отношению к пресинаптическим а2-адренергическим рецепторам определяют на выделенном предсердии морской свинки с электрическим раздражением по известному методу. Исследуемое соединение тестируют при увеличивающихся концентрациях 10 -10 моль/л. Определяют концентрацию (1Сза в моль/л), которая вызывает 307;-ное снижение максимальной тахикардии, исходно полученной при электрическом раздражении предсердия при отсутствии тестируемого соединения, В табл. 6 показаны.концентрации 1Сэа (в моль/л), полученные для соединений, согласно изобретению, а также для клонидина.

Из табл. 6 следует, что соединения, полученные согласно изобретению, противодействуют тахикардии, вызванной электрическим раздражением, при очень небольших концентрациях.

Кроме того, при концентрации альфайохимбина 10 моль/п концентрация сое-б динения А, необходимая для получения

30 -ного снижения тахикардии, превышает

10 моль/л, Эти результаты доказывают, что соединения, полученные согласно изобретению, действуют посредством специфического механизма через а2-агонистическое воздействие, в). Раздражение подвздошной кишки морской свинки.

Фрагменты продольных мышц, связанных с индикатором изометрического усилия, погружают в раствор тирада и натягивают с усилием 1 г.

Электрическое раздражение парасимпатических нервов, приводящих в фрагменты подвздошной кишки, вызывает сокращение мышцы. Это сокращение уменьшается в присутствии пресинаптического az- агониста, а уменьшение зависит от концентрации использованного агониста.

5 Это действие энтагонизируется одновременным наличием а.; -антагонистического соединения, такого, как альфа-йохимбин.

Изучаемые соединения тестируются при возрастающих концентрациях от 10

10 до 10э моль/л.

Определяют концентрацию (1Сьо в моль/л), которая уменьшает на 50 интенсивность сокращения мышцы.

В табл. 7 приводятся концентрации

15 1С5а(в моль/л), полученные для соединений, полученных согласно изобретению. Эти результаты показывают, что зти соединения являются активными при очень небольших концентрациях, 20 В присутствии альфа-йохимбина при концентрациях 10 моль/л концентрация соединений, например, А или Б, которая необходима для 507,-ного уменьшения интенсивности сохранения мышцы, является

25 более высокой и превышает 10 моль/л, что дополнительно подтверждает тот факт, что соединения, полученные согласно изобретению, действительно действуют на уровне пресинаптических с2-адренергических рецепторов, 4. Диуретическая активность.

Диуретическая активность соединений, полученных согласно изобретению, определяют на гончих собаках (6 кобелей и 6 сук)

35 посредством изучения случайных перекрестных перестановок, рандамизированных по 6 путям.

Изучаемое соединение вводится внутривенноо в увеличивающихся дозах 2; 6,5; 20;

65 и 200 рг/кг. В течение первых 3 ч после иньекции измеряют объем выделенной мочи, В табл. 8 для соединения А приводится среднее относительное увеличение (в $) вы45 деленной мочи по сравнению с группой животных, не получивших соединение.

Результаты показывают, что минимальная активная доза, вызывающая сравнительное статистическое увеличения (P <

0,05) мочевыделения составляет у кабелей

<6,6 /и/кн, а у сук вЂ” < 2ргlкг.

5, Токсичность.

Токсичность соединений, полученных согласно изобретению, определяют на самцах мышей NMRI посредством теста Ирвина.

Возрастающие дозы изучаемого соединения вводят внутрибрюшинно группам из трех мышей до достижения смертельной до1836353

Таблица1

Таблица 2

Таблица 3

* п вЂ” число выживших животных.

Таблица 4

Средние неврологические счета по истечении 6 дней после внесения болезни

*и вЂ” число выживших животных в каждой группе. зы (доза, вызывающая смерть двух животных из трех в течение 48 ч), В таблице 9 указана смертельная доза, отмеченная для соединений, полученных согласно изобретению.

Из табл. 9 следует, что соединения, полученные согласно изобретению, являются слаботоксичными.

Формул а изобретен и я

Способ получения замещенных 2-окси3-(1-(1 Н-имида зол-4-ил)ал к ил)-бе н замидов общей формулы О ОН р !!

H2N-С >, H H где R! вЂ” водород или С1-С4-алкил или их нетоксичных фармацевтически приемлемых солей кислот, отличающийся тем. что гидролиэуют в кислой среде 2-окси-3-(1-(1¹

5 имидазол-4-ил)алкил)-бензонитрил общей формулы

ОН В1

=-С 1- 1 ">, г

1О М

H где R1 имеет указанные значения, с выделением целевого продукта в свободном виде или в виде нетоксичных фармацевтически

15 приемлемых солей кислот, 1836353

Таблица 5

Таблица 6

Снижение тахикардии

* и - число испытаний

Таблица 7

Торможение сокращения подвздошной кишки морской свинки

Таблица 8

Анализ вэриантности:"Р < 0,05;.

ХХ р

Таблица 9

Количество воды в различных, гомолатеральных мозговых структурах

{среднее, )