Штамм bifidobacterium infantis 79-43, используемый для введения в состав бифидосодержащих препаратов-эубиотиков и продуктов лечебно-диетического питания

Штамм bifidobacterium infantis 79-43, используемый для введения в состав бифидосодержащих препаратов-эубиотиков и продуктов лечебно-диетического питания

Реферат

 

Использование: в медицине. Штамм Bifidobacterium infantis 79 - 43 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка. Штамм B.infantis 79 - 43 активно размножается на питательных средах разного состава, принятых в производстве бактерийных препаратов. Накапливает производственную биомассу к 16 - 24 ч культивирования с содержанием в 1 мл микробных клеток lg 8. Сквашивает молоко к 24 ч культивирования с образованием сгустка с хорошими вкусовыми и органолептическими свойствами. Продуцирует кислоты и ингибирует рост патогенной и условно-патогенной микрофлоры. Устойчив к ряду антибактериальных препаратов. 3 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой штамм бифидобактерий, который может быть использован для приготовления бактерийных препаратов-эубиотиков и лечебно-диетических продуктов.

Препараты и продукту, содержащие в своем составе бифидобактерии, предназначены для коррекции микрофлоры кишечника людей, страдающих дисбактериозом, возникшим в результате широкого применения антибактериальных препаратов, лучевой и химиотерапии, неблагоприятной экологической ситуации, стрессовых воздействий и т.п.

За рубежом используют препараты-эубиотики и кисломолочные продукты-йогурты, приготовленные на основе бифидобактерий видов B. bifidum, B. longum, B. adolescentis, B. breve (патент Франции N 2336886, N 2411008, патент ФРГ N 2134179, N 2421066, патент Швейцарии N 637297, патент Японии N 05227946, N 04320642. Существует препарат, приготовленный из разрушенных клеток смеси штаммов бифидобактерий видов B. longum и B. infantis, обладающий антиопухолевым действием (патент США N 4645667).

У нас в стране в качестве штаммов-продуцентов, используемых при создании препаратов-эубиотиков и продуктов лечебного питания, применяют бифидобактерии видов B. bifidum N 1, 791, B. londum B379M, B. adolescentis MC-42 (авт. св. N 343588, патент N 1347221, патент N 849779, патент N 864639).

В кишечнике человека встречаются бифидобактрии 5 видов - B.bifidum, B. longum, B. adolesctntis, B. breve и B. infantis, причем с наибольшей частотой виды B. bifidum, B. londum и B. adolescentis (39 - 75%). У детей грудного возраста в 30% случаях обнаруживаются и бифидобактрии видов B. breve и B. infantis, которые характерны для этой группы детей.

Целью изобретения является штамм Bifidobarterium in fantis подвид lactentis 79-43, способный активно наращивать микробную массу в питательных средах и сквашивать молоко к 24 часам культивирования и обладающий специфической активностью.

Штамм Bifidobacterium in fantis 79-43 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка в 1979 г, хранится в лиофилизированном состоянии и депонирован под N 156 в Государственной коллекции микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры человека ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского.

Культурально-морфологические признаки. Клетки представляют собой гр+ полиморфные палочки с бифуркацией или утолщением на 1-2х концах, склонные к образованию скоплений. В печеночной среде штамм образует колонии в виде комет. Логарифмическая фаза роста заканчивается к 24 часам. В жидких питательных средах растет по всей высоте обмена, кроме зоны аэробиоза.

Физиолого-биохимические признаки. Неподвижный, бесспорный облигатный анаэроб. Оптимальная температура выращивания 37,5 - 38^oC, pH питательных сред 7,2 - 7,4. Каталазу не образует, желатину не разжижает. Сбраживает глюкозу с образованием уксусной и L + молочной кислоты без образования газа, закисляя среду выращивания до pH 4,1 - 3,9. Ферментирует лактозу, ксилозу, маннозу, вариабельно маннит, инулин, не сбраживает арабинозу, целлобиозу, сорбит, салицин. Сквашивает стерильное молоко к 16 - 24 часам с образованием плотного сгустка.

Штамм к первым суткам наращивает микробную массу на питательных средах разного состава, активнее на гидролизатно-молочной среде (табл. 1) Штамм активно размножается к 16-24 часам в питательных средах и молоке, что является одним из основных показателей технологичности штамма. Штамм обладает специфической активностью. При культивировании на питательных средах продуцирует кислоты, наиболее активно - на гидролизатномолочной (табл. 2).

Штамм ингибирует рост натогенных и условно-патогенных микроорганизмов - шигелл Зонне, Флексинера, ЭПКП, стафилококка, протея (табл. 3).

Изучение спектра чувствительности к 14 применяемым антибактериальным препаратам выявило, что штамм устойчив к оксациллину, цефалотину, неомицину, канамицину, тетрациклину, олеандомицину, линкомицину, полимиксину; среднеустойчив к бензилпенициллину, карбенициллину; чувствителен к ампициллину, эритромицину, левомицетину, ристомицину.

Из приведенных данных следует, что штамм 79-43 активно наращивает микробную массу на питательных средах, принятых в производстве бактерийных препаратов в короткие 16 - 24 часа, сроки культивирования, содержанием микрооных клеток lg 7,88-8,03; обладает кислотообразующими и ингибирующими свойствами в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов; обладает устойчивостью к ряду антибактериальных препаратов.

Способность штамма 79-43 активно наращивать микробную массу в питательных средах и размножаться в молоке, сквашивая его, делает возможным использование его в составе бифидосодержащих бактерийных препаратов и лечебно-диетических продуктов.

Пример 1. Использование штамма 79-43 для получения бактерийного препарата.

Штамм 79-43 1-2-3-го пассажей культивируют при температуре 37,5 - 38^oC и PH среды 7,2 - 7,4 в течение 16 - 24 ч. К выращенной биомассе добавляют защитные среды высушивания (сахароза 80% и желатина 8% - 10-12%, обезжиренное молоко до 20%). Полученную суспензию разливают по 2 мл в ампулы или по 5 мл в пенициллиновые флаконы, замораживают при температуре минус 40 - 45^oC и лиофилизируют из замороженного состояния в вакуум-сушильных аппаратах. Полученный препарат содержит 10⁷-10⁸ живых клеток бифидобактерий. Согласно НТД на сухой бифидумбактерин (ФС 42-132 ВС-94) допускается содержание в 1 дозе препарата не менее 10⁷ живых бифидобактерий.

Пример 2. Использование штамма 79-43 в составе закваски для приготовления кисломолочного бифидумбактерина.

2.1 I-й пассаж. - Лиофилизированный штамм 79-43 вносят в питательную среду (печеночную, тиогликолевую, кукурузно-лактозную) из расчета 0,1 г сухой биомассы (1 доза) на 100 мл среды. Посевы инкубируют 24 ч. при 37,5 - 38^oC.

2-й пассаж. Полученную биомассу в количестве 10% вносят в среду накопления (1 л). Инкубируют 16-24 ч. при 37,5-38^oC.

Получение продукта. Выросшую закваску в объеме 5-10% вносят в емкости со стерильным молоком и инкубируют 16-24 ч. при 37,5-38^oC. В данном случае указанным количеством закваски получают 20 л продукта.

2.2 I пассаж. Лиофилизированный штамм 79-43 0,1 г сухой биомассы (1 доза) титруют методом десятикратным разведений в питательной среде и в обмене 10% посевного материала из 10^-2 - 10^-4 переносят в питательную среду (1 л). Инкубируют 24 ч. при 37,5 - 38^oC.

2-й пассаж. Полученную биомассу в количестве 10% вносят в среду накопления (10 л). Инкубируют 16 - 24 ч. при 37,5 - 38^o.

Получение продукта. Выросшую закваску в объеме 5% вносят в емкости со стерильным молоком и инкубируют 16 - 24 ч. при 37,5 - 38^oC. В данном случае указанным количеством закваски можно получить 200 л продукта.

Таким образом, предлагаемый штамм 79-43 является технологичным, поскольку активно накапливает биомассу в питательных средах в короткие, 16 - 24 ч. , сроки культивирования; сквашивает молоко в 24 часам с образованием плотного сгустка; обладает специфической активностью, продуцируя кислоты и подавляя рост патогенной и условно-патогенной микрофлоры. Штамм можно рекомендовать для введения его в состав препаратов-эубиотиков и лечебно-диетических продуктов питания.

Формула изобретения

Штамм Befidobacterium infantis (коллекционный N 156 Государственной коллекции микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры человека ГКНМ МНИИЭМ им. Г. Н.Габричевского), используемый для приготовления бифидосодержащих бактериальных препаратов и лечебно-диетических продуктов питания.

РИСУНКИ

Рисунок 1

QB4A Регистрация лицензионного договора на использование изобретения

Лицензиар(ы): ГУ "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского"

Вид лицензии*: НИЛ

Лицензиат(ы): ООО "АМФИТА"

Договор № РД0000219 зарегистрирован 08.04.2005

Извещение опубликовано: 27.06.2005        БИ: 18/2005

* ИЛ - исключительная лицензия        НИЛ - неисключительная лицензия

QB4A Регистрация лицензионного договора на использование изобретения

Лицензиар(ы): Федеральное Государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

Вид лицензии*: НИЛ

Лицензиат(ы): Общество с ограниченной ответственностью "АМФИТА"

Договор № РД0047004 зарегистрирован 16.02.2009

Извещение опубликовано: 27.03.2009        БИ: 09/2009

* ИЛ - исключительная лицензия        НИЛ - неисключительная лицензия

QZ4A - Регистрация изменений (дополнений) лицензионного договора на использование изобретения

Лицензиар(ы): Федеральное Государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Вид лицензии*: НИЛ

Лицензиат(ы): Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная фирма АМФИТА"

Характер внесенных изменений (дополнений):Изменена сторона договора: лицензиат ООО "Научно-производственная фирма АМФИТА"

Дата и номер государственной регистрации договора, в который внесены изменения: 16.02.2009 № РД0047004

Извещение опубликовано: 27.09.2009        БИ: 27/2009

* ИЛ - исключительная лицензия НИЛ - неисключительная лицензия

QB4A Государственная регистрация договора о распоряжении исключительным правом

Дата и номер государственной регистрации договора: 07.10.2011 № РД0088267

Вид договора: лицензионный

Лицо(а), предоставляющее(ие) право использования: Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU)

Лицо, которому предоставлено право использования: Общество с ограниченной ответственностью "АнвиЛаб" (RU)

Условия договора: НИЛ, на срок до 31.12.2012 на территории РФ.

Дата публикации: 20.11.2011