Замещенные бисиндолилимиды малеиновой кислоты для ингибирования клеточной пролиферации

Замещенные бисиндолилимиды малеиновой кислоты для ингибирования клеточной пролиферации

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящее изобретение относится к некоторым замещенным пирролам, которые являются антипролиферативными агентами. Эти соединения и их фармацевтически приемлемые соли используются при терапии или контроле нарушений клеточной пролиферации, прежде всего, рака. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, и к способам лечения и/или контроля рака, конкретно терапии или контроля солидных опухолей.

Уровень техники

Неконтролируемая клеточная пролиферации является отличительным признаком рака. Злокачественные опухолевые клетки имеют повреждение в генах, которые прямо или опосредованно контролируют цикл клеточного деления. Изучению антипролиферативных агентов посвящено множество исследований. Несмотря на то, что идентифицировано множество агентов, обладающих требуемой антипролиферативной активностью, многие из них имеют различные недостатки, включающие плохую растворимость, сложное строение и т.п., в связи с которыми эти агенты становятся неприменимыми или неудобными для лечения человека. Поэтому существует потребность в низкомолекулярных соединениях, которые могут быть легко синтезированы, которые эффективны в качестве противоопухолевых агентов и применимы для доставки с использованием непрерывного вливания пациентам. Таким образом, объектом настоящего изобретения является разработка таких соединений, а также фармацевтических композиций, содержащих такие соединения.

Определение терминов

Термины, использованные в тексте заявки, имеют следующие значения.

"Алкенил" означает алифатический ненасыщенный углеводород с прямой или разветвленной цепью, содержащий от 1 до 15 атомов углерода, предпочтительно от 1 до 10 атомов углерода, наиболее предпочтительно от 1 до 6 атомов углерода.

"Алкокси" означает алкильную или алкенильную группу, связанную с остатком молекулы через атом кислорода (например, RO-, такую как метокси, этокси и т.п.).

"Арил" означает ароматический цикл, содержащий от 5 до 10 атомов и включающий 1 или 2 цикла, которые необязательно могут включать один или более гетероатомов, которые являются одинаковыми или различными. В рамках настоящего определения арил включает гетероарил. Предпочтительные гетероатомы включают азот, серу или кислород, индивидуально или в любом сочетании, вместо одного или более атомов углерода. Примерами арильных групп по определению являются фенил, пиридин, имидазол, пиррол, триазол, фуран, пиримидин.

"Циклоалкил" означает неароматическую, частично или полностью насыщенную циклическую алифатическую углеводородную группу, содержащую от 3 до 8 атомов. Примеры циклоалкильных групп включают циклопропил, циклопентил и циклогексил.

"Эффективное количество" означает количество по меньшей мере одного соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, которое эффективно ингибирует и/или предупреждает дифференциацию опухолевой клетки человека, включая клеточные линии опухолей человека.

"Гетероатом" означает атом, выбранный из азота, серы и кислорода. Гетероатомы выбирают независимо и они могут заменять один или более атомов углерода.

"Гетероцикл" означает 3-10-членную неароматическую, частично или полностью насыщенную углеводородную группу, содержащую по меньшей мере один гетероатом. Такие циклические системы включают морфолин, пирролидин, пиперидин, пиперазин.

"IC₅₀" означает концентрацию конкретного соединения по изобретению, необходимую для 50%-ного ингибирования специфической измеряемой активности. IC₅₀ может быть измерена, как описано в примере 15 и ниже.

"(Низш.)алкил" означает насыщенный алифатический углеводород с прямой или разветвленной цепью, содержащий от 1 до 6, предпочтительно от 1 до 4 атомов углерода. (Низш.)алкильные группы могут быть замещенными, как более подробно описано ниже. Кроме того, алкильная цепь может включать один или более гетероатомов вместо одного или более атомов углерода. Типичные (низш.)алкильные группы включают метил, этил, пропил, изопропил, бутил, трет-бутил, 2-бутил, пентил, гексил и т.п.

"Фармацевтически приемлемая соль" означает обычные кислотно-аддитивные соли и основно-присоединенные соли, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства соединений формулы I, а также образованы из приемлемых нетоксичных органических или неорганических кислот, или органических или неорганических оснований. Примеры кислотно-аддитивных солей включают как соли неорганических кислот, таких как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, иодистоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота и азотная кислота, так и соли органических кислот, таких как уксусная кислота, винная кислота, салициловая кислота, метансульфоновая кислота, янтарная кислота, лимонная кислота, яблочная кислота, молочная кислота, фумаровая кислота и т.п. Примеры основно-присоединенных солей включают соли, полученные из гидроксидов аммония, калия, натрия и четвертичного аммония, например, таких как гидроксид тетраметиламмония.

"Фармацевтически приемлемый", такой как фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент и т.п., означает фармакологически приемлемый и по существу нетоксичный материал для пациента, которому вводится конкретное соединение.

"Фармацевтически активный метаболит" означает продукт метаболического превращения соединения формулы I, который является фармацевтически приемлемым и эффективным.

Группы "полиэтиленгликоль" или "ПЭГ" означают структуры общей формулы -R⁹(ОСН₂СН₂)_nОН, где n означает среднее число от 2 до 1500, предпочтительно от 15 до 150, со средней молекулярной массой от 500 до 5000 Да, и где R⁹ означает карбоксил или (низш.)алкил, предпочтительно метил или этил.

"Пролекарство" означает соединение, которое в физиологических условиях или за счет сольволиза может быть превращено в фармацевтически активное соединение. При введении пациенту пролекарство может быть неактивным, но in vivo оно превращается в активное соединение.

"Замещенный", такой как замещенный алкил, означает, что замещение может быть в одном или нескольких положениях или, если не указано иное, что заместители в каждом положении выбраны независимо из указанных вариантов.

"Замещенная аминогруппа" означает аминогруппу, которая моно- или дизамещена другой группой, предпочтительно (низш.)алкилом (например, метилом или этилом).

Описание изобретения

Конкретно изобретение относится к замещенным пирролам формулы

и фармацевтически приемлемым солям вышеуказанных соединений, где R выбирают из группы, включающей -PO₃R¹R², -CHR³OCOR⁴, -CHR³OCO²R⁴, -CHR³OCONHR⁴ и -COR⁴;

R¹ и R² выбирают из группы, включающей Н, Na и NH₄, причем они одинаковы, но если один из R¹ или R² означает Н, другой может быть иным, или в другом варианте R¹ и R² вместе означают Са;

R³ выбирают из группы, включающей Н или метил;

R⁴ выбирают из группы, включающей (низш.)алкил, который необязательно может быть замещенным одним или более заместителями, выбранными из группы, включающей -CO₂R⁵,

-NR⁶R⁷, полиэтиленгликоль, -OPO₃R¹R², гидрокси, алкокси и арил, алкенил, который необязательно может быть замещенным одним или более заместителями, выбранными из группы, включающей -СО₂R⁵, -NR⁶R⁷, полиэтиленгликоль, -OPO₃R¹R², гидрокси, алкокси и арил, циклоалкил, который необязательно может быть замещенным одним или более заместителями, выбранными из группы, включающей -CO₂R⁵,

-NR⁶R⁷, полиэтиленгликоль, -ОРО₃R¹R², гидрокси, алкокси и арил, гетероцикл, причем, если он включает N в качестве гетероатома, то N необязательно может быть замещен группой -COR⁸, и арил, который необязательно может быть замещенным одним или более заместителями, выбранными из группы, включающей -CO₂R⁵, гидрокси, алкокси, полиэтиленгликоль, -OPO₃R¹R², и (низш.)алкил, который в свою очередь может быть замещенным гидрокси, карбокси и замещенной аминогруппой;

R⁵ выбирают из группы, включающей Н, Na, или (низш.)алкил;

R⁶ и R⁷ каждый независимо выбирают из группы, включающей Н, (низш.)алкил и -COR⁸, или в другом варианте группа -NR⁶R⁷ образует 5- или 6-членный гетероцикл; и

R⁸ означает (низш.)алкил, который необязательно может быть замещен полиэтиленгликолем.

Соединения по настоящему изобретению обладают антипролиферативной активностью, прежде всего, они ингибируют клеточное деление в G2/M фазе клеточного цикла и обычно относятся к ингибиторам "G2/M фазы клеточного цикла". Эти соединения являются растворимыми пролекарствами активного метаболита противоопухолевого терапевтического агента, описанного в патенте US №5057614 (Davis и др.), и таким образом, применимы для доставки посредством непрерывного вливания.

Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, включающим фармацевтически эффективное количество одного или более вышеописанных соединений и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.

Кроме того, настоящее изобретение относится к применению одного или более вышеописанных соединений для получения лекарственных средств, предназначенных для терапии нарушений клеточной пролиферации, прежде всего, рака, например солидных опухолей, опухоли молочной железы, толстой кишки или легких.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения солидных опухолей, прежде всего, опухолей молочной железы или толстой кишки, введением пациенту, нуждающемуся в такой терапии, эффективного количества соединения формулы I и/или его фармацевтически приемлемых солей.

В предпочтительном варианте соединений формулы I R означает -CHR³OCOR⁴. Наиболее предпочтительно R³ означает Н, а R⁴ означает (низш.)алкил, замещенный полиэтиленгликолем.

В другом предпочтительном варианте соединений формулы I R означает -COR⁴. Более предпочтителен R⁴, выбранный из группы, включающей гетероцикл и (низш.)алкил, наиболее предпочтителен (низш.)алкил, замещеннный группой -NR⁶R⁷.

В другом предпочтительном варианте соединений формулы I полиэтиленгликоль имеет молекулярную массу от приблизительно 750 до приблизительно 5000 Да, наиболее предпочтительно приблизительно 2000 Да.

Примерами предпочтительных соединений формулы I являются следующие соединения:

3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-илметиловый эфир 3-[2-(2-метоксиэтокси)этокси]пропионовой кислоты,

O-[2-[[2,5-дигидро-3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидропиррол-3-ил]индол-1-ил]метоксикарбонил]этил]-O'-метилполиэтиленгликоль 2000,

3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-илметиловый эфир 2,3-диметоксибензойной кислоты,

гидрохлорид 3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-илметилового эфира 3-диэтиламинометилбензойной кислоты,

3-(1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-1-октадец-9-еноилпиррол-2,5-дион,

{3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1 Н-пиррол-3-ил]индол-1-ил}фосфоновая кислота,

3-(1-ацетил-1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-дион,

трифторацетат 3-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-4-[1-(пиперидин-4-карбонил)-1Н-индол-3-ил]пиррол-2,5-диона,

гидрохлорид 3-(1-аминоацетил-1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-диона,

3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-илметиловый эфир уксусной кислоты,

моно-{3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-илметиловый} эфир пентандиовой кислоты,

1-{3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-ил}этиловый эфир 2,3-диметоксибензойной кислоты и

гидрохлорид 1-{3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-ил}этилового эфира 3-диэтиламинометилбензойной кислоты.

Соединения, описанные в тексте заявки и обобщенные вышеуказанной формулой, могут иметь таутомеры и структурные изомеры. Предполагается, что изобретение включает любые таутомерные и структурно-изомерные формы этих соединений, или смеси таких форм, и не ограничивается любой из таутомерных или изомерных форм, использованной в вышеупомянутых формулах.

Синтез соединений по изобретению

Соединения по изобретению могут быть получены способами, известными в данной области техники. Приемлемые способы синтеза этих соединений приведены в примерах. В основном эти соединения могут быть получены, как описано в пункте 18.

Более конкретно, соединения формулы I, в которых R означает -РО₃R¹R², а R¹ и R² имеют значения, указанные выше, могут быть получены, как показано ниже на схеме I.

Схема I

Как показано на схеме I, 3-(1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-дион (1) (полученный, как описано в заявке US сер. №09/268887, находящейся на стадии одновременного рассмотрения, соответствующие фрагменты которой включены в описание заявки в качестве ссылки) обрабатывали соответственно защищенным хлорфосфонатом в присутствии сильного основания, такого как бис(триметилсилил)амид лития, в приемлемом растворителе, таком как ТГФ, с образованием производного защищенной фосфоновой кислоты 2, где Х означает пригодную защитную группу, известную специалистам в данной области, такую как бензил. Удаление защитных групп можно проводить любыми стандартными методами, известными специалистам в данной области техники, с образованием фосфоновой кислоты 3. Конкретно, если Х означает бензильную группу, защитные группы удаляют с использованием циклогексадиена и палладия на угле в качестве катализатора. Затем соединение 3 может быть превращено в его соль 4, такую как мононатриевая соль, стандартными методами, известными в данной области техники.

Соединения формулы I, где R означает -COR⁴, могут быть получены, как показано ниже на схеме II.

Схема II

Обычно, 3-(1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-дион (соединение 1, полученное, как описано выше для схемы I) депротонируют в апротонном растворителе, таком как ТГФ, при -60°С с использованием сильного основания, такого как бис(триметилсилил)амид лития. Затем полученный анион обрабатывают известным хлорангидридом или хлорангидридом, полученным известными способами. В другом варианте соединение 1 может быть конденсировано с известной карбоновой кислотой или с кислотой, полученной известными способами, с использованием стандартных методов получения амидной связи, таких как диизопропилкарбодиимидный метод или метод с использованием ГОБТ. Соединение 5, где R⁴ содержит защищенный карбоксил, гидроксиалкил, амино или моноалкиламино, может быть затем модифицировано удалением защитной группы известными способами, а затем необязательно модификацией полученной карбокси, гидрокси или аминогруппы с образованием требуемого амида или эфира способами, известными специалистам в данной области.

Соединения общей формулы I, где R означает -CHR₃OCOR⁴, могут быть получены, как показано ниже на схеме III.

Схема III

Как показано выше на схеме III, гидроксиалкилпроизводное 6 этерифицируют известными методами. Обычно соединение 6 обрабатывают известной карбоновой кислотой или карбоновой кислотой, полученной известными способами, в растворителе, таком как хлористый метилен, в присутствии EDC и диметиламинопиридина при комнатной температуре в течение нескольких часов. В другом варианте промежуточное гидроксипроизводное 6 может быть обработано известным хлорангидридом или хлорангидридом, полученным известными способами. В другом варианте промежуточное гидроксипроизводное 6 может быть обработано известным ангидридом или ангидридом, полученным известными способами.

Для получения соединения 7, где R⁴ содержит гетероароматический цикл, гетороатом, такой как N, затем может быть модифицирован реакцией с алкилиодидом, таким как -СН₃I, в растворителе, таком как ацетонитрил.

В другом варианте соединение 7, где R⁴ содержит защищенный карбоксил, гидроксиалкил, амино или моноалкиламино, может быть затем модифицировано удалением защитной группы известными способами, а затем необязательно модификацией полученной карбокси, гидрокси или аминогруппы с образованием требуемого амида или эфира способами, известными специалистам в данной области техники.

Исходное соединение 6, где R³ означает Н, также может быть получено, как описано в заявке US сер. №09/268887 (соединение II), соответствующие фрагменты которой включены в описание заявки в качестве ссылки.

Исходное соединение 6, где R³ означает метил, может быть получено, как показано ниже на схеме IV.

Схема IV

Соединение 8 является коммерческим препаратом (например, фирмы Aldrich).

Соединения общей формулы I, где R означает -CHR³OCO₂R⁴, а R³ и R⁴ имеют значения, указанные выше, могут быть получены, как показано ниже на схеме V.

Схема V

Обычно гидроксиалкилпроизводное 6 обрабатывают известным хлорформиатом или хлорформиатом, полученным известными способами, в растворителе, таком как дихлорметан, при температуре от -78°С до 20°С, в присутствии диметиламинопиридина с получением требуемого карбоната 14.

Соединения общей формулы I, где R означает -CHR³OCONHR⁴, a R³ и R⁴ имеют значения, указанные выше, могут быть получены, как показано ниже на схеме VI.

Схема VI

Обычно промежуточное гидроксиметилпроизводное 6 депротонируют с использованием сильного основания, такого как бис(триметилсилил)амид лития, в растворителе, таком как ТГФ, при 0°С. Затем полученный анион обрабатывают бис(пара-нитрофенил)карбонатом в том же растворителе, а затем известным амином или амином, полученным известными способами.

Кислоты соединений формулы I могут быть превращены в фармацевтически приемлемую соль взаимодействием с приемлемым основанием способами, известными в данной области техники. Пригодные соли включат соли как с неорганическими основаниями, такие как соли натрия, калия и кальция, так и соли с органическими основаниями, такими как этилендиамин, моноэтаноламин или диэтаноламин. Превращение основания соединения формулы I в фармацевтически приемлемую соль проводят взаимодействием с приемлемой кислотой известным способом. Приемлемые соли включают соли как с неорганическими кислотами, например гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты или сульфаты, так и соли с органическими кислотами, например ацетаты, цитраты, фумараты, тартраты, малеаты, метансульфонаты или пара-толуолсульфонаты.

Композиции/составы

В другом варианте настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, включающим по меньшей мере одно соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль.

Эти фармацевтические композиции могут вводиться перорально, например в форме таблеток, таблеток с покрытием, драже, твердых или мягких желатиновых капсул, растворов, эмульсий или суспензий. Они могут вводиться ректально, например в форме суппозиториев. Однако, прежде всего, соединения по настоящему изобретению пригодны для парентерального введения, например в форме растворов для инъекции.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению, включающие соединения формулы I, пролекарства таких соединений или их соли, могут быть получены способом, известным в данной области техники, например обычными способами смешивания, инкапсулирования, растворения, гранулирования, эмульгирования, включения в полимер или гель, дражирования или лиофилизации. Эти фармацевтические препараты могут быть переработаны с терапевтически инертными неорганическими или органическими носителями. В качестве таких носителей при изготовлении таблеток, таблеток с покрытием, драже и жестких желатиновых капсул могут быть использованы лактоза, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновая кислота или ее соли. Пригодные носители для мягких желатиновых капсул включают растительные масла, воски и жиры. В зависимости от природы активного соединения обычно для мягких желатиновых капсул не требуется никаких носителей. Приемлемыми носителями для приготовления растворов и сиропов являются вода, полиолы, сахароза, инвертированный сахар и глюкоза. Пригодными носителями для инъекций являются вода, спирты, полиолы, глицерин, растительные масла, фосфолипиды и ПАВы. Пригодными носителями для суппозиториев являются природные или отвержденные масла, воски, жиры и полужидкие полиолы.

Кроме того, фармацевтические препараты могут содержать консерваторы, солюбилизирующие агенты, стабилизаторы, увлажнители, эмульгаторы, подсластители, красители, ароматизаторы, соли для регуляции осмотического давления, буферные вещества, агенты для покрытия оболочкой или антиоксиданты. Кроме того, они могут содержать другие терапевтически ценные соединения, включая дополнительные активные ингредиенты, иные, чем соединения формулы I.

Дозировки

Как упоминалось выше, соединения по настоящему изобретению используются при терапии и контроле нарушений клеточной пролиферации, прежде всего, онкологических нарушений. Эти соединения и композиции, содержащие вышеупомянутые соединения, прежде всего, применимы при терапии и контроле солидных опухолей, например, таких как опухоли молочной железы и толстой кишки.

Терапевтически эффективное количество соединения по изобретению означает количество соединения, которое эффективно предупреждает, облегчает или уменьшает интенсивность симптомов заболевания, или пролонгирует выживание пациента, подлежащего лечению. Терапевтически эффективное количество определяется специалистом.

Терапевтически эффективное количество или дозировки соединения по изобретению можно варьировать в широких пределах и корректировать в соответствии с индивидуальными требованиями в каждом отдельном случае. В общем случае, при пероральном или парентеральном введении взрослым людям массой приблизительно 70 кг должна быть достаточной суточная доза от приблизительно 10 мг до приблизительно 10000 мг, предпочтительно от приблизительно 200 мг до приблизительно 1000 мг, хотя при соответствующих показаниях верхний предел может быть превышен. Суточная доза может вводиться в виде разовой дозы или отдельными дозами, или при парентеральном введении непрерывным вливанием.

Примеры

Соединения по настоящему изобретению могут быть синтезированы известными методами, например, такими, какие приведены выше на общих схемах. Предпочтительные методы синтеза соединений и получения композиций иллюстрируются следующими примерами.

Пример 1

3-[4-(1-Метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-илметиловый эфир 3-[2-(2-метоксиэтокси)этокси]пропионовой кислоты

Суспензию гидрохлорида 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида ("EDC·HCl", фирмы Aldrich, 77 мг, 0,40 ммоля) в сухом ТГФ (12 мл) обрабатывали ДМАП (фирмы Aldrich) (55 мг, 0,45 ммоля) при 22°С в течение 2 мин. К смеси добавляли 3-(1-гидроксиметил-1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-дион (110 мг, 0,26 ммоля) (полученный, как описано ниже). Смесь перемешивали в течение 20 мин, добавляли 2-(2-метоксиэтокси)этокси]пропионовую кислоту (CAS: 209542-49-4) (120 мг, 0,62 ммоля) и перемешивали при 22°С в течение 4 ч. Растворитель выпаривали, продукт очищали хроматографией на силикагеле, при этом получали 130 мг 3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-илметилового эфира 3-[2-(2-метоксиэтокси)этокси]пропионовой кислоты (выход 80%).

3-(1-Гидроксиметил-1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-дион получали, как описано в заявке US сер. №09/268887 (соединение II), соответствующие фрагменты которой включены в описание в качестве ссылки.

Пример 2

О-[2-[[2,5-дигидро-3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидропиррол-3-ил]индол-1-ил]метоксикарбонил]этил]-О'-метилполиэтиленгликоль 2000.

К раствору 3-(1-гидроксиметил-1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-диона (200 мг, 0,5 ммоля) (полученного, как описано выше в примере 1) в дихлорметане при -78°С добавляли триэтиламин (0,6 ммоля), а затем хлорангидрид О-(2-карбоксиэтил)-О'-метилполиэтилен(2000)гликолевой кислоты (0,6 ммоля) (полученной обычными методами из монометилполиэтиленгликоль(2000)пропионовой кислоты). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и растворитель выпаривали. Остаток очищали экспресс-хроматографией на силикагеле, при этом получали 1 г О-[2-[[2,5-дигидро-3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидропиррол-3-ил]индол-1-ил]метоксикарбонил]этил]-О'-метилполиэтиленгликоля 2000 (выход 80%).

Пример 3

Следующие соединения были получены по методике, описанной в примере 2:

а) 3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-илметиловый эфир 2,3-диметоксибензойной кислоты,

б) гидрохлорид 3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-илметилового эфира 3-диэтиламинометилбензойной кислоты.

Пример 4

3-(1Н-Индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-1-октадец-9-еноилпиррол-2.5-дион

3-(1Н-Индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-дион (250 мг, 0,65 ммоля), полученный, как описано в заявке US сер. №09/268887, растворяли в ТГФ (15 мл) и охлаждали до -60°С. К полученному раствору добавляли бис(триметилсилил)амид лития (0,7 ммоля, 0, 7 мл, 1,0 М в ТГФ), а затем олеоилхлорид (фирмы Aldrich) (0,300 г, 1,0 ммоль) в ТГФ (5 мл). Полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Растворитель выпаривали и неочищенный материал подвергали предварительной очистке хроматографией на силикагеле. Полученные продукты разделяли хроматографией на силикагеле с использованием градиента этилацетата и гексана. При этом получали 310 мг 3-(1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-1-октадец-9-еноилпиррол-2,5-диона (выход 70%).

Пример 5

{3-[4-(1-Метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-ил}фосфоновая кислота

а) Раствор 3-(1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-диона (210 мг, 0,55 ммоля), полученного, как описано в заявке US сер. №09/268887, в ТГФ (150 мл) охлаждали до -70°С. К полученному раствору добавляли бис(триметилсилил)амид лития (1,5 ммоля, 1,5 мл, 2,5 экв., 1,0 М в ТГФ), а затем дибензилхлорфосфат (CAS: 538-37-4) (500 мг, 1,6 ммоля) в ТГФ (5 мл). Охлаждающую баню удаляли, когда температура раствора достигала -40°С раствор выливали в воду и экстрагировали этилацетатом/гексаном (1:4). Органический слой промывали водой, сушили и упаривали. Остаток очищали и разделяли на компоненты хроматографией на силикагеле в градиенте этилацетата/гексана. При этом получали 150 мг дибензилового эфира {3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-ил}фосфоновой кислоты (выход 43%).

б) Раствор дибензилового эфира {3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-ил}фосфоновой кислоты (50 мг, 0,08 ммоля) (полученного, как описано выше на стадии а)) в смеси ТГФ/этанола (3 мл/6 мл) обрабатывали 10% Pd/C (75 мг) и 1,4-циклогексадиеном (0,5 мл), а затем нагревали при 35-40°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали, фильтровали через целит и упаривали досуха. Остаток кристаллизовали из ТГФ/гексана, при этом получали 20 мг {3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-ил}фосфоновой кислоты (выход 55%).

Пример 6

3-(1-Ацетил-1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-дион

Раствор 3-(1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-диона (51 мг, 0,13 ммоля), полученного, как описано в заявке US сер. №09/268887, в ТГФ (20 мл) охлаждали до -70°С. К раствору добавляли бис(триметилсилил)амид лития (0,5 ммоля, 3,8 экв., 0,5 мл 1,0 М раствора в ТГФ), а затем избыток ацетилхлорида (0,1 мл). Полученный раствор перемешивали до тех пор, пока температура не достигала -45°С. Реакционную смесь упаривали и продукт очищали хроматографией на силикагеле, при этом получали 33 мг 3-(1-ацетил-1H-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-диона (выход 65%).

Пример 7

Трифторацетат 3-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-4-[1-(пиперидин-4-карбонил)-1Н-индол-3-ил]пиррол-2,5-диона

К раствору 3-(1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-диона (полученного, как описано в заявке US сер. №09/268887 (соединение 1), соответствующие фрагменты которой включены в описание в качестве ссылки) в ТГФ добавляли 1,5 экв. N-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-карбоновой кислоты (фирмы Bachem, CA) и по 1,3 экв. диизопропилкарбодиимида и N-гидроксибензотриазола. Полученный раствор перемешивали при КТ (комнатной температуре) в течение 6,5 ч, затем добавляли небольшое количество карбоната цезия и 0,5 мл ДМФ. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 мин, затем разбавляли CH₂Cl₂, промывали насыщенным раствором NH₄Cl и водой. Продукт очищали экспресс-хроматографией (выход 92%). Полученный ВОС-защищенный амин растворяли в CH₂Cl₂ и обрабатывали трифторуксусной кислотой при КТ в течение 1 ч. Растворитель выпаривали, остаток очищали ЖХВР, при этом получали трифторацетат 3-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-4-[1-(пиперидин-4-карбонил)-1Н-индол-3-ил]пиррол-2,5-диона (выход 54%).

Пример 8

Гидрохлорид 3-(1-аминоацетил-1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-диона

1,05 экв. N-(трет-бутоксикарбонил)глицина (фирмы Bachem, CA) и 1 экв. 3-(1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-диона (полученного, как описано выше) растворяли в ТГФ, добавляли по 1,3 экв. N-гидроксибензотриазола и диизопропилкарбодиимида, и реакционную смесь перемешивали в течение 5 ч. Затем добавляли небольшое количество карбоната цезия и ДМФ. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, разбавляли этилацетатом и эфиром, промывали водой и сушили над сульфатом натрия. Полученный 3-[N-бутоксикарбонил-(1-аминоацетил-1Н-индол-3-ил)]-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-дион очищали на пластинках для препаративной ТСХ (выход 53%). ВОС-защищенный продукт растворяли в ТГФ и по каплям добавляли 12 н. HCl. Реакционную смесь перемешивали при КТ в течение 2 ч, затем концентрировали в токе N₂ и очищали методом ЖХВР, при этом получали 0,026 г 3-(1-аминоацетил-1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-диона (выход 95%).

Пример 9

3-[4-(1-Метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-илметиловый эфир уксусной кислоты

Суспензию 3-(1-гидроксиметил-1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-диона (120 мг, 0,288 ммоля) (полученного, как описано в заявке US сер. №09/268887 (соединение II)) в 3 мл уксусного ангидрида (фирмы Aldrich) перемешивали при комнатной температуре в течение 19 ч и при температуре 100°С в течение 2,5 ч. Полученный раствор охлаждали, разбавляли водой и экстрагировали EtOAc. Слой EtOAc промывали водой, солевым раствором, сушили над сульфатом магния и упаривали. Остаток очищали экспресс-хроматографией с использованием EtOAc/гексана, при этом получали 77,1 мг 3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-илметилового эфира уксусной кислоты (выход 53%).

Пример 10

Моно-{3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-илметиловый} эфир пентандиовой кислоты

Раствор 3-(1-гидроксиметил-1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-диона (103 мг, 0,248 ммоля) (полученного, как описано выше в примере 1), глутарового ангидрида (35,1 мг, 0,308 моля) (фирмы Aldrich) и триэтиламина (0,03 мл, 0,924 ммоля) в 5 мл EtOAc кипятили с обратным холодильником в течение 6 ч. Затем раствор охлаждали, разбавляли EtOAc, промывали 0,5 н. HCl, водой, солевым раствором, сушили над сульфатом магния и упаривали. Остаток очищали экспресс-хроматографией с использованием EtOAc/ацетона, при этом получали 35 мг моно-{3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-илметилового} эфира пентандиовой кислоты (выход 27%).

Пример 11

1-{3-[4-(1-Метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-ил}этиловый эфир 2,3-диметоксибензойной кислоты

а) К суспензии NaH (1,92 г 60%-ной суспензии в масле) в 75 мл ДМФ добавляли индол (4,68 г, 40 ммолей) (фирмы Aldrich). Смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин и по каплям добавляли 1-хлорэтилметиловый эфир (4 мл). Полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, выливали в ледяную воду и экстрагировали толуолом. Органический слой сушили над сульфатом магния и упаривали. Остаток очищали экспресс-хроматографией с использованием EtOAc/гексана, при этом получали 4 г 1-(1-метоксиэтил)индола (выход 58%).

б) К раствору 1-(1-метоксиэтил)индола (4 г, 23 ммоля) (полученного, как описано выше на стадии а)) в безводном диэтиловом эфире при 0°С в течение 5 мин добавляли оксалилхлорид (4,2 мл, 48 ммолей). Полученную суспензию перемешивали при 0°С в течение 5 ч и фильтровали, при этом получали 1,9 г [1-(1-метоксиэтил)-1Н-индол-3-ил]оксоацетилхлорида (выход 31%). Полученный материал использовали без дальнейшей очистки.

в) К суспензии [1-(1-метоксиэтил)-1Н-индол-3-ил]оксоацетилхлорида (1,9 г, 7,15 ммоля) (полученного, как описано выше на стадии б)) и гидрохлорида 1-метилэтилового эфира (1-метил-6-нитро-1Н-индол)-3-этениминокислоты (2,3 г, 7,3 ммоля) (соединение 15 на схеме 2 в заявке US сер. №09/268887) в 75 мл СН₂Cl₂ при 0°С в течение 3 мин добавляли триэтиламин (3,6 мл, 25,8 ммоля). Смесь перемешивали при 0°С в течение 4 ч и экстрагировали 0,5 н. HCl. Водный слой экстрагировали CH₂Cl₂ и объединенные слои CH₂Cl₂ промывали водой, солевым раствором, сушили над сульфатом магния и упаривали. Остаток растворяли в 70 мл толуола и полученный раствор охлаждали до 0°С, затем добавляли гидрат пара-толуолсульфокислоты (1,4 г, 7,36 ммоля) и смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Суспензию промывали насыщенным раствором NaHCO₃ и экстрагировали EtOAc (2×50 мл). Объединенные слои EtOAc сушили над сульфатом магния и упаривали, при этом получали 4,1 г (выход 100%) 3-[1-(1-метоксиэтил)-1Н-индол-3-ил]-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-диона в виде клейкого твердого вещества красного цвета, которое использовали без очистки.

г) К раствору 3-[1-(1-метоксиэтил)-1Н-индол-3-ил]-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-диона (3,75 г) (полученного, как описано выше на стадии в)) в 100 мл ТГФ добавляли 2 н. HCl (75 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и выливали в EtOAc и солевой раствор. Слои разделяли и водный слой экстрагировали EtOAc. Объединенные слои EtOAc сушили над сульфатом магния и упаривали. Остаток очищали экспресс-хроматографией с использованием EtOAc/гексана, при этом получали 1,1 г (выход 33%) 3-[1-(1-гидроксиэтил)-1Н-индол-3-ил]-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-диона.

д) К раствору 3-[1-(1-гидроксиэтил)-1Н-индол-3-ил]-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)пиррол-2,5-диона (165,3 мг, 0,678 ммоля) (полученного, как описано выше на стадии г)), EDC·HCl (284,5 мг, 1,484 ммоля) и диметиламинопиридина (185,5 мг, 1,58 ммоля) в 20 мл СН₂Cl₂ добавляли 2,3-диметоксибензойную кислоту (287,4 мг, 0,668 ммоля). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 ч, промывали насыщенным раствором NaHCO₃, солевым раствором, сушили над сульфатом магния и упаривали. Остаток очищали экспресс-хроматографией с использованием EtOAc/гексана, при этом получали 203 мг 1-{3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-ил}этилового эфира 2,3-диметоксибензойной кислоты (выход 50%).

Пример 12

Гидрохлорид 1-{3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2.5-диоксо-2.5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-ил}этилового эфира 3-диэтиламинометилбензойной кислоты

Гидрохлорид 1-{3-[4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил]индол-1-ил}этилового эфира 3-диэтиламинометилбензойной кислоты получали по методике, описанной выше в примере 11д), с использованием в качестве исходного материала 3-диэтиламинометилбензойной кислоты (CAS: 137605-77-7) (выход 50%).

Пример 13

3-[4-(1-Метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-3-ил] индол-1-илметиловый и монометилполиэтиленгликолевый (2000) диэфир угольной кислоты

Монометилполиэтиленгликоль (средняя ММ 2000) (1 г, 0,5 ммоля) обрабатывали избытком 20%-ного раствора фосгена в толуоле при комнатной температуре в течение 24 ч и упаривали. Полученный хлорформиат в дихлорметане добавляли к смеси 3-(1-гидроксиметил-1Н-индол-3-ил)-4-(1-мет