Способы ингибирования тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста, бициклические производные пиримидина, фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей тирозинкиназу рецептора эпидермального фактора роста активностью, и композиция, обладающая контрацептивным действием

Способы ингибирования тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста, бициклические производные пиримидина, фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей тирозинкиназу рецептора эпидермального фактора роста активностью, и композиция, обладающая контрацептивным действием

Реферат

 

Изобретение относится к новым бициклическим производным пиримидина или их фармацевтически приемлемым солям, способу ингибирования тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста, в частности при лечении раковых заболеваний, фармацевтической композиции, обладающей ингибирующей тирозинкиназу рецептора фактора эпидермального роста активностью, а также композиции, обладающей контрацептивным действием. Предлагаемые соединения соответствуют общей формуле I, где 1 - 2 из радикалов А - Е означает азот, а остальные радикалы - углерод или два смежных радикала А - Е вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом А - Е вместе с прилегающими атомами углерода означают пиридиновое, пиримидиновое, тиенильное, пиррольное, имидазольное кольцо; Х - группы NH, NHR⁵, где R⁵ означает низший алкил с 1 - 4 атомами углерода; n = 0, 1 или 2; R отсутствует или означает водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1 - 4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппу, моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе; Ar - фенил, тиенил, R¹, R², R³ и R⁴ независимо друг от друга отсутствуют или означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, ацилокси с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу, моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, ациламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода, при этом а) по крайней мере один из радикалов R¹ - R⁴ имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или алкоксила с 1 - 4 атомами углерода; б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R¹ и R⁴ отсутствуют, R³ - водород, Х - NH, n = 0, 1 или 2, Ar - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Ar - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Ar тиенил, то R² имеет значение, отличное от водорода, амино или моно- или диалкил аминогруппы с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной части, или его фармацевтически приемлемую соль в эффективном количестве. Способ ингибирования заключается во введении млекопитающему указанного выше соединения или его фармацевтически приемлемой соли. Композиции содержат указанное бициклическое соединение в эффективном количестве и, соответственно, фармацевтически или контрацептивно приемлемый эксципиент, разбавитель или носитель. 6 с. и 50 з.п.ф-лы, 3 табл., 17 ил.

Изобретение относится к области ингибирования протеинкиназы, более конкретно к способам ингибирования тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста, новым бициклическим производным пиримидина, фармацевтической композиции, обладающей ингибирующей тирозинкиназу рецептора эпидермального фактора роста активностью, и композиции, обладающей контрацептивным действием.

Поверхностные клеточные рецепторы семейства тирозинкиназных рецепторов эпидермального фактора роста (EGFR) играют роль в ряде заболеваний, например раковых заболеваний. Это семейство состоит из EGF рецептора (также называемого Erb-B1), Erb-B2 рецептора и его существенно активного онкопротеинового мутанта Neu, Erb-В3 рецептора и Erb-B4 рецептора. EGFR имеет в качестве наиболее важных лигандов эпидермальный фактор роста (EGF) и трансформирующий фактор роста альфа (TGF альфа). По-видимому, рецепторы проявляют только минимальные функции у взрослых людей, но возможно вовлекаются в процесс заболевания в значительной части всех видов рака, особенно рака ободочной кишки и груди. Близко родственные рецепторы Erb-B2, Erb-В3 и Erb-B4 имеют в качестве основных лигандов семейство герегулинов, а рецептор сверхэкспрессии и мутации был четко определен как основной фактор риска при плохом прогнозе рака груди. Кроме того, также было показано, что все четыре члена этого семейства рецепторов могут образовывать гетеродимерные сигнальные комплексы с другими членами семейства и что это может привести к синергической трансформирующей способности, если более одного члена семейства проявляет сверхэкспрессию при злокачественной опухоли.

Сверхэкспрессия более чем одного члена семейства, как было показано, является относительно обычной для злокачественных опухолей у людей.

Пролиферативное заболевание кожи псориаз в настоящее время не может успешно лечиться. Его часто лечат противораковыми средствами, такими как метотрексат, который имеет очень серьезные побочные эффекты и который является не очень эффективным при ограниченных токсичностью дозах, которые могут быть использованы. Полагают, что TGF альфа является основным фактором роста, сверхпродуцирующим при псориазе, поскольку у 50% трансгенных мышей, которые сверхэкспрессируют TGF альфа, развивается псориаз. Это наводит на мысль, что хороший ингибитор EGFR сигнализации может быть использован в качестве противопсориазного средства, предпочтительно, но не обязательно, при местном дозировании.

EGF является мощным митогеном для клеток почечных канальцев. Четырехкратное увеличение как EGF секреции мочи, так и EGF и мРНК было отмечено у мышей на ранней стадии диабета, вызванного стрептозойцином. Кроме того, повышенная экспрессия EGFR была отмечена у пациентов с пролиферативным гломерулонефритом (Roychaudhury и др., Pathology, 1993, 25, 327).

Сообщалось, что хронический панкреатит коррелирует с большим увеличением экспрессии как EGFR, так и TGF альфа. (Korc и др., 1994, 35, 1468). У пациентов с более серьезной формой заболевания, обычно при увеличении верхней части поджелудочной железы, также была показана сверхэкспрессия Erb-B2 рецептора (Friess и др., Ann. Surg. 1994, 220, 183).

В процессах созревания бластоцита, имплантации бластоцита в маточный эндометриум и в других случаях переимплантации ткани матки продуцируют EGF и TGF альфа (Taga Nippon Sanka Fujinka Gakkai Zasshi, 1992, 44, 939), имеют повышенные уровни EGFR (Brown и др., Endocrinology, 1989, 124, 2882) и легко могут быть индуцированы на продуцирование гепарин-связующих EGF за счет близости развившегося, но не прекратившего развития бластоцита. (Das и др., Development, 1994, 120, 1071). В свою очередь, бластоцит имеет достаточно высокий уровень TGF альфа и EGFR экспрессии (Adamson, Mol. Reprod. Dev., 1990, 27, 16). Хирургическое удаление подчелюстных желез, основного участка секреции EGF в организме, и лечение анти-EGFR моноклональными антителами, обе меры значительно снижают фертильность мышей (Tsutsumi и др. J. Endocrinology, 1993, 138, 437) за счет успешного снижения имплантации бластоцита.

Известны бис-моно- и бициклические ариловые и гетероариловые соединения, которые можно применять для ингибирования тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста и/или рецептора фактора роста тромбоцитов (см. заявку WO 92/20642, C 07 C 43/21, A 61 K 31/44, 31/50, 31/495, 26.11.1992 г.).

Задачей изобретения является расширение арсенала возможностей ингибирования тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста, например Erb-b2, Erb-b3 или Erb-b4.

Поставленная задача решается нижеописанными объектами.

Первым объектом изобретения является способ ингибирования тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста при лечении млекопитающего путем введения млекопитающему бициклического производного, который заключается в том, что в качестве бициклического производного используют бициклическое производное пиримидина общей формулы (I) где 1-2 из радикалов A - E означает азот, а остальные радикалы углерод, или два смежных радикала A - E вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом A - E вместе с прилегающими атомами углерода означают пиридиновое, пиримидиновое, тиенильное, пиррольное, имидазольное кольцо, X - группы NH, NHR⁵, где R⁵ означает низший алкил с 1 - 4 атомами углерода, n - 0, 1 или 2, R - отсутствует или означает водород, алкил с 1-4 атомами углерода, алкоксил с 1-4 атомами углерода, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1-4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппа, моно- или диалкиламиногруппа с 1-4 атомами углерода в каждой алкильной группе, Ar - фенил, тиенил, R¹, R², R³ и R⁴ независимо друг от друга отсутствуют или означают водород, алкил с 1-4 атомами углерода, алкоксил с 1-4 атомами углерода, ацилокси с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу, моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, ациламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода, при этом а) по крайней мере один из радикалов R¹ - R⁴ имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1- 4 атомами углерода или алкоксила с 1-4 атомами углерода, б) если E и В означают азот, D и A - углерод, R¹ и R⁴ отсутствуют, R³ - водород, X - NH, n - 0,1 или 2, Ar - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Ar - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Ar тиенил, то R² имеет значение, отличное от водорода, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1-4 атомами углерода в каждой алкильной части, или его фармацевтически приемлемую соль в эффективном количестве.

Предпочтительные признаки предлагаемого способа включены в подпункты 2 - 50 формулы изобретения.

Вторым объектом изобретения являются бициклические производные пиримидина вышеприведенной формулы (I), где R - R⁴, X, Ar, A, B, D, E и n имеют вышеуказанные значения, при этом а) по крайней мере один из радикалов R¹ - R⁴ имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1-4 атомами углерода или алкоксила с 1-4 атомами углерода, б) если E и B означают азот, D и A - углерод, R¹ и R⁴ отсутствуют, R³ - водород, X - NH, n - 0,1 или 2, Ar - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Ar - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Ar - тиенил, то ² имеет значение, отличное от водорода, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной части, их отдельные стереоизомеры, рацемат или смесь диастереомеров или их фармацевтические соли или гидраты.

Предпочтительными бициклическими производными пиримидина формулы (I) являются соединения, выбранные из группы, включающей 6-амино-4-(3-броманилино)пиридо[3,2-d] пиримидин; 4-(3- броманилино)-6-метиламинопиридо[3,2-d] пиримидин: 4-(3- броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,2-d]пиримидин; 7-амино-4-(3- нитроанилино)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7-амино-4-(3-броманилино) пиридо[4,3-d] пиримидин; 7-амино-4-(4-броманилино)пиридо[4,3- d]пиримидин; 7-амино-4-(3-трифторометиланилино)пиридо[4,3- d]пиримидин; 7-ацетиламино-4(3-броманилино)пиридо[4,3- d]пиримидин; 7-ацетамидо-4-бензиламинопиридо [4,3-d] пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,4-d)]пиримидин.

Третьим объектом изобретения является фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей тирозинкиназу рецептора эпидермального фактора роста активностью, которая в смеси с фармацевтически приемлемым эксципиентом, разбавителем или носителем включает бициклическое производное пиримидина вышеприведенной общей формулы (I) или его фармацевтическую соль в эффективном количестве.

Четвертым объектом изобретения является способ ингибирования тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста при лечении раковых заболеваний, псориаза, панкреатита или почечных заболеваний путем введения млекопитающему бициклического производного пиримидина вышеприведенной общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в эффективном количестве.

Данный способ может также применяться при лечении псориаза, панкреатита или почечных заболеваний.

Пятым объектом изобретения является способ ингибирования тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста для предотвращения имплантации бластоцита путем введения млекопитающему бициклического производного пиримидина вышеприведенной общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в эффективном количестве.

Шестым объектом изобретения является композиция, обладающая контрацептивным действием, которая включает в смеси с контрацептивно приемлемым эксципиентом, разбавителем или носителем бициклическое производное пиримидина вышеприведенной общей формулы (I) или его фармацевтическую соль в эффективном количестве.

Бициклические производные пиримидина вышеприведенной общей формулы (I) можно получать известными способами, например представленными на схемах I - XIX (см. в конце описания), в которых Ar означает замещенный фенил или тиенил.

Замещение 2-хлора в 2,6-дихлор-3-нитропиперидине проводят с помощью цианида одновалентной меди в N-метил-2-пирролидоне (NМП). Замещение второго хлора в этом нитриле на фторид на этой стадии может быть предпочтительным. Затем проводят мягкое восстановление нитрогруппы в условиях, когда галоген не гидролизуется. Гидролиз нитрила с последующей кристаллизацией орто-формита и хлорирование по типу Вильсмейера приводят к дигалогенпиридопиримидину. Замещение более реактивного 4-хлора на соответствующий амин проводят после замещения 6-галогена на соответствующий нуклеофил для образования конечных продуктов. Данным способом можно получать также соединения, у которых один из R¹ или R² означает водород, а другой является низшим алкоксилом; или один из R¹ или R² является водородом, а другой - аминогруппой: или один из R¹ или R² означает водород, а другой является низшей моно- или диалкиламиногруппой; или один из R¹ или R² означает водород, а другой - низший алкил.

Замещение хлора в 2-хлор-3,5-динитропиридине проводят с помощью цианида меди в NМП. Восстановление нитрогрупп в аминогруппы проводят после гидролиза нитрила в амид. Его циклизуют в пиримидон с помощью ортоформиата, который превращают в хлорид с помощью хлорангидрида ортофосфорной кислоты, или при желании превращают в тиометильное производное путем обработки пентасульфидом фосфора, потом метилйодидом и мягким основанием. Замещение соответствующим амином дает целевое 7-аминосоединение. Аминная функция может быть восстановительно алкилирована или активирована диазотированием аминогруппы в кислых или щелочных условиях, затем восстановлена в гидразид или превращена в низший алкил, простой эфир или в галоген при действии купрата или сочетанием Стилла по методикам, известным специалистам в данной области. Альтернативно, амин может быть восстановительно аминирован с образованием алкиламинной боковой цепи. Данным способом можно также получать соединения, упомянутые выше в связи с описанием схемы I.

Обработка ЛДА (диизопропиламид лития) с последующей обработкой боратом/пероксидом водорода позволяет ввести 3-гидрокси-заместитель. Если пиридин подвергают 2-му металлированию в положении 4, спирт может быть защищен как ТИПС (триизопропилсилиловый) простой эфир, который будет вызывать второе металлирование в положении 5. Могут быть использованы альтернативные нитрования, такие как превращение литиевого промежуточного производного в станнан и обработка тетранитрометаном, или использование NO₂BF₄ (нитроний-тетрафторборат). C₁ - замещение может быть проведено с использованием цианида одновалентной меди или других источников ионов цианида. После гидролиза нитрила и восстановления нитрогруппы может быть использован ортоформиат вместо формамида для циклизации и, возможно, что некоторые циклизации будут требовать замещения F на MeS перед реакцией. Положение 4 активируют хлорированием, а затем вводят амин с боковой цепью. Окончательное замещение может быть выполнено с помощью алкоксидных или аминных нуклеофилов. Данным способом можно также получать соединения, у которых R¹ и R² являются низшими алкоксилами; один из R¹ или R² означает аминогруппу, а другой является низшим алкоксилом; или один из R¹ или R² означает моно- или диалкиламиногруппу, а другой - низший алкоксил.

Применение 6-алкилхинальдиновой кислоты после ионного бромирования в жестких условиях дает ангидрид, который раскрывают аммиаком, рециклизуют в имид и затем проводят разложение по Гофману с потерей активного карбонила. Циклизацию и присоединение циклической боковой цепи обычным образом проводят путем сочетания по Стиллу для введения алкильной группы, радикала R¹ и/или R².

Динитрование 2,6-диоксипиридина проводят для превращения в очень реактивное дихлорсоединение. Динитродихлорпиридин просто замещают цианидом одновалентной меди в ММП, а затем соединение восстанавливают в мягких условиях в диамин. Нитрил гидролизуют до амида, который затем циклизуют в пиридопиримидон, который хлорируют обычным путем. Замещение более реактивного хлора в 4-боковой цепи проводят после замещения 6-хлора алкоксидом. Для получения соединений, у которых R¹ или R² означает моно- или диалкиламино, а другой - низший алкоксил, амин должен быть соответственно алкилирован по методикам, известным специалистам в данной области.

2,4-Диамино-5-цианопиридин может быть циклизован непосредственно во многие производные 4-бензиламинопиридопиримидина при обработке бензиламином и муравьиной кислотой при высокой температуре. Для менее нуклеофильных аминов 2,4-диамино-5-цианопиридин превращают путем обработки этилортоформиатом/уксусным ангидридом, последующей циклизацией с помощью гидросульфид-иона в безводных условиях с получением 7-амино-4-тионо-3Н-пиридо/4,3-d/-пиримидина. S-алкилирование и замещение соответствующим амином дают целевой продукт. Если R² не является аминогруппой, амин может быть ацилирован или восстановительно алкилирован. Альтернативно, 2,4-диамино-5-цианопиридин может быть гидролизован в соответствующий амид и эта группа может быть циклизована в 7-амино-4-оксо-3Н-пиридо/4,3-d/-пиримидин с помощью ортоформиата. Диазотирование 7-аминогруппы и замещение фтором позволяют ввести другие аминные и алкоксидные нуклеофилы в конце синтеза, после того как заместитель был введен обычным образом. Диазотирование и замена аминогруппы бромом позволяют провести сочетания Стилла в положении 7.

Данным способом можно получать соединения, у которых R² означает низший алкил, низший алкоксил, аминогруппу или низшую моно- или диалкиламиногруппу.

2-Хлор-5-нитропиридин превращают в соответствующее 2-фторсоединение с помощью фторида калия в диметилсульфоксиде. Восстановление нитрогруппы с последующей обработкой Boc-ангидридом (Boc = трет.-бутоксикарбонил) дает Вос-аминопроизводное, которое металлируют и карбоксилируют в 4-положении. Удаление Boc-группы с помощью трифторуксусной кислоты и циклизация пиримидонового цикла формамидом дают 6-фтор-4-оксо-3H-пиридо(3,4-d)пиримидин. Его хлорируют в положении 4 обычным образом и вводят 4-боковую цепь через замещение соответствующим амином. Замещение 6-фтора соответствующими нуклеофилами приводит к различным конечным продуктам. Если фтор замещают на тиометоксид, то он, в свою очередь, может быть замещен алкильными группами в катализируемых никелем замещениях Гриньяра. Данным способом можно получать соединения, у которых R¹ означает низший алкил или алкоксил, аминогруппу или низшую моно- или диалкиламиногруппу.

Нитрование 2-метоксиникотиновой кислоты с последующим замещением активированной метоксигруппы и циклизацией пиримидонового цикла можно проводить в одну стадию с помощью формамидина, или, альтернативно, в две стадии с помощью аммиака с последующей циклизацией с помощью эквивалента формамида. Карбонил превращают в хлорид и замещают боковой цепью обычным способом, а затем селективно восстанавливают нитрогруппу в аминогруппу. Она может быть алкилирована, ацилирована или диазотирована. Диазосоединение может быть превращено в гидроксильное или в бромидное или иодидное соединения, и эти последние могут быть введены в реакцию сочетания Стилла для введения низшего алкила, алкоксила, аминогруппы, моно- или диалкиламиногруппы радикала R¹.

Этот путь использует известное металлирование и карбоксилирование 2,6-дифторпиридина с последующим замещением 2-фтор-заместителя. Циклизация пиримидонового кольца с помощью формамида, последующее превращение карбонила в хлорид обычным способом дает хлорфторпиридопиримидин. Арил(алкил)аминная боковая цепь вводится путем замещения более реактивного пиримидинового хлора, затем вводят заместитель R² путем фторидного замещения. Для введения алкила используют замещение фтора алкоксидом, последний простой эфир расщепляют до пиридона, проводят O- трифлатирование и сочетание Стилла. Данным способом получают соединения, у которых R₂ означает низший алкил или алкоксил, аминогруппу, моно- или диалкиламиногруппу.

Эта схема основана на металлировании 2,6-дифторпиридина подобно схеме IX. Первое металлирование используют для введения кислорода, а второе - для введения карбоновой кислоты. Если требуется провести второе металлирование в положении 5, кислород может быть защищен как очень массивный ТИПС-простой эфир и может потребоваться более сильное основание, чем ЛДА. Аммиак вводят в положение 2 при высокой температуре и давлении, циклизуют пиридоновое кольцо, активируют в положении 4 обычным способом, а затем замещают в положении 4 боковой цепью. Замещение 7-фтор-заместителя соответствующим нуклеофилом, последующие превращения, как описано в предыдущих схемах, завершают синтез. Данным способом можно также получать соединения, у которых R¹ и R² означают низший алкоксил, или один из R¹ и R² означает аминогруппу, а другой является низшим алкоксилом, или один из R¹ или R² означает низшую моно- или диалкиламиногруппу, а другой означает низший алкоксил.

Нитрование коммерчески доступной дихлорникотиновой кислоты проводят путем селективного замещения более реактивного хлора в мягких условиях, а затем более жесткого замещения другого хлора в соответствующем порядке. Полученную в результате 6-алкокси-2- амино-5-нитроникотиновую кислоту циклизуют в пиримидон и превращают 4-карбонил в хлорид и замещают обычным образом на подходящий амин, получая 4-амино-7-алкокси-6-нитропиридо(2,3-d) пиримидин. Восстановление нитрогруппы с последующим любым желаемым алкилированием дает целевые продукты.

Реакция подходящей S-алкилизотиурониевой соли с метоксиметилидинмалоно-нитрилом приводит к полностью функционализированному пиримидиновому предшественнику. Первоначально образовавшийся пиримидин может быть замещен по S-этильной группе на R² до или после гидролиза нитрила, если замещение или окисление позже оказывается проблематичным. Замещение S-этильной группы также может быть достигнуто без окисления для активации серы. Циклизацию второго пиримидинового цикла проводят после активации 4-карбонила осернением и алкилированием. Даже если 7-тиогруппа не была замещена в этот момент, предпочтительно происходит введение 4-амино-боковой цепи. Данным способом можно получать соединения, у которых R² означает низший алкоксил, низшую моно- или диалкиламиногруппу или аминогруппу.

3H-тиено(3,2-d)пиримид-4-он может быть получен по стандартным методикам из коммерчески доступного этил-3-аминотиофенкарбоксилата и формамида. Превращение карбонила в хлорид по стандартным методикам с последующим замещением подходящим амином дает целевые тиено(3,2-d)пиримидины. Если R² не является водородом, подходящий электрофил, например нитрогруппа, для заместителей, основанных на аминогруппе или диазотированных производных, или бром для конечных продуктов, получаемых сочетанием Стилла, может быть введен на показанной или более ранней стадии, а затем превращен в ² путем восстановления или аминирования, например, или с помощью сочетания Стилла, или другими известными специалистам в данной области способами. Данным способом можно также получать соединения, у которых A и B означают углерод, a D и E, взятые вместе, означают атом серы, R¹ или R² означают водород, низший алкил, низший алкоксил, амино или низшую моно- или диалкиламиногруппу.

Тиено(2,3-d)пиримид-4-он получают путем синтеза Гриньяра из 2,5-дитиана и этилцианоацетата с последующей циклизацией с формамидом. Превращение карбонила в хлорид по стандартным методикам с последующим замещением подходящим амином дает целевые тиено(2,3-d)пиримидины.

Для получения пирроло(2,3-d)пиримидина циклизуют пиримидиновый цикл в цианоаминопиррол известными способами. Активация и замещение тиола боковой цепью могут быть проведены до или после возможного электрофильного замещения пиррольного цикла. Данным способом можно также получать соединения, у которых A и B, взятые вместе, означают атом азота, a D и E означают углерод, R¹ или R² означают водород, низший алкил, низший алкоксил, аминогруппу или низшую моно- или диалкиламиногруппу.

Получение пирроло(3,2-d)пиримидина проводится с помощью известной конденсации ортоформиата с подкисленной 4-метильной группой 6-пиримидонов с образованием пирролопиримидина, как показано выше. Боковая цепь может быть введена по стандартным методикам, таким как в схеме 1, и заместитель R² может быть введен по стандартной методике в химии электрофильного замещения, как описано выше.

Эти соединения могут быть получены при непосредственном замещении галогена в соответствующих 6-хлорпуринах по хорошо известным из уровня техники методикам. Заместитель R¹ может быть введен путем легкого электрофильного замещения в активированном положении 8 пуринового цикла с последующими типами превращений, описанных в нижеприведенных примерах. Данным способом можно также получать соединения, у которых A и B, взятые вместе, означают атом азота, D означает углерод, E означает азот, R¹, R³ и/или R⁴ означают водород или низший алкил, a R² означает водород, низший алкил, низший алкоксил, аминогруппу или низшую моно- или диалкиламиногруппу.

Реакция 6-хлор-4-метилтиопиримидина с ЛДА и потом с диметилформамидом дает соответствующий 5-альдегид, который обрабатывают гидразином, чтобы замкнуть цикл, получая 4-метилтиопиразоло(3,4-d)пиримидин, при замещении которого соответствующим амином получают целевые производные пиразоло (3,4-d)пиримидина. Данным способом можно получать соединения, у которых R^1/4 означают водород, низший алкил, если находятся на азоте, или H, низший алкил, низший алкоксил, амино- или низшую моно- или диалкиламиногруппу, если находятся на углероде.

Нитрование пиразол-3-карбоновой кислоты с последующем восстановлением приводит к 4-аминопиразол-3-карбоновой кислоте. Ее циклизуют в пиразоло(3,4-d)пиримид-4-он с помощью соляно-кислого формамидина и проводят замещение карбонила на галоид по стандартным методикам, затем замещают хлор на соответствующий амин, получая целевой пиразоло(4,3-d)пиримидин.

Получение бициклических производных пиримидина вышеприведенной общей формулы (I) поясняется следующими примерами.

ПРИМЕР 1 4-Анилинопиридо(3.2-d)пиримидин мезилат 3Н-Пиридо(3.2-d) пиримидин-4-OH Раствор 2,00 г (9,91 ммоля) 6-хлор-3-нитропиколинамида в 100 мл смеси этилацетата с метанолом (1:1) гидрируют на 0,40 г 5%-ного палладия-на-угле при 60 фунт/дюйм² [= 4,219 кг/см²] в течение 6 дней с добавлением свежего катализатора через 2 и 4 дня. После удаления катализатора фильтрованием раствор концентрируют досуха, получают 3-аминопиколинамид в виде оранжевого масла, которое используют непосредственно на следующей стадии. Сырой продукт перемешивают при кипячении с обратным холодильником в 50 мл триэтилорто-формиата в течение 42 часов; в течение этого времени образуется каштановый осадок. После охлаждения твердый продукт отфильтровывают, тщательно промывают петролейным эфиром и сушат в вакууме, получают 1,27 г (87%) 3Н-пиридо(3,2-d)пиримидин-4-она, т.пл. 343 -345^oC.

4-Хлорпиридо(3,2-d)пиримидин Суспензию 1,00 г (6,80 ммоля) указанного выше пиримидона в 30 мл хлорокиси фосфора кипятят с обратным холодильником в течение 4 часов, затем концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток распределяют между дихлорметаном и насыщенным раствором бикарбоната натрия, отделяют и обрабатывают органический слой, получают 0,97 г (86%) 4-хлорпиридо(3,2-d)пиримидина в виде каштанового твердого продукта, т. пл. 335^oC (разложение), который используют без дополнительной характеристики.

4-Анилинопиридо(3,2-d)пиримидин-мезилат Раствор 84 мг 4-хлорпиридо[3,2-d] -пиримидина (0,5 ммоля), 56 мг (0,6 ммоля) анилина и 62 мг триэтиламина (0,6 ммоля) в 2 мл этанола кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 2 часов. Сырую реакционную смесь очищают препаративной ТСХ (тонкослойная хроматография) на пластинах с диоксидом кремния, элюируют один раз 3% метанола в хлороформе. Экстрагируют основную полосу и выпаривают досуха при пониженном давлении, твердый остаток растворяют в 5 мл ацетона, фильтруют и медленно при перемешивании прибавляют 32 мкл (0,5 ммоля) метансульфоновой кислоты. Остаток собирают фильтрованием, промывают ацетоном и сушат в вакуумной печи; получают 91 мг (57%) 4-анилинопиридо(3,2-d)пиримидин-мезилата в виде матовых желтых игл.

¹Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 11,75 (1H, с. шир); 9,11 (1 Н, дд, J = 1,5, 4,3 Гц); 8,97 (1H, с); 8,32 (1H, дд, J = 1,5; 8,4 Гц); 8,12 (1H, дд, J = 4,3, 8,5 Гц); 7,88 (2H, д, J = 8,2 Гц); 7,49 (2H, т, J = 8,0 Гц); 7,32 (1H, т, J = 7,0 Гц); 2,34 (3H, с).

ПРИМЕР 2 4-Бензиламинопиридо(3,2-d)пиримидин Раствор 0,10 г (0,60 ммоля) свежеприготовленного 4-хлорпиридо (3,2-d)пиримидина [полученного, как описано в предыдущем эксперименте] и 0,13 мл (1,20 ммоля) бензиламина в 15 мл пропан-2-ола, содержащий следы концентрированной соляной кислоты, нагревают в течение 30 минут при 50^oC, затем концентрируют досуха. Остаток распределяют между водой и этилацетатом, органический слой отделяют и обрабатывают, хроматографируют на силикагеле. Этилацетат элюирует головную фракцию, тогда как смесь метанола с этилацетатом (1:9) элюирует 4-(бензиламино)пиридо[3,2-d)пиримидин (0,11 г, 77%).

¹Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,67 (1 Н, с); 6,50 (1H, дд, J = 4,3, 1,5 Гц); 8,10 (1H, дд, J = 8,5, 1,5 Гц); 7,63 (1H. дд, J = 8,8, 4,3 Гц); 7,55 (1H, шир.); 7,41-7,29 (5Н, м); 4,86 (2H, д, J = 5,9 Гц).

ПРИМЕР 3 4-(3-Броманилино)пиридо[3,2-d]пиримидин Проводят реакцию полученного, как описано в предыдущем примере, хлорпиридо(3,2-d)пиримидина с 3-броманилином в пропан-2-оле, содержащем следы концентрированной соляной кислоты при 50^oC в течение 30 минут, затем продукт хроматографируют на силикагеле и получают с выходом 87% 4-(3-бромфенил) аминопиридо[3,2-d]пиримидин.

¹H-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 9,19 (1H, ш); 8,83 (1H, с); 8,80 (1H, дд, J = 4,3, 1,5 Гц): 8,29 (1H, шир.); 8,19 (1H, дд, J = 8,5, 1,5 Гц); 7,83 (1H, м); 7,76 (1H, дд, J = 8,5; 4,3 Гц); 7,29-7,27 (2H, м).

ПРИМЕР 4 4-(3-Броманилино)-6-фторпиридо[3,2-d]пиримидин 2-Циано-6-фтор-3-нитропиридин Смесь 10,0 г (0,054 моля) 6-хлор-2-циано-3-нитропиридина и 9,48 г (0,163 моля) фторида калия в 200 мл ацетонитрила кипятят с обратным холодильником в течение 18 часов при перемешивании, затем выливают в воду и экстрагируют этилацетатом. Экстракт промывают водой и обрабатывают, остаток хроматографируют на силикагеле, элюируют смесью этилацетата с петролейным эфиром (3: 7), получают, после удаления растворителя при пониженном давлении, 7,2 г (79%) 2-циано-6-фтор-3-нитропиридина.

¹H-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,79 (1H, дд, J = 9,0, 6,0 Гц); 7,48 (1H, дд, J = 9,0, 3,0 Гц).

6-Фтор-3-нитропиридин-2-карбоксамид Раствор 1,40 г 2-циано-6-фтор-3-нитропиридина (8,39 ммоля) в 30 мл 90%-ной серной кислоты нагревают при 70^oC в течение 90 мин, затем охлаждают, выливают на лед и подщелачивают концентрированным аммиаком. Экстракция этилацетатом и обработка дают 0,94 г (61%) 6- фтор-3-нитропиримидин-2-карбоксамида.

¹H-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,70 (1H, дд, J = 8,9 Гц, 6,5 Гц); 8,30 и 8,03 (1H, 1H шир. с); 7,62 (1H, дд, J = 8,9, 2,9 Гц).

6-Фтор-3H-пиридо(3,2-d)пиримид-4-он Раствор 1,50 г (8,10 ммоля) 6-фтор-3-нитропиридин-2- карбоксамида в этилацетате гидрируют на 5%-ном палладии-на-угле (0,30 г) при 60 фунт/дюйм² (= 4,219 кг/см²) в течение 2 часов. После удаления катализатора фильтрованием растворитель отгоняют при пониженном давлении, получают остаток сырого 3-амино-6- фторпиримидин-2-карбоксамида, который используют непосредственно на следующей стадии. Добавляют 60 мл триэтилортоформиата, после чего смесь нагревают и кипятят с обратным холодильником при перемешивании в течение 18 часов. Охлажденную смесь разбавляют равным объемом петролейного эфира, полученный осадок собирают фильтрованием и тщательно промывают петролейным эфиром, получают 6-фтор-3H-пиридо(3,2-d)пиримид-4-он (1,26 г, 84%).

¹H-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,72 (1H, шир. с); 8,31 (1H, дд, J = 8,6, 7,7 Гц); 8,20 (1H, с); 7,66 (1H, дд, J = 8,6, 3,0 Гц).

4-(3-Броманилино)-6-фторпиридо(3,2-d)пиримидин Суспензию 0,2 г (1,21 ммоля) 6-фтор-3H-пиридо(3,2-d)пиримид-4-она в 30 мл хлорокиси фосфора кипятят с обратным холодильником при перемешивании до тех пор, пока она не станет гомогенной (2 часа), а затем еще 1 час. Удаляют избыток хлорокиси фосфора при пониженном давлении, остаток распределяют между дихлорметаном и насыщенным водным раствором дикарбоната натрия. Обработка органической части дает сырой 4-хлор-6-фторпиридо(3,2-d)пиримидин (100%) в виде нестабильного твердого продукта, который используют непосредственно на следующей стадии. Раствор 0,20 г (1,1 ммоля) 4-хлор-6-фторпиридо(3,2-d)пиримидина и 0,12 мл (2,18 ммоля) 3-броманилина в 20 мл пропанола-2, содержащего 1 каплю конц. соляной кислоты, кипятят с обратным холодильником в течение 15 минут, затем охлаждают, выливают в воду и экстрагируют этилацетатом. Экстракт обрабатывают и хромографируют остаток на силикагеле, элюируя смесью этилацетат/петролейный эфир (1:2); после удаления растворителя при пониженном давлении получают 0,18 г (52%) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо (3,2-d)пиримидина.

¹H-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,82 (1H, с); 8,65 (1H, шир. с); 8,31 (1H, т, J = 7,4 Гц); 8,27 (1H, шир. с); 7,77 (1H, м); 7,41 (1H, дд, J = 8,9 Гц, 2,2 Гц); 7,29 (2H, шир.с).

ПРИМЕР 5 4-(3-Броманилино)-6-хлорпиридо(3,2-d)пиримидин 6-Хлор-3-нитропиколинамид Раствор 1,00 г (5,45 ммоля) 6-хлор-3-нитропиколинонитрила в 15 мл 90%-ной серной кислоты нагревают при 70^oC в течение 3,5 часов, а затем выливают в ледяную воду. Смесь экстрагируют четыре раза этилацетатом, а затем объединенные экстракты обрабатывают, получая 0,80 г (73%) 6-хлор-3-нитропиколинамида.

¹H-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,55 (1H, д, J = 8,5 Гц); 8,31 и 8,04 (1H, 1H, 2 шир.с); 7,93 (1H, д, J = 8,5 Гц).

6-Хлор-3H-пиридо(3,2-d)пиримидин-4-он Раствор 0,30 г 6-хлор-3-нитро-пиколинамида (1,49 ммоля) в 30 мл этилацетата гидрируют при 60 фунт/дюйм² (= 4,219 кг/см²) на 0,10 г 5%-ного палладия-на-угле в течение 20 минут. После удаления катализатора фильтрованием раствор концентрируют досуха, получают 3-амино-6-хлорпиколинамид в виде желтого масла, которое непосредственно используют на следующей стадии. Его растворяют в 30 мл триэтилортоформиата и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 18 часов. Добавляют 30 мл петролейного эфира к охлажденному раствору, отфильтровывают полученный в результате осадок сырого 6-хлор-3H-пиридо(3,2-d)пиримидин-4-она (0,27 г, 99%) и сушат в вакуумной печи.

4-(3-Броманилино)-6-хлорпиридо(3,2-d)примидин Суспензию вышеуказанного хиназолона (0,20 г; 1,10 ммоля) в 30 мл хлорокиси фосфора кипятят с обратным холодильником в течение 3 часов, затем концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток распределяют между дихлорметаном и насыщенным раствором бикарбоната натрия, обрабатывают органическую часть, получают 0,16 г (73%) 4,6-дихлорпиридо(3,2-d)пиримидина в виде каштанового твердого продукта, который используют непосредственно на следующей стадии. Раствор 0,16 г (0,80 ммоля) сырого дихлорпиридопиримидина и 0,17 мл (1,60 ммоля) 3-броманилина в 25 мл пропанола-2, содержащего следы конц. соляной кислоты, нагревают при 50^oC в течение 30 минут. Охлажденную смесь выливают в насыщеный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом, экстракт обрабатывают и хроматографируют на силикагеле. Элюирование смесью этилацетата с петролейным эфиром (1:4) дает 3-бромалин, тогда как смесь этилацетат/петролейный эфир (1:1) элюирует 0,17 г (63%) 4-(3-броманилино)-6-хлорпиридо(3,2-d)пиримидина.

H¹-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,90 (1H, шир. с); 8,84 (1H, с): 8,30 (1H, дд, J = 2,1, 2,20 Гц); 8,17 (1H, д, J = 8,8 Гц); 7,82-7,78 (1H,м); 7,73 (1H, д, J = 8,8 Гц); 7,32-7,29 (2H, м).

ПРИМЕР 6. 4-(3-Броманилино)-6-аминопиридо(3.2-d)пиримидин Реакция 0,12 г (0,38 ммоля) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо(3,2-d)пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] с насыщенным раствором аммиака в этаноле в сосуде под давлением при 100^oC в течение 18 часов дает 87 мг (72%) 6- амино-4-[3-бр